Феназепам, 1,4-бензодиазепины

5) Влияние заместителей в положении 3. Спектр фармакологической активности 3-замещенных 1,2-дигидро-ЗН-1,4-бенздиазепин-2-онов качественно сходен со спектром 1,2-дигидро-ЗН-1,4-бенздиа-зепин-2-онов, незамещенных в положении 3. Природа заместителей у атома С₃ оказывает существенное влияние на уровень активности бенздиазепинов, причем иногда различное по отдельным видам действия. 3-Алкилпроизводные обладают значительно меньшей активностью по сравнению с незамещенными у атома С₃ веществами. С увеличением объема алкильного радикала активность убывает. Активность хиральных 1,4-бенздиазепинов зависит от их конфигурации. Так, левовращающий изомер (D-форма) 3-пропил-7-хлор-5-фенил-1,2-дигидро-ЗН-1,4-бенздизепин-2-она обладает большей по сравнению с правовращающим изомером активностью по тесту антагонизма с коразолом.

Введение гидроксильной группы в положение 3 1,2-дигидро-ЗН-1,4-бенздиазепиновой системы приводит к неоднозначному изменению активности по отдельным видам действия. По антагонизму с коразолом, по тесту максимального электрошока и угнетению ориентировочных реакций активность 3-оксипроизводных в ряде случаев ниже активности незамещенных в положении 3 аналогов. Однако по тестам потенцирования гексеналового сна и нарушения координации движений 3-оксипроизводные более активны. З-Ацил- оксипроизводные, как правило, менее активны, чем соответствующие 3-оксипроизводные. З-Арилиден- и 3-гетарилиденпроизводные менее активны, чем незамещенные в положении 3 бенздиазепиноны. Но некоторые представители данного типа производных 1,4-бенздиазепина, обладая достаточно высокой активностью по основным видам действия, проявляют низкую активность по тем видам действия, которые для транквилизаторов считаются побочными. Это делает перспективным изучение такого рода соединений с целью изыскания так называемых дневных транквилизаторов.

6) Влияние группировки в положении 2. Замещение карбонильной группы в 1,2-дигидро-ЗН-1,4-бенздиазепин-2-онах на тиокарбонильную либо метиленовую группу приводит к ослаблению активности, хотя характер действия препаратов на центральную нервную систему принципиально не изменяется.

7) Замещение у атома N₁ на метальную группу чаще всего приводит к увеличению активности. Введение в это положение более объемных заместителей сопровождается снижением уровня активности. В некоторых случаях могут получаться практически неактивные производные. Замещение атома водорода в положении 1 на некоторые группы (карбамоильную, ацильные и др.) иногда дает эффект пролонгации действия таких производных 1,4-бенздиазепина.

8) Влияние аннелированных циклов. Среди большого количества 1,4-бенздиазепинов с аннелированными циклами наибольший фармакологический и клинический интерес представляют системы с аннелированными гетероциклами в положениях 1, 2, и З, 4. Симметричные триазолобенздиазепины (триазолам, алпразолам и пр.) как транквилизаторы превосходят по активности диазепам [4,6].

1.9 Феназепам

1.9.1 Препарат «Феназепам»

«Феназепам»являетсяотечественнымвысокоактивным

транквилизатором анксиолитического действия, превосходит другие транквилизаторы; оказывает также выраженное противосудорожное, миорелаксантное и снотворное действие. Механизм действия феназепама связан с уменьшением возбудимости подкорковых центров головного мозга, торможением действия между ними и корой мозга. Феназепам является экзогенным лигандом специфических бензодиазепиновых рецепторов ЦНС. При применении вместе со снотворными и наркотическими средствами происходит взаимное усиление влияния на ЦНС. Феназепам назначают при различных невротических и психатоподобных состояниях, сопровождающихся тревогой, страхом, повышенной раздражительностью, эмоциональной лабильностью. Препарат эффективен при навязчивости, фобии, ипохондрических синдромах, показан также при психогенных психозах, панических реакциях и другие, так как снимает состояние тревоги и страха.

Феназепам применяют также для купирования алкогольной абстиненции. Кроме того, назначают как противосудорожное и снотворное средство. По силе снотворного действия приближается к митразепаму.

Назначают феназепам внутрь в виде таблеток. В амбулаторных условиях назначают взрослым по 0.00025-0.0005 г (0.25-0.5мг) 2-3 раза в день. В условиях стационара суточная доза может быть увеличена до 0.003-0.005г (3-5мг); при лечении эпилепсии суточная доза составляет от 0.002-0.01 г (2-10мг).

Следует учитывать, что в связи с высокой активностью феназепама чаще могут наблюдаться атаксия, сонливость, мышечная слабость, головокружение [10,11].

1.9.2 Пространственная форма феназепама

Дигидро-3Н-1,4-бензодизепин-2-оны имеют ваннообразную пространственную форму (рисунок 1.32).

В гетероцикле имеются два практически плоских фрагмента, включающих кратные связи N(8)-C(5)-C(6)-C(13) и C(6)-C(13)-N(12)-C(11), и амидный фрагмент C(5)-N(8)-C(9)-C(11); плоским является также окружение атома углерода карбонильной группы. Атомы N(8), C(5), C(6), C(13) расположены практически в одной плоскости, от которой атомы C(9), C(11) и N(12) отогнуты в сторону.

Рисунок 1.32 - Геометрия молекулы феназепама и торсионные углы в семичленном гетероцикле

Длина связей и валентные углы в молекуле феназепама со стандартными отклонениями показаны на рисунке 1.33. Оба атома азота тригональные.

На рисунке 1.34 представлено расположение молекул феназепама в кристалле. За счет водородных связей между амидными группами молекулы образуют центросимметричные димеры. Длина Н-связи равна 2,9 Е [4].

Рисунок 1.33 - Длины связей и валентные углы со стандартными отклонениями в молекуле феназепама

Рисунок 1.34 - Расположение молекул феназепама в кристалле

1.9.3 Фармакокинетика феназепама

Высокая биодоступность феназепама способствует быстрому достижению максимального уровня препарата практически во всех исследуемых субстратах (30 мин), после чего происходит быстрое снижение содержания во всех исследуемых органах и тканях животных. Высокое содержание отмечено в печени, почках и жировых тканях. Снижение логарифма концентраций содержания препарата в печени, почках, жировой ткани и плазме крови осуществляется параллельно. Более высокое содержание препарата в указанных органах обусловлено экскректорными функциями печени, почек и липофильностью препарата и, как следствие, сродством к жировой ткани. Изучение распределения препарата при однократном и длительном введениях продемонстрировало отсутствие депонирования препарата. При изучении распределения препарата и метаболитов в органах и тканях не обнаружено какого-либо органа и ткани, в котором элиминация препарата и метаболитов осуществлялась бы существенно медленнее, чем из плазмы крови. Распределение метаболитов феназепама, продемонстрировало также высокую скорость метаболизма препарата [10].

Одним из направлений биотрансформации феназепама в организме является процесс гидроксилирования, который осуществляется по третьему положению диазепинового цикла (рисунок 1.35). В результате этих превращений образуется 3-оксифеназепам, который является одним из метаболитов феназепама. Наряду с образованием гидроксилированного метаболита в процессе метаболизма феназепама предполагается образование продукта биотрансформации с шестичленным диазепиновым циклом (6-бром-4-фенилхиназолинон) и метаболита с разорванным диазепиновым кольцом (бензофенон) [11].

Выделение феназепама из организма при однократном и длительном введениях происходит в результате нескольких параллельных парциальных процессов:

а) процесс выведения неизменного соединения и процессы образования продуктов окисления препарата (свободных метаболитов);

б) процессы выведения свободных метаболитов феназепама и процессы образования конъюгатов;

в) параллельное образование глюкуроновых и других конъюгатов [4].

Рисунок 1.35- Биотрансформация феназепама в организме

1.9.4 Данные о безопасности препарата

Препарат не обладает мутагенными свойствами. Не выявлено токсическое действие феназепама на лейкоциты. Препарат не оказывает воздействия на бласт-трансформацию лимфоцитов крови. В ходе клинического изучения препарата, в основном, регистрировались побочные (или нежелательные) эффекты, характерные для всех транквилизаторов бензодиазепинового ряда и связанные с гипноседативным и миорелаксантным действием препарата. Все наблюдаемые нарушения обычно спонтанно исчезали или значительно уменьшались при стабилизации дозировок и по мере увеличения сроков лечения.

Исследование побочных эффектов при применении феназепама не выявило каких-либо неожиданных или опасных явлений, что дает основания отнести оригинальный отечественный транквилизатор - «Феназепам» - к высокоэффективным и безопасным средством [11,13].

1.9.5 Синтез феназепама

Процесс получения фармокопейного феназепема состоит из следующих стадий:

1) подготовка оборудования;

2) подготовка сырья, вспомогательных материалов;

3) получение «бензофенона» из n-броманилина и о-хлорбензоилхлорида (рисунок 1.36);

n-броманилин о-хлорбензоилхлорид «бензофенон»

Рисунок 1.36 - Схема получения «бензофенона»

4) получение технического феназепама:

- ацилирование “бензофенона” (рисунок 1.37);

«хлорацетомид»

Рисунок 1.37 - Схема ацилирования “бензофенона”

- аминирование «хлорацетомида» (рисунок 1.38);

«аминоацетомид»

Рисунок 1.38 - Схема аминирования «хлорацетомида»

- получение феназепама (рисунок 1.39);



феназепам

Рисунок 1.39 - Схема получения феназепама

5) получение фармакопейного феназепама (перекристаллизация технического феназепама из толуола);

6) регенерация растворителей;

7) обезвреживание отходов;

8) обезвреживание выбросов в атмосферу [17].

анксиолитик феназепам биохимический фармакокинетика



2. АНАЛИЗ СУБСТАНЦИИ ФЕНАЗЕПАМА И ПРЕПАРАТА «ФЕНАЗЕПАМ»

В экспериментальной части данной работы описаны методы и методики анализа основного действующего вещества в субстанции и в препарате «Феназепам» и соответствие ФС по основным показателям качества, приведены расчеты по изложенным методикам и обсуждение полученных в ходе эксперимента результатов, а так же описан эксперимент по усовершенствованию технологии производства препарата. Анализу подвергались субстанция и готовая продукция препарата «Феназепам». ООО «РОЗФАРМ» не осуществляет самостоятельного производства субстанций феназепама, а приобретает его у других предприятий специализируемых на их изготовлении. В связи с этим входной контроль получаемого сырья очень важен. Исследования проводились в отделе контроля качества ООО «РОЗФАРМ».

2.1 Производство препарата «Феназепам»

Производство препарата включает в себя стадии:

1) Подготовка сырья феназепама.

Процесс подготовки сырья для производства таблеток включает в себя стадии:

- измельчение сырья;

- просев сырья;

- приготовление увлажнителя.

Измельчение сырья (стеариновой кислоты) производится на микромельнице. Предварительно отвешивают необходимое количество сырья на технических весах.

Просев сырья осуществляют с помощью вибрационного сита. Допускается использование ручного сита. Для просеивания сырья для производства таблеток «Феназепам» (феназепам, сахар молочный, крахмал картофельный) используется сито с диаметром отверстий (0,5±0,03) мм. Для просеивания сырья: кислота стеариновая (измельченная), кальция стеарат используется сито с диаметром отверстий (0,3±0,06) мм.

2) Приготовление таблеточной массы.

Процесс приготовления таблетмассы для производства таблеток включает в себя стадии:

- получение гранулята;

- калибровка гранулята;

- опудривание гранулята

- переработка некондиционных таблеток.

В качестве вспомогательных веществ для производства «Феназепам» таблеток 1мг используются: сахар молочный как наполнитель, крахмал картофельный как связующее и разрыхляющее вещество, кальция стеарат как смазывающее вещество, кислота стеариновая как скользящее вещество.

Процесс получения гранулята включает в себя стадии:

- смешивание и увлажнение;

- сушка гранулята.

Для производства таблеток «Феназепам» используют влажное гранулирование, которое проводят в ротогрануляторе. В ротогранулятор загружают действующее вещество, затем добавляют необходимое количество увлажнителя. После смешивания на панели управления ротогранулятора устанавливают режим сушки гранулята. Сушку гранулята осуществляют под вакуумом с периодическим отбором проб для определения влаги, которая должна составлять 2.5+0.5%.

После охлаждения гранулята до температуры 25±5 ^оС продукт подвергают калибровке. Калибровку гранулята проводи на установке для калибровки гранул, на сетке с размером ячеек 1.5 мм.

Опудривание гранулята проводят на смесительной установке, последовательно загружая необходимые количества гранулята, крахмала картофельного с влажностью не более 20%, стеарата кальция или магния, некондиционные измельченные таблетки.

3) Таблетирование таблеточной массы

Процесс таблетирования таблетмассы таблеток включает в себя стадии:

- таблетирование;

- обеспыливание таблеток.

Таблетирование таблеточной массы производят на таблетпрессе, предварительно отрегулировав параметры прессования (среднюю массу таблеток, усилие прессования, высоту таблетки). На этой стадии проводят отбор проб таблеток на соответствие по:

- описанию;

- средней массе таблеток;

- распадаемости.;

- количественному содержанию.

Обеспыливание таблеток производят в обеспыливателе, который входит в аппаратную схему таблетпресса.

2.2 Метод прямого прессования

Метод прямого прессования позволяет значительно сократить производственный процесс за счёт исключения таких стадий, как приготовление гранулирующего раствора, увлажнения, влажного гранулирования, сушки, сухой грануляции. Это позволяет повысить качество готовой продукции, особенно полученной на основе термолабильных и светочувствительных субстанций, увеличивает стабильность препаратов в процессе хранения.

Однако для производительной работы таблеточных машин прессуемый материал должен обладать оптимальными технологическими характеристиками (сыпучестью, прессуемостью, влажностью и др.) Такими характеристиками обладает лишь небольшое число не гранулированных порошков - вещества, имеющие изометрическую форм частиц приблизительно одинакового гранулометрического состава, не содержащих большого количества мелких фракций. Они хорошо прессуются.

Одним из методов подготовки лекарственных веществ к прямому прессованию является направленная кристаллизация - добиваются получения таблетируемого вещества в кристаллах заданной сыпучести, прессуемости и влажности путем особых условий кристаллизации.

Широкое использование прямого прессования может быть обеспечено повышением сыпучести не гранулированных порошков, качественным смешиванием сухих лекарственных и вспомогательных веществ, уменьшением склонности веществ к расслоению.

2.3 Методики экспериментов

2.3.1 Анализ субстанции феназепама на содержание основного действующего вещества и других показателей качества

Анализу подвергалась субстанция феназепама, приобретаемая ООО «РОЗФАРМ» на других предприятиях. Контроль поступившей субстанции позволяет подтвердить подлинность, количественное содержание основного действующего вещества в сырье, которое в последующем используется для изготовления нестерильных лекарственных препаратов. Испытания проводились в соответствии с ФС 42-2411-04.

Таблица 2.1

Числовые показатели, влияющие на качество субстанции феназепама

Наименование показателей	Норма
Температура плавления	225оС - 230оС
Посторонние примеси	Не более 0.05%
Потеря в массе при высушивании (определение влаги)	Не более 0.5%
Сульфатная зола	Не более 0.1%
Количественное содержание действующего вещества (феназепама)	Не менее 99%



2.3.1.1 Описание внешнего вида субстанции феназепама

Рисунок 2.1 - Структура феназепама (7-бром-1.3-дигидро-5-(2-хлорфенил)-2Н-1.4-бензодиазепин-2-она)

Феназепам представляет собой белый или белый со слегка желтоватым или кремовым оттенком кристаллический порошок [17].

2.3.1.2 Определение растворимости

Растворимость является физическим показателем подлинности субстанции.

Растворимость в фармакопейном анализе рассматривают, как свойство лекарственного вещества растворяться в различных растворителях. Растворимость при постоянной температуре является одной из основных характеристик, с помощью которой подтверждается подлинность лекарственных веществ.

В соответствии с ФС 42-2411-04 субстанция феназепама практически нерастворима в воде и эфире, мало растворима в этиловом спирте 95% и умеренно растворима в хлороформе.

Определение проводят в соответствии с ГФ XII, вып.1, с. 175.

Методика определения растворимости субстанции

Для определения растворимости субстанции феназепама применяют следующие растворители: этиловый спирт 95%, хлороформ.

1 г субстанции феназепама вносят в 100 см³ хлороформа и непрерывно встряхивают в течение 10 минут при 20±2°С. Предварительно навеска должна быть растерта.

1 г субстанции феназепама вносят в 1000 см³ этилового спирта 95% и непрерывно встряхивают в течение 10 минут при 20±2°С.

Субстанцию считают растворившейся, если в растворе при наблюдении в проходящем свете не обнаруживаются частицы вещества [17].

2.3.1.3 Определение подлинности

Испытание на подлинность - это подтверждение идентичности анализируемого лекарственного вещества (лекарственной формы), осуществляемое на основе требований ФС 42-2411-04.

Для определения подлинности феназепама разработаны следующие методики.

1) Качественная реакция

Реакция на блокированную ароматическую аминогруппу является качественной реакцией на определение лекарственных средств бензодиазепинового ряда. Данная реакция протекает по схеме представленной на рисунке 2.2.

Рисунок 2.2 - Качественная реакция на феназепам

Методика эксперимента

0.02 г субстанции феназепама нагревают до кипения с 2 см³ разведенной кислоты хлороводородной в течение 3 минут и охлаждают. В полученный раствор добавляют нитрит натрия и проводят реакцию диазотирования. Затем в полученную соль диазония добавляют резорцин в щелочной среде и получают азокраситель красного цвета.

2) Специфическая реакция.

При плавлении лекарственных веществ образуются плавы различного цвета, что является специфической реакцией на определении подлинности субстанции феназепама.

При плавлении субстанции феназепама образуется плав фиолетового или красно-фиолетового цвета. Раствор плава феназепама в этиловом спирте 95% имеет особенность, его окраска изменяется в зависимости от рН среды: при рН<7 окраска изменяется от сине-зеленой до желтой, а при рН>7 - в сине-фиолетовую.

Методика эксперимента

Небольшое количество субстанции феназепама нагревают в сухой пробирке над пламенем горелки до образования плава.

Затем к плаву добавляют этиловый спирт 95% и в полученный раствор добавляют раствор едкого натра или разведенную серную кислоту.

3) Спектрофотомерия в инфракрасной области.

Инфракрасный спектр химического соединения является одной из его наиболее важных характеристик, так как получаемый ИК - спектр содержит ценную информацию о строении соединений.

ИК - спектры поглощения обусловлены переходами между двумя колебательными уровнями молекулы, находящейся в основном электронном состоянии. В ИК - спектрах проявляются (активны) колебания, которые сопровождаются изменением дипольного момента молекулы.

Методика определения

Инфракрасный спектр субстанции феназепама снимался на спектрометре ИнфраЛЮМ ФТ.

Для определения подлинности субстанции феназепама используются диски с КВr. Навеску твердого вещества (1-3 мг) тщательно смешивают в вибромельнице или в ступке со спектроскопически чистым бромидом калия (150-200 мг) и смесь прессуют при давлении 7.5-10 т/см² в течение 2-5 минут под вакуумом 2-3 мм рт. ст.

Спектр полученного образца снимают относительно воздуха или относительно диска, приготовленного из чистого КВr, помещенного во второй канал прибора [17].

2.3.1.4 Определение температуры плавления

Под температурой плавления вещества подразумевают интервал температуры между началом плавления - появлением первой капли жидкости и концом плавления - полным переходом вещества в жидкое состояние. Температура плавления - постоянная характеристика для индивидуального лекарственного вещества. В присутствии даже небольшого количества примесей она изменяется, что используется для подтверждения степени чистоты лекарственного вещества.

Методика определения температуры плавления

Для анализа субстанции феназепама используют прибор для определения температуры плавления с диапазоном измерений в пределах от 20 до 360°С с электрическим обогревом (рисунок 2.3).

Рисунок 2.3 - Прибор для определения температуры плавления

Прибор состоит из следующих частей:

1) основание со щитком управления и номограммой;

2) стеклянный блок-нагреватель, обогрев которого осуществляется константановой проволокой, навитой бифилярно;

3) оптическое приспособление;

4) приспособление для установки термометров;

5) приспособление для установки капилляров;

6) термометр укороченный с ценой деления 0.5°С;

7) источник нагрева (электрический обогрев);

8) капилляры длиной 20 см.

Колбу наполняют на ѕ объема шара концентрированной серной кислотой. Тонко, измельченную субстанцию феназепама сушат при температуре от 100 до 105°С в течение 21 ч. Высушенную субстанцию помещают в капилляр, имеющий диаметр от 0.9 до 1 мм и толщину стенки от 0.1 до 0.15 мм, запаянный с одного конца.

При плавлении в приборе длина капилляра должна быть 20 см. Для уплотнения вещества капилляр многократно бросают в стеклянную трубку высотой не менее 50 см, поставленную вертикально на стекло. Высота слоя вещества в капилляре должна быть около 3 мм. Капилляр с веществом сохраняют до начала определения в эксикаторе.

Во внутреннюю пробирку прибора помещают термометр так, чтобы конец его отстоял от дна пробирки на 1 см.

Нагревание в приборе проводят сначала быстро, а затем регулируют его так, чтобы за 10°С до начала плавления была достигнута необходимая скорость подъема температуры, указанная ниже.

За 10°С до ожидаемого начала плавления капилляр с веществом вносят в прибор таким образом, чтобы запаянный конец его находился на нижней части столика, расположенной на уровне середины ртутного шарика термометра.

Продолжают нагревание со скоростью от 1.5 до 2°С в 1 минуту;

Проводят не менее двух определений; за температуру плавления принимают среднее арифметическое значение нескольких определений, проведенных в одинаковых условиях и отличающихся друг от друга не более чем на 1°С [17].



2.3.1.5 Прозрачность раствора

Прозрачность раствора является физическим показателем для определения чистоты лекарственного вещества.

Методика определения

Прозрачность жидкости определяют путем сравнения испытуемой жидкости с растворителем или эталонами.

0.1 г навески субстанции феназепама растворяют в 10 см³ хлороформа и сравнивают с раствором хлороформа. Раствор субстанции феназепама не должен отличаться от растворителя.

Испытание проводят при освещении электрической лампой матового стекла мощностью 40 Вт на черном фоне при вертикальном расположении пробирок (рисунок 2.4).

Рисунок 2.4- Схема просмотра прозрачности жидкости

На рисунке 2.4 приведены следующие обозначения: 1- источник света, 2 - экран, 3 - зона контроля, 4 - глаза.

Жидкость считают прозрачной, если при ее рассмотрении невооруженным глазом не наблюдается присутствие нерастворенных частиц, кроме единичных волокон [17].

2.3.1.6 Цветность раствора

Цветность раствора является физическим показателем чистоты лекарственного вещества. Возможное появление окраски обусловлено присутствием посторонних примесей.

Методика определения

Берут точную навеску субстанции феназепама и растворяют в 10 см³ хлороформа, затем сравнивают полученный раствор с раствором хлороформа.

Исследуемые жидкости берут для сравнения в равных количествах. Сравнение проводят в пробирках одинакового стекла и диаметра при дневном отраженном свете на матово-белом фоне.

Окраска исследуемого образца должна быть вполне идентична эталону или только приближаться к отмеченной окраске, не превышая ее по интенсивности, но несколько отличаясь от нее по тону. Жидкость рассматривают сверху через весь слой жидкости на матово-белом фоне. Исследуемый раствор считается бесцветным, если он не отличается от цвета растворителя [17].

2.3.1.7 Посторонние примеси

Содержание примесей должно строго контролироваться, что бы исключить присутствие токсичных соединений или наличие индифферентных веществ в лекарственных средствах в таком количестве которые мешают их использование для конкретных целей.

Определение посторонних примесей в субстанции феназепама проводят при помощи тонкослойной хроматографии.

Методика определения:

0.01 г препарата растворяют в 1 см³ ацетона (раствор №1). 0.02 см³ полученного раствора №1 (200 мкг) наносят на линию старта пластинки Силуфол УФ 254 размером 5x15 см. Рядом, в качестве свидетеля, наносят 0.01 см³ 0.001% раствора феназепама (0.1 мкг) в ацетоне (раствор №2). Пластинку с нанесенной пробой высушивают на воздухе в течение 5 минут, а затем помещают в камеру со смесью растворителей этилацетат, гексан, кислота муравьиная в соотношении (15:5:2) и хроматографируют восходящим методом. Когда фронт растворителя пройдет расстояние 10 см, пластинку вынимают из камеры, сушат на воздухе в течение 5 мин, а затем просматривают в ультрафиолетовом свете при длине волны 254 нм. На хроматограмме раствора №1 должно быть одно пятно, совпадающее по интенсивности и расположению с хроматограммой раствора № 2.

Подготовка пластины: пластинку Силуфол УФ 254 помещают в камеру для хроматографирования со смесью растворителей этилацетат, гексан, кислота муравьиная в соотношении (15:5:2) и хроматографируют восходящим методом. Когда фронт подвижной фазы дойдет до конца пластины, ее вынимают из камеры и высушивают на воздухе в течение 30 минут. Смесь растворителей для элюирования должна быть свежеприготовленной.

Приготовление 0.001% раствора феназепама (раствор №2): 0.01 г феназепама растворяют в 10 см³ ацетона; из полученного раствора отбирают 1 см³, помещают в мерную колбу вместимостью 100 см³ и доводят объем раствора ацетона до метки. Раствор должен быть свежеприготовленным [17].

2.3.1.8 Потеря в массе при высушивании

Под влагой субстанции понимают потерю в массе за счет гигроскопической влаги и летучих веществ, которую обнаруживают при высушивании субстанции до постоянной массы.

Содержание влаги в лекарственной субстанции служит одним из числовых показателей, характеризующий ее доброкачественность. Субстанция не должна содержать влаги выше допустимых норм, так как повышенная влажность при хранении создает условия, способствующие снижению качества субстанции.

Допустимый предел потери в массе при высушивании составляет 0.5%.

Методика определения

Точную навеску субстанции феназепама помещают в предварительно высушенный и взвешенный бюкс и сушат до постоянной массы. Если высушивание проводилось при нагревании, открытый бюкс вместе с крышкой помещают в эксикатор для охлаждения на 50 мин, затем закрывают крышкой и взвешивают. Первое взвешивание проводят после сушки в течение 2 ч. Последующие взвешивания проводят после каждого часа дальнейшего высушивания [17].

Определение проводят по формуле 2.1:

, (2.1)

где m₁ - масса навески до высушивания;

m₂-масса навески после высушивания.

2.3.1.9 Определение сульфатной золы

Золой называют остаток неорганических веществ, получаемый после сжигания сырья и последующего прокаливания остатка до постоянной массы.

При определении содержания золы необходимо помнить, что результаты зависят от длительности и температурного режима всего процесса озоления. Первое, на что следует обратить внимание, - это полнота сжигания. При быстром сжигании и высокой температуре может произойти сплавление частичек золы, сплавленные частички захватывают и покрывают собой несгоревшие еще частички сырья, в результате чего озоление проходит не полностью. На результат анализа влияют также длительность и температура прокаливания остатка, полученного после сжигания сырья.

Если содержание сульфатной золы превышает норму 0.1%, то это может привести к побочному фармакологическому эффекту.

Методика определения

Точную навеску препарата около 1 г, помещают в предварительно прокаленный и точно взвешенный фарфоровый, кварцевый или платиновый тигель, смачивают 1 см³ концентрированной серной кислоты и осторожно нагревают на сетке или песчаной бане до удаления паров серной кислоты. Затем прокаливают при слабом калении (около 500 °С) до постоянной массы, избегая сплавления золы и спекания ее со стенками тигля. По окончании прокаливания тигель охлаждают в эксикаторе и взвешивают.

В случае трудного сгорания прибавление концентрированной серной кислоты и прокаливание повторяют [17].

Содержание сульфатной золы определяется по формуле 2.2:

, (2.2)

где m₁ - масса навески до высушивания;

m₂ - масса навески после высушивания.

2.3.1.10 Количественное определение действующего вещества в субстанции феназепама

Количественное определение проводят в соответствии с ФС 42-2411-04

Методику количественного определения феназепама проводят путем неводного титрования 0.1 н раствором хлороводородной кислоты в среде хлороформа и уксусного ангидрида (1:1). В качестве индикатора используют кристаллический фиолетовый. Титрование ведут до желтого окрашивания. Использование хлороформа повышает растворимость феназепама в растворе уксусного ангидрида, так как в нем субстанция не растворима.

Методика определения

Около 0.3 г препарата растворяют в смеси 20 см уксусного ангидрида и хлороформа и титруют 0.1 н раствором кислоты хлороводородной до желтого окрашивания (0.15 см³ ) [17]. Расчет ведут по формуле 2.3.

, (2.3)

где V - объем кислоты пошедшей на титрование;

х - концентрация раствора, используемого для титрования;

m₀ - масса навески;

W - потеря при высушивании.

1 см³ 0.1 н раствора кислоты хлороводородной соответствует 0.03496 г C₁₅H₁₀BrClN₂O.

2.3.2 Методики определения готовой продукции препарата «Феназепама»

Анализу подвергался препарат «Феназепам», изготовленный на предприятии ООО РОЗФАРМ. Испытания проводились в соответствии ФСП 42-0284679805.

Препарат анализировался на подлинность, количественное содержание действующего вещества и другие показатели качества. В таблице 2.2 представлены основные числовые показатели, влияющие на качество готового препарата.

Таблица 2.2

Числовые показатели, влияющие на качество препарата «Феназепам» таблеток

Наименование показателей	Норма
Растворение	Не менее 70% за 45 минут
Посторонние примеси	Не более 0.25%
Количественное определение	От 0.0009 до 0.0011 г
Однородность дозирования	±15%

2.3.2.1 Определение подлинности препарата

Испытание на подлинность -- это подтверждение идентичности анализируемого лекарственного препарата, осуществляемое на основе требований ФС.

Наиболее точным и высокочувствительным является спектрофотометрический метод анализа, который основан на способности 1,2-дигидро-3Н-1,4-бензодиазепин-2-онов избирательно поглощать монохроматический свет в определенной области спектра. В их спектрах наблюдают три полосы поглощения с максимумами при 200-215, 220-230, 240-255 нм. Две первые полосы соответствуют возбуждению ароматических хромофоров, третью - длинноволновую полосу относят к азометиновой связи, сопряженной с бензольным кольцом [18].

Методика определения

Измерения оптической плотности проводят на спектрофотометре в диапазоне длин волн 200-255 нм, в кюветах с толщиной слоя 10 мм, относительно раствора стандартного образца (РСО).

Приготовление исследуемого раствора

Около 0.75 г (точная навеска) порошка растертых таблеток с дозировкой 0.001 г или около 0.6 г (точная навеска) порошка растертых таблеток с дозировкой 0.0025 г помещают в мерную колбу вместимостью 100 см³, прибавляют 25 см³ спирта 95% и встряхивают в течение 10 минут.

Доводят объем раствора спиртом 95% до метки, встряхивают и фильтруют.

Приготовление раствора РСО феназепама.

0.05 г (точная навеска) феназепама помещают в мерную колбу вместимостью 50 см³, взбалтывают в течение 10 минут. Доводят объем раствора спиртом 95% до метки и перемешивают (раствор 1) [18].

2.3.2.2 Определение растворимости препарата

Растворимость является физическим показателям подлинности полученного препарата.

Растворимость препарата «Феназепам» определяется спектрофотометрическим методом.

Методика определения растворимости

Приготовление раствора препарата проводят в соответствии с требованиями ОФС 42-0003-04, используя прибор типа «Вращающаяся корзина».

Среда 0.1 м раствора кислоты хлороводородной, объем - 500 см³, скорость вращения корзины - 100 об/мин, время растворения - 45 минут.

В корзину помещают одну таблетку. Через 45 мин раствор фильтруют через фильтр типа «Миллипор», с диаметром пор 0.45 мкм или бумажный фильтр, отбрасывая первые 15 см³ фильтрата. 10 см³ фильтрата для таблеток с дозировкой 0.0025 г помещают в мерную колбу вместимостью 25 см³ и доводят объем раствора 0.1 н раствором НСl до метки.

Для дозировки 0.001 г используется 25 см³ непосредственного фильтрата.

Определение оптической плотности раствора

Измерение оптической плотности полученного раствора проводят на спектрофотометре при длине волны 232 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм.

Параллельно измеряют оптическую плотность раствора рабочего стандартного образца (РСО) феназепама.

В качестве раствора сравнения используют 0.1 м раствор НС1. Количество феназепама, перешедшего в раствор в % (X) вычисляют по формуле 2.4.

, (2.4)

где D₁ -- оптическая плотность исследуемого раствора;

D₀ - оптическая плотность раствора РСО феназепама;

а₀ - навеска РСО феназепама, грамм;

В - содержание феназепама в одной таблетки в граммах;

V - объем пробы, взятой для определения, в см³;

Р - содержание основного вещества в РСО феназепама в %.

В раствор через 45 мин должно перейти не менее 70% (Q) феназепама.

Приготовление раствора РСО феназепама

0.08 г (точная навеска) феназепама помещают в мерную колбу вместимостью 200 см³, растворяют в 10 см³ спирта 95%, доводят объем раствора 0.1 н раствором хлороводородной кислотой до метки и перемешивают. 1 см³ полученного раствора вносят в мерную колбу вместимостью 200 см³, доводят объем раствора 0.1 н хлороводородной кислотой до метки и перемешивают.

Срок годности раствора 1 сутки [18].

2.1.2.3 Определение однородности дозирования

Проводят для таблеток без оболочки с содержанием 0.05 г и менее лекарственного вещества и для таблеток, покрытых оболочкой, с содержанием лекарственного вещества 0.01 г и менее. От серии, подлежащей испытанию, отбирают пробу таблеток в количестве 30 штук. В каждой из 10 таблеток определяют содержание лекарственного вещества. Содержание лекарственного вещества в одной таблетке может отклоняться более чем на ±15% от среднего содержания, и ни в одной таблетке не должно превышать ±25%. Если из 10 испытанных таблеток 2 таблетки имеют отклонения содержание лекарственного вещества более чем на ±15% от среднего, определяют содержание лекарственного вещества в каждой из оставшихся 20 таблеток. Отклонение в содержании лекарственного вещества ни в одной из 20 таблеток не должно превышать более чем ±15% от среднего.

Для осуществления данного определения используют спектрофотомерический метод.

Определение проводят в соответствии с требовании ГФ XII, вып. 2, с.154.

Методика определения

Одну таблетку помещают в мерную колбу вместимостью 25 см³, прибавляют 1.5 см³ воды, встряхивают в течение 5 минут. Прибавляют 20 см³ спирта 95% взбалтывают в течение 5 минут, доводят объем раствора спиртом 95% до метки, перемешивают и фильтруют через плотный бумажный фильтр. 12.5 см³ фильтрата для таблеток с дозировкой 0.001 г или 5 см³ для таблеток с дозировкой 0.0025 г помещают в мерную колбу вместимостью 100 см³, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают.

Измеряют оптическую плотность полученного раствора на спектрофотометре в максимуме поглощения при длине волны 232 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм.

Параллельно измеряют оптическую плотность раствора РСО феназепама. В качестве раствора сравнения используют смесь спирт 95% - вода (1:10). Содержание феназепама в одной таблетки в граммах (X) вычисляют по формуле2.5:

, (2.5)

где D₁ - оптическая плотность исследуемого раствора;

D₀ - оптическая плотность раствора РСО феназепама;

а_о - навеска РСО феназепама, г;

V - объем исследуемой пробы, взятой для определения, в см³;

Р - содержание основного вещества в РСО феназепама в %.

Приготовление раствора РСО феназепама

Около 0.05 г (точная навеска) феназепама помещают в мерную колбу вместимостью 50 см³, взбалтывают в течение 10 минут. Доводят объем раствора спиртом 95% до метки и перемешивают (раствор 1).

Срок годности раствора 1 месяц при хранении в холодильнике [18].

2.3.2.4 Определение посторонних примесей

Содержание примесей должно строго контролироваться, чтобы исключить присутствие токсичных соединений или наличие индифферентных веществ в лекарственных средствах в таком количестве которые мешают их использование для конкретных целей.

Определение посторонних примесей в препарате «Феназепам» проводят методом тонкослойной хроматографии.

Методика определения

0.6 г порошка тщательно растертых таблеток для дозировки 0.01 г или 0.48 г для дозировки 0.0025 г взбалтывают с 2 см³ ацетона в течение 5 минут и фильтруют через бумажный фильтр.

На линию старта предварительной подготовленной пластинки Kieselgel 60 F254 размером 10x20 см наносят 0.05 см³ (100 мкг) и 0.01 см³ (20 мкг) полученного раствора. Рядом наносят 0.02 см (20 мкг) раствора стандартного образца вещества свидетеля (СОВС) феназепама, 0.05 см³ (0.25мкг), 0.02 см (0.1 мкг) и 0.01 см³ (0.05 мкг) раствора СОВС 1 феназепама. Пластинку с нанесенными пробами сушат на воздухе в течение 5 минут, помещают в насыщенную камеру со смесью этилацетат - гексан - кислота муравьиная (15:5:2) и хроматографируют восходящим методом.

Когда фронт подвижной фазы пройдет 15 см от линии старта, пластинку вынимают из камеры, сушат на воздухе в течение 15 минут и просматривают в УФ свете при длине волны 254 нм.

На хроматограмме препарата (100 мкг) кроме основного пятна допускается появление только одного пятна примеси, которое по величины и интенсивности не должно превышать пятно на хроматографе 0.25 мкг СОВС феназепама (не более 0.25%).

Проверка пригодности хроматографической системы.

Приготовление раствора СОВС феназепама: 0.05 г феназепама растворяют в 20 см³ ацетона в количественной колбе со спиртом вместимостью 50 см³.

Срок годности раствора 1 месяц при хранении в холодильнике.

Приготовление раствора СОВС 1 феназепама.

0.5 см³ раствора 1 помещают в мерную колбу вместимостью 100 см³ и доводят объем раствора ацетоном до метки.

Приготовление пластинки: Пластинку с закрепленным слоем силикагеля Kieselgel 60 F₂₅₄ раствором 10x20 см помещают в камеру для хроматографирования со смесью этилацетат - гексан - кислота муравьиная (15:5:2) и хроматографируют восходящим методом. Когда фронт подвижной фазы дойдет до конца пластинки, ее вынимают из камеры и сушат на воздухе в течение 30 минут. Проверка пригодности хроматографической системы. Хроматографическая система считается пригодной, если на хроматограмме СОВС 1 четко видно пятно (0.05 мкг) [18].

2.3.2.5 Количественное определение действующего вещества в препарате «Феназепам»

Количественное определение основного действующего вещества в препарате определяется при помощи спектрофотометрического метода.

Методика определения

Измерение оптической плотности проводят на спектрофотометре при длине волны 232 нм в кюветах с толщиной слоя 10 мм.

0.75 г (точная навеска) порошка растертых таблеток с дозировкой 0.001 г или 0.6 г (точная навеска) порошка растертых таблеток с дозировкой 0.0025 г помещают в мерную колбу вместимостью 100 см³, прибавляют 25 см³ спирта 95% и встряхивают в течение 10 минут. Доводят объем раствора спиртом 95% до метки, встряхивают и фильтруют (раствор А).

5 см³ раствора А помещают в мерную колбу вместимостью 50 см³ доводят объем раствора водой до метки и перемешивают (раствор Б).

Параллельно измеряют оптическую плотность раствора РСО феназепама. В качестве раствора сравнения используют смесь спирт 95% - вода (1:10). Содержание феназепама в одной таблетки в граммах (X) вычисляют по формуле 2.6:

, (2.6)

где D₁ - оптическая плотность исследуемого раствора;

D₀ - оптическая плотность раствора РСО феназепама;

a₁ - навеска порошка растертых таблеток в граммах;

а₀ - навеска РСО феназепама, грамм;

b - средняя масса таблетки, грамм;

Р - содержание основного вещества в РСО феназепама в %.

Содержание феназепама должно быть от 0.0009 до 0.0011 г для дозировки 0.001 г и от 0.00225 до 0.00275 г для дозировки 0.0025 г считая на среднюю массу таблетки.

Приготовление раствора РСО феназепама. Около 0.05 г (точная навеска) феназепама помещают в мерную колбу вместимостью 50 см³, взбалтывают в течение 10 минут. Доводят объем раствора спиртом 95% до метки и перемешивают (раствор 1).

Срок годности раствора 1 месяц при хранении в холодильнике.

5 см³ раствора 1 помещают в мерную колбу вместимостью 100 см³, доводят объем раствора спиртом 95% до метки и перемешивают (раствор А).

5 см³ раствора А помещают в мерную колбу вместимостью 50 см³, доводят объем раствора до метки и перемешивают (раствор Б) [18].

2.3.2.6 Оценка фармацевтической эквивалентности таблетизированных лекарственных форм феназепама

Цель эксперимента - проведение сравнительной оценки фармацевтической эквивалентности (по профилям растворения) лекарственных форм психотропного лекарственного средства феназепама на примере таблеток, полученных по действующей технологии (1), таблеток полученных методом прямого прессования (3) и таблеток, с измененным составом и полученных с использованием размолотой субстанции (2).

Исследовались таблетки феназепама 0,001 г 3-х вариантов, соответствующих требованиям действующей ФСП (кроме качественного состава).

Испытание на растворение проводится по методике, описанной в ФСП на препарат «Феназепам» таблетки 1 мг", используя вместо одной временной точки отбора проб несколько точек.

Тест проводится на приборе SOTAX AT 7 smart (Швейцария), аппарат типа "Вращающаяся корзинка", скорость вращения 100 об/мин. В качестве среды растворения используется 0.1 М раствор кислоты хлористоводородной, объем среды растворения 500 мл, температура 37 °С.

Испытание проводится на 12 таблетках для каждого препарата. Отбор проб осуществляется через 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40 и 45 мин после начала испытания. Объем пробы составляет 10 мл, после отбора среду растворения восполняют в том же объеме. Отобранные пробы фильтруются через мембранный фильтр типа "Millipore" с размером пор 0,45 мкм.

Содержание активного вещества, высвободившегося в среду растворения, определяется методом УФ-спектрофотометрии по интенсивности поглощения испытуемых растворов. Измерение оптической плотности проводится на спектрофотометре СФ-46 в кювете с толщиной слоя 10 мм в максимуме поглощения при длине волны 243 нм относительно раствора рабочего стандартного образца (РСО) феназепама.

Для каждого установленного промежутка времени процент высвободившегося лекарственного вещества (ЛФ) феназепама рассчитывается по формуле, учитывающей восполнение среды растворения.

Эквивалентность кинетики растворения исследуемых ЛФ оценивается с помощью коэффициента различия и коэффициента подобия.

Коэффициент различия (f₁) показывает процент ошибки между двумя кривыми по всем временным точкам и рассчитывается по формуле 2.7:

f₁ = (2.7)

где n - число точек времени;

R_j и T_j - процентное содержание лекарственного вещества, высвободившегося в среду растворения, в момент времени j.

Коэффициент различия равен нулю, если профили испытуемого и стандатного ЛС идентичны. По мере увеличения различия между двумя профилями растворения значение коэффициента возрастает.

Коэффициент подобия (f₂) - это величина, представляющая собой логарифмическое преобразование значения суммы квадратов ошибок, рассчитанных по разности между испытуемым T_j и стандартным образцом R_j во всех точках времени. Коэффициент подобия рассчитывается по формуле 2.8:

f₂ = (2.8)

где n - число точек времени;

R_j и T_j - процентное содержание лекарственного вещества, высвободившегося в среду растворения, в момент времени j.

Коэффициент подобия может принимать значения от 0 до 100. По мере уменьшения эквивалентности профилей растворения значение коэффициента подобия приближается к 0.

Профили растворения принято считать эквивалентными (подобными), если значение f₁ находится в пределах диапазона от 0 до 15 и значение f₂ находится в пределах диапазона от 50 до 100 [19,21,23].

2.4 Результаты и обсуждения

Исследования проводились в контрольно-аналитической лаборатории отдела контроля качества (ОКК) ООО «РОЗФАРМ». В качестве объектов исследования были выбраны входное сырье (субстанция) феназепама и готовая форма препарата «Феназепам».

2.4.1 Анализ субстанции феназепама по основным показателям качества

Исследования проводились с готовой субстанцией феназепама, поставщик ООО «Протек - СВМ» на соответствии ФСП 42-2411-04. Для объективной и достоверной оценки качества данной субстанции по всем проверяемым показателям проводились 3 параллельных опыта с пробами из этого образца.

2.4.1.1 Описание субстанции феназепама

По внешнему описанию все 3 пробы представляли собой белый кристаллический порошок с сероватым оттенком, что соответствует показателю качества субстанции.

2.4.1.2 Растворимость субстанции феназепам

Исследование проводилось в соответствии с методикой, приведенной в п. 2.3.1.2.

Проведение анализа показало, что субстанция феназепама мало растворима в этиловом спирте 95% и умеренно растворима в хлороформе, что соответствует норме, и доказывает подлинность субстанции феназепама.

2.4.1.3 Определение подлинности

Испытание на подлинность субстанции феназепама проводилось несколькими методами, представленными в методике 2.3.1.3.

1) Качественная реакция на блокированную ароматическую аминогруппу: при прибавлении к 0.02 г субстанции феназепама 2 см³ разведенной кислоты хлороводородной, нитрита натрия и резорцина наблюдалось красное окрашивание, что свидетельствовало о присутствии вещества бензодиазепинового ряда. Таким образом, качественная реакция положительная.

2) Специфическая реакция: при плавлении субстанции феназепама образовывался плав красно-фиолетового цвета. При добавлении в плав раствора едкого натра красно-фиолетовая окраска раствора плава в 95%-ном спирте переходит в сине-фиолетовую, а при добавлении разведенной серной кислоты - в сине-зеленую, зеленую и желтую.

3) Спектрофотометрия в инфракрасной области: при исследовании ИК-спектра феназепама были рассмотрены характеристические частоты основных функциональных групп, входящих в его состав.

Для вторичных амидных групп характерно наличие поглощения в области валентных колебаний связей N - Н (3500 - 3100 см^-1). Так, в спектре наблюдаются интенсивные полосы поглощения при 3200 см^-1 и 3100 см^-1. Согласно литературным данным вторичные амиды могут давать две полосы.

Полоса деформационных колебаний NH-групп (вторичных аминов) расположена в области 1600-1500 см^-1, обычно слабая и сливается с поглощением ароматического кольца (1625-1440 см^-1).

В области карбонильных поглощений (1900-1580 см^-1) амидная группа имеет две полосы поглощения. Первая из них наблюдается при 1690 см^-1, эта полоса обусловлена сложными колебаниями карбонильной группы, в которых принимает большое участие связь N-H. Вторая при 1600 см^-1. Поглощение связи C=N (в цикле) отвечает полоса поглощения 1580 см^-1.

В области 1625-1440 см^-1 наблюдаются интенсивные полосы поглощения, отвечающие валентным колебаниям ароматического кольца.

Валентные колебания С - Н связи отвечают полосы в 3000 см^-1 и 2910 см^-1, 1175-860 см^-1 отвечают деформационным колебаниям СН связи ароматического кольца.

ИК-спектр субстанции феназепама представлен на рисунке 2.5

2.4.1.4 Определение температуры плавления

Исследования проводились в соответствии с методикой, представленной в п.2.3.1.4.

Температура плавления для вещества феназепам составляет от 225°С - 230°С. В ходе проведения эксперимента было получено, что субстанция феназепама плавиться от 225.5°С - 226°С, что подтверждает подлинность вещества.



Рис. 2.5

2.4.1.5 Прозрачность раствора

Определение проводилось в соответствии с методикой 2.3.1.5. Исследование показало, что раствор феназепама в хлороформе прозрачен, что говорит о том, что в нем нет ни каких посторонних частиц других веществ.

2.4.1.6 Цветность раствора

Определение проводилось в соответствии с методикой 2.3.1.6. Исследование показало, что раствор феназепама в хлороформе бесцветен, это говорит о чистоте субстанции, В ней не содержится посторонних примесей других веществ.

2.4.1.7 Посторонние примеси

Наличие примесей определялось методом тонкослойной хроматографии согласно с методикой, представленной в п. 2.3.1.7.

Посторонние примеси в субстанции феназепама определяется тонкослойной хроматографией.



Рисунок 2.6 - Хроматограмма субстанции феназепама

При рассмотрении полученной хроматограммы при ультрафиолетовом свете при длине волны 254 нм мы наблюдаем пятна. Пятно исследуемого раствора феназепама совпадает по интенсивности и R_f с пятном свидетеля.

2.4.1.8 Потеря в массе при высушивании

Определение проводились в соответствии с методикой 2.3.1.8., было рассчитана по формуле 2.1 процентная потеря в массе при высушивании; результаты представлены в таблице 2.3.

Таблица 2.3

Количественное содержание влаги в субстанции феназепама

Масса навески, г	Масса бюкса с навеской, г	Вес бюксов с навеской после сушки, г	Потеря в массе при высушивании W,%	Среднее значение из 3-х параллельных испытаний W,%	Допустимый предел значений, %
0.4846	32.3321	32.3318	32.3321	0.06	0.076	Не более 0.5%
0.5934	32.6647	32.6642	32.6647	0.08
0.5354	32.2554	32.2549	32.2554	0.09

Среднее значение равно 0.076%, оно удовлетворяет норме (не более 0.5%) по данному показателю качества субстанции.

2.4.1.9 Сульфатная зола