Методика восстановления динитроароматических соединений и токсикологическая оценка их производных

3. Экспериментальная часть

3.1 Методика проведения селективного восстановления динитроароматических соединений под действием ультразвука

Схема №1.Селективное восстановление динитросоединений, минуя стадию экстракции

В синтезе использовался восстанавливающий агент: свежеприготовленный раствор сульфат железа(2). Для того, что бы его приготовить, потребовалась железная пыль, которая помещалась в 20% раствор серной кислоты до полного растворения.

Примеси отфильтровывались бумажным фильтром.

Теоретически, для того, что бы восстановить одну нитрогруппу в динитроароматическом соединении, по количеству ионов железа рассчитывалась необходимая масса навески динитротолуола и других полинитросоединений(известно, что на восстановление одной нитрогруппы требуется 6 моль ионов железа).



Рис. 1. Процесс восстановление нитросоединений до аминоароматических продуктов

Рассчитанную навеску растворяли в изобутиловом спирте, слегка подогревая смесь над электроплиткой, и доводили до полного растворения ди- и полинитросоединения.

После того, полученный раствор сульфат железа(II), не дожидаясь его окисления на воздухе, что могло привести к потере восстановительных свойств этого агента, поместили в ультразвуковую мойку. Туда же прилили изобутиловый спирт, содержащий ароматическое соединение.

Из схемы №1 видно, что водный раствор и изобутиловый спирт не смешиваются, и образуется бинарная система.

Режим ультразвуковой мойки был установлен на продолжительность синтеза в течение 10 минут, температура процесса составляла 40^оС.

В процессе воздействия ультразвуком, бинарная система перешла в гомофазную, что обеспечило наибольшее соприкосновение реагентов в искомых двух не смешивающихся растворов.

Рис. 5. Реактор - после окончания реакции происходит расслоение на 2 фазы

После процедуры с ультразвуком, полученную смесь поместили в экстракционную колбу. В экстракционной колбе смесь разделилась на две фракции: водную, содержащую в себе неорганическую часть, и органическую. В этой фракции, т.е. в изобутиловом спирте(плотность меньше 1 (0,8027 (20°C, г/см3)), следовательно вода внизу), содержался продукт реакции.

С целью выделения органических компонентов из полученную реакционную смесь подщелачивали аммиаком до рН=6,5-7,5. Полученную массу экстрагировали хлороформом 5-8 раз (объём хлороформа равен объёму смеси). В дальнейшем хлороформ отгоняли под вакуумом досуха.

Смесь после сушки под вакуумом анализировали методами ГЖХ и ЯМР 1Н - спектроскопии. ИК - спектры записывали на приборе SPECORD М-80. Анализ веществ проводили в растворе СНCl₃ при спектральной ширине щели прибора 1,5 см-1, времени интегрирования 5 с. Применялись кюветы толщиной 0,1 - 0,2 мм с окошками из NaCl.

ЯМР 1Н спектры записывали на спектрометре Bruker DRX (500.13 МГц) в ДМСО, с ТМС в качестве внутреннего стандарта при комнатной температуре.

Элементный состав определяли на элементном анализаторе СHN-1.

3.2 Эксперимент на Ceriodaphnia affinis. Цериодафнии как тест-объект для токсикологических исследований

Ветвистоусые рачки родов Daphnia и Ceriodaphnia широко распространены в водоемах, поэтому легко доступны для исследования. Они имеют небольшие размеры, не требовательны, высоко плодовиты и имеют короткий цикл развития. Тело их заключено в прозрачную камеру (карапакс), благодаря чему есть возможность на живых экземплярах наблюдать процесс созревания яиц в гонадах, прохождение пищи по пищеварительному тракту, дыхательные движения, ритм сердцебиения. Эти показатели являются весьма важными при постановке токсикологических опытов для оценки степени токсичности и механизма действия веществ [23]. Кроме того, их использование в качестве тест-организмов для биотестирования рекомендовано для государственного экологического контроля [20].

Рачки вида Ceriodaphnia affinis обитают в пресноводных водоемах Европы, Северной Америки, Азии, Северной Африки. Этот вид относится к олиго- и бетамезосапробам и населяет водоемы с замедленным течением (неглубокие озера, реки, водохранилища).

Цериодафнии имеют сравнительно мелкие размеры (половозрелые самки - 1,5 мм, самцы - 0,8 мм), что позволяет в опытах манипулировать с меньшими объемами воды и более компактными емкостями. Биологический цикл развития от рождения до половозрелости у цериодафний короток при оптимальных условиях развития. Так, при температуре 25^oС созревание наступает на 2-3-и сутки от рождения, время первого помета - на 3-4-е сутки, а за срок 7-8 суток у рачков получают 3 помета.

При температуре 18^oС сроки получения трех пометов у рачков могут растянуться до 28 суток. Численность молоди у рачков в первом помете невелика - по 2-6 особей, а начиная со второго помета - от 6 до 20 особей на самку. Этот вид цериодафний моно- или дицикличен. Максимум полового периода размножения приходится на август-сентябрь. В лабораторных условиях самцы появляются при недостаточном освещении, снижении температуры, концентрации растворенного кислорода, голодании.

По отношению к кислородному фактору цериодафния довольно чувствительна, ее нормальное развитие протекает при концентрации растворенного кислорода в воде не ниже 5 мг ?₂/л. Вследствие этого цериодафнии чувствительны к органическому загрязнению веществами, снижающими концентрацию растворенного кислорода в среде.

Исследуя биологическое действие химических соединений, токсикологи регистрируют изменение выживаемости и плодовитости (основные показатели), длину тела цериодафний, используют биохимические и биофизические показатели; иногда встречаются данные об изменении морфологических признаков.

3.2.1 Методика проведения острого опыта на Ceriodaphnia affinis

В помещении, где содержатся цериодафнии, недопустима обработка химическими веществами с целью уничтожения насекомых, грызунов и др.

Лабораторную культуру Ceriodaphnia affinis ведут на природной воде из водоема либо на водопроводной воде, отстоянной не менее семи суток и желательно дехлорированную путем аэрации. Вода должна удовлетворять следующим требованиям:

1) рН - 7,8-8,2;

2) общая жесткость - 1,3-2,0 мг-экв/л;

3) содержание растворенного кислорода - 5,0-7,0 мг О₂/л.

Рачков лучше всего культивировать в стаканах емкостью 0,5-1 литр, с плотностью посадки не более одной особи на 20 мл объема. При этом удается более объективно оценивать качество культуры, ее пригодность для токсикологических исследований, а также дает возможность вести клональные культуры. С целью адаптации рачков к условиям лаборатории их помещают в смешанную воду: 1 часть среды, в которой рачки жили ранее, и 3 части лабораторной воды. Культуральная среда обновляется полностью один раз в неделю.

В качестве корма для цериодафний используют зеленые протококковые водоросли (Chlorella vulgaris) и пекарские дрожжи. Водоросли вносят в концентрации 250-500 тыс. кл/мл ежедневно (2 мл суспензии на 1 л воды). Дрожжи дают не чаще одного раза в неделю (1-2 мл 1%-ного раствора на 1 л), желательно перед сменой раствора.

Культуру цериодафний выращивают в климатостате, люминостате или бюксе при оптимальных условиях содержания: температуре (25±1)^oС, освещенности 400-600 лк, продолжительности светового дня 10-12 ч.

При культивировании цериодафний удобно содержать рачков двух поколений - материнского (размножающиеся особи) и подрастающей молоди. Продолжительность использования маточных культур ограничивается 15-20 сутками. Отмечается каждое родившееся в лабораторных условиях поколение, и ставится дата рождения.

Для токсикологических исследований используют цериодафний, начиная с третьего поколения. Рачков в возрасте (4±2) ч исследуют на устойчивость к стандартному токсиканту - бихромату калия в остром опыте. Величина LC₅₀ бихромата калия за 24 часа находится в интервале 1,0-2,2 мг/л.

В дальнейшем эксперименты с бихроматом калия ставят одновременно с постановкой основного острого опыта с каждым веществом [54, 55, 57].

Перед основными острыми опытами проводят предварительные опыты для установления диапазона концентраций исследуемых веществ, которые вызывают иммобилизацию или гибель рачков в интервале 10-90 %. В предварительном остром опыте обычно используют по 5 концентраций для каждого вещества, различающихся в 10 раз: 100; 10; 1; 0,1; 0,01 мг/л. Длительность опыта 24 или 48 часов. Из концентраций, используемых в предварительных опытах, отбрасывают концентрации, которые вызывают гибель 0 или 100 % рачков. Оставшийся диапазон концентраций (в котором находится искомая летальная концентрация, вызывающая гибель 50 % рачков) используется для основного острого опыта.

Продолжительность основного острого опыта для данного объекта исследования составляет 48 часов. Основным биологическим показателем служит выживаемость гидробионтов (процент гибели). Острый опыт проводится с набором из пяти концентраций исследуемого вещества, входящих в диапазон, установленный в предварительных испытаниях. Растворы веществ для опытов готовятся с учетом их растворимости.

Для опытов используют химические стаканы объемом 250 мл, куда наливают по 50 мл раствора токсиканта и вносят от 5 до 10 рачков Ceriodaphnia affinis в возрасте (6±2) ч. Для статистической достоверности используют не менее трех повторностей для каждой концентрации. Параллельно ставят контрольные опыты с отстоянной водой и водой с растворителем, использовавшимся для растворения исследуемых веществ в концентрациях, соответствующих разведениям в опытах. Повторность контролей соответствует повторности в опытах. Если в контроле наблюдается значительная гибель организмов, опыт бракуется и должен быть повторен.

Условия проведения опытов те же, что и при разведении культуры цериодафний, но в ходе острых опытов рачков не кормят, а смену раствора проводят ежедневно.

Наблюдения за выживаемостью проводят непрерывно в течение первого часа воздействия раствора, через каждые 15 минут в продолжение второго часа, затем ежечасно до конца первого дня наблюдений, на следующий день - 2-3 раза в сутки[54, 55].

3.2.2 Обработка и оценка результатов эксперимента на Ceriodaphnia affinis

Для определения наличия острого действия растворов исследуемых веществ на цериодафний рассчитывают летальность (L, %) рачков для каждой концентрации и находят медиальную летальную концентрацию.

Летальность (L, %) рассчитывается по формуле:

где X_K - число выживших особей в контроле, шт.; X_о - число выживших особей в тестируемой воде, шт.

В случае гибели дафний в контроле от 5 до 20 %, вносят поправку в результаты по формуле Аббота:

Результаты всех повторностей суммируются, и определяется средняя смертность организмов в данной концентрации токсиканта. По ней рассчитываются величины LC₅₀ за 48 часов и определяются действующие концентрации веществ по наличию статистически достоверного снижения величины выживаемости цериодафний в опыте по сравнению с контролем.

Достоверность полученных результатов считается надежной, если удовлетворены следующие условия:

1) гибель контрольных цериодафний не превышает 10 %;

2) LC₅₀ бихромата калия за 24 часа для цериодафний в возрасте (6±2) часов находится в интервале 1,0-2,2 мг/л;

3) содержание растворенного кислорода в исследуемых растворах, определенное в конце опыта, не ниже 5,0 мг О₂/л [54, 55, 57].

Медиальная летальная концентрация (LC₅₀) определяется с помощью графического метода. Он основан на определении LC₅₀ по кривой летальности или характеристической кривой, отражающей распределение индивидуальной устойчивости животных к исследуемому токсическому агенту.

Характеристическая кривая строится путем нанесения концентраций или логарифмов концентраций по оси абсцисс, а процента летальности - по оси ординат. В полуграфическом виде эта зависимость близка к прямой. От точки на оси ординат, соответствующей 50 % смертности, проводится линия, параллельная оси абсцисс. Из точки пересечения этой линии с опытной прямой опускают перпендикуляр на ось абсцисс. Полученная концентрация разбавления С_х и будет соответствовать искомой величине LC₅₀. Медиальную летальную концентрацию можно найти, решив уравнение, описывающее характеристическую кривую. Чем больше LC₅₀, тем токсичнее тестируемое вещество.

Зависимость между концентрацией и эффектом (в данном случае процентом гибели животных) при графическом изображении должна иметь вид S-образной кривой. При логарифмировании концентраций кривые становятся более симметричными [56].

3.3 Эксперимент на смешанной культуре Chlorella vulgaris и Scenedesmus quadricauda

3.3.1 Методика проведения острого опыта на смешанной культуре Chlorella vulgaris и Scenedesmus quadricauda

Методика основана на регистрации снижения темпов роста (снижение численности) клеток водорослей Chlorella vulgaris и Scenedesmus quadricauda под воздействием токсических веществ, присутствующих в тестируемой воде (опыт), по сравнению с контрольной культурой в пробах, не содержащих токсических веществ (контроль).

Критерием острой токсичности является снижение численности клеток водорослей на 50 % и более, по сравнению с контролем в течение 96-часовой экспозиции.

В экспериментах по определению острой токсичности устанавливают:

1) ингибирующую концентрацию, вызывающую снижение численности клеток водорослей на 50 % и более, по сравнению с контролем за 96 часов экспозиции;

2) безвредную концентрацию, вызывающую снижение численности клеток водорослей не более чем на 20 %, по сравнению с контролем за 96 часов экспозиции.

Характеристики степени токсичности используемой воды приведены в таблице 13:

Таблица 13. Оценка токсичности воды.

Отклонение от контроля, %	Оценка
до 20	Нетоксичная
от 50 и более	Острая токсичность

Длительность эксперимента - 4 суток. Для эксперимента используются культуры, находящиеся в начальной фазе логарифмического роста (через 3-5 суток после перенесения в новую культуральную среду). Начальная плотность водорослей в контроле и опыте - в пределах 20-50 тыс. кл/мл.

Опыты ставятся в трех повторностях. Для учета возможного эффекта растворителя на водоросли ставится второй контроль, в который добавляются эквивалентные количества растворителя. Общий объем жидкости в колбах составляет 40 мл, из них 12 мл - питательная среда Успенского №1 (KNO₃ - 0,025 г/л, MgSO₄ - 0,025 г/л, Ca(NO₃)₂ - 0,1 г/л, KH₂PO₄ - 0,025 г/л, K₂CO₃ - 0,0345 г/л); 8 мл - суспензия водорослей. Обязательное условие для постановки опыта - добавление питательной среды из такого расчета, чтобы через 4-5 суток численность водорослей возросла, по крайней мере, в 2 раза.

Питательную среду стерилизуют в автоклаве (0,5 ч при 1 атм.) или сухим жаром (1 ч при 18^oС), а при отсутствии автоклава - кипячением на медленном огне на водяной бане.

Водоросли выращивают в стерильных колбах емкостью 0,25-0,5 л, закрытых ватно-марлевыми пробками, которые сверху прикрываются колпачками из стерильной пергаментной бумаги или полиэтиленовой пробкой. Для предотвращения оседания клеток на дно и их прикрепления к стенкам, а также для лучшего растворения углекислого газа, содержимое колб не менее двух раз в сутки перемешивают, избегая намокания пробок.

Оптимальный режим предусматривает культивирование водорослей при температуре (20±2)^oC в люминостате при естественном освещении и досвечивании в течение 12 часов в сутки лампами дневного света с общей освещенностью 3-5 тыс. лк. Повышение температуры до 25^oС и выше усиливает действие токсиканта, поэтому культивировать водоросли и проводить опыты следует в термостатируемых установках. Колбы с водорослями размещают в люминостате так, чтобы освещение было равномерным снизу или сверху при удалении источника от колб на 30-40 см во избежание их перегрева.

При отсутствии термостатируемых условий опыты могут проводиться с размещением колб на окне при естественном освещении, но с защитой от прямых солнечных лучей.

Соответствующие наблюдения и анализы проводят ежедневно в течение четырех дней после постановки эксперимента. Оценивают число живых клеток в камере Горяева. При работе с ней просчитывают число клеток в 25 больших квадратах, а затем проводят пересчет на 1 см³ по формуле: х=m*10⁴, где х - общее количество клеток в 1 см³; m - количество клеток в 25 больших квадратах. Для определения живых и мертвых клеток используют краситель - метиленовую синь и нейтральный красный. К 1 мл суспензии водорослей добавляют 1 мл метиленовой сини и нейтрального красного в разведении 1:5000. Растворы красителей и суспензии водорослей тщательно перемешивают и через 20 минут микроскопируют. При смешении двух красок мертвые клетки окрашиваются в фиолетовый цвет. Живые клетки имеют зеленую окраску.

3.3.2 Обработка и оценка результатов эксперимента на Chlorella vulgaris и Scenedesmus quadricauda

При определении острого токсического действия для каждой концентрации по результатам трех параллельных определений вычисляют среднее значение выживаемости по формуле:

где Х - среднее значение выживаемости, Х_i - значение выживаемости в i-том параллельном определении, n - количество параллельных определений.

Рассчитывают относительное (в %) изменение уровня численности клеток водорослей для каждой концентрации по сравнению с контролем (L):

где Х_K - среднее значение выживаемости в контроле,

Х_o - среднее значение выживаемости в опыте.

Стимуляция (противоположная угнетению реакция тест-объектов на воздействие токсикантов) до уровня 30 %, по сравнению с контролем, считается как нетоксичное действие испытуемой воды на тест-объект. При стимуляции более 30 % вода признается токсичной, если в хроническом опыте на дафниях и цериодафниях выявляется увеличение плодовитости рачков более чем на 30 % в тестируемой воде, по сравнению с контролем [54].

3.4 Статистическая обработка результатов

Статистическую обработку результатов можно проводить с использованием различных критериев достоверности. Широко используется в практике t-критерий Стьюдента. Применение его возможно только в том случае, если при некоторых строго определенных условиях распределение величины известно, т.е. является нормальным. Для проверки гипотезы о нормальном распределении величины используют критерий Фишера, который и позволяет оценить равенство дисперсий. Если дисперсии равны, то распределение является нормальным и использование t-критерия Стьюдента возможно. В этом случае расчет производится по формулам для малых выборок [59-61].

Вычисляют среднее значение (Х) для каждой величины по формуле:

где X_i - значение каждой величины; n - количество проанализированных вариантов.

Затем определяют отклонение каждого варианта от средней величины (D):

Среднее квадратичное отклонение (?) вычисляют по формуле:



где D - отклонение каждой величины от средней; n - количество проанализированных вариантов.

Ошибку среднего (m) вычисляют по формуле:

где s - среднее квадратичное отклонение; n - количество проанализированных вариантов.

Для выявления достоверности различий в показателях токсичности между опытным и контрольным вариантами рассчитывают t-критерий Стьюдента:

где m_о - ошибка среднего в опытном варианте; m_K - ошибка среднего в контрольном варианте; Х_о - среднее значение опытного варианта; X_K - среднее значение контрольного варианта.

Его сравнивают с табличным td (соответствующим заданному уровню значимости и степени свободы). Если рассчитанная величина t-критерия Стьюдента больше или равна табличному значению критерия, то различия между величинами показателя в контрольной и тестируемой воде достоверны, и тестируемая вода оказывает острое токсическое действие на гидробионтов [58, 59, 62].

Выводы

В результате данной работы была предложена методика восстановления нитро- и динитроаренов солями металлов переменной степени окисления под действием ультразвука.

1) В качестве восстанавливающего агента был выбран сульфат железа (II) не растворимый в органической фракции (в изобутиловом спирте), а также обеспечивший наиболее высокий выход продуктов. По сравнению с другими металлами переменной степени окисления - хлоридом олова (II) и хлоридом титана (III), сульфат железа (II) обладает более выраженной региональной селективностью.

2) Установлено, что более реакционно-способной в реакции моновосстановления хлоридом железа(II) является орто-нитрогруппа.

3) Для анализа полученных продуктов реакций восстановления мы использовали газожидкостную хроматографию. Этот метод позволил проанализировать состав смеси продуктов синтеза без их предварительного разделения.

4) Проведено исследование токсичности производных динитрохлорбензола на двух тест-объектах Ceriodaphnia affinis и смешанной культуре Chlorella vulgaris и Scenedesmus quadricauda, рассчитаны LC₅₀.

5) Установлено, что с увеличением количества нитрогрупп увеличивается токсичность веществ как для цериодафний, так и для смешанной культуры Chlorella vulgaris и Scenedesmus quadricauda

6) Нитрогруппа, расположенная в п-положении обладает большей реакционной способностью, чем в м-положении. Этим можно объяснить, что у молекулы 2-хлор,5-нитроанилин токсичный эффект более ярко выражен, по сравнению с другими аминами.

7) Выявлено, что с увеличением коэффициента липофильности для производных 2,4-динитрохлорбензола, токсичность возрастает и совпадает с двумя тест объектами.

Литература

1. Н.Н. Ворожцов // Основы синтеза промежуточных продуктов и красителей, Госхимиздат, 1955.

2. Б.М. Богословский, Н.Г. Лаптев // Химия красителей. Изд. научи.-тех. лит. РСФСР, 1960.

3. Н.А. Преображенский, Э.И. Генкин // Химия органических лекарственных веществ, Госхимиздат, 1953.

4. Инф. бюлл. о зарубежн. хим. пром., НИИТЭхим, № 14, 5 (1962).

5. D. Вгaun, Kunststoffe, 50, 375 (1960).

6. Матвеев Л.Г. Улучшенный способ получения 2-амино-4-нитрофенола. // М.: Хим. промышленность.- 1984.- N3.- с.143-144.

7. Пат. 2916815 ФРГ // 1980.

8. Фирц-Давид Г.Э., Бланже Л. Основные процессы синтеза красителей.- М.:

ИЛ.- 1957.- 382 с.

9. M. Hoyo, V. Takagi, Y. Ogata // J.Am. Chem.Soc.- 1960.- v.82, № 10.- p.2459-

2462.

10. Hurashima Tsucnaki, Manabe Osamu. // Chem.Zelt.-1975.- v.3.- p.259-260.

11. Terpko M.O., Heck R.F. // J.Org.Chem.- 1980.- v.45, № 24.- p.4992-4993.

12. Пат. 215912 ГДР // 1981.

13. J.L. Miesel, G.O.P. O'Doherty, and J.M. Owen. Catalysis in Organic Synthesis.- Academic Press, New York, 1976.

14. Molga E.J., Westerterp K.R. // Chem.End.Sci.- 1992.- v.47, № 7.- p.1733-1749.

15. Davey C.L., Powell L.W., Turner N.Y., Wells A. // Tetrahedron Lett.-1994.- 35. № 42.- С. 7867

16. Пат. 215912 ГДР // 1981.

17. А.с. 578303 СССР // 1978.

18. Chemikal Analit.- 1964.- vol.46, № 12, р. 601-606.

19. Пат.289454 Германия // 1912.

20. Robert E. // Ber.- 1927.- Bd.66.- s.173.

21. Vojiz W. // Chem. prium.- 1981.- vol.31,N 2.- s.74-75.

22. Houben-Weyl. Methoden der organischen Chemie. Stuttgart: G. Thieme Verlag.- 1957 - Bd.11/1.- p.474-490

23. Blanksma J.J., Broek W.S., Halgen D. // Rec.trav. Chim.Bas.- 65, 1946.- p.329.

24. Claus A., Stiebel B. // Ber.- 1887.- Bd.20.- s.1379-1382.

25. Копейкин В.В., Копейкин В.А., Миронов Г.С. и др.// Основной органический синтез и нефтехимия: Межвуз. сб. научн. тр.-Ярославль, ЯПИ, 1983.-в.19.-С. 65-68

26. Копейкин В.А. Селективное электрохимическое восстановление ароматических нитронитрилов.- Дис. ... канд. хим. наук.- Москва, 1985.- 158 с.

27. Бегунов Р.С., Орлов В.Ю., Копейкин В.В. и др. // Изв. вузов. Химия и хим. технология. -1998.- т. 41, в. 5.- С. 9-11.

28. Орлов В.Ю., Бегунов Р.С., Орлова Т.Н., Копейкин В.В. // Изв. вузов. Химия и хим. технология. -1998.- т. 41, в. 6.- С. 79-83.

А.с. 1558892 СССР. //Б.И.- 1990.- № 15.

29. Leibzon V.N., Michalchenko L.V., Leonova M.Yu., and Gultyai V.P., Absrs Electrochemical Society 197^th Meeting (Toronto, May 14-18, 2000), Toronto, 2000, 1, Abstract No. 1069.

30. Leibzon V.N., Michalchenko L.V., Leonova M.Yu., and Gultyai V.P., in New Directions in Organic Electrochemistry, Y. Matsumura, The Electrochemical Society, Inc., Pennington, USA, 2000, 15, 60.

31. Билькис И.И., Гойдин В.В., Усков С.И., Штейнгардц В.Д., Журн. орган. химии, 1991, 27, 24.

32. Билькис И.И., Усков С.И., Штейнгарц В.Д., Изв. Сиб. Отд. АН СССР, 1987, 3, 111.

33. S.E. Barrows, C.J. Cramer, D.G. Truhlar, M.S Elovit, and E.J. Weber, Envirion. Sci. Technol., 1996, 30, 3028.

34. В.Н Лейбзон, Л.В Михальченко, М.Ю. Леонова, В.П Гультяй Изменение региоселективности моновосстановления 2,4,6 - тринитротолуола ионами титана (111) и ванадия (11) в присутствии солей железа(11) и меди (11). / Изв. Академии наук. Сер. Хим. 2005, № 5, с. 1172-1176

35. Brand K., Eisenmenger T. // J. Pract. Chemie.- 1913.- 87.- s.487-507.

36. Иванов В.И. Электрохимическое восстановление динитропроизводных бензола.- Дис. ... канд. хим. наук.- Москва, 1988.

37. Лисицин Ю.А. Электросинтез ароматических аминов.- Дис. ... канд. хим. наук.- Казань, 1991.- 167 с.

38. Davey C.L., Powell L.W., Turner N.Y., Wells A. // Tetrahedron Lett.-1994.- 35. № 42.- С. 7867.

39. Реакция гидробионтов на загрязнения / Под. ред. Строганова Н.С. - М.: Наука, 1983. - 177 с.

40. Основы промышленной токсикологии / Под. ред. Толоконцева Н.А. - С.-П.: Медицина, 1978.-303 с.

41. Биологические аспекты охраны и рационального использования окружающей среды: Сб. науч. Тр./ Днепропетровск, 1977.

42. Вопросы охраны природы и рационального использования природных ресурсов / Под. ред. Жекулина В.С.- С.-П., 1978.

43.Химическая энциклопедия. Научное издательство: «Большая Российская энциклопедия». 1995. Т. 4. с. 13.

44. Евгеньев М.И. Тест-методы и экология / М.И. Евгеньев // Соросовский образовательный журнал. - 1999. - №11. - С. 29 - 34.

45. Брагинский Л.П. Методологические аспекты токсикологического биотестирования на Daphnia magna и других ветвистоусых ракообразных / Л.П.Брагинский // Гидробиологический журнал. - 2000.- №5. - с.50 - 57.

46. Розанцев Э.Г. Биотестирование, или биологическая оценка безопасности / Э.Г. Розанцев, Е.Г. Черемных // Экология и промышленность России. - 2003. - № 10. - С.44-46.

47. Биологический контроль окружающей среды: биоиндикация и биотестирование: учеб.пособие для студ.высш.учеб. заведений / О.П. Мелеховой, Е.И. Егоровой, Т.И. Евстегнеева и др.; под ред. О.П. Мелеховой, Е.И. Егоровой. - М.: Издательский центр «Академия», 2007. - 288 с.

48. Реакция гидробионтов на загрязненияю / Под. ред. Строганова Н.С. - М.: Наука, 1983. - 177 с

49. Моделирование и контроль качества вод: сб. науч.тр. - Харьков, 1988. - 167 с.

50. Филенко О.Ф., Соколова С.А. // Методические рекомендации по установлению эколого-рыбохозяйственных нормативов (ПДК и ОБУВ) загрязняющих веществ для воды водных объектов, имеющих рыбохозяйственное значение. М.: ВНИРО, 1998. С. 33-69.

51. Муравьева С.И. Руководство по контролю вредных веществ в воздухе рабочей зоны: справ. Издание / С.И.Муравьева, М.И. Буковский, Е.К. Прохорова. - М.: Химия, 1991. - 368 С.

52. Филенко О.Ф., Соколова С.А. // Методические рекомендации по установлению эколого-рыбохозяйственных нормативов (ПДК и ОБУВ) загрязняющих веществ для воды водных объектов, имеющих рыбохозяйственное значение. М.: ВНИРО, 1998. С. 33-69.

53. http://abc.vvsu.ru/Books/ecolog_tocsicolog/page0005.asp

54. Филенко О.Ф. Методические рекомендации по установлению эколого-рыбохозяйственных нормативов (ПДК и ОБУВ) загрязняющих веществ для воды водных объектов, имеющих рыбохозяйственное значение / О. Ф. Филенко, С. А. Соколова. -- М.: ВНИРО, 1998. -- С. 33-69.

55. РД 118-02-90. Методическое руководство по биотестированию воды. -- М.,1991.--64 с.

56. Строганов Н.С. Методики биологических исследований по водной токсикологии. -- М.: Наука, 1971. С. 187-19

57. Лебедев Г.Д. Определение токсичности пресных вод в отношении некоторых гидробионтов // Вопросы водной токсикологии. -- М.: Наука, 1970. -- С. 90-250.

58. Гмурман В.Е. Теория вероятностей и математическая статистика. -- М.: Высш. шк., 1998. -- 479 с.

59. Копанев В.А. Метод вероятностной оценки токсического эффекта / В.А. Копанев, Э.Х. Гинзбург, В.Н. Семенова. -- Новосибирск: Наука, 1988. -- 128 с.

60. Травень В.Ф. Электронная структура и свойства органических молекул. -- М.: Наука, 1989. -- 389 с.

61. Сигал Дж. Полуэмпирические методы расчета электронной структуры. --М.: Мир, 1980. -- 328 с.

62. Гордон А. Спутник химика / А. Гордон, Р. Форд. -- М.: Мир, 1976. -- 381 с.

63. Химическая энциклопедия. Научное издательство: «Большая Российская энциклопедия». 1995. Т. 4. с. 13.

64. Силаев А.А., Походзей Ю.И., Карамышева А.В. Токсичность ряда производных ароматических аминов // Мед. Труда и пром. Экол. 1996, №10, С. 36- 40

65. Зависимость структура - токсичность для некоторых производных анилина / Е.В. Браузе, А.С. Кабанкин, Т.С. Чувирова // тез. докл. междунар. конф. Пермь, 1993. С. 315-316.

66. Чекалин М.А., Пассет Б.В., Иоффе Б.А., Технология органических красителей и промежуточных продуктов, Л., 1972.

67. Пат. 2094429 Россия // РЖХ. - 1998. - 10 Н153П.

68. Заявка 4437551 ФРГ // РЖХ. - 1998. - 8 Н129П.

69. Kalkote U.R., Lugade A.J., Nikzad P.V. et al.// Bull.Chem.Soc.Jpn.- 1983.- v.56, № 10.- p.3159-3164.

70. Pitze D., Dozzezotti E. // Chemia.-1965.- v.19, № 18.- p.462.

71. Hurashima Tsucnaki, Manabe Osamu. // Chem.Zelt.-1975.- v.3.- p.259-260.

72. Ignacrak W., Kaminski W., Paryjczak T. // Przem.chem.- 1983.- 62.- № 4.- p.213-215.

73. Kalkote U.R., Lugade A.J., Nikzad P.V. et al.// Bull.Chem.Soc.Jpn.- 1983.- v.56, № 10.- p.3159-3164.

74. J.L. Miesel, G.O.P. O'Doherty, and J.M.Owen. Catalysis in Organic Synthesis.- Academic Press, New York, 1976

75. Molga E.J., Westerterp K.R. // Chem.End.Sci.- 1992.- v.47, № 7.- p.1733-1749.

76. Жукинский В.Н. Критерии комплексной оценки качества поверхностных вод / В.Н. Жукинский, О.П. Оксилюк, Г.Н. Одейник, С.И. Кошелова. -- М.: Наука, 1980. -- С. 57-63

77. РД 118-02-90. Методическое руководство по биотестированию воды. -- М., 1991. -- 64 с.

78. Починок А.П. Энциклопедия по безопасности и гигиене труда Т4 - М.,: 2001 - 106-115 с.

81. Нейланд О.Я. Органическая химия. М.: Высшая школа, 1990 - 345 с

82. Государственная фармакопея СССР,.М.,: выпуск 2, 1976 -20 с.

83. Новый справочник «клиника и технология»// радиоктивные вещества, вредные вещества, гигиенические нормативы. -- М.: Наука, 1985. -- С. 11-16

84. Ultrasound. Its chemical, physical and biological effects, ed. by K. S. Suslik, N. Y., 1988; Mason T. Y., Lo rimer Ph. J., Sonochemistty: theory, application and uses of ultraso und in chemistry,N. Y., 1988;

85. Флеров Б.А. Биотестирование: терминология, задачи, перспективы. // Теоретические вопросы биотестирования. -- Волгоград, 1983. -- С. 153-158.

86. Гмурман В.Е. Теория вероятностей и математическая статистика. -- М.: Высш. шк., 1998. -- 479 с.

Приложение

Схема №1.Селективное восстановление динитросоединений, минуя стадию экстракции

Схема №2.Восстановление нитросоединений.



Рис.1.Схема проведения селективного восстановления динитроарен.

Рис.5.Реактор - после окончания реакции происходит расслоение на 2 фазы

Размещено на Allbest.ru