Характеристика моноклональных антител к рекомбинантным белкам pseudomonas aeruginosa

Антитела культур №№ 2 и 3 (n=2) не взаимодействовали с ToxA и OprF, сорбированным на нитроцеллюлозе, однако взаимодействовали с данными белками в ИФА.

Антитела культур №№ 1, 4 и 5 (n=3) взаимодействовали с ToxA в нативной и денатурированной форме и с OprF, но только в нативной форме. По результатам ИФА эти антитела взаимодействовали со всеми рекомбинантными белками: aTox, OprF и OprF-aTox.

3.4 Определение цитотоксичности рекомбинантного ЭТА

Определение цитотоксического эффекта рекомбинантного ЭТА была проведена на линии клеток яичника китайского хомячка (СНО). В тесте использовали разные дозы рекомбинантного экзотоксин А: ЭТА1 - 150 мкг/мл, ЭТА2 - 105мкг/мл и ЭТА3 - 10,5 мкг/мл. Нумерация токсина 1-3 соответствует номеру партии.

Исходя из полученных результатов установили, что ЭТА3 почти не оказывал токсического эффекта, при концентрации 500 мкг/мл, ЭТА2 обладал токсическим эффектом клетки СНО переставали гибнуть при концентрации токсина 7,78 мкг/мл, ЭТА1 обладал наиболее выраженной цитотоксичностью для клеток CHO в дозе 104 на лунку, клетки не гибли при концентрации 0, 98 мкг/мл. Основываясь на этих данных из ЭТА1 рассчитывали дозу токсина включающую в себя 4 цитопатогенные дозы и составляющую около 16 мкг/мл.

Эту цитотоксическую дозу токсина в дальнейшем использовали в работе для оценки токсиннейтрализующей активности полученных моноклональных антител.

3.5 Определение токсиннейтрализующей активности моноклональных антител

4. Обсуждение

На первом этапе работы проведён ИФА с наработанными рекомбинантными белками. По результатам ИФА обнаружены антитела которые взаимодействовали с: 1) только с OprF и слитным белком OprF- aTox; 2) только с aTox и слитным белком OprF-aTox; 3) со всеми рекомбинантными белками aTox, OprF и OprF- aTox.

Наибольший интерес представляли культуры, синтезирующие антитела: №№ 1, 2, 3, 4, 5, 10 (n=6), так как они взаимодействовали со всеми рекомбинантными белками. Использование таких моноклональных антител дает возможность выявлять сразу три рекомбинантных белка aTox; OprF и OprF-aTox и в дальнейшей перспективе на основе этих антител создать тест- систему. В случае если вакцина будет состоять из этих белков.

Супернатанты этих культур протестированы в иммунодот варианте иммуноферментного анализа, данные соответствовали результатам, полученным в ИФА, однако, антитела не взаимодействовали с OprF, обработанным денатурирующими агентами. Вероятно, данный эпитоп разрушался на белке OprF при разрушении его пространственной структуры.

Остальные антитела, протестированные в иммунодот варианте ИФА, также имели сходные результаты.

Большинство антител №№ 6, 7, 11, 10, 12 (n=5) в иммунодот варианте ИФА взаимодействовали только с ToxA, причем как в нативной, так и в денатурированной форме. В ИФА данные Ат взаимодействовали только с ToxA и слитным белком OprF-aTox и кроме №10, не взаимодействовали с рекомбинантным белком OprF.

МА, направленные только к анатоксину (ToxA), в дальнейшем могут применяться для выявления самого анатоксина, и возможно даже полноразмерного экзотоксина А.

Антитела №№ 2 и 3 в иммунодот варианте не взаимодействовали с ToxA и OprF, сорбированным на нитроцеллюлозе, однако антитела взаимодействовали с данными белками в ИФА, что возможно связано с изменением пространственной структуры белков в процессе сорбции на нитроцеллюлозе.

При помощи, МА, направленных к OprF, можно выявлять не только сам белок наружной мембраны, но возможно и всю синегнойную палочку, т.е. разработать и создать на основе полученных антител тест-систему для идентификации P. aeruginosa. Не исключено, что данные Ат или некоторые из них могут обладать протективными свойствами, но в данной работе исследований в этом направлении не проводилось, однако, представляет интерес их тестирование в будущем.

Полученные результаты позволили выделить 4 гибридные культуры- продуцентов антител, представляющие наибольший интерес: №.№1, 4, 9 и 10 (n=4) При выборе данных антител ориентировались на интенсивность их взаимодействия в ИФА и в иммунодот варианте ИФА.

Предполагалось, что выбранные МА могли обладать токсин нейтрализующей активностью. Для установления этого факта была проведена реакция нейтрализации цитотоксичности (НЦТ) использовали супернатаны и асцитные жидкости гибридных культур №.№1, 4, 9 и 10. тем не менее, токсиннейтрализующих антител среди них не обнаружено.

Заключение

Цель данной работы являлось изучение иммунобиологических и иммунохимических свойств моноклональных антител к рекомбинантным белкам P. aeruginosa.

По методике, разработанной в лаборатории протективных антигенов ФГБУ «НИИВС им. И.И. Мечникова» наработаны и проанализированы рекомбинантные белки aTox; OprF и OprF-aTox. Полученные рекомбинантные белки использовали для характеристики панели МА и оценки взаимодействия антител в твердофазном ИФА, в иммунодот варианте иммуноферментного анализа и реакции нейтрализации цитотоксичности. По данным ИФА, антитела были условно разделены на 3 группы. Результаты в иммунодот варианте соответствовали таковым по иммуноферментному анализу: большинство МА (№№ 6, 7, 11, 10, 12, n=5) были направлены только к aTox, МА (№№ 8 и 9, n=2) только к OprF, МА (№№ 2 и 3, n=2) не направлены ни к aTox, ни к OprF, МА (№№ 1, 4 и 5, n=3) направлены к aTox и нативной форме OprF. Для четырёх гибридных культур оценена токсиннейтрализующая активность №.№1, 4, 9 и 10 (n=4) ни одно из них не обладало токсиннейтрализующими свойствами.

В дальнейшем планируется продолжить исследования в этом направлении. Вероятно, стоит расширить панель гибридных культур- продуцентов моноклональных антител и группы антител для тестирования токсиннейтрализующей активности. Важен поиск новых более совершенных методов оценки полученных МА. Предположительно, токсиннейтрализующие антитела могут быть использованы для конструирования гуманизированных моноклональных антител, для терапии токсических форм инфекций P. aeruginosa или стать основой для создания диагностической тест-системы.

Выводы

1. Получен рекомбинантный белок OprF-aTox.

2. В твердофазном ИФА выделили 3 группы гибридных культур, среди них 2 взаимодействовали с OprF и слитным белком OprF- aTox, 4 - с aTox и слитным белком OprF-aTox и 6 - со всеми рекомбинантными белками aTox, OprF и OprF- aTox.

3. В иммунодот варианте ИФА выявлены 5 антител, взаимодействующих с не денатурированной и денатурированной формой aTox, 2 - с не денатурированной и денатурированной формой OprF, 2 не взаимодействовали с aTox и OprF и 3 взаимодействовали с не денатурированную и денатурированной формой aTox и нативной формой OprF.

4. МА №.№1, 4, 9 и 10 не обладали нейтрализующей активностью.

Список литературы

1. Gordon S.M., Serkey J.M., Keus T.F. et al. Secular trends in nosocomial bloodstream infections in a 55-bed cardiothoracic intensive care unit. // Ann Thorac Surg.1998. Vol.65. P. 95-100.

2. Hospital infections Program, National Center for Infections Diseases, Centers for Diseases control Intensive Antimicrobial Resistance Epidemiology surveillance report // Am Infect Control. 1999. Vol.24. P. 279-284.

3. Van Eldere J. Multicentre surveillance of Pseudomonas aeruginosa susceptibility patterns in nosocomial infections //Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 2003. Vol.51 (2). P. 347-352.

4. Bearman G.M., Munro C., Sessler C.N., Wenzel R.P. Infection control and the prevention of nosocomial infections in the intensive care unit. // Semin Respir Crit Care Med. 2006. Vol.27 (3) P. 310--324.

5. Исхакова Х.И. Синегнойная палочка и другие грамотрицательные условно патогенные бактерии как возбудители госпитальных инфекций: Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук. 1988. 30 с.

6. Коршунова Г.С., Садовникова В.Н. Состояние заболеваемости внутрибольничными инфекциями в Российской Федерации // Внутрибольничные инфекции - проблемы эпидемиологии, клиники диагностики, лечения и профилактики. Москва. 1999. С. 124-125.

7. О состоянии заболеваемости внутрибольничными инфекционными болезнями и мерах по их предупреждению: Протокол решения Коллегии Минздрава Российской Федерации от 26.02 №16 // Дезинфекц. дело. 2003. №1. С. 63-65.

8. Розанова С.М. Резистентность к антибактериальным препаратам грамотрицательной флоры палат интенсивной терапии: Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук. 2004.

9. Сидоренко С.В., Резван С.П., Стерхова Г.А., Грудинина С.А. Госпитальные инфекции, вызванные Pseudomonas aeruginosa. Распространение и клиническое значение антибиотикорезистентности // Антибиотики и химиотерапия. 1999. Т.44. №3. С. 25-33.

10. Руднов В.А. Современное клиническое значение синегнойной инфекции и возможности ее терапии у пациентов отделений реанимации // Инфекции и антимикробная терапия. 2002. №6. С. 170-176.

11. Савенко С.А. Как решить проблему внутрибольничной инфекции // Врач. 1998. №3. С. 34-35.

12. Stanislavsky E.S., Dmitriev B.A., Lanyi B., Joo I. Antigens of. Pseudomonas aeruginosa and theiruse in immunoprophylaxis and immunotherapy. // Acta Microbiol. Acad. Sci. Hung. 1985. Vol.32. P. 3-37.

13. Едвабная Л.С., Зайднер И.Г., Макаренко Т.А. и др. Белковые протективные антигены P.aeruginosa // Журн. микробиол. 1985. № 11. С. 18- 23.

14. Макаренко Т.А., Станиславский Е.С. Иммунологическое изучение белков клеточной стенки Pseudomonas aeruginosa // Журн. микробиол. 1996. № 2. C. 7-9.

15. Станиславский Е.С., Joo I. Вакцины против Pseudomonas aeruginosa инфекции: итоги и перспективы исследований // Бактериальные антигены, Cборник трудов. Москва.1982. С. 3-14.

16. Станиславский Е.С., Joo I., Булк В.Ф. и др. Бесклеточная вакцина № 4 // Журн. микробиол. 1982. № 10. С. 25-29.

17. Юшкова В.И., Станиславский Е.С., Ландсман Г.И. Экспериментальное изучение динамики АТ-образования к антигенам слизи P.aeruginosa // Журн. микробиол. - 1983. - № 3. - С. 78.14. Руднов В.А. Антибиотикотерапия госпитальных инфекций вызванных Pseudomonas aeruginosa // Русский медицинский журнал. 2005. № 7 (13). C. 485-490.

18. Hancock R.E., Sinhnel R., Martin N. Outer membrane protein of Pseudomonas // Mol. Microbiol. 1990. Vol.4. P. 1069-1075.

19. Mizuno T., Kageyama M. Separation and characterization of the outer membrane of Pseudomonas aeruginosa. // J. Biochem. 1982. Vol.84 (1) P. 179- 191.

20. von Specht B., Knapp B., Hungerer K., Lucking C., Schmitt A., Domdey H. Outer membrane proteins of Pseudomonas aeruginosa as vaccine candidates // J. Biotechnol. 1996. Vol.44 (1-3). P. 145-153.

21. Зверев В.В., Курбатова Е., Калошин А.А., Михайлова Н.А., Злыгостев С.А., Торопчина Ю.Н. Получение рекомбинантного белка F наружной мембраны (OprF) Pseudomonas aeruginosa и изучение его антигенных свойств // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии, 2005. №5. С.50-53

22. Iglewski, B.H., Kabat D. NAD-dependent inhibition of protein synthesis by Pseudomonas aeruginosa toxin // Proc Natl Acad Sci U S A. 1975. Vol.72 (6). P. 2284-2288.

23. Pollack M., Anderson S.E. Toxicity of Pseudomonas aeruginosa exotoxin A for human macrophages. // Infection and immunity. 1978. Vol.19 (3). P. 1092-6.

24. Wolf P., Elsдsser-Beile U. Pseudomonas exotoxin A: From virulence factor to anti-cancer agent // International Journal of Medical Microbiology. 2009. Vol.299 (3). P. 161-176.

25. Wick M.J., Hamood A.N., Iglewski B.H. Analysis of the structure-function relationship of Pseudomonas aeruginosa exotoxin A. // Mol Microbiol. 1990. Vol.4 (4). P. 527-535.

26. Mikhailova N.A., Kuniagina O.V., Kuznetsova T.N., Sadykova A.F., Brodinova N.S., Bodrova G.N. The safety, reactogenicity and antigenic activity of Pseudomonas aeruginosa anatoxin studied in volunteers // Zh Mikrobiol Epidemiol Immunobiol. 1995. Vol.3. P. 89-92.

27. Podgornaia L.G., Dziuban N.F. Antigenic properties of Pseudomonas aeruginosa anatoxin and the protective action of antitoxic anti-Pseudomonas aeruginosa serum // Zh Mikrobiol Epidemiol Immunobiol. 1986. Vol.6. P. 67-69.

28. Callahan L.T. 3rd. Pseudomonas aeruginosa exotoxin: purification by preparative polyacrylamide gel electrophoresis and the development of a highly specific antitoxin serum // Infect Immun. 1976. Vol.14. P. 55-61.

29. Elzaim H.S., Chopra A.K., Peterson J.W., Goodheart R., Heggers J.P. Generation of neutralizing antipeptide antibodies to the enzymatic domain of Pseudomonas aeruginosa exotoxin A // Infect Immun. 1998. Vol.66. P. 2170-2179.

30. Douglas C.M., Collier R.J. Exotoxin A of Pseudomonas aeruginosa: substitution of glutamic acid 553 with aspartic acid drastically reduces toxicity and enzymatic activity // J Bacteriol. 1987. Vol.169. P. 4967-4971.

31. Lukac M., Pier G.B., Collier R.J.Toxoid of Pseudomonas aeruginosa exotoxin A generated by deletion of an active-site residue // Infect Immun. 1988. Vol.56. P. 3095-3098.

32. Woodruff W.A., Hancock R.E., et al. Expression in Escherichia Coli and function of porin protein F of Pseudomonas aeruginosa // J. Bacteriol. 1986. Vol.167. P. 473-479.

33. Cornelis P., Sierra J.C., Lim A.Jr., Malur A., Tungpradabkul S., Tazka H., Leitao A. et al. Development of new cloning vectors for the production of immunogenic outer membrane fusion proteins in Escherichia coli // Biotechnology (N.Y.). 1996. №14. P. 203-208.

34. Егорова О.Н. и др. Эпидемиология и профилактика синегнойной инфекции // Федеральные клинические рекомендации. М., 2014. 82 с.

35. Беляков В.Д., Ряпис Л.А., Илюхин В.И. Псевдомонады и псевдомонозы // М.: Медицина, 1990.

36. Макаренко Т.А. Белковые протективные антигены P.aeruginosa: Автореферат диссертации на соискание кандидата биологических наук. 1994. 24 с.

37. Синегнойная инфекция // Под ред. А.Ф. Мороз. М.: Медицина, 1988.

38. Возбудители гнойно-воспалительных, септических и раневых инфекций. Боррелии ириккетсии - возбудители трансмиссивных инфекций / Н.С. Горячкина и др. М.: ГБОУ ВПО РНИМУ им. Н. И. Пирогова Минздрава России, 2011. 41 с.

39. Kolle W., Hetsch Н. Экспериментальная бактериология и инфекционныя болезни. // Издание журн. «Практическая Медицина», С.-Петербургь, 1908. - 536 с.

40. Мороз, А. Ф., Анциферова Н. Г., Баскакова Н. В. и др. Синегнойная инфекция. М.: Медицина, 1988. 256 с.

41. Шагинян, И. А., Чернуха М. Ю. Неферментирующие грамотрицательные бактерии в этиологии внутрибольничных инфекций: клинические, микробиологические и эпидемиологические особенности // Клин Микробиол. Антимикроб Химиотер. 2005.Т. 7. № 3. С. 271-285.

42. van Delden C., Iglewski B.H. Cell-to-cell signaling and Pseudomonas aeruginosa infections. Emerg. Infect. Dis., 1998. Vol.4. P. 551-560.

43. Шмитт К.К., Мейсик К.С., О'Браэн А.Д. Бактериальные токсины: друзья или враги?//Клин Микробиол Антимикроб Химиотер. 2005. Т. 2. № 1. С. 4-15.

44. Профилактика внутрибольничных инфекций в стационарах и охрана труда среднего медицинского работника // Вып.1. М.: ООО Изд. дом "Медицинский вестник", 2001. 96 с.

45. Семина Н.А., Ковалева Е., Галкин В.В. Актуальные вопросы ВБИ // Материалы конференции Внутрибольничные инфекции. М., 2002. С. 53-58.

46. Грузина В. Д. Коммуникативные сигналы бактерий // Антибиотики и химиотерапия. 2003. Т.48. № 10. С. 32-39.

47. Портнягина О. Ю., Новикова О. Д., Вострикова О. П., Хоменко В. А., Соловьева Т. Ф. Бактериальные порины как перспективные антигены для диагностики и вакцинопрофилактики инфекционных заболеваний // Вестник ДВО РАН . 2004. №3.

48. Chen T.Y., Shang H.F., Chen T.L., Lin C.P., Hui C.F., Hwang J. Recombinant protein composed of Pseudomonas exotoxin A, outer membrane proteins I and F as vaccine against P.aeruginosa infection // Appl. Microbiol. Biotechnol. 1999. Vol.52. P. 524-533.

49. Editorial. Meeting summary Possibilities for active and passive vaccination against opportunistic infections // Vaccine. 2004. Vol.22. P. 801-804.

50. Pollack M., Taylor N.S., Callahan L.T. Exotoxin production by clinical isolates of Pseudomonas aeruginosa. // Infection and immunity. 1977. Vol.3 (15). P. 776- 80

51. Bahaa El-din A., El-Nagdy M., Badr R. Pseudomonas aeruginosa Exotoxin A as a Virulence Factor in Burn Wound Infections // Egyptian Journal of Plast. Reconstr. Surg. 2008. Vol.1 (17). P. 125-133.

52. 5. Gill D. Bacterial toxins: a table of lethal amounts. // Microbiological Reviews. 1982. Vol.46 (1). P. 86-94.

53. Pavlovskis O., Shackelford A. Pseudomonas aeruginosa exotoxin in mice: localization and effect on protein synthesis // Infection and immunity. 1974. Vol.3 (9). P. 540-546.

54. Pollack M. The role of exotoxin A in pseudomonas disease and immunity. // Reviews of infectious diseases. 1983. Vol. 5 Suppl 5. P. S979-S984.

55. Дюзбак С.Т. Механизм действия экзотоксина А Pseudomonas aeruginosa на макроорганизм (экспериментальные исследования) // Журн. микробиол. 1984. № 6. C. 35-39..

56. Вовк В.А., Учакина Н.. Выделение экзотоксина А Pseudomonas aeruginosa методом аффинной хроматографии с использованием специфических антител // ЖМЭИ. 1989. № 4. C. 64-68.

57. Янишевская М.Н., Кузьмина Н.С., Голшмид В.К. Экзотоксин Pseudomonas aeruginosa // Журн. микробиол. 1982. №10. C. 33-37.

58. Liu P. Extracellular toxins of Pseudomonas aeruginosa // Journal of Infectious Diseases. 1974. Vol.130. P. 94-99.

59. Mйrй J., Morlon-Guyot J., Bonhoure A. Acid-triggered membrane insertion of Pseudomonas exotoxin A involves an original mechanism based on pH-regulated tryptophan exposure // Journal of Biological Chemistry. 2005. Vol.22 (280). P. 21194-21201.

60. Ogata M., Chaudhary V.K., Pastan I., FitzGerald D.J. Processing of Pseudomonas exotoxin by a cellular protease results in the generation of a 37,000- Da toxin fragment that is translocated to the cytosol // Journal of Biological Chemistry. 1990. Vol.33 (265). P. 20678-20685.

61. Siegall C.B., Chaudhary V.K., FitzGerald D.J., Pastan I. Functional analysis of domains II, Ib, and III of Pseudomonas exotoxin // J Biol Chem. 1989. Vol.264 (24). P. 14256-14261.

62. Hwang J. Fitzgerald D.J., Adhya S., Pastan I. Functional domains of Pseudomonas exotoxin identified by deletion analysis of the gene expressed in E. coli. // Cell. 1987. Vol.48 (1). P. 129-36.

63. Cripps A.W., Peek K., Dunkley M., Vento K., Marjason J.K., McIntyre M.E. et al. Safety and immunogenicity of an oral inactivated whole-cell Pseudomonas aeruginosa vaccine administered to healthy human subjects // Infect Immun. 2006. Vol.74 (2). P. 968-974.

64. Langford D.T., Hiller J. Prospective, controlled study of a polyvalent Pseudomonas vaccine in cystic fibrosis--three year results // Arch Dis Child. 1984. Vol.59 (12). P. 1131-1134.

65. MacIntyre S., McVeigh T., Owen P. mmunochemical and biochemical analysis of the polyvalent Pseudomonas aeruginosa vaccine PEV // Infect Immun. 1986. Vol.51 (2). P. 675-686.

66. Hatano K., Boisot S., DesJardins D., Wright D.C., Brisker J., Pier G.B. Immunogenic and antigenic properties of a heptavalent high-molecular-weight O- polysaccharide vaccine derived from Pseudomonas aeruginosa // Infect Immun. 1994. Vol.62 (9). P. 3608-3616.

67. Crowe B.A., Enzersberger O., Schober-Bendixen S., Mitterer A., Mundt W., Livey I., Pabst H., Kaeser R., Eibl M., Eibl J. and et al. The first clinical trial of immuno's experimental Pseudomonas aeruginosa flagellar vaccines // Antibiot Chemother. 1991. Vol.44. P. 143-156.

68. Doring G., Pfeiffer C., Weber U., Mohr-Pennert A., Dorner F. Parenteral application of a Pseudomonas aeruginosa flagella vaccine elicits specific anti-flagella antibodies in the airways of healthy individuals // Am J Respir Crit Care Med. 1995. Vol.151 (4). P. 983-985.

69. Baumann U., Mansouri E., von Specht B.U. Recombinant OprF-OprI as a vaccine against Pseudomonas aeruginosa infections // Vaccine. 2004. Vol.22 (7). P. 840-847.

70. Cohen J. Naked DNA points way to vaccines // Science. 1993. Vol.259 (5102). P. 1691-1692.

71. Donnelly J.J., Ulmer J.B., Shiver J.W., Liu M.A. DNA vaccines // Annu Rev Immunol. 1997. Vol.15. P. 617-648.

72. Jang I.J., Kim I.S., Park W.J., Yoo K.S., Yim D.S., Kim H.K., Shin S.G., Chang W.H., Lee N.G. et al. Human immune response to a Pseudomonas aeruginosa outer membrane protein vaccine // Vaccine. 1999. Vol.17 (2). P. 158- 168.

73. Holder I.A., Neely A.N., Frank D.W. PcrV immunization enhances survival of burned Pseudomonas aeruginosa-infected mice // Infect Immun. 2001. Vol.69 (9). P. 5908-5910.

74. Priebe G.P., Brinig M.M., Hatano K., Grout M., Coleman F.T., Pier G.B., Goldberg J.B. Construction and characterization of a live, attenuated aroA deletion mutant of Pseudomonas aeruginosa as a candidate intranasal vaccine // Infect Immun. 2002. Vol.70 (3). P. 1507-1517.

75. Zaidi T.S., Priebe G.P., Pier G.B. A live-attenuated Pseudomonas aeruginosa vaccine elicits outer membrane protein-specific active and passive protection against corneal infection // Infect Immun. 2006. Vol.74 (2). P. 975-983.

76. Hanessian S., Regan W., Watson D., Haskell T.H. Isolation and characterization of antigenic components of a new heptavalent Pseudomonas vaccine // Nat New Biol, 1971. Vol.229 (7). P. 209-210.

77. Larbig M., Mansouri E., Freihorst J., Tummler B., Kohler G., Domdey H., Knapp B., Hungerer K.D. et al. Safety and immunogenicity of an intranasal Pseudomonas aeruginosa hybrid outer membrane protein F-I vaccine in human volunteers // Vaccine. 2001. Vol.19 (17-19). P. 2291-2297.

78. Price B.M., Galloway D.R., Baker N.R., Gilleland L.B., Staczek J., Gilleland H.E. Jr. Protection against Pseudomonas aeruginosa chronic lung infection in mice by genetic immunization against outer membrane protein F (OprF) of P. aeruginosa // Infect Immun. 2001. Vol.69 (5). P. 3510-3515.

79. Staczek J., Gilleland H.E.Jr., Gilleland L.B., Harty R.N., Garcia-Sastre A., Engelhardt O.G., Palese P. A chimeric influenza virus expressing an epitope of outer membrane protein F of Pseudomonas aeruginosa affords protection against challenge with P. aeruginosa in a murine model of chronic pulmonary infection // Infect Immun. 1998. Vol.66 (8). P. 3990-3994.

80. Saha S., Takeshita F., Sasaki S., Matsuda T., Tanaka T., Tozuka M., Takase K., Matsumoto T., Okuda K. et al. Multivalent DNA vaccine protects mice against pulmonary infection caused by Pseudomonas aeruginosa // Vaccine. 2006. Vol.24 (37-39). P. 6240-6249

81. Титова Т.И., Сидорова Т.Н., Радкевич С.А. и др. Получение и изучение свойств поливалентной корпускулярной синегнойной вакцины // Журн. микробиол. 1985. №8. С. 80-84.

82. Станиславский Е.С., Joo I., Северцева М.К. и др. Иммунологическая эффективность и безвредность в эксперименте пиоиммуногена-вакцины против инфекции Pseudomonas aeruginosa // Журн. микробиол. 1982. №5. С. 70-75

83. Бандман О.А., Едвабная Л.С., Булк В.Ф. и др. Бесклеточная вакцина псевдомонас: иммунохимическая характеристика и иммуногенность // Журн. микробиол. 1987. № 11. С. 44-47.

84. Макаренко Т.А., Балаян С.С., Сергиенко А.И. и др. Иммунологический ответ у доноров-добровольцев, иммунизированных вакциной псевдомонас // Журн. микробиол. 1991. № 11. С. 39-41

85. Пат. 1410527 С СССР, С12Р1/04. Способ получения экзотоксина А синегнойной палочки // Н.А. Михайлова, Т.Н. Кузнецова, Ф.А. Шаймухаметов, А.Ф. Мороз, И.А. Баснакьян. - Заявл. 10.09.86; Опубл. 09.06.95 // БИПМ. - 1995.

86. Пат. 1481962 С СССР, А61К35/74. Способ обезвреживания очищенного экзотоксина А синегнойной палочки // Н.А. Михайлова, Ф.А. Шаймухаметов, Т.Н. Кузнецова, А.Ф. Мороз. - Заявл. 15.07.87; Опубл. 09.06.95 // БИПМ. - 1995.

87. Ianishevskaia M.N., Kuz'mina N.S., Golshmid V.K. Pseudomonas aeruginosa exotoxin // Zh Mikrobiol Epidemiol Immunobiol. 1982. Vol.10. P. 33-37.

88. Vaneeva N.P., Ianishevskaia M.N., Aleksandrova T.N., Ianshina N.L. The determination of specific Pseudomonas aeruginosa antitoxins in commercial preparations of human immunoglobulin // Zh Mikrobiol Epidemiol Immunobiol. 1995. Vol.1. P. 59-61.

89. Kohler G., Milstein С. // Nature. 1975. Vol.56. 495 p.

90. Kronborg G., Pressler Т., Fomsgoard A., Koch C., Hoiby N. Specific IgG2 antibodies to Pseudomonas aeruginosa lipid A and lipopolysacharide are early markers of chronic infection in patients with cystic fibrosis// Infection. 1993. Vol.21 (5). P. 297-302.

91. Hancock R.E., Mutharia L.M. Monoclonal antibodies against bacterial outer membrane antigens. // Advances in experimental medicine and biology. 1985. Vol.185. P. 215-22.

92. Sokol P.A., Woods D.E. Monoclonal antibodies to Pseudomonas aeruginosa fer-ripyochelin-binding protein// Inf. Immun. 1986. Vol.53 (3). P. 621-627.

93. Gaston M.A., Yale A., McDougall J., Pitt T.L. Monoclonal antibidies against Pseudomonas aeruginosa II J. Med. Microbiol. 1985. Vol.20 (3). P. 6-7.

94. George A.J., Urch C.E. Diagnostic and Therapeutic Antibodies // Methods. 2000.

95. Ломтатидзе М.В. Получение, характеристика и применение моноклональных антител к антигенам синегнойной палочки // канд. дис. 2004.

96. Pfaller M., Barrett M., Koontz F.P., Wenzel R.P., Cunningham M.D., Rollins N., Darveau R.P. Clinical evaluation of a direct fluorescent monoclonal antibody test for detection of Pseudomonas aeruginosa in blood cultures. // Journal of clinical microbiology. 1989. Vol.3 (27). P. 558-60.

97. Chia J., Pollak M., Avigan D., Steinbch S. Functionally distinct monoclonal antibodies reactive with enzymatically active and binding domains of Pseudomonas aeruginosa Toxin A // INFECTION AND IMMUNITY. 1986, Vol.52 (3). P. 756-762

98. Elzaim H.S., Chopra A.K., Peterson J.W., Vasil M.L., Higgers J.P. Protection against Exotoxin A (ETA) and Pseudomonas aeruginosa infection in mice with ETA-specific antipeptide antibodies. // Infect Immun. 1998. Vol.66 (11). P. 5551- 5554.

99. Galloway D.R., Hedstrom R.C., Pavlovskis O.R. Production and characterization of monoclonal antibodies to exotoxin A from Pseudomonas aeruginosa // INFECTION AND IMMUNITY. 1984. Vol. 44 (2). P. 262-267.

100. Ohtsuka H., Horigome K., Higuchi A et al. Binding of monoclonal antibody specific for domain Ia/II of Pseudomonas aeruginosa exotoxin A at pH 4 strongly neutralize exotoxin A-induced cytotoxicity in cell culture and in vivo // INFECrION AND IMMUNITY. 1992. Vol.60 (3). P. 1061-1068.

101. Shang H., Yeh M., Lin C., Hwang J. Characterization of monoclonal antibody B7, which neutralizes the cytotoxicity of Pseudomonas aeruginosa exotoxin A // Clinical and diagnostic laboratory immunology. 1996. Vol.3 (6). P. 727-732.

102. Пат. RU 2529359 Российская Федерация, МПК-8 C12N1/21, C12N15/09, C12N15/31, C12P21/00. Рекомбинантная плазмидная днк ppa-oprf-eta, кодирующая синтез рекомбинантного белка oprf-eta pseudomonas aeruginosa, штамм escherichia coli pa-oprfeta - продуцент рекомбинантного белка oprf-eta pseudomonas aeruginosa и способ получения рекомбинантного белка oprf-eta pseudomonas aeruginosa / Калошин А. А., Солдатенкова А. В. Михайлова Н. А.; заявитель и патентообладатель ФГБУ "НИИВС им. И.И. Мечникова" РАМН - № 2012139928/10; Заявл. 19.09.2012; Опубл. 27.09.2014 Бюл. № 27

Размещено на Allbest.ru