Размещено на http://www.allbest.ru/

Федеральное государственное образовательное учреждение

высшего профессионального образования

Алтайский государственный аграрный университет

Факультет ветеринарной медицины

Кафедра микробиологии, эпизоотологии, паразитологии и ветеринарно-санитарной экспертизы

Курсовая работа

Производственный ветсанконтроль, ветсанитария, ветсанэкспертиза и профилактика сибирской язвы при производстве, переработке и реализации продукции животного происхождения

Выполнила:

студентка 526 группы

Хрипкова А.А.

Проверил:

Борисенко Н.Е.

Барнаул 2015



Оглавление

Введение

1. Обзор литературы

1.1 Определение болезни

1.2 Характеристика возбудителя

1.3 Устойчивость

1.4 Эпизоотологические данные

1.5 Предубойная диагностика

1.6 Послеубойная диагностика

1.7 Лабораторная диагностика

1.7.1 Материал для исследования

1.7.2 Взятие материала от животных

1.7.3 Взятие материала из сырья животного происхождения

1.7.4 Порядок проведения исследования

1.7.5 Бактериоскопия

1.7.6 Посев на питательные среды

1.7.7 Биологический метод

1.7.8 Иммунно-серологические и аллергологические методы исследования

1.7.9 Идентификация культур

1.8 Дифференциальная диагностика

1.9 Ветеринарно-санитарная экспертиза туш и внутренних органов

1.10 Мероприятия при обнаружении сибирской язвы на мясоперерабатывающих предприятиях

1.11 Мероприятия по профилактике заболеваний животных и людей сибирской язвой

Заключение

Список литературы



Введение

Актуальность темы

Сибирская язва является особо опасным зооантропонозным заболеванием, встречающейся в настоящее время в виде спорадических случаев и редко в виде вспышек. Возбудитель сибирской язвы, активно распространяясь в абиотической среде, представляет потенциальную опасность для диких и сельскохозяйственных животных, а также человека.

Несмотря на значительное снижение в последние десятилетия экономического ущерба от этого инфекционного заболевания в результате проведения широкомасштабных профилактических мероприятий болезнь продолжает регистрироваться во многих странах мира, в различных регионах России и в частности в Алтайском крае. Проводимая специфическая профилактика лишь предупреждает заражение животных не исключая возможности возникновения болезни.

Цели исследования изучить:

- возбудителя заболевания;

- виды и методы его диагностики;

- правилами ветеринарно-санитарной экспертизы туши и внутренних органов при подозрении на сибирскую язву;

- мероприятия, проводимые при обнаружении сибирской язвы на мясоперерабатывающих предприятиях;

- мероприятия по профилактике заболевания.

Задачи исследования

Задача исследования - ознакомиться с научно-методической литературой по сибирской язве, санитарными и ветеринарными правилами диагностики и профилактики данного заболевания.



1. Обзор литературы

1.1 Определение болезни

Сибирская язва (Anthrax) -- зооантопонозное заболевание. К ней восприимчивы животные многих видов, особенно травоядные, и человек. Инфекционный процесс протекает преимущественно остро с явлениями септицемии или с образованием различной величины карбункулов. Болезнь регистрируют в виде спорадических случаев, возможны энзоотии н даже эпизоотии. Название болезни "сибирская язва" предложил в 1789 г. С.С. Андриевский, который изучал её на Урале и в Сибири. [1]

1.2 Характеристика возбудителя

Бацилла антракса - довольно крупная (1...1,3 х 3,0...10,0 мкм) палочка, неподвижная, образующая капсулу и спору.

Микроб встречается в трех формах: в виде различной величины вегетативных клеток (капсульных и бескапсульных), в виде спор, заключенных в хорошо выраженный зкзоспориум, и в виде изолированных спор.

В препаратах из крови и тканей больных или погибших от сибирской язвы животных бактерии, а в неокрашенном состоянии имеют форму гомогенных прозрачных палочек с четко закругленными концами.

Сибиреязвенная бацилла при неблагоприятных условиях существования обладает способностью формировать споры. В каждой вегетативной клетке, или спорангии, образуется только одна эндоспора, чаще располагающаяся центрально, реже субтерминально.

Споры бациллы антракса овальные, иногда округлые. Размеры зрелых спор колеблются в пределах 1,2-1,5 мкм н длину н 0,8-1 мкм в поперечнике, незрелые споры (проспоры) - несколько меньше. При температуре ниже 12⁰С и выше 42⁰С, а также в живом организме или невскрытом трупе, в крови и сыворотке крови животных споры не образуются. [2]

1.3 Устойчивость

Вегетативные формы микроба малоустойчивы к различным неблагоприятным факторам. В невскрытом разлагающемся трупе бациллы лизируются через 7 суток. При нагревании до 60⁰С они гибнут через 15 мин, при кипячении - мгновенно, под действием прямого солнечного спета - через несколько часов.

Быстро погибают при воздействии обычных дезинфицирующих средств. Бациллы сохраняются при - 10⁰С - до 24 дней, в замороженном мясе при 15⁰С - до 15 дней. Чрезвычайно устойчивы споры. Они не погибают в разлагающихся трупах, годами сохраняются в воде, десятками лет - в почве. Засолка и сушка мяса, кож способствуют сохранению спор. Сухой жар при 120-140⁰С убивает споры только через 2-3 ч, автоклавирование при 120⁰С - через 5-10 мин, кипячение - через 15-30 мин. 10% раствор едкого натра, 1% раствор формальдегида убивают споры после двухчасового воздействия; более эффективны хлорсодержащие препараты. [3]

1.4 Эпизоотологические данные

Наиболее восприимчивы к сибирской язве овцы, крупный рогатый скот, лошади, олени, верблюды, буйволы, менее восприимчивы -- свиньи. Поражаются также дикие животные. Собаки и кошки малочувствительны и заболевают только при заражении большими дозами. Из лабораторных животных наиболее чувствительны к заражению белые мыши, морские свинки, кролики. Источники возбудителя инфекции -- больные животные, из организма которых возбудитель выделяется с калом, мочой, слюной. Факторами передачи возбудителя служат объекты внешней среды, обсемененные Bacillus anthracis. Особенно опасны трупы животных, павших от сибирской язвы, а также кожи, шерсть, щетина, кости, рога этих животных. Совершенно недопустимо вскрытие сибиреязвенных трупов. В невскрытых трупах бациллы сибирской язвы погибают в течение 3 суток, а вскрытие трупа дает свободный доступ кислорода к органам и тканям, в которых содержится громадное количество бацилл. Последние под действием кислорода и тепла образуют споры и длительно сохраняются в почве и на окружающих предметах. Так же опасна вынужденная прирезка животных в агональном состоянии. Неубранный (необезвреженный) сибиреязвенный труп могут растащить плотоядные животные и хищные птицы, маловосприимчивые к этой болезни. [4]

1.5 Предубойная диагностика

Различают две основные формы болезни: септическую и карбункулезную. По локализации патологических изменений выделяют кожную, кишечную, легочную и ангинозную формы сибирской язвы. Кроме того, различают молниеносное (сверхострое), острое, подострое, хроническое и абортивное течение болезни.

Исход заболевания, если не подвергать животных лечению, как правило, летальный.

При молниеносном течении (чаще регистрируется у овец и коз, реже -- у крупного рогатого скота и лошадей) отмечают возбуждение, повышение температуры тела, учащение пульса и дыхания, синюшность видимых слизистых оболочек. Животное внезапно падает и в судорогах погибает. Длительность болезни от нескольких минут до нескольких часов. Температурная реакция в большинстве случаев остается незамеченной.

Острое течение (характерно для крупного рогатого скота и лошадей) характеризуется повышением температуры тела до 42⁰С, угнетением, отказом от корма, прекращением или резким сокращением лактации у коров, дрожью, нарушением сердечной деятельности, синюшностью видимых слизистых оболочек, часто с точечными кровоизлияниями. У лошадей нередко случаются приступы колик. Иногда отмечают запор или кровавую диарею. Кровь обнаруживают и в моче. Могут возникнуть отеки в области глотки и гортани, шеи, подгрудка, живота. Животные погибают на 2-3-й день болезни. В период агонии из носовых отверстий и рта выделяется кровянистая пенистая жидкость.

Подострое течение отмечают чаще у лошадей. Клинические признаки такие же, как и при остром течении, но менее выражены. Болезнь продолжается до 7 дней и более. У животных на различных частях тела (чаще на груди, животе, вымени, лопатках, голове, в области анального отверстия) появляются отеки.

Хроническое течение (2-3 мес) проявляется исхуданием, инфильтратами под нижней челюстью и поражением подчелюстных и заглоточных лимфатических узлов.

Абортивное течение болезни проявляется незначительным подъемом температуры тела, угнетением, потерей аппетита, уменьшением секреции молока, истощением животного. Продолжительность болезни обычно до 2 нед, редко больше. Больное животное, как правило, выздоравливает.

Карбункулезная форма болезни может быть первичной (место внедрения возбудителя), или карбункулы образуются как вторичные признаки при остром или подостром течении. Они могут появляться в различных частях тела животного, но чаще -- в области головы, груди, плеч и живота. Вначале появляются плотные, горячие и болезненные припухлости, затем они становятся холодными, безболезненными и тестоватыми. В центре припухлости ткань некротизируется и распадается, в результате чего образуется язва. Иногда карбункулезные опухоли образуются у крупного рогатого скота в виде пузырей на слизистой оболочке рта, на языке, губах, щеках, небе. Температура тела повышается незначительно. Карбункулезная форма сибирской язвы чаще встречается у свиней, лошадей, крупного рогатого скота, реже у мелкого рогатого скота.

Кишечная форма проявляется расстройством функции органов пищеварения. Запор у больных животных сменяется диареей, экскременты с примесью крови. У лошадей отмечают сильные колики. Болезнь сопровождается высокой температурой.

Легочная форма характеризуется признаками прогрессирующей геморрагической пневмонии и острого отека легких.

Ангинозная форма сибирской язвы преобладает у свиней. Инфекция не принимает характера септицемии, а протекает большей частью локализованно, в форме ангины или фарингита, выражающегося сильным опуханием в области гортани, переходящим на шею по ходу трахеи, на грудь и предплечье. Под давлением опухоли затрудняются дыхание и глотание, слюнотечение, появляются цианоз слизистых оболочек, неподвижность шеи, кашель и хрипота. При сильном отеке глотки и гортани животное может погибнуть от удушья. Температура тела у свиней может быть повышенной или нормальной. Иногда у свиней указанные признаки отсутствуют, и болезнь проявляется в виде общего угнетения, слабости, отказа от корма, и подозрение на сибирскую язву возникает лишь при послеубойном осмотре туш.

У пушных зверей сибирская язва характеризуется коротким инкубационным периодом: от 10-12 ч до 1 суток, редко 2-3 суток. У соболей болезнь часто протекает сверхостро без каких-либо выраженных клинических признаков. Звери едят, бегают, внезапно падают и погибают в предсмертных судорогах. У норок, песцов, лисиц и енотов болезнь протекает остро, длится до 2-3 ч. При этом отмечают повышенную температуру, учащенное дыхание, слабость, шаткость походки, отказ от корма, жажду, иногда рвоту, часто диарею с наличием в каловых массах крови, большого количества пузырьков газа. При более длительном течении болезни (1-2 суток) у лисиц и уссурийских енотов наблюдают отечную припухлость в области гортани, быстро распространяющуюся по нижней части шеи к голове. Иногда припухлости подкожной клетчатки наблюдают на конечностях и других частях тела. Болезнь почти всегда заканчивается гибелью животных. [5]

1.6 Послеубойная диагностика

При осмотре туш павших животных патологоанатомические изменения характерны и постановка диагноза не вызывает трудностей. Патологические изменения зависят от формы течения болезни. При септической форме находят резкое увеличение селезенки с пульпой черного цвета и мягкой консистенцией. Кровь густая, несвернувшаяся, темного цвета. В печени, сердце и почках отмечают дегенеративные изменения. Легкие отечны, с уплотненными участками. Лимфатические узлы увеличены, сочные, с кровоизлияниями.

При карбункулезной форме имеются кровянисто-студенистые инфильтраты в подкожной клетчатке, чаще в области головы, груди, живота, шеи, конечностей, реже в средостенье, и также кровоизлияния в серозных оболочках. Лимфатические узлы в зоне карбункулов увеличены, отечны, с точечными кровоизлияниями. Селезенка не всегда увеличена и размягчена. При кишечной форме отмечают воспаление слизистых оболочек с кровоизлияниями в мезентериальных лимфатических узлах.

Для осмотра в ветеринарные лаборатории рынков поступают туши и органы, полученные при убое животных, больных сибирской язвой в начальной стадии, а также при хронической или атипичной формах, когда могут отсутствовать характерные патологические изменения, в том числе такие, как увеличение селезенки, густая несвернувшаяся кровь, гиперемия печени, кровоизлияния, которые проявляются примерно за 15-20 часов до смерти животного при наступлении септицемии.

Отсутствие характерных изменений в начальный период заболевания объясняется тем, что при карбункулезной форме, особенно у крупного рогатого скота, процесс некоторое время протекает как местный, при этом возбудитель в крови отсутствует или его еще очень мало. Поэтому в этот период температура тела животного близка к нормальной, и ветеринарный врач при предубойном осмотре не всегда может заметить небольшой отек вокруг карбункула или, если он локализован во внутренних органах, допускает скот к убою и выдает справку о благополучии для предъявления в ветеринарную лабораторию рынка.

При кишечной форме отмечают изменения в мезентериальных лимфатических узлах и воспалительный процесс в слизистой оболочке.

При атипичных формах патологические изменения не всегда характерны. Они часто ограничены в пределах определенных органов. В таких случаях обнаруживают кровоизлияния или интенсивную гиперемию в различных тканях и лимфатических узлах, очаги уплотнения или инфильтраты. Могут быть небольшие кровоизлияния и инфильтраты подкожной клетчатки в области нижней челюсти, паховых лимфатических узлах, розовато-коричневая окраска жира, окружающего эти лимфатические узлы, темный цвет межреберных и поясничных мышц, увеличенная селезенка без размягчения пульпы и другие изменения.

У мелкого рогатого скота наряду с молниеносной отмечают острую, подострую, и редко карбункулезную формы сибирской язвы. В последнем случае находят геморрагические отеки в подкожной клетчатке и регионарных лимфатических узлах. У лошадей патологоанатомические изменения аналогичны изменениям у крупного рогатого скота. При атипичных формах отмечают ограниченные местные поражения на различных участках тела животного, а также очаговый, фибринозный плеврит.

При ангинозной форме у свиней отмечают характерные патологические изменения в виде студенистого бесцветного или желтоватого отека с кровоизлияниями. При этом в процессе могут вовлекаться миндалины, корень языка, а также слизистая оболочка (геморрагическое воспаление, дифтеритические налеты черного или серого цвета) При хронической местной форме отеков гортани и налетов на слизистой оболочке не бывает, поражен один или несколько лимфатических узлов, собирающих лимфу в области головы (часто - подчелюстные, реже - затылочные, околоушные и шейные). Лимфатический узел вишнево-красного цвета, с кровоизлияниями, увеличен. Часто процесс охватывает часть лимфатического узла, который увеличен, кирпичного или серо красного цвета, с явлениями некроза ткани.

При кишечной форме, протекающей у свиней главным образом хронически, отмечают ограниченные воспалительные геморрагические отеки в кишечнике, наиболее заметные на серозной оболочке, которые быстро некротизируют, принимая вид крошковатых образований зеленовато-желтого или желто-серого цвета. Впоследствии они отпадают, а на их месте остаются язвы с изъеденным дном, неровными краями и кровоизлияниями. При заживлении образуются рубцы со стянутыми краями.

Региональные брыжеечные лимфатические узлы подвергаются типичным для сибирской язвы изменениям. Иногда отмечаются кровоизлияния только в одном лимфатическом узле и небольшой отек брыжейки.

Таким образом, при ветеринарно-санитарной экспертизе туш и органов свиней необходимо осматривать глотку, гортань, подчелюстные, околоушные, шейные и брыжеечные лимфатические узлы.

При атипичной форме сибирской язвы у свиней иногда находят гиперемию поясничных лимфатических узлов и кровоизлияния в корковом слое почек, плохое обескровливание туш и др. Атипичные формы течения сибирской язвы у домашних животных не всегда четко выражены, что затрудняет диагностику. Поэтому при всех неясных патологоанатомических изменениях в тушах и органах следует предполагать сибирскую язву и ставить диагноз после проведения бактериологических исследований. [6]

сибирский язва туша экспертиза



1.7 Лабораторная диагностика

Исследование на сибирскую язву включает микроскопию мазков из исходного материала, высевы на питательные среды, постановку основных и дополнительных тестов идентификации, использование МФА для обнаружения антигенов и антител к ним, постановку ПЦР, биопробы и реакции преципитации. У человека и свиней, в случае невозможности установить диагноз вышеперечисленными методами, обязательна постановка клинической кожно-аллергической пробы с сибиреязвенным аллергеном.

1.7.1 Материал для исследования

Материал от животных:

1) продовольственное сырье и продукты животного происхождения;

2) объекты окружающей среды - почва, трава, фураж, подстилка, вода и т.д.

Забор всех видов материала осуществляется в стерильную стеклянную или пластиковую посуду, соответствующую объему проб. Иммунофлуоресцентным, серологическим и бактериологическим методами исследуется соответствующий материал из общей пробы.

1.7.2 Взятие материала от животных

В случае падежа животного в лабораторию направляют ухо и мазок, полученный из надреза уха. Ухо отрезают с той стороны, на которой лежит труп. Предварительно ухо туго перевязывают шпагатом у основания в двух местах и отрезают между лигатурами. Место отреза уха на трупе прижигают. Отрезанное ухо заворачивают в пергаментную бумагу, смоченную в дезинфицирующем растворе. Если подозрение на сибирскую язву возникло при вскрытии трупа животного или в ходе вынужденного убоя, все манипуляции по вскрытию прекращают и на исследование направляют кровь, кусочки органов (селезенки, печени, лимфоузлов, в которых имеются характерные патологоанатомические изменения), костный мозг (из грудины или канала бедренной кости). Материалы от трупа необходимо брать и исследовать как можно раньше, так как из-за развития посторонней микрофлоры трудно выделить чистую культуру возбудителя сибирской язвы. От трупов свиней в обязательном порядке отбирают заглоточные лимфатические узлы и участки отечной соединительной ткани.

1.7.3 Взятие материала из сырья животного происхождения

Взятие материала из сырья животного происхождения и из объектов внешней среды проводится в тех случаях, когда необходимо установить источник инфекции или фактор передачи, для выявления обсемененности спорами возбудителя сибирской язвы отдельных объектов, а также в целях обнаружения микроба в местах старых скотомогильников при проведении строительных, мелиоративных, гидротехнических и других работ, связанных с выемкой и перемещением грунта.

Мясо и мясные продукты:

Из материала, доставленного на исследование, отбирают образцы весом 10-30 г, из мяса - участки с лимфоидной тканью или кровоизлияниями.

Шерсть:

Шерсть для исследования отбирают из разных мест, не менее 5 образцов массой около 2 г каждый (лучше брать пучки загрязненной шерсти). Если шерсть упакована в кипы, берут не менее 10 образцов из разных мест каждой кипы, а также скопившуюся внутри обшивки пыль. Образцы от одной кипы объединяют и упаковывают вместе.

Кожа и кожсырье:

Берут кусочки кожи размером 3х3 см с периферических незагнивших и незаплесневевших участков шкурок. При наличии на внутренней стороне шкурки кровоподтеков или инфильтратов пробы берут и в этих местах.



1.7.4 Порядок проведения исследования

Все работы по проведению исследования материала подозрительного на наличие возбудителя сибирской язвы проводят с соблюдением требований СП 1.3.1285-03 "Безопасность работы с микроорганизмами I-II групп патогенности (опасности)".

Исследования на сибирскую язву можно разделить на два этапа:

1) обнаружение возбудителя или его компонентов (ДНК, антигенов) в организме больных людей, животных, секционном материале или объектах окружающей среды, с которыми имели контакт заболевшие и которые могли быть источником инфицирования;

2) выделение и идентификация чистой культуры возбудителя с последующим изучением ее свойств.

При исследовании патологического материала от людей и животных готовят мазки из нативных проб, окрашивают их по Граму и люминесцирующими иммуноглобулинами, засевают на плотные и жидкие питательные среды, заражают лабораторных животных и проводят ПЦР-анализ. Для анализа проб кожи, шкуры и шерсти к уже указанным методам добавляется реакция преципитации и исключается бактериоскопия и МФА.

1.7.5 Бактериоскопия

А) Световая микроскопия

Из поступившего патологического материала готовят несколько мазков, которые подсушивают на воздухе, фиксируют в спирте с добавлением 3% перекиси водорода не более 30 мин, после этого окрашивают по Граму и на капсулу одним из методов (по Ребигеру, Михину, Романовскому-Гимза). В окрашенных мазках из патологического материала сибиреязвенный микроб представляет собой грамположительные палочки, располагающиеся короткими цепочками или попарно. Концы палочек, обращенные друг к другу, резко обрублены, свободные концы обычно закруглены. В отдельных случаях (чаще в мазках от человека или свиней) форма возбудителя сибирской язвы может быть нехарактерной (короткие, толстые или изогнутые, иногда зернистые палочки с вздутием посередине или на конце, возможно наличие "теней" микробов).

Для обнаружения капсул лучшей краской является раствор Ребигера (прилож. 2.2). На всю поверхность фиксированного мазка пипеткой наносят раствор Ребигера и выдерживают 30-60 сек, затем промывают водой и высушивают. В мазках из свежего патологического материала капсула вокруг микроба окрашивается в розовый или красно-фиолетовый цвет, тело микробной клетки - в темно-фиолетовый. В мазках из крови и спинномозговой жидкости палочки с капсулой увеличены, края микроба закруглены.

Б) Люминесцентная микроскопия - МФА

Для люминесцентной микроскопии делают мазки-отпечатки из экссудата брюшной полости и органов биопробных животных, мазки-отпечатки из отечной жидкости и внутренних органов людей и животных, мазки из подозрительных колоний, выросших из посевов проб на чашках с питательными средами. Мазки подсушивают на воздухе и фиксируют в этиловом спирте с 3% перекиси водорода в течение 30 мин. На высохшие фиксированные мазки наносят в рабочих разведениях, указанных на этикетке, диагностические сибиреязвенные люминесцирующие адсорбированные соматические иммуноглобулины. В исходных пробах могут быть обнаружены сибиреязвенные микробы в вегетативной или споровой форме. Мазки из смывов, суспензий, вытяжек из материалов, подозрительных на высокую контаминацию возбудителем сибирской язвы, обрабатывают диагностическими люминесцирующими адсорбированными антиспоровыми иммуноглобулинами.

1.7.6 Посев на питательные среды

Подготовленный для исследования материал засевают на чашки Петри с МПА, агаром Хоттингера (рН 7,2), селективную дифференциально-диагностическую среду с 0,01% натрия фенол-фталеинфосфата и пробирку с МПБ. Для засева одной пробы желательно использовать не менее 5 чашек. Поверхность агара перед посевом должна быть совершенно сухой. Посев необходимо производить с помощью шпателя, предварительно нанося на поверхность агара 1-2 капли (0,1 мл) исследуемого материала.

После суточного роста сибиреязвенного микроба МПБ остается прозрачным, на дне образуется рыхлый осадок в виде "комочка ваты". При встряхивании пробирки бульон не мутнеет, осадок разбивается с трудом на мелкие хлопья. В отдельных случаях в МПБ появляется диффузный рост культуры (легкое помутнение), при встряхивании образуются муаровые волны, на поверхности бульона может наблюдаться рост в виде пристеночного кольца.

Из бульонной культуры делают мазки, окрашивают по Граму и исследуют под микроскопом. В мазках из бульонной культуры обнаруживают типичные цепочки, состоящие из сибиреязвенных палочек, из бульонной культуры с диффузным ростом - отдельные или парно расположенные палочки. Для получения чистой культуры из бульона делают высевы на плотные питательные среды петлей для получения изолированных колоний.

На следующий день плотные питательные среды просматривают визуально и под микроскопом при малом увеличении.

Посевы на селективной дифференциально-диагностической среде с фенолфталеинфосфатом натрия перед просмотром обрабатывают парами аммиака. Для этого в отдельную крышку от чашки Петри помещают фильтровальную бумагу и наливают на нее 1-2 мл аммиака водного (29%-го, концентрированного). Затем чашку с посевами (агаром вверх), без крышки, помещают на несколько секунд (пока не порозовеют колонии сапрофитов) в крышку с аммиаком. Таким образом обрабатывают все посевы. В силу того, что сибиреязвенный микроб не образует или продуцирует фосфатазу слабо, его колонии, как правило, не изменяют своего цвета. Колонии спорообразующих сапрофитов, в том числе и В. cereus, под действием паров аммиака приобретают розовый или красный цвет. С дифференциально-диагностической среды для выделения чистой культуры отбирают визуально и с помощью микроскопа при малом увеличении все колонии, не изменившие своего цвета после обработки парами аммиака или слабо порозовевшие.

Из всех отобранных колоний делают мазки на двух или более предметных стеклах. Мазки фиксируют и окрашивают двумя способами - по Ребигеру (или по Граму) и сибиреязвенной люминесцирующей соматической сывороткой. При просмотре мазков учитывают характерную для сибиреязвенного микроба морфологию (длинные нити, концы палочек обрублены), при окраске люминесцирующими сыворотками - специфическое свечение на 4 или 3. Для идентификации отбирают только колонии чистой культуры, которые состоят из характерных для сибиреязвенного микроба палочек. Их отсевают на секторы МПА или агара Хоттингера. Материал из всех других отобранных колоний рассевают петлей на отдельных чашках Петри с МПА или агаром Хоттингера для получения изолированных колоний.

На этом этапе исследования для получения чистой культуры сибиреязвенного микроба важно проводить рассев на неселективной среде. Посевы помещают в термостат на 18-20 ч, после чего проводят учет и отбор колоний для дальнейшей идентификации по полной схеме лабораторного исследования.

Из изолированных колоний повторно делают мазки, их фиксируют и окрашивают, как описано выше. При отсутствии достаточного количества культуры исследование проводят на следующие сутки после накопления биомассы.



1.7.7 Биологический метод

В день поступления материала, одновременно с бактериоскопией и посевами на питательные среды с целью выделения возбудителя сибирской язвы, в обязательном порядке проводят биологическую пробу на восприимчивых лабораторных животных.

Для постановки биологической пробы используют белых беспородных мышей (массой 18-2 г), морских свинок (массой 350-400 г) или золотистых хомяков (массой 60-80 г). Исследуемый материал, подготовленный соответствующим образом (раздел "Подготовка проб к исследованию"), суспендируют в небольшом объеме стерильного 0,9%-го раствора хлорида натрия и вводят подкожно во внутреннюю поверхность бедра 2 мышам в объеме 0,2-0,5 мл, 2 морским свинкам или 2 золотистым хомякам в объеме 0,5-1,0 мл. Гибель зараженных животных наступает через 1-3 сут., иногда позже. При вскрытии трупов биопробных животных, павших от сибирской язвы, отмечают характерный для сибиреязвенной инфекции студенистый геморрагический отек подкожной клетчатки на месте введения материала, гиперемию внутренних органов, увеличение селезенки и несвернувшуюся кровь. Из тканей и органов павших животных делают мазки-отпечатки, а также посевы на МПА или агар Хоттингера и селективную среду. Мазки-отпечатки фиксируют в спирте с 3% перекиси водорода в течение 30 мин, а затем окрашивают раствором Ребигера или метиленовой синькой. В мазках при микроскопии сибиреязвенные бациллы расположены короткими цепочками, попарно или поодиночке, окружены розовой капсулой, зачастую сливающейся вокруг групп микробов. В посевах при просмотре чашек вырастают крупные шероховатые колонии с бахромчатой периферией. Идентификацию выросших колоний проводят выше описанными методами.

В случаях, когда чистая культура возбудителя из посевов исходного материала на питательные среды получена раньше, чем наступает гибель зараженных этим материалом животных, суточной бульонной культурой заражают дополнительно двух мышей или морских свинок в дозах, указанных выше.

Наблюдение за животными ведут в течение 10 сут., после чего их исследуют, как описано выше. В целях ускорения исследования количество заражаемых белых мышей увеличивают до 6-10 особей и по одной мыши от каждой пробы забивают через 2-3 сут. после введения исходного инокулюма. В этом случае при вскрытии особое внимание уделяют месту введения. Если в исходном материале имеется достаточное количество сибиреязвенного микроба, то на месте введения можно обнаружить отек подкожной клетчатки. В мазках-отпечатках с места введения выявляются капсульные формы микроба, а в посевах - рост типичных колоний.

1.7.8 Иммунно-серологические и аллергологические методы исследования

А) Реакция преципитации по Асколи

Реакция позволяет в короткие сроки обнаружить сибиреязвенный антиген в экстрактах из струпьев язв больных, органов умерших от сибирской язвы людей, шкур и органов павших животных. Для постановки реакции необходимы: преципитирующая сибиреязвенная сыворотка, экстракт из исследуемого материала и сибиреязвенный бактерийный антиген для контроля.

Перед постановкой реакции свежий биоматериал выдерживают в термостате в течение 18-20 ч. Экстрагирование проводят горячим и холодным способами. При этом следует учитывать, что в экстрактах, полученных горячим способом, меньше преципитиногенов.

Для получения экстракта из патологического материала и струпьев горячим способом материал измельчают, заливают 0,9%-м раствором натрия хлорида с 0,3%-м раствором карболовой кислоты в соотношении 1:10 и кипятят в течение 30-40 мин, при холодном способе - оставляют для экстрагирования на 16-18 ч при комнатной температуре. Полученные экстракты фильтруют до полной прозрачности через фильтровальную бумагу или вату, предварительно смоченные 0,9%-м раствором хлорида натрия. В узкие пробирки наливают 0,2-0,3 мл прозрачной сибиреязвенной преципитирующей сыворотки, а затем пастеровской пипеткой осторожно наслаивают на нее такое же количество полученного экстракта. Если реакция положительная, то на границе соприкосновения жидкостей не позднее 15 мин должно появиться мутно-белое кольцо. Реакция оценивается знаком (+). При сомнительной реакции появление кольца наблюдается позднее 15 мин (±). Если кольцо отсутствует, то реакция оценивается как отрицательная (-).

Одновременно необходимо ставить три контрольных пробы: преципитирующая сыворотка плюс коммерческий стандартный сибиреязвенный антиген; преципитирующая сыворотка плюс экстрагирующая жидкость; нормальная лошадиная сыворотка плюс коммерческий стандартный сибиреязвенный антиген. Все контроли, кроме первого, должны быть отрицательными.

Исследование кожевенного и мехового сырья на сибирскую язву в реакции преципитации по Асколи проводят в соответствии с "Наставлением по исследованию кожевенного и мехового сырья реакцией преципитации", утвержденным Главным управлением ветеринарии Минсельхоза СССР 25 мая 1971 г.

1.7.9 Идентификация культур

Все выделенные культуры, подозрительные на принадлежность к В. anthracis, обязательно подвергают дальнейшему изучению биологических свойств, служащих критерием видовой идентификации, а при необходимости и целого ряда дополнительных свойств, являющихся основой для внутривидового типирования.

А) Морфология В. anthracis

В мазках из 18-24-часовых бульонных и агаровых культур вегетативные клетки имеют форму палочек, расположенных длинными цепочками. Концы бацилл в окрашенных препаратах обрублены и вогнуты, отчего цепочка напоминает бамбуковую трость с коленчатыми сочленениями. По Граму бациллы сибирской язвы окрашиваются положительно. Споры имеют овальную форму, внутри бактериальной клетки образуется одна спора, располагающаяся центрально, не превышая диаметра тела микробной клетки. Размеры вегетативных клеток сибиреязвенного микроба 1-1,5х6-10 мкм, спор - 0,8-1х1,5 мкм.

Морфологию спор определяют в культуре, полученной на плотной питательной среде при культивировании в течение 3-7 суток. Существует несколько способов окраски спор, основанных на том, чтобы сделать проницаемой для краски их плотную оболочку (Ауэски, Пешкова, Циля-Нильсена). Для дифференциации от других грамположительных бацилл мазки окрашивают сибиреязвенными люминесцирующими сыворотками, ориентируясь при микроскопии на морфологию клеток и специфическое свечение (ярко-зеленая периферия и более темная сома клеток).

Б) Характер роста на плотных и в жидких питательных средах

Характер роста на агаровых средах определяют визуально невооруженным глазом или через лупу, а также под микроскопом, для чего чашку помещают на столик микроскопа вверх дном и просматривают колонии в проходящем свете при малом увеличении и с суженной диафрагмой. Оценивают колонии по их морфологии: величине, форме, виду, цвету, характеру поверхности и края, прозрачности, структуре, консистенции, а также по специфическому запаху. На МПА и агаре Хоттингера возбудитель сибирской язвы формирует крупные шероховатые матовые серые сухие колонии в R-форме, с "шагреневой" поверхностью, неровными краями и отходящими от них волнистыми отростками, напоминающими при просмотре в микроскопе (малое увеличение) локоны волос или львиную гриву. Колонии сибиреязвенного микроба на плотных питательных средах отличаются от колоний спорообразующих сапрофитов меньшими размерами, большей шероховатостью и более выраженными "локонами" по периферии. Колония сибиреязвенного микроба с трудом берется бактериологической петлей, при этом за петлей поднимается тяж бактериальной массы. Агаровая культура сибиреязвенного микроба имеет специфический слегка ароматический запах.

При использовании дифференциально-диагностической среды с натрия фенолфталеинфосфатом учитывают одновременно два важных диагностических признака - характер выросших колоний и тест на щелочную фосфатазу.

В МПБ сибиреязвенный микроб растет в виде придонного "комочка ваты", бульон над которым остается прозрачным. "Комочек ваты" бульонной культуры В. anthracis с трудом разбивается при встряхивании, в отличие от подобного придонного роста некоторых представителей спорообразующих сапрофитов, легко разбивающегося и вызывающего помутнение среды.

В) Тест на подвижность

Одним из наиболее постоянных для сибиреязвенного микроба признаков является отсутствие подвижности, в отличие от большинства спорообразующих сапрофитов. Можно определить подвижность путем высева культуры уколом в столбик полужидкого (0,2-0,3%) агара. Посевы выдерживают в термостате при температуре (36±1)°С в течение 18-20 ч. В полужидком агаре рост сибиреязвенного микроба наблюдается только по следу укола, а окружающая среда остается прозрачной. Подвижные микробы дают диффузный рост. Простым методом определения подвижности является микроскопическое исследование в "висячей" или раздавленной капле, а также в камере Горяева 18-20-часовой бульонной культуры. Однако описаны и неподвижные варианты В. cereus и других сапрофитов.

Г) Тест на гемолиз

Для проведения этого теста готовят МПА или агар Хоттингера (рН 7,2) с 3-5% дефибринированной крови барана (прилож. 1.4). Посев испытуемых культур производят бактериологической петлей секторами и инкубируют в термостате при (36±1)°С в течение 18-20 ч, после чего учитывают результат. В эти сроки сибиреязвенный микроб не лизирует эритроциты барана в отличие от большинства родственных спорообразующих сапрофитов, образующих широкую зону гемолиза вокруг выросших колоний.

Д) Тесты на чувствительность к пенициллину

Тест "жемчужного ожерелья". Перед постановкой пробы остуженный до 45 С 2% питательный агар разливают по 10 мл в 3 пробирки. В первую добавляют пенициллин из расчета 0,5 ЕД/мл, во вторую - 0,05 ЕД/мл, третья - без антибиотика - остается контрольной. Содержимое каждой пробирки выливают в чашку Петри. После застывания среды дно чашек снаружи размечают на квадраты или кружки, на которых пишут номера анализа. На обозначенные участки наносят по одной капле изучаемых 3-6-часовых бульонных культур. На одной чашке может быть поставлено до 10 проб. Посевы инкубируют при (36±1)°С. Не позже 3 ч просматривают рост под микроскопом с иммерсионным объективом, предварительно накрыв каждый отмеченный участок покровным стеклом. На среде, содержащей пенициллин, видны шарообразной формы бактериальные клетки сибиреязвенного микроба, расположенных в виде цепочек, напоминающих ожерелье из жемчуга. Спорообразующие сапрофиты, как правило, устойчивые к пенициллину, имеют обычную бациллярную форму. В контрольной среде без пенициллина сибиреязвенный микроб формирует длинные цепи палочек.

Е) Метод определения гемолитической и протеолитической активности

Определение проводят в соответствии с методическими рекомендациями "Определение гемолитической активности у сибиреязвенного микроба" (М., 1989). С этой целью готовят двухслойный агар, используя в качестве первого слоя 1% агар Дифко на 0,9%-м растворе хлорида натрия, который разливают в чашки Петри по 20 мл. Для второго слоя готовят 0,7%-й агар на 0,9%-м растворе хлорида натрия, в который после охлаждения вносят следующие ингредиенты: для проверки гемолитической активности - 6% трижды стерильно отмытых в 0,9%-м растворе хлорида натрия эритроцитов барана; для определения протеолитической активности - желатин, казеин, бычий сывороточный альбумин и гемоглобин в концентрации 0,4%. После полного застывания верхнего слоя в агаровых пластинках пробойником делают по 6-7 лунок в каждой чашке, дно которых заливают каплей расплавленного 1% агара.

В лунки вносят по 0,1 мл 2-суточной бульонной культуры изучаемых штаммов. Учет производят через 48 ч инкубации при температуре (36±1)⁰С для выявления гемолитической и через 24 ч - при выявлении протеолитической активности. В последнем случае перед просмотром поверхность агара обрабатывают 20% раствором трихлоруксусной кислоты. Положительные результаты соответствуют обнаружению зон просветления в агаре вокруг лунок с культурой.

Ж) Тест на лецитиназу

Наличие или отсутствие лецитиназной активности определяют в жидкой желточной среде или на агаре Хоттингера, в который добавлен стерильно желток куриного яйца. В пробирки с 5 мл жидкой желточной среды засевают петлей суточную культуру и инкубируют в термостате при (36±1)⁰С. Возбудитель сибирской язвы, как правило, в течение нескольких суток инкубирования не свертывает желток, в то время как представители спорообразующих сапрофитов свертывают желток уже в первые сутки. На плотной питательной среде вокруг колоний сибиреязвенного микроба не формируются зоны ферментации желтка, в то время как вокруг колоний большинства сапрофитов, вырабатывающих активную лецитиназу, просматривается широкая беловатая непрозрачная зона. [7]

1.8 Дифференциальная диагностика

При дифференциальной диагностике у коров необходимо исключить эмфизематозный карбункул, злокачественный отек, пастереллез (отечная форма) и пироплазмидозы, тимпанию незаразного характера, лейкоз. У овец -- брадзот, инфекционную энтеротоксемию и пироплазмидозы; у свиней -- рожу, чуму, пастереллез; у лошадей -- злокачественный отек, сверхострое течение инфекционной анемии, пироплазмидозы, петехиальную горячку, кормовые отравления.

Основой дифференциальной диагностики является комплексный метод исследования, в котором результаты лабораторной диагностики имеют решающее значение. [5]

1.9 Ветеринарно-санитарная экспертиза туш и внутренних органов

При подозрении на сибирскую язву дальнейший убой животных приостанавливают. От подозрительной туши берут кусочки селезенки, измененные части ткани и пораженные лимфатические узлы и направляют в лабораторию для бактериоскопического и бактериологического исследований. До получения результатов исследований тушу и все органы изолируют в обособленное место. При установлении бактериоскопическим исследованием сибирской язвы тушу с органами и шкурой, не ожидая результатов бактериологического исследования, направляют для уничтожения (сжиганием) при соблюдении установленных ветеринарно-санитарных правил.

Все обезличенные продукты (ноги, уши, вымя, кровь и др.), полученные от убоя других животных, смешанные с продуктами убоя от сибиреязвенного животного, сжигают.

Шкуры от здоровых животных, контактировавшие со шкурой от животного, больного сибирской язвой, подлежат дезинфекции в порядке, предусмотренном действующей Инструкцией по дезинфекции сырья животного происхождения и предприятий по его заготовке, хранению и обработке.

Примечание. Во всех случаях, когда в Правилах указывается на необходимость дезинфекции шкур, они подлежат дезинфекции согласно упомянутой Инструкции.

После удаления сибиреязвенной туши и других продуктов убоя в убойном цехе немедленно проводят дезинфекцию согласно Инструкции о мероприятиях против сибирской язвы. Рабочим проводится экстренная профилактика сибирской язвы в соответствии с Инструкцией и методическими указаниями по лабораторной и клинической диагностике, профилактике и лечению сибирской язвы у людей, утвержденной Минздравом СССР.

Другие туши и продукты убоя, подозреваемые в обсеменении бациллами сибирской язвы по ходу технологического процесса, немедленно подвергают обеззараживанию проваркой, но не позднее 6 ч с момента убоя, в открытых котлах в течение 3 ч с начала закипания, а в закрытых котлах при давлении пара 0,5 МПа в течение 2,5 ч. При невозможности провести обеззараживание в указанный срок эти туши должны быть изолированы в помещение при температуре не выше 10 град. С, а затем направлены на обеззараживание, как указано выше, но не позже 48 ч с момента убоя. Если это невыполнимо, то туши и продукты убоя, подлежащие обеззараживанию, должны быть направлены на утилизацию или сжигание.

Туши и продукты убоя, обсеменение которых бациллами сибирской язвы по ходу технологического процесса исключается, выпускают без ограничения.

При отрицательном результате бактериоскопического исследования тушу, подозреваемую в заражении сибирской язвой, оставляют в изоляции до получения заключения о результатах бактериологического исследования; необходимость проведения других мероприятий в цехе (дезинфекция и т.д.) определяется ветеринарным врачом. [8]

1.10 Мероприятия при обнаружении сибирской язвы на мясоперерабатывающих предприятиях

При обнаружении сибирской язвы на предприятие накладывают карантин и проводят следующие мероприятия.

При обнаружении трупа или больного сибирской язвой животного в загоне предубойного цеха (скотобазы) прием скота прекращают; труп направляют на техническую утилизацию или сжигают; все имеющееся поголовье подвергают клиническому обследованию и термометрии, свиней аллергическому исследованию с сибиреязвенным аллергеном; животных с повышенной температурой тела и положительно реагирующих на аллерген свиней изолируют и лечат; клинически здоровых животных и свиней из этой партии, не реагирующих на аллерген, немедленно убивают на санитарной бойне.

Скот из других загонов-накопителей подают на убой в цех первичной переработки.

Вагон, прогоны, по которым перемещалась партия животных, среди которых обнаружено заболевание сибирской язвой, подвергают увлажнению дезинфицирующими растворами, тщательной механической очистке от навоза и последующей дезинфекции одним из средств, указанных настоящих Правилах; навоз из загона, где было обнаружено заболевание, и смежных с ним загонов подлежит сжиганию.

При обнаружении на конвейере характерных для сибирской язвы патологических изменений убой животных и движение продукции в цехе первичной обработки сырья останавливают, патологический материал направляют на лабораторное исследование. Пораженную тушу и соседние с нею (по две с каждой стороны) изолируют вместе с внутренними органами и шкурами. При лабораторном подтверждении сибирской язвы изолированные туши, внутренние органы и шкуры направляют на техническую утилизацию или сжигают. Прием скота прекращают и проводят дезинфекцию помещений (включая базу и прогоны), оборудования, спецодежды и других инфицированных объектов.

Пол в убойных цехах посыпают сухой хлорной известью с содержанием не менее 25% активного хлора из расчета 2 кг на 1 кв.м площади и затем увлажняют водой - 5 л на 1 кв.м, экспозиция - 1 ч.

Затем все поверхности оборудования и помещения (стены на высоту 2 м от пола) тщательно обмывают 5%-ным горячим (не менее 70 градусов) раствором кальцинированной соды и проводят дезинфекцию.

Инструменты (ножи, мусаты и др.) дезинфицируют путем кипячения в 0,5%-ном растворе кальцинированной соды в течение 90 мин или автоклавируют при 1,5 атм в течение 2-х ч. Менее ценные инструменты и другие металлические предметы обжигают.

Спецодежду обеззараживают автоклавированием или кипячением в воде в течение 90 мин. Все работники предприятия, соприкасавшиеся с животными, больными сибирской язвой, или полученными от них продуктами, должны быть ознакомлены с необходимыми мерами профилактики при сибирской язве и в обязательном порядке подвергнуты санитарной о6работке.

После проведения мероприятий по уничтожению возбудителя болезни проводят термометрию оставшихся на предубойной базе животных свиней подвергают аллергическому исследованию). При отсутствии подозрительных по заболеванию всех животных подают на убой.

Карантин с мясоперерабатывающего предприятия снимают после завершения комплекса мероприятий по обеззараживанию контаминированных объектов с контролем качества дезинфекции. [9]

1.11 Мероприятия по профилактике заболеваний животных и людей сибирской язвой

В стационарно неблагополучных по сибирской язве пунктах и на угрожаемых территориях территориальный центр госсанэпиднадзора и станция по борьбе с болезнями животных проводят:

- регистрацию эпизоотических очагов в специальном журнале, который постоянно хранится в делах районной (городской) ветеринарной станции и в центре санитарно-эпидемиологического надзора, вместе с журналом обязательно хранят выкопировки с карт территории стационарно неблагополучных пунктов с обозначением на них места и границ почвенных очагов сибирской язвы; указанные места должны быть ограничены канавами (по всему периметру), обнесены изгородью, исключающей случайный доступ людей и животных, и обозначены табличками с надписью "сибирская язва";

- контролируют проведение работ по ограждению и содержанию в надлежащем санитарном состоянии скотомогильников, отдельных старых захоронений животных и биотермических ям, обеззараживанию почвы в местах с достоверно установленными границами захоронений трупов животных, павших от сибирской язвы;

- организуют постоянный надзор за санитарным состоянием мест скопления скота (базары, выставки, выводки и др.), заготовки, хранения и переработки сырья и продуктов животного происхождения.

В стационарно неблагополучных по сибирской язве пунктах и на угрожаемых территориях:

- не допускается вынужденный убой скота без разрешения ветеринарного врача; в случае вынужденного убоя запрещается реализация мяса и других продуктов в пищу людям и для кормления животных без лабораторного исследования;

- требуется обязательное согласование с ветеринарной и санитарно-эпидемиологической службами проведения агромелиоративных, строительных и других работ, связанных с выемкой и перемещением грунта; в санитарно-защитной зоне почвенных очагов сибирской язвы не разрешается отвод земельных участков для проведения изыскательских, гидромелиоративных, строительных и других работ, связанных с выемкой и перемещением грунта, последующим затоплением, подтоплением или изменением уровня грунтовых вод, а также передача в аренду, продажа в личную собственность, выделение под сады, огороды или иное землепользование участков территории в непосредственной близости к почвенным очагам сибирской язвы; размеры санитарно-защитной зоны устанавливают органы ветеринарной службы и санитарно-эпидемиологического надзора с учетом особенностей местности и вида предполагаемых работ;

- регулярно проводится разъяснительная работа среди населения, владельцев скота и работников животноводства об опасности и сущности заболевания сибирской язвой.

На угрожаемых по сибирской язве территориях, определяемых ветеринарными органами республик, краев, округов и областей по согласованию с Департаментом ветеринарии Минсельхозпрода РФ, проводят плановую профилактическую иммунизацию всех восприимчивых к болезни сельскохозяйственных животных, независимо от их принадлежности, используя принятые в практику вакцины в порядке и в сроки, предусмотренные наставлениями по их применению.

0 проведении прививок против сибирской язвы составляют акт с указанием количества привитых животных (по видам), наименования использованной вакцины, предприятия-изготовителя, номера серии и контроля, даты изготовления и количества израсходованной вакцины. К акту прилагают опись вакцинированных животных, принадлежащих населению, с указанием фамилий владельцев. Если по какой-либо причине животное нельзя вакцинировать, его включают в отдельную опись с указанием причины, из-за которой не проведена вакцинация, и возможного срока прививки, о чем ставят в известность владельца животного. Акты и описи подлежат хранению в учреждениях государственной ветеринарной сети в течение двух лет.

Убой привитых против сибирской язвы животных на мясо разрешается не ранее чем через 10 суток после прививки. В вынужденных случаях по разрешению ветеринарного врача убой привитого скота может быть проведен ранее указанного срока - при отсутствии поствакцинальных осложнений и соблюдении требований, указанных в действующих "Правилах ветеринарного осмотра убойных животных и ветеринарно-санитарной экспертизы мяса и мясных продуктов", а также в "Ветеринарно-санитарных правилах внутрихозяйственного убоя скота на мясо". Шкуры, снятые с вынужденно убитых животных, хранят в изолированных условиях до получения результатов исследования проб кожи в реакции преципитации.