Главная
База знаний "Allbest"
Химия
Тонкослойная хроматография и ее роль в контроле качества пищевых продуктов
Тонкослойная хроматография и ее роль в контроле качества пищевых продуктов
Общая характеристика процесса хроматографии. Физико-химические основы тонкослойной хроматографии, классификация методов анализа. Варианты хроматографии по фазовым состояниям. Контроль качества пищевых продуктов посредством метода ТСХ, оборудование.
| Рубрика | Химия |
| Вид | курсовая работа |
| Язык | русский |
| Дата добавления | 27.12.2009 |
| Размер файла | 371,8 K |
Отправить свою хорошую работу в базу знаний просто. Используйте форму, расположенную ниже
Студенты, аспиранты, молодые ученые, использующие базу знаний в своей учебе и работе, будут вам очень благодарны.
Растительные масла. 10 мл масла наливают в делительную воронку, прибавляют 20 мл ацетона, встряхивают и приливают 10 мл этилового спирта. Выделившееся масло сливают. К ацетоно-спиртовому экстракту прибавляют 100 мл 2%-ного водного раствора сернокислого натрия. Из смеси экстрагируют препарат 2 раза н-гексаном порциями по 30 мл, каждый раз встряхивая 5 мин. К объединенным гексановым экстрактам прибавляют 20 мл насыщенного раствора безводного сернокислого натрия в серной кислоте и осторожно встряхивают несколько раз. Отделяют органический слой и повторяют обработку до тех пор, пока кислота не обесцветится. Сушат экстракт и испаряют растворитель до 0,1--0,2 мл.
Молоко, сливки. К 50 мл молока или 20г сливок прибавляют концентрированную серную кислоту (30--40 мл) до полного почернения пробы. Охлажденный до 10--15° С раствор переносят в делительную воронку и экстрагируют н-гексаном 2 раза порциями по 25 мл. Для полного извлечения воронку встряхивают 2 мин, затем оставляют ее на несколько минут до полного разделения слоев. Если образуется эмульсия, прибавляют 1--2 мл этилового спирта. К объединенным экстрактам в делительной воронке прибавляют 10 мл концентрированной серной кислоты, насыщенной сернокислым натрием, и осторожно встряхивают несколько раз. Очистку повторяют до получения бесцветной кислоты.
Творог, сыр. 50 г творога или 10 г измельченного на терке сыра заливают 40 мл н-гексана или петролейного эфира, непрерывно встряхивают 2--3 мин и периодически встряхивают в течение 30 мин. Экстракцию повторяют. Объединенные экстракты в делительной воронке очищают серной кислотой, как указано выше.
Сливочное масло. 20 г сливочного масла растапливают на водяной бане в круглодонной колбе, прибавляют 50 мл ацетона, тщательно перемешивают до растворения жира, прибавляют 10 мл ледяной дистиллированной воды и охлаждают па льду до затвердения жира (примерно 30 мин). Сливают ацетоновый экстракт процедуру повторяют 3 раза. Из объединенных экстрактов в круглодонной колбе ацетон отгоняют на водяной бане. Пестициды экстрагируют из оставшегося водного экстракта гексаном тремя порциями по 10 мл в течение 5 мин. Объединенные гексановые экстракты в делительной воронке обрабатывают серной кислотой с сернокислым натрием. Очищенный экстракт сушат и упаривают. Второй способ подготовки проб молока и молочных продуктов. Молоко (кефир, простокваша, кумыс и другие цельномолочные продукты). 25 мл продукта помещают в делительную воронку на 300 мл, приливают по 5 мл раствора оксалата калия и насыщенного раствора NaCl, перемешивают, приливают 100 мл ацетона, встряхивают 2 мин. Приливают 100 мл хлороформа и встряхивают 2 мин. Воронку оставляют до полного разделения слоев. Верхнюю фазу отбрасывают, а нижнюю выливают в круглодонную колбу со шлифом и испаряют растворитель досуха. Остаток смывают 30 мл гексана.
Сгущенное молоко. 10--20%-ные сливки. К 10 г продукта прибавляют 10 мл насыщенного раствора NaCI и выливают в делительную воронку вместимостью 150 мл. К смеси приливают 40 мл ацетона, встряхивают 2 мин, приливают 60 мл хлороформа, встряхивают 2--3 мин и оставляют до разделения фаз. Далее поступают, как при определении пестицидов в молоке.
Сгущенные молочные продукты. 10 г продукта помещают в стаканчик, заливают 10 мл воды с температурой 45--50° С, перемешивают и переносят в делительную воронку емкостью 150 мл, добавляют 5 мл раствора оксалата калия. Содержимое воронки перемешивают, приливают 80 мл ацетона и встряхивают 2--3 мин, добавляют 100 мл хлороформа и встряхивают 5--7 мин. После разделения фаз нижнюю фазу сливают в круглодонную колбу, растворители отгоняют, а остаток растворяют в 30 мл петролейного эфира.
Сухие молочные продукты. 3 г сухих молочных продуктов (2 г сухих сливок) высыпают в стаканчик, приливают 15 мл дистиллированной воды с температурой 40--45° С, размешивают и переносят в делительную воронку вместимостью 300 мл, приливают по 5 мл раствора оксалата калия и насыщенного раствора поваренной соли. Содержимое воронки перемешивают, добавляют 80 мл ацетона и встряхивают 3--5 мин, приливают 100 мл хлороформа, встряхивают 5 мин и оставляют на 3--5 мин (до разделения фаз). Нижнюю фазу сливают в колбу, растворители отгоняют, а остаток смывают 30 мл н-гексана.
Масло, молочный жир. 2 г продукта высыпают в стаканчик, подогревают до 40° С и растворяют в 30 мл н-гексана.
Сметана, 30--40%-ные сливки. 5 г продукта отвешивают в стаканчик, добавляют 10 мл насыщенного раствора поваренной соли и переносят в делительную воронку вместимостью 150 мл. Стаканчик обмывают 40 мл ацетона, смывы переносят в делительную воронку, которую встряхивают 1--2 мин, добавляют 70 мл хлороформа и встряхивают 2--3 мин. Воронку оставляют на 3--5 мин (до разделения фаз), нижнюю фазу слипают в колбу для отгонки растворителей, растворители отгоняют, а остаток смывают 30 мл л-гексана.
Творог, сыр. 10 г творога или измельченного на терке сыра растирают с 10 мл насыщенного раствора поваренной соли и переносят в делительную воронку на 250--300 мл. Прибавляют 80 мл ацетона, встряхивают 2 мин, прибавляют 100 мл хлороформа и вновь встряхивают. Нижнюю фазу используют для анализа после отгонки растворителей, растворив остаток в 30 мл н-гексана.
Очистка экстракта от молочного жира. В нижнюю часть хроматографической колонки помещают стекловату, затем насыпают в колонку 70 мл силикагеля АСК и уплотняют его постукиванием. Колонку промывают 50 мл гексана, а прошедший через нее растворитель отбрасывают. На подготовленную таким образом колонку наносят 30 мл полученного из молока или молочных продуктов экстракта. После впитывания экстракта в сорбент пестицид элюируют 110мл смеси бензола с гексаном (3:8) порциями по 25--30 мл. Элюат собирают в круглодонную колбу со шлифом вместимостью 250--300 мл. Через 10 мин после впитывания последней порции растворителя сорбент отжимают с помощью резиновой груши. После очистки растворители отгоняют под вакуумом.
Хроматографирование. На хроматографическую пластинку на расстоянии 1,5 см от ее края шприцем или пипеткой наносят исследуемую пробу в одну точку так, чтобы диаметр пятна не превышал 1 см.
Остаток экстракта в колбочке смывают тремя небольшими порциями (по 0,2 мл) диэтилового эфира, которые наносят в центр первого пятна. Справа и слева от пробы на расстоянии 2 см наносят стандартные растворы, содержащие 1,5 и 10 мкг исследуемых препаратов. Для нанесения 1 мкг стандартный раствор следует разбавлять в 10 раз.
Пластинку с нанесенными растворами помещают в камеру для хроматографирования, на дно которой за 30 мин до начала хроматографирования наливают подвижный растворитель н-гексан, а для препаратов, у которых Rf в гексане ниже 0,3 -- смесь гексана с ацетоном (6:1). Край пластинки с нанесенными растворами может быть погружен в подвижный растворитель не более чем на 0,5 см.
После того как фронт растворителя поднимется на 10 см, пластинку вынимают из камеры и оставляют на несколько минут для испарения растворителя. Далее пластинку орошают проявляющим реактивом и подвергают УФ-облучению 10--15 мин (лампа ПРК-4). Пластинки следует располагать на расстоянии 20 см от источника света.
При наличии хлорорганических пестицидов на пластинке появляются пятна серо-черного цвета. Количественное определение осуществляют сравнением размеров пятен пробы и стандартного раствора (визуально или измеряют площади). Между количеством препарата в пробе, не превышающем 20 мкг, и площадью его пятна на пластинке существует прямая пропорциональность. При большем содержании препарата следует использовать пропорциональную часть исследуемого экстракта.
Расчет количества препарата в пробе вычисляют по формуле:
X = A / P или
где X -- содержание препарата в пробе, мг/кг или мг/л; А -- количество препарата, найденное путем визуального сравнения со стандартным раствором, мкг; Р -- масса или объем исследуемой пробы, г или мл; А1 - содержание препарата в стандартном растворе, мкг; S1 - площадь пятна стандартного раствора, мм2; S - площадь пятна пробы, мм2.
Величина Rf зависит от адсорбента, размера его частиц, количества и природы связующего материала, толщины слоя, природы подвижного растворителя, степени насыщения камеры для хроматографирования парами подвижного растворителя, расстояния пройденного растворителем, температуры, количества и природы коэкстрактивных веществ.
Для ДДТ Rf для оксида алюминия составляет 0,61-0,71 (в зависимости от изомера) и 0,50-0,54 на силикагеле.
На слое оксида алюминия обнаруживаются три пятна, которые соответствуют 4,4'-ДДТ (основное пятно), 2,4'-ДДТ и 4,4'-ДДД (слабое пятно). Пятно ДДД проявляется, если содержание ДДТ в анализируемой пробе превышает 20 мкг. Содержание изомеров ДДТ суммируют. На хроматограммах проб пищевых продуктов, содержащих остаточные количества ДДТ, кроме упомянутых трех пятен, обнаруживается четвертое пятно, соответствующее продукту разложения ДДТ -- ДДЭ.
На слое силикагеля технический препарат ДДТ дает одно пятно, соответствующее сумме изомеров. Если количество ДДТ в пробе превышает 20 мкг, на хроматограмме появляется слабое пятно, соответствующее ДДД. [5]
2.2 Определение о,о-диэтил-8-(6-хлорбензоксазолинил-3-метил)-дитиофосфата (фозалона) в яблоках методом тонкослойной хроматографии
Фозалон применяется для борьбы с вредителями сада. [6]
В литературе описана идентификация фозалона и определение его в растениях колориметрическим и биологическим методами [7].
Однако эти методы весьма громоздки, так как требуют сложной очистки растительных экстрактов. Нами был разработан простой качественный и количественный метод определения остаточных количеств фозалона в яблоках с применением тонкослойной хроматографии. Исходным веществом служил чистый препарат фозалона. Опыты проводили с яблоками сорта Ренет Симиренко.
После испытания ряда экстрагентов для извлечения фозалона из яблок был избран хлороформ. Для идентификации фозалона применили метод тонкослойной хроматографии.
При подборе подвижной фазы был изучен ряд органических растворителей и их смесей. Наилучшей для идентификации фозалона является смесь гексана с ацетоном в соотношении 4:1.
Для проявления фозалона на хроматографических пластинках был испытан ряд реактивов, рекомендованных для проявления фосфорорганических пестицидов [8 - 11].
Наилучшие результаты дали 0,2%-ный раствор хлористого палладия [L. Fishbein, J. Fowkes, P. Jones. J. Chromatogr., 23, 47b (1966).] или смесь 0,05 %-ного раствора бром-фенолового синего в ацетоне с 1%-ным водным раствором AgNО3 в соотношении 1:1, с последующим отбеливанием хроматограмм 2,5%-ным раствором лимонной кислоты [Л. М. Фукельман. Сборник трудов ВИЗР, вып. 20, ч. 4, 61 (1964).]. Эти проявители позволяют обнаруживать до 1 мкг фозалона.
Рис. 5. Тонкослойная хроматограмма фозалона1 из экстракта яблок на силикагеле КСК. а - место нанесения экстракта; б - точка нанесения стандарта; в - место отложения фозалона
Рис. 6. Двухмерная тонкослойная хроматограмма фозалона из экстракта яблок на силикагеле КСК. а -- б -- место нанесения экстракта с содержанием фозалона 50 мкг; в, г, д - точки нанесения стандартных растворов фозалона, соответственно 25, 50 и 75 мкг.
Предлагаемая методика определения фозалона в яблоках заключается в следующем. 100 г яблок измельчают, наносят пипеткой определенное количество фозалона. Экстрагируют хлороформом при встряхивании на шутель-аппарате 1,5 часа. Хлороформный экстракт отделяют от растительной массы фильтрованием. Растительную массу на фильтре промывают трижды хлороформом (по 20 мл). Фильтрат и промывные порции хлороформа собирают в колбу для отгонки растворителя. Хлороформ отгоняют под вакуумом до объема 5--10 мл. Переносят его количественно в стаканчик, упаривают до 0,5 мл и наносят на пластинку полоской шириной 1 см длиной 5 см на расстоянии 1,5 см от нижнего края пластинки.
Для хроматографирования используют стеклянные пластинки размером 9 X 15 см, на которые наносят тонкий слой силикагеля марки КСК (40 меш), закрепленный гипсом.
Хроматографирование проводят в системе гексан -- ацетон (4:1).
Пластинки проявляют указанными выше проявителями. Причем в случае применения хлористого палладия пятна фозалона окрашиваются в желтый цвет на белом фоне, а примеси --.в коричневый. Окраска не исчезает в течение длительного промежутка времени. При применении второго проявителя пятна фозалона окрашиваются в синий цвет на желтом фоне, а примеси совсем не окрашиваются. Следует отметить, что в этом случае пятна фозалона через 10--15 мин. бледнеют. Rf фозалона равно 0,5 (рис. 5).
Чувствительность метода 0,1 мг/кг.
Этот вариант метода позволяет качественно определять содержание фозалона в растительной пробе.
Для количественного определения фозалона в пробе мы использовали двухмерную хроматографию на пластинках размером 15 20 см.
Экстракцию и отгонку проводят так же, как и в предыдущем случае. Экстракт без очистки наносят на пластинку полоской длиной 5 см и шириной 1 см на расстоянии 1,5 см от нижнего края (нижняя сторона пластинки 15 см) и 2 см от левого края пластинки.
Хроматографирование проводят в подвижном растворителе гексан -- ацетон (4 : 1). Дают растворителю продвинуться на 12--15 см, потом пластинку высушивают на воздухе в течение 20 мин. Далее поворачивают ее на 90е так, чтобы левый край пластинки служил основанием. С левой стороны пластинки наносят стандарты с разным содержанием фозалона и хроматографируют в том же подвижном растворителе. С целью получения хорошо сформированных пятен проводят повторное хроматографирование в том же направлении, но с применением другого подвижного растворителя -- хлороформа.
После проявления пластинок теми же реактивами, что и в предыдущем случае, получали пятна с Rf = 0,82 (рис. 6). Количественное определение фозалона проводят сравнением пятна анализируемой пробы с пятнами стандартов.
Предложенным методом было проведено определение остатков фозалона в яблоках (см. таблицу).
Определение фозалона в 100 г яблок
|
Внесено фозалона, мкг |
Найдено фозалона, мкг |
Ошибка |
Внесено фозалона, мкг |
Найдено фозалона, мкг |
Ошибка |
|||
|
мкг |
% |
мкг |
% |
|||||
|
25 |
20 |
5 |
- 20 |
75 |
70 |
5 |
- 6,7 |
|
|
50 |
45 |
5 |
-10 |
100 |
85 |
15 |
- 15 |
|
|
50 |
40 |
10 |
- 20 |
Глава 3. ТСХ - оборудование
3.1 Оборудование фирмы НТЦ ЛЕНХРОМ для инструментальной ТСХ
Оборудование фирмы НТЦ ЛЕНХРОМ позволяет провести все рабочие этапы современной тонкослойной хроматографии:
§ дозировка и нанесение проб
§ проведение процесса хроматографии
§ УФ-обнаружение
§ детектирование (окрашивание) хроматограмм
§ видеозапись изображений пластинок
§ количественная обработка хроматограмм
Объекты исследования и области применения планарной хроматографии
1. Готовые лекарственные формы
§ подлинность действующих веществ
§ точность дозировки
§ наличие вредных примесей и добавок
2. Фармакология
§ фармакокинетические исследования
§ изучение метаболизма действующих веществ
3. Биохимия и медицина
§ определение содержания важнейших биологически активных соединений в жидкостях и тканях организма
§ изменение содержания этих веществ при патологии
§ судмедэкспертиза
§ допинг-контроль
4. Охрана окружающей среды
§ анализ пестицидов в питьевой и сточных водах, осадках, продуктах питания
§ анализ токсических веществ (например, афлатоксинов) в продуктах питания
3.1.1 Портативный набор для тсх
Портативный набор для ТСХКомплект предназначен для качественного и полуколичественного анализов многокомпонентных смесей органических и неорганических веществ и может найти применение во всех областях науки и техники, где для анализа используется метод тонкослойной хроматографии.Комплект позволяет:
§ проводить анализ смесей методом ТСХ, основанном на разделении анализируемых веществ за счет различной скорости перемещения их по тонкому слою сорбента, нанесенного на плоскую подложку (стеклянную, полимерную или алюминиевую);
§ наносить точное количество анализируемых веществ на хроматографические пластины;
§ анализировать одновременно большое количество проб;
§ обнаруживать и просматривать хроматограммы в ультрафиолетовом свете;
§ окрашивать хроматограммы;
§ удалять органические растворители с хроматограмм высушивающим устройством с подогревом.
Комплект включает:
§ Ультрафиолетовый осветитель УФО-254
§ Хроматографическую камеру для пластин размером 130-130-56 см
§ Пластины для ТСХ (10х10), одна упаковка - 50 шт
§ Пульверизатор для вязких и агрессивных жидкостей
§ Пульверизатор для маловязких и неагрессивных жидкостей
§ Фен
Торрированные стеклянные капилляры V=1 ml
3.1.2 Базовый набор для ТСХ
Базовый набор для ТСХ (расширенный)
§ УФ-кабинет 254/365 (ультрафиолетовая лампа) - 1 шт.
§ Спрей-камера коррозионностойкая (камера для окрашивания хроматограмм методом опрыскивания) - 1 шт.
§ Столик с подогревом для нанесения образцов на пластины - 1 шт.
§ Камера хроматографическая (для пластин 15x15 см) - 2 шт.
§ Камера хроматографическая (для пластин 10x10 см) - 2 шт.
§ Сушильный шкаф ШСУ - 1 шт.
§ Пульверизатор для агрессивных жидкостей - 1 шт.
§ Пульверизатор для маловязких жидкостей с резиновой "грушей"- 1 шт.
§ Микрошприц V=1 мкл - 1 шт.
§ Микрошприц V=10 мкл - 1 шт.
§ Стеклянные капилляры V=1 мкл -100 шт.
§ Микрокап (держатель капилляров) - 1 шт.
§ Пластины на стеклянной подложке АТСХ (10x10 см) - 20 шт.
§ Пластины "Сорбфил" ПТСХ-П-А 10x10 см - 50 шт.
§ Пластины "Сорбфил" ПТСХ-П-А-УФ 10x10 см - 50 шт.
§ Пластины "Сорбфил" ПТСХ-АФ-А 10x10 см - 50 шт.
§ Пластины "Сорбфил" ПТСХ-АФ-А-УФ 10x10 см - 50 шт.
3.1.3 Оборудование для проведения ВЭТСХ анализов
Качественный анализ: Набор для ВЭТСХ CAMAG, включая УФ-кабинет
Набор для ВЭТСХ дополнен горизонтальной ВЭТСХ камерой и новым аппликатором CAMAG Nanomat 4, диспенсером капилляров с держателем для одноразовых капилляров объемом 0.5б1б2б и 5 мкл. При использовании горизонтальной камеры количество одновременно анализируемых проб удваивается, а расход растворителей значительно сокращается. В отличие от обычных, ВЭТСХ пластины имеют лучшее разрешение. Предназначен для качественного и количественного анализов (при использовании систем денситометрии).
Система для документирования и видеоденситометрии
Новейшая система для качественного и количественного анализа в ТСХ при детектировании в видимой области спектра, включая режим флуоресценции. Специально разработана для массовых анализов растительного сырья на подлинность или для скриннинга образцов на присутствие "ключевых" компонентов. Полное документирование оцифрованных изображений с хранением в базах данных эталонных изображений, например, для сравнения с рабочими анализами.
Количественный анализ: Полуавтоматический аппликатор CAMAG Linomat 4 для нанесения "полос" способом распыления.
Линомат 4 распыляет раствор пробы в форме узкой полосы на поверхность пластины (ТСХ или ВЭТСХ). Такой способ нанесения дает возможность дозирования большого объема образца по сравнению с контактным методом, а также гарантирует максимально возможное разрешение для выбранной хроматографической системы для любого варианта: качественного, количественного или препаративного разделения.
Техника нанесения, используемая в приборе CAMAG Linomat 4, стала синонимом качества в количественной инструментальной хроматографии.
Спектроденситометр CAMAG Scanner 3
Спектроденситометр третьего поколения с программным управлением от ПЭВМ. Уникальные характеристики оптико-механической части гарантируют высокое разрешение (до 25 мкм) и скорость сканирования. Возможность работы в режиме отражения (УФ и флуоресценция) и пропускания (УФ и флуоресценция). Развитое программное обеспечение с готовыми методами количественного анализа, включая статистические расчеты и методы калибровки. Сертифицирован по ISO и ГОСТ.
Программа-менеджер для планарной хроматографии - winCATS
Новейшее программное обеспечение для документирования всех стадий хроматографии от пробоподготовки, нанесения, элюирования, дериватизации до детектирования. С использованием процедур управления приборами EquiLink программа становится операционной оболочкой для управления всеми приборами, сбора данных и обработки результатов в соответствии с GLP/GMP.
Новый информационные технологии превратили ТСХ в инструментальный метод, дополняющий ВЭЖХ в современной лаборатории.
3.1.4 Пластины многократного пользования для высокоэффективной и аналитической ТСХ
В ИВС АН СССР разработана технология производства пластин для тонкослойной хроматографии на стеклянной, полимерной подложке и подложке из алюминиевой фольги. В настоящее время по этой технологии выпускаются пластины для ТСХ на стеклянной подложке размером 20x20 см и полимерной подложке размером 10x10 см в количестве 50000 и 500000 штук в год, соответственно, в двух модификациях: АТСХ (пластины для аналитической ТСХ) и ВЭТСХ (пластины для высокоэффективной ТСХ). В качестве сорбента используется фракционированный силикагель КСКГ (СССР) с диаметром пор 110-130 А и размером фракций 5-17 мкм (АТСХ) и 8-12 мкм (ВЭТСХ). Толщина слоя сорбента 110-130 мкм. Могут выпускаться пластины с толщиной слоя до 200 мкм. Выпускаются также пластины этих модификаций с люминофором с возбуждением 254 нм.
Особенности ТСХ-пластин, выпускаемых по технологии ИВС, связаны с использованием в качестве связующего золя кремневой кислоты, который после нагревания переходит в силикагель. Таким образом, разработанные ТСХ-пластины не имеют связующего и состоят из двух компонентов: слоя силикагеля и подложки. Если применять стеклянную подложку, то такие ТСХ-пластины являются химически прочными. Их химическая устойчивость определяется химической стойкостью силикагеля. В результате ТСХ-пластины ИВС могут многократно обрабатываться агрессивными реагентами, например, горячей хромовой смесью, что снимает ограничения в использовании коррелирующих реагентов для модификации и детектирования пластин и позволяет проводить многократную (до 10 раз) регенерацию пластин с помощью хромовой смеси. Механическая прочность слоя сорбента может регулироваться, обеспечивая, с одной стороны, транспортировку и многократность обработки пластин и, с другой стороны, возможность экстракции слоя адсорбента с разделившимися веществами для их последующей эволюции.
По эффективности АТСХ- и ВЭТСХ-пластины ИВС соответствуют ДС- и HPTLC-пластинам фирмы "Merck" (ФРГ).
Пластины широко испытаны в анализе производных аминокислот, пестицидов, липидов, антибиотиков, а также других классов органических и неорганических соединений и высокополимеров.
Пластины на стеклянной подложке:§ АТСХ, 20x20 см§ АТСХ, 10x20 см§ АТСХ, 10x10 см§ АТСХ, 5x10 смСтоимость: 0,62-2,25 $ за 1 шт.Пластины на алюминиевой подложке:§ ПТСХ-АФ, 10x10§ ПТСХ-АФ-УФ, 10x10§ ПТСХ-АФ, 10x15§ ПТСХ-АФ-УФ, 10x15Стоимость: 0,55-0,95 $ за 1 шт.Пластины на полимерной подложке:§ ПТСХ-А, 10x10§ ПТСХ-А-УФ, 10x10§ ПТСХ-А, 10x15§ ПТСХ-А-УФ, 10x15§ ПТСХ-В, 10x10§ ПТСХ-В-УФ, 10x10Стоимость: 0,5-0,9 $ за 1 шт.Двумерная ВЭТСХ смеси ДНС-аминокислот на пластине 6x6 (4 хроматограммы 3x3 см)ВЭТСХ ФТГ-аминокислот АТСХ технического образца ДДТ Определение бромистого метилав зерне послефумигации (АТСХ) ВЭТСХ липидов сыра Оценка содержания родственных примесей в антибиотике акларубицине |
3.1.5 Контроль эффективности разделения
Для идентификации тонкослойных хроматограмм требуется ультрафиолетовое освещение двух типов:
- длинноволновое, с длиной волны 365 нм - под которым разделенные вещества на пластинах флюоресцируют яркими пятнами, часто разного цвета, на темном фоне. Чувствительность детектирования в таком свете увеличивается с ростом интенсивности облучения;
- коротковолновое, с длиной волны 254 нм - под которым вещества, адсорбируя свет, становятся видимыми. Эти вещества выглядят как темные пятна на ярком зеленом фоне пластины.
УФ-кабинеты фирмы НТЦ "Ленхром" разработаны специально для лабораторий ТСХ. Однако, они могут использоваться и для решения других задач: проверки подлинности документов, и денежных знаков, в минералогии, археологии, криминалистике и др. Лампы помещены в защитный кожух, не пропускающий видимый свет, что позволяет исследовать хроматограммы в незатененных помещениях, сохраняя при этом высокую чувствительность.
Выпускаются УФ-кабинеты двух типов: УФ-кабинет254/365, УФО-254.
3.1.6 Хроматографические камеры
Камера с плоским дном и притертой крышкой - классическая емкость для хроматграфии, позволяющая проводить процедуру хроматографии в условиях частичного или полного насыщения атмосферы камеры парами растворителя. Благодаря оптимальным размерам, происходит низкое потребление растворителей в процессе работы. Размер камер предназначен для пластин разных стандартных размеров: 10х10, 15х15 и 20х20 см.
Камера для проявления в парах йода
Камера для окрашивания - плоская стеклянная камера предназначена для окрашивания хроматографических пластинок растворами реагентов в легколетучих растворителях методом погружения. Камера позволяет равномерно по площади окрасить поверхность пластины. Камера потребляет малое количество детектирующего реагента. Камеры предназначены для пластин размером 10х10 и 15х15 см.
3.1.7 Постхроматографическая дериватизация
Пульверизатор для агрессивных жидкостей
Благодаря конструктивным особенностям, пульверизатор безопасен при работе с агрессивными (н-р, концентрированные кислоты и щелочи) жидкостями. Пульверизатор может работать как с использованием резиновой груши (маловязкие жидкости), так и с использованием сжатого воздуха, что позволяет распылять вязкие жидкости.
Пульверизатор для маловязких жидкостейПульверизатор работает с использованием резиновой груши. Пульверизатор используют для распыления маловязких и неагрессивных жидкостей, т.е. водных и спиртовых растворов.
Спрей-камера
Устойчивая к агрессивным средам спрей-камера предназначена для окрашивания хроматограмм методом орошения (опрыскивания) различными детектирующими реагентами. Камера гарантирует безопасность процесса распыления вредных веществ для организма человека. Камера, по желанию, может быть укомплектована гибкой трубой для соединения с вытяжной вентиляцией.
3.1.8 Оборудование для нанесения образцов
Торрированные стеклянные капилляры
Ассортимент капилляров: 1, 2, 3, 5, 10, 20 мкл. Использование держателя капилляров "Микрокап" позволяет достигать высокой точности дозировки вручную.
100 штук капилляров комплектуется 1 шт. "Микрокап".
Шприцевой дозатор "MULTISTEP-50" в комплекте с микрошприцем V=1 мкл (Аналог РВ-600 фирмы Hamilton)
Шприцевой дозатор "MULTISTEP-50" предназначен для многократной дозировки микроколичеств жидкости с помощью микрошприцев. "MULTISTEP-50" обеспечивает пятидесятикратное повторение дозы (50 шагов). Для микрошприцев с рабочим объемом 1 мкл каждый шаг дозатора "MULTISTEP-50" отмерит 0,02 мкл жидкости. Дозатор "MULTISTEP-50" существенно облегчает работы, связанные с многократным повтором микродоз.
Столик для нанесения образцов на пластины (с подогревом)
Использование для нанесения проб на пластины столика с подогревом дает возможность получения пятен стартовых зон минимального размера (2-3 мм), что необходимо для более эффективного разделения многокомпонентных смесей при хроматографии.
3.1.9 Приборы и оборудование для высокоэффективной тонкослойной хроматографии
СИСТЕМА ДЛЯ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ С ДЕНСИТОМЕТРОМ "ДенСкан"
Назначение и область применения
Системы для тонкослойной хроматографии и электрофореза с денситометром "ДенСкан" предназначены для качественного и количественного анализа состава проб веществ и материалов в видимой области спектра и ультрафиолетовом свете при длинах волн 254 и 365 нм. Область применения - исследования в химии, биохимии, биологии, медицине, фармакологии, аналитическом контроле чистых веществ, объектов окружающей среды и др.
Технические данные
· Денситометр обеспечивает расчет параметров и количественную оценку хроматограмм в видимой и ультрафиолетовой области спектра (?max= 254 нм, ?max =365 нм)
· Размер обрабатываемых пластин, не более 15 х 15
· Время ввода изображения, с не более 5
· Время обмера хроматограммы, мин 5
· Отношение сигнал/шум: видимая область не менее 5/1УФ, 254 нм не менее 5/1УФ, 365 нм не менее 5/1
· Относительное СКО по площади пятен, % видимая область не более 5УФ, 254 нм не более 5УФ, 365 нм не более 5
· Размах значений Rf : видимая область не более 0,02УФ, 254 нм не более 0,02УФ, 365 нм не более 0.02
· Масса осветительной камеры, кг не более 12 кг
· Габаритные размеры осветительной камеры, мм не более длина. 420 ширина 420 высота 700
· Напряжение питания, В 220 ± 22/33
· Частота переменного тока, Гц 50 ± 1
· Средняя наработка на отказ денситометра, ч не менее 5000
1. Состав денситометра
2. Денситометр "ДенСкан" состоит из камеры осветительной, черно-белой либо цветной видеокамеры или сканнера, блока ввода изображения, системы обработки данных. Камера осветительная выполнена в виде блочной конструкции, включающей следующие основные узлы:- источники света: лампы дневного света. Лампы УФ диапазона, длина волны 254 нм лампы УФ диапазона, длина волны 365 нм- набор корректирующих светофильтров- детектор - черно-белая малогабаритная видеокамера OS-45D или аналогичная с чувствительностью не хуже 0,02 люкс, с ручной фокусировкой и ручной регулировкой диафрагмы либо цветной сканнер с разрешением от 200 d.p.i. и выше с интерфейсом, соответствующим TWAIN стандарту- установочный столик для пластин; - канал связи с блоком ввода изображенияСистема обработки данных с использованием персонального компьютера и программного обеспечения "Dens". Минимальные требования к компьютеру:- Операционная система - Microsoft Windows 95, Windows 98, Windows NT (версия 4.0 или выше) - Процессор - Pentium 100 MHz- Оперативная память (RAM) - 8 Мбайт, рекомендуется 16 Мбайт- Цветной монитор - с диагональю не менее 14 дюймов- Место на жестком диске - 10 Мбайт- Манипулятор - "мышь"Блок ввода изображения видеобластер AverMedia ( и программное обеспечение к нему) используется для получения изображения хроматограммы на мониторе компьютера. Возможно использование аналогичных систем. [12]
Литература
1. Аналитическая хроматография / Под ред. В.И. Сакодынского и др. М.: Химия, 1993, с. 19 - 21.
2. Кнорре Д.Г., Крылова Л.Ф., Музыкантов В.С. Физическая химия. - М.: Высш. шк., 1990. - 416с.
3. Алесковский В.Б., Бардин В.В., Булатов М.И. Физико-химические методы анализа. Практическое руководство.- Л.: Химия, 1988. - 376 с.
4. Ольшанова К.М. Практикум по хроматографическому анализу. М., Высш. школа, 1970. -312с.
5. Определение ддт, ддэ, ддд, альдрина, дильдрина, гептахлора, кельтана, метоксихлора, эфирсульфоната и других ядохимикатов в продуктах питания хроматографией в тонком слое / Методы определения микроколичеств пестицидов в продуктах питания, кормах и внешней среде. М.: Колос, 1977. с. 9 - 17
6. Е.С. Косматый, Б.М. Тверская, Ф.И. Полонская. Определение о,о-диэтил-8-(6-хлорбензоксазолинил-3-метил)-дитиофосфата (фозалона) в яблоках методом тонкослойной хроматографии / Методы анализа пестицидов // Проблемы аналитической химии. Том II / М., «Наука», 1972. С. 70 - 73.
7. W.Mc Kinley, S.J. Grahem. J. Assoc. Offic. Agric. Chemists, 43, 89 (I960).
8. L. Fishbein, J. Fowkes, P. Jones. J. Chromatogr., 23, 47b (1966).
9. Р. Nangniot, G. Dardenne. Bull. Inst. Agr. St. Res., 31, 120 (1963).
10. A.R. Kittleson. Analyt. Chem., 24, 1173 (1952).
11. Л.М. Фукельман. Сборник трудов ВИЗР, вып. 20, ч. 4, 61 (1964).
12. http://lenchrom.spb.ru/chromatography/thinlayer_004.shtml
Подобные документы
Основы метода обращенной газовой хроматографии. Газовая хроматография - универсальный метод качественного и количественного анализа сложных смесей и способ получения отдельных компонентов в чистом виде. Применение обращенной газовой хроматографии.
курсовая работа [28,9 K], добавлен 09.01.2010Сущность метода хроматографии, история его разработки и виды. Сферы применения хроматографии, приборы или установки для хроматографического разделения и анализа смесей веществ. Схема газового хроматографа, его основные системы и принцип действия.
реферат [130,2 K], добавлен 25.09.2010Газовая хроматография - один из наиболее перспективных физико-химических методов исследования, бурно развивающийся в настоящее время. Классификация хроматографических методов. Различные характерные признаки процесса. Сущность методов хроматографии.
реферат [30,3 K], добавлен 25.01.2010Сущность и содержание ионно-парной хроматографии, ее использование в жидкостной хроматографии и экстракции для извлечения лекарств и их метаболитов из биологических жидкостей в органическую фазу. Варианты ионно-парной хроматографии, отличительные черты.
реферат [28,7 K], добавлен 07.01.2010Понятие и основные этапы протекания метода эксклюзионной хроматографии, его принципиальная особенность и сферы применения, разновидности и их отличительные признаки. Характеристика оборудования, используемого в процессе эксклюзионной хроматографии.
реферат [54,4 K], добавлен 07.01.2010Явления, происходящие при хроматографии. Два подхода к объяснению - теория теоретических тарелок и кинетическая теория. Газовая, жидкостная, бумажная хроматография. Ионообменный метод. Случаи применения ионообменной хроматографии. Гельхроматографирование.
реферат [69,4 K], добавлен 24.01.2009Сущность высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) как метода анализа и разделения сложных примесей. Сорбенты, координационно-насыщенные хелаты; закономерности влияния строения лиганда на поведение хелатов в условиях обращенофазной хроматографии.
реферат [109,8 K], добавлен 11.10.2011Возникновение и развитие хроматографии. Классификация хроматографических методов. Хроматография на твердой неподвижной фазе: газовая, жидкостная (жидкостно-адсорбционная). Хроматография на жидкой неподвижной фазе: газо-жидкостная и гель-хроматография.
реферат [28,1 K], добавлен 01.05.2009Назначение лигандообменной хроматографии, принцип и этапы ее реализации, задействованные элементы. Определение микропримесей в жидкостной хроматографии, рекомендации по его проведению. Методика анализа сложных примесей и инструментарий для него.
реферат [27,1 K], добавлен 07.01.2010Использование тонкослойной хроматографии в качественном анализе. Выбор проявляющего растворителя (подвижной фазы). Нанесение раствора образца на пластинку. Двумерная хроматография на бумаге. Приготовление подвижной фазы, нанесение вещества и проявление.
курсовая работа [1,1 M], добавлен 01.12.2015
