Технология переработки травы Polygonum Songoricum Schrenk

· Limosum (иловатый). Рекомендовано как перспективное дубильное юга Дальнего Востока.

· Longisetum (длиннощетинковый). В Японии - при лечении рака желудка.

· Manshuriense (маньчжурский). В Приморье отвар, настой и порошок - при колитах и как кровеостанавливающее.

· Minus (малый). В Забайкалье - как лекарственное растение.

· Nitens (блестящий). Отвар, настойка и жидкий экстракт корней используются в качестве вяжущего при лечении острых и хронических колитов, энтеритов. Наружно - при стоматите и гингивите. Для получения дубильных веществ. Нейтральный экстракт дает по железной протраве на всех типах ткани черную окраску. Медоносное, кормовое.

· Orientale (восточный). На юге СРВ (Вьетнам) - при лечении опухолей. В пищу - как овощ. Декоративное.

· Pacificum (тихоокеанский). В приморье отвар, настойка и порошок используются при сильных поносах, дизентерии, колитах и как кровеостанавливающее.

· Panjutinii (горец Панютина). Перспективен для культуры как силосное.

· Paronychioides (приноготковидный). Дубильное растение.

· Patulum (отклоненный). Дубильное и красильное растение. Перганос. Кормовое для овец.

· Perfoliatum (стеблеобъемлющий). На полуострове Индокитай и в Северном Вьетнаме - для лечения опухолей.

· Persicaria (почечуйный). Эфиромасличное, витаминоносное, дубильное и декоративное растение. Корни и корневища применяются для окраски тканей в желтый цвет. Надземная часть рекомендована к медицинскому применению при хронических запорах. Экстракт - при маточных кровотечениях. Отвар и настой - при лечении геморроидальных кровотечений, как диуретическое при болезни почек и мочекаменной болезни, при диарее, простудных и венерических заболеваниях; наружно в виде полосканий - для укрепления десен при цинге и для обмывания ран; в свежем виде - вместо горчичников при радикулите, подагре, головной боли (прикладывают к затылку), для заживления ран. В народной медицине некоторых стран используются для лечения опухолей различной этиологии, в том числе рака желудка. Фармакологические и клинические испытания препаратов (10%-ный настой и спиртовый экстракт) показали возможность применения их в гинекологической практике при кровотечении и для усиления родовой деятельности, а также при лечении геморроя. Используется для получения желтой краски. Может быть использована в винной и ликероводочной промышленности. Инсектицид против клопов. Медонос. Ядовито для скота, особенно семена [1, 2, 6, 33].

· Riparium (береговой). Рекомендуется для закрепления склонов.

· Rupestre (скальный). Подземная часть - сырье для дубильно-экстрактовой промышленности. Надземная часть - сырье для лекарственных препаратов, обладающих Р-витаминной активностью, а также при кишечных заболеваниях. Кормовое для сельскохозяйственных животных.

· Sericeum (шелковистый). В Забайкалье - как лекарственное.

· Sibiricum (сибирский). В Забайкалье - как лекарственное и кормовое. Подземная часть обладает хорошими дубильными свойствами.

· Songoricum (джунгарский). Корневище используется для дубления кож и как прекрасный фиксатор при окраске кожи. Молодые побеги употребляются в пищу вместо щавеля. Медонос.

· Subauriculatum (полуушастый). На Дальнем Востоке - как лекарственное раствение вместо Polygonum bistorta. Корневище применяют при ангине, гонорее, зобе, раке желудка.

· Tripterocarpum (трехкрылоплодный). На Камчатке корневища используют в пищу, как Polygonum viviparum.

· Viscoferum (клееносный). Может быть использовано в парфюмерии и ликероводочном производстве.

· Viviparum (живородящий). В Забайкалье все растение заваривают и пьют вместо чая; настой - при диарее и резях в животе. Дубильное. Отвар из корневищ - желудочное средство; при простудных заболеваниях, болезнях мочеполовых путей. Порошок сухих корневищ - кровеостанавливающее. Используют в пищу в сыром и вареном виде, а также измельчают в муку и варят кашу; отвар пьют вместо чая. Можно получать черную краску. Порошок из надземной части - кровеостанавливающее при порезах и ушибах; настой - от белей и при гонорее. Листья используют как желудочное средство. Семена съедобны и служат лакомством.

· Weyrichii (горец Вейриха). Обладает фитонцидной активностью к патогенным микроорганизмам и рекомендуется для улучшения гигиенических и эпидемиологических характеристик воздуха. Подземная часть используется для дубления кож. Надземная часть как лекарственное. Кормовое для силосования, сенажа и травяной муки. Декоративное. Широко испытан в культуре как силосное растение [6, 9, 33].

Исследуемое нами растительное сырье было собрано на территории Казахстана, поэтому приводим ботаническое описание горца Джунгарского, приведенное во Флоре Казахстана [5].

Горец Джунгарский (Polygonum songoricum Schrenk) - многолетнее растение. Стебли 20-70 см высотой, в верхней части слегка ветвистые; листья черешковые, 6-10 см длиной и 3,5-6 см шириной, широко-яйцевидные или яйцевидные, постепенно заостренные, при основании округлые или сердцевидные, снизу с редкими волосками; черешки 2-4 см длиной; цветки в негустой метелке с веточками, часто почти горизонтально отклоненными и при плодах поникающими; околоцветник 2,5-3 мм длиной, при плодах до 4 мм длиной, красный, нередко с белыми или зеленоватыми верхушками долей; орешки 3,5-4 мм, трехгранные, с острыми ребрами, лоснящиеся. Цветет в период июнь-август.

Растет в высокогорном поясе, на каменистых склонах. Встречается в Западном Тянь-Шане. Общее распространение: Средняя Азия [5].

Ниже приведены сравнительные характеристики литературных и экспериментальных данных по химическому составу горца Джунгарского (таблица 3).

Таблица 3 - Химический состав горца Джунгарского

№	БАВ	Литературные данные (Федоров А.А.) [6]	Полученные экспериментальные данные (надземная часть)
1	Дубильные вещества	Корни - 14,28%; Корневище - 17-20%; Надземная часть - 2,38%	1,80 (2,54)%
2	Флавоноиды	Корни; Стебли - 1,4-1,6%; Листья - 9,5-10% (кемпферол, кверцетин, мирицетин); Соцветия - 14,2-15%	15,09% (кверцетин) 0,65% (авикулярин)
3	Фенолы и фенолокислоты	-	Пирогаллол
Продолжение таблицы 3
1	2	3	4
4	Аминокислоты	-	0,48%
5	Органические кислоты	-	0,71%
6	Сапонины	-	Смешанные; 2,33% (тритерпеновые)
7	Алкалоиды	Надземная часть	Не обнаружены
8	Полисахариды	-	8,12%
9	Кумарины	-	0,13%
10	Антрахиноны	-	Не обнаружены
11	Ксантоны	-	Не обнаружены



Из таблицы 3 видно, что для казахстанского вида горца Джунгарского впервые было выявлено содержание таких групп БАВ, как фенолы и фенолокислоты, амино- и органические кислоты, сапонины смешанного типа и полисахариды. Однако, в отличие от литературных данных, в исследуемом нами сырье горца Джунгарского не обнаружены алкалоиды. Благодаря содержанию дубильных веществ и флавоноидов исследуемое нами сырье может обладать определенной физиологической активностью (противовоспалительное, антиоксидантное или вяжущее), а присутствующие полисахариды в сумме могут придать обволакивающие и иммуностимулирующие свойства.



2. Результаты и обсуждение

2.1 Подбор оптимального экстрагента

При подборе оптимального экстрагента показал, что интенсивность окраски после нагревания увеличилась во всех флаконах, однако не во всех случаях наблюдалось повышение выхода экстрактивных веществ после температурного воздействия. Это относится к таким экстрагентам, как вода и диоксан для сырья 2009 г. сбора; этанол (70%), бензол, диоксан (50% и 100%) и диоксан-ацетон-вода (1:1:2) - для сырья 2010 г. сбора.

После длительного стояния во флаконах, содержащих воду (№1-4, 7, 13 из таблицы 26), было замечено образование мелкодисперсного аморфного осадка на поверхности осевшего сырья. При встряхивании флакона этот осадок образовывал устойчивую в течение нескольких часов муть. Согласно результатам качественного анализа, данный осадок содержит дубильные вещества, белки и пептиды. Ниже представлены результаты фитохимического анализа экстрактов горца Джунгарского (2010 г. сбора).

Примечание: 30%- и 40%-ный этанольные экстрагенты по результатам качественного анализа близки к 50%-ному этанолу; 70%-ный этанол близок по составу к 96%-ному этанолу. По этой причине фотографии фитохимического анализа данных экстрактов не были представлены в настоящей работе.

Вода извлекает: гликозиды флавоноидов, все типы полифенольных соединений, гидролизуемые дубильные вещества, галлокатехины, альдозы, восстанавливающие сахара, аминокислоты, гликозиды кумаринов, сапонины, полисахариды (рисунок 1).

Спиртовый (50%) экстрагент извлекает: слизи, флавоноиды различных типов и их гликозиды, все типы полифенольных соединений, гидролизуемые и конденсированные дубильные вещества, катехины, галлокатехины, альдозы, восстанавливающие сахара, аминокислоты, окси - (метокси-) кумарины и их гликозиды, стероидные сапонины, полисахариды.

Водный экстракт Рисунок 2. Спиртовой (50%) экстракт

Спиртовый (96%) экстрагент извлекает: слизи, флавоноиды различных типов, все типы полифенольных соединений, гидролизуемые и конденсированные дубильные вещества, катехины, галлокатехины, альдозы, восстанавливающие сахара, аминокислоты, окси - (метокси-) кумарины (рисунок 3).

Ацетоновый (50%) экстрагент извлекает: слизи, флавоноиды и их гликозиды, все типы полифенольных соединений, гидролизуемые и конденсированные дубильные вещества, катехины, галлокатехины, альдозы, восстанавливающие сахара, аминокислоты, окси - (метокси-) кумарины и их гликозиды, сапонины, полисахариды.



Спиртовой (96%) экстракт Рисунок 4. Ацетоновый (50%) экстракт

Ацетоновый экстрагент извлекает: флавоноиды различных типов, все типы полифенольных соединений, гидролизуемые и конденсированные дубильные вещества, альдозы, восстанавливающие сахара, аминокислоты, окси - (метокси-) кумарины (рисунок 5).

Этилацетатный экстрагент извлекает: флавоноиды различных типов, все типы полифенольных соединений, дубильные вещества аминокислоты, альдозы, восстанавливающие сахара, окси - (метокси-) кумарины (слабая интенсивность появляющейся окраски свидетельствует о следовых количествах указанных групп БАВ).

Ацетоновый экстракт Рисунок 6. Этилацетатный экстракт



Бензольный экстрагент извлекает: аминокислоты, тритерпеновые сапонины (в следовых количествах).

Диоксановый (50%) экстрагент извлекает: флавоноиды и их гликозиды, гидролизуемые и конденсированные дубильные вещества, катехины, галлокатехины, альдозы, восстанавливающие сахара, аминокислоты, окси - (метокси-) кумарины и их гликозиды, стероидные сапонины, полисахариды.

Бензольный экстракт Рисунок 8. Диоксановый (50%) экстракт

Диоксановый экстрагент извлекает: флавоноиды различных типов, все типы полифенольных соединений, альдозы, восстанавливающие сахара, аминокислоты (рисунок 9).

Диоксано-ацетоно-водный (1:1:2) экстрагент извлекает: флавоноиды и их гликозиды, гидролизуемые и конденсированные дубильные вещества, катехины, галлокатехины, альдозы, восстанавливающие сахара, аминокислоты, окси - (метокси-) кумарины и их гликозиды, полисахариды.



Диоксановый экстракт Рисунок 10. Диоксано-ацетоно-водный (1:1:2) экстракта

В таблице 4 представлены данные о качественном анализе растительного сырья 2009 и 2010 гг. сбора на сапонины (тритерпеновые и стероидные). Данная методика основана на способности сапонинов образовывать пену различной дисперсности, устойчивости и объема. Такая способность обусловлена наличием в молекуле сапонинов гидрофобного углеводородного скелета и гидрофильной функциональной группы (НООС- или НО-группы). Последний фактор обеспечивает также способность молекул сапонинов образовывать мицеллы, благодаря чему последние совместно с действующими веществами в растении, проявляют «синергический эффект» [34].

Таблица 4 - Содержание сапонинов в растительном сырье

№	Экстрагент	Содержание сапонинов
		2009 г	2010 г
1	Вода	тритерпеновые	тритерпеновые
2	Этанол (30%)	-	стероидные
3	Этанол (40%)	-	стероидные
4	Этанол (50%)	стероидные	стероидные
5	Этанол (70%)	-	не обн.
6	Этанол (96%)	не обн.	не обн.
7	Ацетон (50%)	тритерпеновые	тритерпеновые
Продолжение таблицы 4
1	2	3	4
8	Ацетон	не обн.	не обн.
9	Этилацетат	не обн.	не обн.
10	Бензол	следовые кол-ва	следовые кол-ва
11	Диоксан (50%)	стероидные	стероидные
12	Диоксан	не обн.	не обн.
13	Диоксан-ацетон-вода (1:1:2)	не обн.	не обн.

Данные таблицы 4 показывают смешанную природу сапонинов в растительном сырье (тритерпеновые и стероидные), причем различий в природе сапонинов в сырье 2009 и 2010 гг. сбора не наблюдалось [37].

С целью уточнения природы сапонинов, содержащихся в растительном сырье 2010 г. сбора было произведено их осаждение из спиртового (50%) экстракта ацетоном (разбавление 1:1). При этом выход осадка составил 1,17%. Полученный осадок анализировали хроматомасс-спектрометрическим методом. Была определена тритерпеновая природа сапонинов. Характерны 6 пиков с молекулярными массами: 648, 608, 460, 445, 400, 392, причем наиболее интенсивными оказались 648 и 608. Данные значения свидетельствуют о тритерпеновой природе сапонинов.

Для наглядности на рисунке 11 представлены данные о выходе экстрактивных веществ, в зависимости от года сбора сырья и природы экстрагента.

При подборе экстрагентов для переработки сырья 2010 г. сбора наиболее эффективными экстрагентами являются вода, ацетон (50%) и спирт (50%). Сырье различных годов сбора отличается в своем качественном и количественном составе. Данные из рисунка 11 наглядно показывают характер этих различий: уменьшение содержания соединений с простой эфирной связью и гетероциклических соединений, увеличение содержания гликозидов и других соединений (например, дубильные вещества гидролизуемого типа), легко растворимых в воде.

Таким образом, в качестве экстрагента выбран этанол (50%). Природа соединений, извлекаемых этанолом (50%) наиболее полно отвечает требованиям, предъявляемым при постановке эксперимента, а, именно, извлечение полифенольного комплекса и гликозидов соединений.

2.2 Оптимизация процесса получения фитопрепарата. Технология комплексной переработки растительного сырья

Соотношение сырье-растворитель. При выбранном экстрагенте оптимальным оказалось соотношение 1:7 (таблица 27). Целесообразность определения параметра «соотношение сырье-экстрагент» экономическими соображениями, поскольку для предприятия, к примеру, вопрос об экстракции сырья 500 или 600 л экстрагента является существенным.

Выбор соотношения «сырье-экстрагент» необходимо осуществлять, учитывая 2 фактора: суммарный выход экстрактивных веществ и количество затраченного при этом экстрагента.

Режим экстракции. Поскольку прерывная экстракция подразумевает чередующиеся процессы нагревания и охлаждения системы, это обуславливает длительность экстракции относительно непрерывного режима и бульшие энергозатраты. На основании этих суждений нами выбран режим экстракции - нагревание непрерывное в течение 1 часа.

Все полученные в ходе отработки данные оптимизации процесса экстракции сведены в таблицу 5.

Таблица 5 - Параметры технологического процесса переработки травы горца Джунгарского в лабораторных условиях

№	Параметр	Надземная часть горца Джунгарского
		2009 г	2010 г
1	Место сбора	Енбекшиказахский район Алматинской области	Енбекшиказахский район Алматинской области
2	Степень измельчения сырья	5 мм	5 мм
3	Экстрагент	диоксан-ацетон-вода (1:1:2)	этанол (50%)
4	Соотношение «сырье-экстрагент»	1:7	1:7
5	Температурный режим	кипение экстрагента	кипение экстрагента
6	Временной режим, ч	2	1
7	Кратность экстракции	-	2
8	Режим экстракции	прерывное нагревание	непрерывное нагревание
9	Режим концентрирования экстракта	t < 50єC, p < 1 атм.	t < 50єC, p < 1 атм.

В таблице 6 представлен материальный баланс процесса переработки травы горца Джунгарского 2010 г. сбора.

Таблица 6 - Материальный баланс процесса экстракции сырья 2010 г. сбора

Загружено	Выгружено
Масса сырья - 100,000 г	Масса шрота - 73,347 г. Масса экстрактивных веществ - 17,799 г.: I - 7,547 г. II - 3,014 г. III - 2,175 г. IV - 2,383 г. V - 2,680 г
Объем экстрагента - 1650 мл: I - 700 мл II - 200 мл III - 250 мл IV - 250 мл V - 250 мл	Объем экстракта - 1400 мл: I - 300 мл II - 195 мл III - 200 мл IV - 265 мл V - 440 мл
Потери: Экстрагент - 250 мл (15,15%); Шрот - 8,854 г. (8,85%)
Выход экстрактивных веществ - 17,80%
Примечание - была проведена 5-кратная экстракция сырья с целью выявления оптимальной кратности.

Таким образом, из травы горца Джунгарского получен фитопрепарат в количестве 17,799 г. (соответственно, с выходом - 17,80%). Данный фитопрепарат был количественно проанализирован на основные группы БАВ.

Мы апробировали другую схему переработки травы горца Джунгарского, заключающуюся в последовательной экстракции растительного материала (таблица 7):

вода > вода > этанол (40%) > ацетон (50%).

Этот процесс условно назван «прямой» технологией. В случае «обратной» технологии последовательность экстракции соответственно была:

ацетон (50%) > этанол (40%) > вода > вода.

В данном эксперименте использован этанол 40%-ный вместо 50%-ного, используемого в предыдущих технологиях. Преимущество первого заключается в большем выходе экстрактивных веществ (таблица 26).

Таблица 7 - Основные параметры процессов «прямой» и «обратной» технологии

№	Параметр	«Прямая» технология	«Обратная» технология
1	Соотношение «сырье-экстрагент»	1:8	1:7
2	Время нагревания, ч	2	2
3	Температурный режим	кипение экстрагента	кипение экстрагента
4	Режим	непрерывная	непрерывная
5	Кратность	4	4

Как видно из таблицы 7, параметры «прямой» и «обратной» технологий идентичны друг другу, за исключением взятого соотношения «сырье-экстрагент». Таким образом, общее количество затраченных экстрагентов (вода, этанол, ацетон) в случае «прямой» технологии превышает расход их, соответственно, при «обратной» экстракции. Причина заключается в достаточно хорошей впитываемости сырья водой (1:8), которая являлась первым экстрагентом в «прямой» технологии. А в случае «обратной» - первым являлся ацетон (50%), который впитывается в меньших количествах, поэтому был отмечен меньший его расход (1:7). Материальный баланс обоих процессов представлен в таблицах 8 и 9 соответственно.

Таблица 8 - Материальный баланс «прямой» технологии

Загружено	Выгружено
Масса сырья - 10,000 г	Масса сухого шрота (в г): I+II - 7,864 III - 7,289 IV - 7,151
Объем экстрагента (в мл): Вода - 80 (I) + 30 (II) Этанол (40%) - 63 (III) Ацетон (50%) - 58,3 (IV)	Объем экстракта (в мл): Вода - 27 (I) + 60 (II) Этанол (40%) - 41 (III) Ацетон (50%) - 35 (IV)
Потери экстрагентов: вода - 23 мл (20,91%); этанол (40%) - 22 мл (34,92%); ацетон (50%) - 23,3 мл (39,97%);
Примечание - указаны массы шрота после соответствующих стадий экстракции, т.е. I+II - после 2-кратной экстракции водой, III - после экстракции этанолом (40%), IV - после экстракции ацетоном (50%).

Таблица 9 - Материальный баланс «обратной» технологии

Загружено	Выгружено
Масса сырья - 10,000 г	Масса сухого шрота (в г): I - 8,361 II - 7,569 III+IV - 6,856
Объем экстрагента (в мл): Ацетон (50%) - 70 (I) Этанол (40%) - 58,5 (II) Вода - 53 (III) + 22,7 (IV)	Объем экстракта (в мл): Ацетон (50%) - 43 (I) Этанол (40%) - 34 (II) Вода - 54 (III+IV)
Потери экстрагентов: ацетон (50%) - 27 мл (38,57%); этанол (40%) - 24,5 мл (41,88%); вода - 21,7 мл (28,67%);

Таким образом, при меньших затратах экстрагентов в случае «обратной» технологии (соотношение - 1:7) наблюдается бульший выход экстрактивных веществ (на 2,95%), чем при «прямой» технологии.

Это говорит о важности последовательности обработки растительного материала экстрагентами различной природы. Экстракцию сырья необходимо производить, постепенно повышая полярность экстрагента (ацетон (50%) > этанол (40%) > вода).

Ранее было показано, что ацетоно-водный экстрагент (50%) благодаря имеющимся карбонильным и гидроксильным группам извлекает практически все основные группы БАВ, среди которых наиболее важными являются флавоноиды, кумарины, ГДВ и КДВ и полифенолы. Водно-этанольная экстракция обеспечивает выход сапонинов (стероидного строения), а также дополнительно - тех групп БАВ, которые не извлеклись в полной мере водным ацетоном. Наконец, двойная водная экстракция извлекает из сырья оставшуюся массу полифенольных соединений, дубильных веществ, полисахаридов и гликозидов, в т.ч. гликозиды флавоноидов, кумаринов и других групп БАВ (перечислены основные действующие вещества), а также сапонинов тритерпенового ряда. Во все фракции переходят органические, окси- и аминокислоты, углеводы и гликозиды.

При хроматографическом анализе жидких экстрактов было выявлено преимущественное содержание основных групп БАВ (дубильные вещества, флавоноиды, полисахариды) в случае «обратной» технологии.

2.3 Количественный анализ основных групп БАВ в сырье и препарате

В ходе проведения количественного анализа были допущены некоторые отклонения от предписаний методик [16, 38-41], указанные в таблице 10.



Таблица 10 - Отклонения от методик количественного анализа основных групп БАВ

№	Группа БАВ (методика)	Характеристика отклонений
		Методика	Измененная методика
1	Дубильные вещества (комплексо-нометрия)	0,01М раствор трилона Б готовится по расчетной навеске, после чего устанавливается его титр по раствору цинка	Был использован 0,01М раствор, приготовленный из фиксанала
2	Флавоноиды (авикулярин)	-	Внесенные изменения будут описаны ниже
3	Органические кислоты	Нет данных о приготовлении и установлении титра 0,1М раствора NaOH	Раствор NaOH готовили по расчетной навеске. Титр приготовленного раствора
Продолжение таблицы 10
1	2	3	4
			устанавливали титрованием 0,1н раствором щавелевой кислоты (титрант I рода), приготовленным из фиксанала
		Извлечение органических кислот проводится методом 1-кратной экстракции водой в соотношении 1:8	Извлечение органических кислот проводилось методом 2-кратной экстракции водой в соотношении 1:12
4	Сапонины	Отсутствует методика для анализа препаратов с пересчетом на кислоту глицирризиновую (аналогичная для сырья)	Анализ препарата не проводился
5	Кумарины	Отсутствует методика для анализа сухих и жидких препаратов, кроме водных	Навеску сухого препарата растворяли в хлороформе в мерной колбе на 50 мл, после чего нерастворенный осадок отфильтровывали; для анализа использовали хлороформный раствор

Рассмотрим причины отклонений, допущенных нами в ходе определения количественного содержания основных групп БАВ:

Дубильные вещества (комплексонометрия): Раствор, приготовленный по фиксаналу, является стандартизированным, и нет необходимости в установлении его титра. К тому же стандартизированный или приготовленный из фиксанала раствор трилона Б допускается длительное время.

Флавоноиды (кверцетин и авикулярин): Ранее методом хроматографии с СО метчиков было установлено содержание в сырье кверцетина (индивидуальный флавоноид). Это стало доводом в пользу использования методики количественного определения суммы флавоноидов в сырье с пересчетом на кверцетин. Согласно расчетам содержание суммы флавоноидов в сырье составляло 15,09%. Такие данные свидетельствовали о явном завышении результатов. Поэтому было решено снять УФ-спектр поглощения испытуемого раствора (экстракт + AlCl₃) в пределах волн 380-450 нм. Спектр поглощения был снят в течение 18-23 мин после добавления 1%-ного спиртового раствора AlCl₃.

УФ-спектр поглощения испытуемого раствора с добавлением AlCl₃

Из рисунка 12 видно, что максимум поглощения комплекса с AlCl₃ наблюдается при л=410-415 нм. Согласно литературным данным [16, 41], в этой области характерен максимум поглощения для комплексов авикулярина (410 нм; Е^{1 %} _1СМ=330), 3-О-рамноглюкозида кверцетина (рутин) (410±5 нм; Е^{1 %} _1СМ=280) и 3-О-рамнозида мирицетина (415±5 нм; Е^{1 %} _1СМ=340) с AlCl₃, а для кверцетина характерен максимум поглощения при л=430 нм. Однако из-за отсутствия метчиков гликозидированных флавоноидов, и наличия ссылок на содержание авикулярина в горцах [6, 42] мы использовали методику с пересчетом на авикулярин.

Однако и здесь возникли моменты, ставящие под сомнение правильность результатов. Так, согласно этой методике, испытуемый раствор состоит из 5 мл раствора А (экстракта) и 2 мл 2%-ного спиртового раствора AlCl₃, доведенных до метки 70%-ным этанолом в мерной колбе на 25 мл. А раствор сравнения состоит из 2 мл раствора А (экстракта) и 1 капли кислоты хлороводородной (10%), доведенных до метки 95%-ным этанолом в мерной колбе на 25 мл. Известно, что спектрофотометрический метод анализа основан на определении оптической плотности анализируемого соединения при длине волны, соответствующей максимуму поглощения, относительно раствора сравнения. А в качестве последнего используют ту же среду, что и в испытуемом растворе, только без анализируемого соединения. В нашем случае анализируемое соединение - комплекс флавоноидов с AlCl₃, а среда - экстракт. Таким образом, выявлены 3 несоответствия правилам спектрофотометрического анализа:

· объемы раствора А (экстракта), отмеренные в испытуемый раствор и раствор сравнения, должны быть одинаковыми;

· концентрация спирта, которым доводят объемы растворов до метки, должна быть одинаковой в обоих случаях;

· факт присутствия в растворе сравнения капли HCl (10%) и отсутствия ее в анализируемом растворе.

С учетом выявленных отклонений предложены 2 измененные методики количественного определения содержания суммы флавоноидов с пересчетом на авикулярин:

1) Методика №1: Около 1 г сырья (точная навеска) помещают в круглодонную колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 30 мл спирта этилового 70%, колбу присоединяют к обратному холодильнику, нагревают на кипящей водяной бане в течение 30 мин; охлаждают, фильтруют в мерную колбу вместимостью 100 мл. Экстракцию повторяют еще 2 раза указанным выше методом, фильтруют через тот же фильтр в ту же мерную колбу, фильтр промывают спиртом этиловым 70% и доводят объем фильтрата тем же растворителем до метки (раствор А).

5 мл раствора А помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, прибавляют 2 мл 2% спиртового раствора алюминия хлорида и доводят объем раствора тем же растворителем (70%-ный этанол) до метки; через 20 мин измеряют оптическую плотность раствора на спектрофотометре при длине волны 410 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм.

В качестве раствора сравнения используют следующий раствор: 5 мл раствора А помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл и доводят объем раствора спиртом этиловым 70% до метки.

2) Методика №2: Около 1 г сырья (точная навеска) помещают в круглодонную колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 30 мл спирта этилового 70%, содержащего 1% кислоты хлороводородной концентрированной, колбу присоединяют к обратному холодильнику, нагревают на кипящей водяной бане в течение 30 мин; охлаждают, фильтруют в мерную колбу вместимостью 100 мл. Экстракцию повторяют еще 2 раза указанным выше методом, фильтруют через тот же фильтр в ту же мерную колбу, фильтр промывают спиртом этиловым 70% и доводят объем фильтрата тем же растворителем до метки (раствор А).

5 мл раствора А помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, прибавляют 2 мл 2% спиртового раствора алюминия хлорида и доводят объем раствора тем же растворителем (70%-ный этанол) до метки; через 20 мин измеряют оптическую плотность раствора на спектрофотометре при длине волны 410 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм.

В качестве раствора сравнения используют следующий раствор: 5 мл раствора А помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл и доводят объем раствора спиртом этиловым 70% до метки.

Согласно методике №1 (без добавления HCl) содержание суммы флавоноидов в сырье составляет 0,52%, что, в свою очередь, разнится с этим же показателем, полученным согласно существующей методике, на 20%. А по методике №2 (0,30%) эта разница составляет 54%.

При определении органических кислот в методике отсутствовали указания о способе приготовления 0,1М раствора NaOH и способе установления его титра, мы на основе литературных данных [43] рассчитали необходимую навеску NaOH, взвесив при этом дополнительно 20% от расчетной массы, и стандартизировали приготовленный раствор NaOH 0,1н раствором щавелевой кислоты, приготовленной из фиксанала. Стандартизированный раствор NaOH использовали в качестве титранта.

Известно, что при 1-кратной экстракции определенных групп БАВ, в частности, органических кислот, происходит неполное их извлечение из растительного сырья. Поэтому в практике для количественного анализа чаще используют 2,3 - кратные экстракции.

Сапонины: Количественное определение сапонинов (тритерпенового ряда) в сырье проводилось согласно методике с пересчетом на кислоту глицирризиновую. Данная методика основана на извлечении сапонинов ацетоном с одновременным гидролизом их углеводной части, что позволяет непосредственно анализировать в дальнейшем только агликоны. Однако для препарата данная методика не разработана.

Кумарины: Из лабораторной практики известно, что хлороформ и вода не смешиваются, поэтому данное обстоятельство было использовано в существующей методике количественного определения содержания кумаринов в водных препаратах. Однако в нашем случае, при равных объемных содержаниях воды и этанола в экстрагенте, данная методика неприемлема, поскольку имеющийся в растворе этанол смешивается с хлороформом в любых соотношениях. Это, в свою очередь, в определенной мере отразится на результатах спектрофотометрического определения суммы кумаринов, поскольку часть соединений препарата, способных растворяться в этаноле, перейдут в слой хлороформ-этанол. Было решено получить хлороформный экстракт из препарата с последующей фильтрацией от нерастворившегося остатка по 2-м причинам: 1) с целью уменьшения искажения результатов под воздействием вышеуказанного фактора; 2) с целью сравнения результатов, полученных при анализе сырья, т.к. из последнего сумма кумаринов также извлекалась хлороформом.

Наблюдения и выводы:

· При определении содержания дубильных веществ (перманганатометрия, комплексонометрия), полисахаридов, флавоноидов, фенолов и фенолокислот, органических кислот, сапонинов не было замечено отклонений от предписаний методик.

· При определении содержания аминокислот в сырье и фитопрепарате было замечено, что добавление нингидринового реактива, помимо появления характерной окраски, вызывает в растворе осаждение. При этом выход осадка составил: для сырья 2010 г. сбора - 2,78%, для препарата - 10,75%. Данный осадок анализировали методом хроматомасс-спектрометрии. Результаты показали наличие в осадке соединений белкового происхождения. Причем характерны 2 пика с молекулярными массами 468 и 496, что свидетельствует о наличии белковых веществ.

Также было замечено, что появляющаяся окраска в препарате отличалась от той, что была в сырье. Это говорит о различном компонентном составе аминокислот в сырье и препарате.

· При определении содержания кумаринов в сырье и препарате, сухой хлороформный остаток не полностью растворился в этиловом спирте (96%), вследствие чего для снятия оптической плотности раствор был предварительно отфильтрован.



Рисунок 13. Содержание групп БАВ в сырье и препарате

Как видно, использованный нами экстрагент (50%-ный этанол) извлекает все группы БАВ, найденные в траве горца Джунгарского, причем отмечено преимущественное содержание дубильных веществ, полисахаридов и кумаринов [44].

Предварительные результаты биоскрининга показали, что полученный из травы горца Джунгарского (2010 г.) комплексный фитопрепарат относится к классу нетоксичных и обладает противовоспалительной активностью.

На настоящий момент испытания препарата продолжаются.

На основании результатов работы по оптимизации технологической схемы составлена блок-схема производства комплексного фитопрепарата из травы горца Джунгарского.



3. Экспериментальная часть

3.1 Характеристика сырья, экстрагентов, реактивов, методов исследования

Объектом исследования явилась надземная часть горца Джунгарского (Polygonum songoricum Schrenk), заготовленная в фазу покоя, в сентябре 2009 и 2010 гг. в Енбекшиказахском районе Алматинской области.

Горец Джунгарский

Внешние признаки. Стебли 20-70 см высотой, в верхней части слегка ветвистые, с черешками 2-4 см длиной. Цвет - от серо-зеленого до желто-зеленого, со своеобразным запахом. Различий во внешнем виде между растительным сырьем 2009 и 2010 гг. сбора не наблюдалось.

Подготовка сырья заключалась в его предварительном высушивании при комнатной температуре в хорошо проветриваемом помещении. После чего высушенное сырье измельчалось на мельнице резного типа и просеивалось через сито №5 (диаметр отверстий - 5 мм).

Методы исследования. Для качественного и количественного анализа основных групп БАВ, а также определения элементного состава в растительном сырье и препарате, полученном из него, были применены следующие методы исследования:

1) Экстракция разнополярными растворителями.

2) Капельный фитоанализ с использованием специфических реагентов на основные группы БАВ.

3) Бумажная хроматография (одномерная с СО метчиков и двумерная);

4) Атомно-абсорбционная спектрометрия.

5) Хроматомасс-спектрометрия.

6) УФ-спектрометрия.

7) Титриметрия.

8) Гравиметрия.

9) Центрифугирование.

Экстрагенты качественного и количественного анализа растительного сырья:

1) вода;

2-6) этанол (30, 40, 50, 70 и 96%);

7-8) ацетон (50 и 100%);

9) этилацетат;

10) бензол;

11-12) диоксан (50 и 100%);

13) диоксан-ацетон-вода (1:1:2).

Системы растворителей для бумажной хроматографии:

1) н-бутанол-уксусная кислота-вода (4:1:5 и 40:12,5:29);

2) уксусная кислота (6%).

Для хроматографии была использована хроматографическая бумага F №3.

В качестве специфических проявителей на группы БАВ при фитоанализе и хроматографии были применены:

1) аммиак (25%-ный раствор);

2) алюминия хлорид (1-2% спиртовые);

3) алюминия хлорид (1-2%) + аммиак (25%);

4) железа (III) хлорид (1-3% водные);

5) ЖАК (1% водный);

6) ванилин в HCl_конц (1%);

7) о-толуидиновый реактив;

8) нингидриновый реактив;

9) реактив Драгендорфа;

10) кислота пикриновая (1% водная);

11) кремний-вольфрамовая кислота;

12) реактив Бушарда-Вагнера-Люголя;

13) мочевина (2%-ный водный);

14) свинца (II) ацетат средний (1-2% водные);

15) калия перманганат (1% водный);

16) меди (II) сульфат (1%) + натрия гидроксид (5%);

17) калия гидроксид (1% спиртовый);

18) кислота хлороводородная (5 и 10% водные);

19) кислота азотная концентрированная;

20) натрия гидроксид (5% водный);

21) УФ-свет;

22) этанол (96%).

Использованы приборы:

1) Весы аналитические BL-150S (Sartorius).

2) Испаритель ротационный Bucki Roravapor Basic 1250.

3) УФ-лампа.

4) УФ-спектрометр СФ-26.

5) Атомно-абсорбционный спектрометр Shimadzu 6200 series.

6) Муфельная печь SNOL7.2/1100.

7) Центрифуга HERAEIC LOBA FuGe 200.

8) Мельница резного типа.



3.2 Определение доброкачественности сырья

Определение влажности, зольности и микроэлементного состава растительного сырья проводили согласно методикам ГФ XI и ГФ РК [38-40]:

Влажность сырья и препарата (Х) в процентах вычисляли по формуле:

(1)

где: m - масса навески сырья, г; m₁ - масса сырья после высушивания, г

Процентное содержание золы (Х) в процентах в абсолютно сухом сырье вычисляли по формуле:

(2)

где: m - масса навески сырья, г; m₁ - масса золы, г; щ - влажность сырья, %.

Процентное содержание золы, не растворимой в кислоте хлороводородной 10%-ной в абсолютно сухом сырье вычисляли по формуле:

(3)

где: m - масса навески сырья, г; m₁ - масса золы, г; щ - влажность сырья, %.

Процентное содержание сульфатной золы в абсолютно сухом сырье рассчитывали по формуле:

(4)

где: m - масса навески сырья, г; m₁ - масса золы, г; щ - влажность сырья, %.

Результаты определения влажности и зольности сырья представлены в таблице 11.

Таблица 11 - Показатели доброкачественности растительного сырья (в %)

Показатель	2009 г	2010 г
Влажность	8,77	7,69
Общая зольность	6,59	8,08
Зола, не раств. в HCl (10%)	-	1,19
Сульфатная зола	-	11,34
Примечание: влажность препарата - 6,94%

Из таблицы 11 видно, что содержание общей золы в растительном сырье различных годов сбора разнятся на 1,32%, а способность впитывать влагу - больше у сырья 2009 г. сбора.

Микроэлементный состав сырья определяли атомно-абсорбционным методом. Около 3 г сырья (точную навеску) помещали в предварительно прокаленный и точно взвешенный фарфоровый тигель, смачивали несколькими каплями азотной кислоты концентрированной и осторожно нагревали до удаления паров кислоты и обугливания сырья. Затем тигель помещали в муфельную печь и прокаливали при t=500єC. Несколько остывший, но еще горячий тигель охлаждали в эксикаторе, после чего содержимое растворяли в минимальном количестве азотной кислоты концентрированной и количественно переносили с помощью дистиллированной воды в мерную колбу на 25 мл. Объем раствора доводили водой дистиллированной до метки. Параллельно проводили холостой опыт, проводя те же самые процедуры, но без растительного сырья (таблица 12).



Таблица 12 - Микроэлементный состав травы горца Джунгарского (2010 г. сбора)

№	Элемент	Содержание, %	№	Элемент	Содержание, %
1	Na	0,3979	7	Co	0,057х10-3
2	K	1,8313	8	Mn	2,5х10-3
3	Mg	0,4688	9	Zn	3,4х10-3
4	Cu	1,2х10-3	10	Cd	не обн.
5	Ni	0,2х10-3	11	Pb	не обн.
6	Fe	18,2х10-3
Примечание - определение элементного состава растительного сырья 2009 г. сбора не проводилось

Как видно, надземная часть горца Джунгарского характеризуется высоким содержанием K, Mg и Na, а также отсутствием в ее составе соединений тяжелых металлов.

Известно, что Na и К регулируют водный обмен в организме. Натрий способствует задержке воды, калий - ее выделению. Ионы обоих элементов необходимы для проявления активности ряда ферментов. Как правило, соли калия широко распространены в растительных продуктах. Большую роль ионы Na⁺ и К⁺ играют в передаче импульсов по нервным и мышечным волокнам, а ионы К⁺ - в регуляции деятельности сердечной мышцы. Длительный недостаток калия может привести к инфаркту миокарда. Эти ионы поддерживают осмотическое давление плазмы крови и других жидкостей.

Магний - один из биологически активных элементов. Примерно 1 ммоля Mg²⁺ находится в свободном виде, остальная часть его связана с белками и другими органическими соединениями. Mg²⁺ обладает свойством активатора и входит в состав большой группы ферментов, называемых киназами. Также он связывает между собой субчастицы рибосомы, являющейся аппаратом для синтеза белка в клетке.



3.3 Качественный анализ растительного сырья

Качественный групповой анализ проводили с использованием специфических реагентов-проявителей на основные группы БАВ методом капельного фитоанализа. О наличии той или иной группы соединений судили по изменению окраски, появлению мути или выпадению осадка, характерном свечении в УФ-свете [12, 16, 41].

Как правило, максимальную информацию о качественном составе растительного сырья дает использование экстрагентов по 2 и более признакам химического сродства [12].

Качественный компонентный анализ проводили хроматографическим методом с СО метчиков на соответствующие группы БАВ; использованы водный, 50%-ный спиртовый и 50%-ный ацетоновый экстракты [45].

Использованы следующие доступные метчики:

· Аминокислоты:

1) DL-серин 11) DL-лейцин

2) DL-метионин 12) DL-триптофан

3) DL-б-аланин 13) L-аспарагин

4) DL-в-фенил-б-аланин 14) L-изолейцин

5) L-глутаминовая кислота 15) DL-тирозин

6) L-аргинин 16) DL-треонин

7) DL-аспарагиновая кислота 17) DL-валин

8) DL-орнитин моногидрохлорид 18) L-пролин

9) L-гистидин 19) DL-норвалин

10) DL-лизин 20) L-цистеин

· Флавоноиды: рутин, кверцетин, мирицетин

· Углеводы:

1) ксилоза 6) манноза

2) арабиноза 7) глюкоза

3) рамноза 8) сахароза

4) галактоза 9) фруктоза

5) мальтоза

· Фенолы и фенолокислоты:

1) резорцин 7) коричная кислота

2) гидрохинон 8) кофейная кислота

3) пирогаллол 9) п-кумаровая кислота

4) пирокатехин 10) ванилиновая кислота

5) м-оксибензойная 11) сиреневая кислота

6) анисовая кислота

Вывод: в растительном сырье 2009 г. сбора обнаружены следующие соединения:

· аминокислоты: гистидин, серин, валин, лейцин;

· углеводы: фруктоза;

· флавоноиды: кверцетин;

· фенолы и фенолокислоты: пирогаллол.

В растительном сырье 2010 г. сбора обнаружены следующие соединения:

· аминокислоты: лейцин, треонин, валин, пролин, метионин;

· углеводы: глюкоза, фруктоза; мальтоза (следовые кол-ва);

· флавоноиды: кверцетин, авикулярин (по результатам спектрофотометрического анализа);

· фенолы и фенолокислоты: пирогаллол.



Хроматограмма с СО аминокислот

Хроматограмма с СО углеводов

Результаты качественного анализа представлены в таблицах 13-25.

В таблицах 13-25 использованы следующие сокращения:

наст. - настаивание, нагр. - нагревание,

желт. - желтый, б/желт. - бледно-желтый,

сер. - серый, т/сер. - темно-серый,

роз. - розовый, б/роз. - бледно-розовый

крас. - красный, ор. - оранжевый,

кор. - коричневый, ос. - осадок,

зел. - зеленый, сир. - сиреневый,

св/кор. - светло-коричневый, св/сир. - светло-сиреневый,

бел. - белый, обесцв. - обесцвечивание,

«>» - переход одной окраски в другую при стоянии,

«-» - отрицательная реакция

Таблица 13 - Качественный состав водного экстракта

№	Реагент	Аналитический сигнал	Группы БАВ
		наст.	нагр.
1	Аммиак (25%)	желт.	желт.	Флавоноиды различных типов, слизи, фенольные соединения
2	AlCl3 (2%, спирт)	б/желт.	б/желт.	Флавоноиды, все типы полифенольных соединений с 3-мя рядовыми ОН-группами или ОН…С(О)… ОН-фрагментом,
3	Аммиак (25%) + AlCl3 (2%, спирт)	желт.	желт.	То же
4	FeCl3 (2%, вода)	сер.	т/сер.	Все фенольные соединения кроме тимола, в зав-сти от расположения ОН-групп, 3-окси-флавонолы
5	ЖАК (1%, вода)	св/сер.	св/сер.	3-рядовое расположение ОН-групп фенольных соед-ний, ГДВ и КДВ
6	Ванилин (1%, HClконц)	б/роз.	роз.>ор.	Эфиры катехинов, пирокатехиновый фрагмент фенольных соединений
7	О-толуидиновый реактив	св/кор.	кор.	Альдозы, восст. сахара
8	Нингидриновый реактив	сир.	сир.	Аминокислоты, аминосахара, амины, алкалоиды с NH2- и NH-группами
9	Реактив Драгендорфа	-	-	-
10	Пикриновая кислота (1%, вода)	-	-	-
11	Кремний-вольфрамовая кислота (5%, вода)	-	-	-
12	Реактив Бушарда-Вагнера-Люголя	-	-	-
13	Мочевина (1%, вода)	-	-	-
14	(СН3СОО)2Pb (2%, вода)	-	желт. ос.	Фенолы, фенолокислоты, флавоноиды, дубильные вещества с о-диокси-группировками
15	KMnO4 (1%, вода)	-	обесцв.	Каротиноиды, соединения с непредельными С=С-связями
16	CuSO4 (1%) + NaOH (5%)	-	зел. ос.	Соединения с ненасыщенными связями
17	KOH (1%, спирт)	-	ор. ос.	Окси (метокси-) - кумарины
Примечание - в сырье 2009 г. сбора реакция на аммиак (1) и ацетат свинца (14) были отрицательными, на о-толуидин (7) - цвет более интенсивный.

Таблица 14 - Качественный состав спиртового экстракта (30%)

№	Реагент	Аналитический сигнал	Группы БАВ
		наст.	нагр.
1	Аммиак (25%)	желт.	желт.	Флавоноиды различных типов, слизи, фенольные соединения
2	AlCl3 (2%, спирт)	желт.	желт.	Флавоноиды, все типы полифенольных соединений с 3-мя рядовыми ОН-группами или ОН…С(О)… ОН-фрагментом,
3	Аммиак (25%) + AlCl3 (2%, спирт)	желт.	желт.	То же
4	FeCl3 (2%, вода)	т/сер.	т/сер.	Все фенольные соединения кроме тимола, в зав-сти от расположения ОН-групп, 3-окси-флавонолы
5	ЖАК (1%, вода)	сер.	сер.	3-рядовое расположение ОН-групп фенольных соед-ний, ГДВ и КДВ
6	Ванилин (1%, HClконц)	роз.	роз.>ор.	Эфиры катехинов, пирокатехиновый фрагмент фенольных соединений
7	О-толуидиновый реактив	св/кор.	св/кор.	Альдозы, восст. сахара
8	Нингидриновый реактив	сир.	сир.	Аминокислоты, аминосахара, амины, алкалоиды с NH2- и NH-группами
9	Реактив Драгендорфа	-	-	-
10	Пикриновая кислота (1%, вода)	-	-	-
11	Кремний-вольфрамовая кислота (5%, вода)	-	-	-
12	Реактив Бушарда-Вагнера-Люголя	-	-	-
13	Мочевина (1%, вода)	-	-	-
14	(СН3СОО)2Pb (2%, вода)	-	желт. ос.	Фенолы, фенолокислоты, флавоноиды, дубильные вещества с о-диокси-группировками
15	KMnO4 (1%, вода)	-	обесцв.	Каротиноиды, соединения с непредельными С=С-связями
16	CuSO4 (1%) + NaOH (5%)	-	зел. ос.	Соединения с ненасыщенными связями
17	KOH (1%, спирт)	-	ор. ос.	Окси (метокси-) - кумарины
Примечание - качественный анализ спиртового экстракта (30%) сырья 2009 г. сбора не осуществлялся.

Таблица 15 - Качественный состав спиртового экстракта (40%)

№	Реагент	Аналитический сигнал	Группы БАВ
		наст.	нагр.
1	Аммиак (25%)	желт.	желт.	Флавоноиды различных типов, слизи, фенольные соединения
2	AlCl3 (2%, спирт)	желт.	желт.	Флавоноиды, все типы полифенольных соединений с 3-мя рядовыми ОН-группами или ОН…С(О)… ОН-фрагментом,
3	Аммиак (25%) + AlCl3 (2%, спирт)	желт.	желт.	То же
4	FeCl3 (2%, вода)	т/сер.	т/сер.	Все фенольные соединения кроме тимола, в зав-сти от расположения ОН-групп, 3-окси-флавонолы
5	ЖАК (1%, вода)	сер.	сер.	3-рядовое расположение ОН-групп фенольных соед-ний, ГДВ и КДВ
6	Ванилин (1%, HClконц)	роз.	роз.>ор.	Эфиры катехинов, пирокатехиновый фрагмент фенольных соединений
7	О-толуидиновый реактив	св/кор.	св/кор.	Альдозы, восст. сахара
8	Нингидриновый реактив	сир.	сир.	Аминокислоты, аминосахара, амины, алкалоиды с NH2- и NH-группами
9	Реактив Драгендорфа	-	-	-
10	Пикриновая кислота (1%, вода)	-	-	-
11	Кремний-вольфрамовая кислота (5%, вода)	-	-	-
12	Реактив Бушарда-Вагнера-Люголя	-	-	-
13	Мочевина (1%, вода)	-	-	-
14	(СН3СОО)2Pb (2%, вода)	-	желт. ос.	Фенолы, фенолокислоты, флавоноиды, дубильные вещества с о-диокси-группировками
15	KMnO4 (1%, вода)	-	обесцв.	Каротиноиды, соединения с непредельными С=С-связями
16	CuSO4 (1%) + NaOH (5%)	-	зел. ос.	Соединения с ненасыщенными связями
17	KOH (1%, спирт)	-	ор. ос.	Окси (метокси-) - кумарины
Примечание - качественный анализ спиртового экстракта (40%) сырья 2009 г. сбора не осуществлялся.

Таблица 16 - Качественный состав спиртового экстракта (50%)

№	Реагент	Аналитический сигнал	Группы БАВ
		наст.	нагр.
1	Аммиак (25%)	желт.	желт.	Флавоноиды различных типов, слизи, фенольные соединения
2	AlCl3 (2%, спирт)	желт.	желт.	Флавоноиды, все типы полифенольных соединений с 3-мя рядовыми ОН-группами или ОН…С(О)… ОН-фрагментом,
3	Аммиак (25%) + AlCl3 (2%, спирт)	желт.	желт.	То же
4	FeCl3 (2%, вода)	т/сер.	т/сер.	Все фенольные соединения кроме тимола, в зав-сти от расположения ОН-групп, 3-окси-флавонолы
5	ЖАК (1%, вода)	сер.	сер.	3-рядовое расположение ОН-групп фенольных соед-ний, ГДВ и КДВ
6	Ванилин (1%, HClконц)	роз.	роз.>ор.	Эфиры катехинов, пирокатехиновый фрагмент фенольных соединений
7	О-толуидиновый реактив	св/кор.	св/кор.	Альдозы, восст. сахара
8	Нингидриновый реактив	т/сир.	т/сир.	Аминокислоты, аминосахара, амины, алкалоиды с NH2- и NH-группами
9	Реактив Драгендорфа	-	-	-
10	Пикриновая кислота (1%, вода)	-	-	-
11	Кремний-вольфрамовая кислота (5%, вода)	-	-	-
12	Реактив Бушарда-Вагнера-Люголя	-	-	-
13	Мочевина (1%, вода)	-	-	-
14	(СН3СОО)2Pb (2%, вода)	-	желт. ос.	Фенолы, фенолокислоты, флавоноиды, дубильные вещества с о-диокси-группировками
15	KMnO4 (1%, вода)	-	обесцв.	Каротиноиды, соединения с непредельными С=С-связями
16	CuSO4 (1%) + NaOH (5%)	-	зел. ос.	Соединения с ненасыщенными связями
17	KOH (1%, спирт)	-	ор. ос.	Окси (метокси-) - кумарины
Примечание - в сырье 2009 г. сбора реакция на о-толуидиновый реактив (7) - цвет более интенсивный.

Таблица 17 - Качественный анализ спиртового экстракта (70%)

№	Реагент	Аналитический сигнал	Группы БАВ
		наст.	нагр.
1	Аммиак (25%)	желт.	желт.	Флавоноиды различных типов, слизи, фенольные соединения
2	AlCl3 (2%, спирт)	желт.	желт.	Флавоноиды, все типы полифенольных соединений с 3-мя рядовыми ОН-группами или ОН…С(О)… ОН-фрагментом,
3	Аммиак (25%) + AlCl3 (2%, спирт)	желт.	желт.	То же
4	FeCl3 (2%, вода)	т/сер.	т/сер.	Все фенольные соединения кроме тимола, в зав-сти от расположения ОН-групп, 3-окси-флавонолы
5	ЖАК (1%, вода)	сер.	сер.	3-рядовое расположение ОН-групп фенольных соед-ний, ГДВ и КДВ
6	Ванилин (1%, HClконц)	роз.	роз.	Эфиры катехинов, пирокатехиновый фрагмент фенольных соединений
7	О-толуидиновый реактив	св/кор.	св/кор.	Альдозы, восст. сахара
8	Нингидриновый реактив	сир.	сир.	Аминокислоты, аминосахара, амины, алкалоиды с NH2- и NH-группами
9	Реактив Драгендорфа	-	-	-
10	Пикриновая кислота (1%, вода)	-	-	-
11	Кремний-вольфрамовая кислота (5%, вода)	-	-	-
12	Реактив Бушарда-Вагнера-Люголя	-	-	-
13	Мочевина (1%, вода)	-	-	-
14	(СН3СОО)2Pb (2%, вода)	-	желт. ос.	Фенолы, фенолокислоты, флавоноиды, дубильные вещества с о-диокси-группировками
15	KMnO4 (1%, вода)	-	обесцв.	Каротиноиды, соединения с непредельными С=С-связями
16	CuSO4 (1%) + NaOH (5%)	-	зел. ос.	Соединения с ненасыщенными связями
17	KOH (1%, спирт)	-	ор. ос.	Окси (метокси-) - кумарины
Примечание - качественный анализ спиртового экстракта (70%) сырья 2009 г. сбора не осуществлялся.



Таблица 18 - Качественный анализ спиртового экстракта (96%)

№	Реагент	Аналитический сигнал	Группы БАВ
		наст.	нагр.
1	Аммиак (25%)	желт.	св/желт.	Флавоноиды различных типов, слизи, фенольные соединения
2	AlCl3 (2%, спирт)	желт.	желт.	Флавоноиды, все типы полифенольных соединений с 3-мя рядовыми ОН-группами или ОН…С(О)… ОН-фрагментом,
3	Аммиак (25%) + AlCl3 (2%, спирт)	желт.	желт.	То же
4	FeCl3 (2%, вода)	т/сер.	т/сер.	Все фенольные соединения кроме тимола, в зав-сти от расположения ОН-групп, 3-окси-флавонолы
5	ЖАК (1%, вода)	т/сер.	т/сер.	3-рядовое расположение ОН-групп фенольных соед-ний, ГДВ и КДВ

Подобные документы

• Оптимизация процесса получения сульфанилата натрия в среде полихлоридов

  История развития производства красителей, методы их получения. Характеристика исходного сырья и получаемого продукта, технология получения сульфанилата натрия. Расчет химико-технологических процессов и оборудования. Разработка узла автоматизации.
  
  дипломная работа [466,9 K], добавлен 06.11.2012
  

• Переработка золотосодержащего сырья

  Характеристика золотосодержащего сырья и методы его переработки. Технологическая схема переработки сырья и описание основных этапов. Процесс выделения золота из тиомочевинных элюатов. Химизм процесса осаждения золота из тиомочевинных растворов.
  
  курсовая работа [4,1 M], добавлен 26.03.2008
  

• Низкомолекулярные соединения

  Жизнь как непрерывный физико-химический процесс. Общая характеристика природных соединений. Классификация низкомолекулярных природных соединений. Основные критерии классификации органических соединений. Виды и свойства связей, взаимное влияние атомов.
  
  презентация [594,7 K], добавлен 03.02.2014
  

• Получение биотоплива из растительного сырья

  Характеристика сущности и назначения биоэтанола - топлива из биологического сырья, получаемого, как правило, в результате переработки стеблей сахарного тростника или семян рапса, кукурузы, сои. Промышленное производство спирта из биологического сырья.
  
  курсовая работа [82,5 K], добавлен 17.05.2012
  

• Свойства фенолгликозидов

  Общая характеристика, распространение и физико-химические свойства фенолгликозидов. Способы получения фенольных соединений из растительного сырья этанолом и метанолом. Методы выделения идентификации, качественное определение и распространение вещества.
  
  презентация [1,5 M], добавлен 27.02.2015
  

• Физико-химическое исследование и анализ галогенидов и иодгалогенидов N-бензилуротропиния, уротропина, 1-(1-адамантил) пиридиния и N-бензилпиридиния

  Биологическая активность и химико-аналитические свойства полииодгалогенидных соединений. Характеристика галогенидов и иодгалогенидов. Идентификация и количественное определение полииодгалогенидов органических катионов. Подлинность и чистота соединений.
  
  дипломная работа [511,9 K], добавлен 09.04.2014
  

• Амины: общее описание

  Амины как производные аммиака, в молекуле которого один, два или три атома водорода замещены органическими радикалами, их классификация и типы. Принципы и методы получения данных соединений, направления практического применения. Строение аминов.
  
  контрольная работа [416,9 K], добавлен 05.08.2013
  

• Термолиз как один из вариантов переработки мазута и утилизации отработанного масла

  Характеристика факторов, влияющих на процесс термолиза нефтяного остаточного сырья с серосодержащей добавкой. Рассмотрение способов переработки и утилизации тяжелых продуктов нефтяного происхождения. Анализ конструктивных особенностей дуктилометра.
  
  дипломная работа [5,7 M], добавлен 25.07.2015
  

• Разработка методики определения флавоноидов в лекарственном растительном сырье

  Краткая характеристика флавоноидов. Подготовка растительного сырья. Строение, физические и химические свойства природных флавоноидов. Методы их выделения и идентификации. Определение оптимальных условий экстрагирования рутина и кверцетина из сырья.
  
  дипломная работа [5,7 M], добавлен 03.08.2011
  

• Цереброзиды. Состав, строение, биологическая роль

  Биологическая роль цереброзиидов - природных органических соединений из группы сложных липидов (сфинголипиды), впервые обнаруженых в составе мозга. Галактоцереброзид - один из простейших гликолипидов. Глюкоцереброзид. Место локализации цереброзидов.
  
  реферат [15,2 K], добавлен 18.03.2016
  

• главная
• рубрики
• по алфавиту
• вернуться в начало страницы
• вернуться к началу текста
• вернуться к подобным работам