Микробиология кисломолочных продуктов детского питания

Проведение анализа.

Перед употреблением среду для учета бифидобактерий следует разогреть в кипящей бане в течение 3-5 минут.

При определении бифидобактерий в смешанных с молочнокислыми бактериями культурах перед расплавлением в среду вносят стерильный раствор неомицина. После расплавления пробирки охлаждают в водяной бане до температуры 45+2°С. Приготовляют ряд разведений продукта (до 9).

Затем из трех-четырех последних разведений продукта в растворе хлористого натрия берут по 1 см³ и вносят 2 параллельные ряда пробирок со средой и тщательно перемешивают пипеткой, следя, чтобы в среду не попал воздух.

Посевы выдерживают в термостате при температуре 37+2°С в течение 2-3 суток, в случае определения бифидобактерий в смешанных с молочно кислыми бактериями культурах- 3-5 суток.

Обработка результатов. Подсчёт количества клеток бифидобактерий в 1г продукта производят путем умножения числа выросших колоний на соответствующие разведение. За окончательный результат анализа принимают среднее арифметическое результатов, полученных в двух параллельных посевах.

Для определения истинного количества бифидобактерий в среде с неомицином результат следует удвоить.

Глава 3. Результаты исследования.

3.1. Микробиологические и физико-химические показатели молока, используемого для производства детских кисломолочных продуктов. (Бифилин-М, Ацидолакт, Бифилакт)

В качестве сырья для производства кисломолочных напитков МУЗ «Детская молочная кухня» г.Иркутска использует молоко сырое коровье, соответствующее ГОСТ Р 52054-2003, 1 сорта, с массовой долей жира 3.5%, поставляемое ОПХ «Пивовариха». Сырое молоко анализируется по ряду параметров в соответствии с нормативной документацией (табл.3). Показатели заготовляемого молока приведены в таблице 4.

В целом, молоко, поставляемое ОПХ «Пивовариха» удовлетворяет ГОСТ. Отрицательный момент заключается в присутствии слабого кормового привкуса, что снижает вкусовые качества готового продукта.

Таблица 3.

Параметры оценки сырого молока .

Параметры	Нормативный документ
Органолептика	ГОСТ 28283-89
Наличие соды	ГОСТ 24065-80
Соматические клетки	ГОСТ 23453-90
Чистота	ГОСТ 8218-89
Бактериальная обсемененность	ГОСТ 9225-84
Температура	ГОСТ 26754-85
Жир	ГОСТ 30648.1-99
Кислотность	ГОСТ 30648.4-99
Плотность	ГОСТ 3625-84

Таблица 4.

Показатели сырого молока, предназначенного для производства детских кисломолочных напитков.

Дата отбора проб	Показатели
	Органолептика	Наличие соды	Кол-во соматич. Кл. в 1 см3	Чистота фильтра	Бактер. Обсемен.	tC	Жир %	Кисл-сть Т	Плотность г/см3
11.04.05	Кормовой привкус.	-	До 500 тыс.	1	1	10С	3.6	17	1027.
12.04.05	Кормовой привкус.	-	До 500 тыс.	1	1	9С	3.5	18	1027.0
13.04.05	Кормовой привкус.	-	До 500 тыс.	1	1	9С	3.5	17	1027.3
14.04.05	Кормовой привкус.	-	До 500 тыс.	1	1	10С	3.5	17	1027.0
15.04.05	Кормовой привкус.	-	До 500 тыс.	1	1	9С	3.5	17	1027.2
18.04.05	Кормовой привкус.	-	До 500 тыс.	1	1	9С	3.5	17	1027.6
19.04.05	Кормовой привкус.	-	До 500 тыс.	1	1	9С	3.5	16	1027.0
20.04.05	Кормовой привкус.	-	До 500 тыс.	1	1	9С	3.6	16	1026.6
21.04.05	Кормовой привкус.	-	До 500 тыс.	1	1	9С	3.5	17	1027.1
22.04.05	Кормовой привкус.	-	До 500 тыс.	1	1	9С	3.5	18	1027.0

3.2. Морфологические, тинкториальные и культуральные признаки микроорганизмов, используемых для приготовления Бифилина-М, Ацидолакта, Бифилакта.

В качестве закваски для производства кисломолочного напитка «Бифилин-М» используется концентрат бифидобактерий жидкий, приготовленный из чистых культур бифидобактерий штамм В379М, который не подвергался генным модификациям (ТУ 9220-001-02069473-02). Поставки осуществляет ВСГТУ г.Улан-Удэ. Физико-химические и микробиологические показатели приведены в таблице 5.

Таблица 5.

Физико-химические и микробиологические показатели бактериального концентрата бифидобактерий, используемые для производства Бифилина-М.

Энергия кисло--тообразования (в час.)	Объём молока на 1 порцию бак.концентрат. (в литрах)	Количество клеток (К.О.Е.) в 1 см3 готового продукта.	Температура сквашивания С
10	200	1*1011	37+2С.

Микроскопия закваски показала наличие Гр⁺ слегка изогнутых и прямых тонких палочек, неподвижных, отдельных и в цепочках.(рис.4)

Рис.4. Микроскопический препарат закваски для приготовления Бифилина-М.

В качестве закваски для производства кисломолочного напитка «Ацидолакт» используются молочнокислые бактерии вида str.thermophilus и L.acidophilus. Бактериальные закваски поставляются ГУП «ВНИМИ-Сибирь» РАСХ г. Омска. Физико-химическая и микробиологическая характеристика бак.препаратов приведены в таблице 6.

Таблица 6.

Физико-химические и микробиологические показатели бактериальных заквасок для производства «Ацидолакта».

Вид бак. закваски	ТУ	Продолжит-сть восстановления сухой закваски (час.)	Энергия кислотообразования вторичной закваски (час.)	Количество К.О.Е. в 1г. Бак. препарата.
Термофильный Стрептококк вязкий.	ТУ 10-02-02-789-65-91.	20	6	1.1*109
Палочка Ацидофильная, вязкая.	ТУ 10-02-02-789-65-91.	20	8	1.1*109

Микроскопия закваски str.thermophilus показала наличие кокков, собранных в цепочки разной длины.(рис.5)

Микроскопия закваски L.acidophilus показала наличие клеток Гр⁺, палочковиднои формы. Палочки прямые, крупные, одиночные и в цепочках. (рис.6)

Рис.5. Микроскопический препарат Str.termophilus, используемый для производства «Ацидолакта».

Рис.6. Микроскопический препарат L.acidophilus, используемый для производства «Ацидолакта».

Микроскопия производственной закваски, полученной путём восстановления бактериального концентрата бифидобактерий и восстановления сухих заквасок str.thermophilus и L.acidophilus на стерилизованном молоке показала ту же микроскопическую картину, что и в сухих заквасках.

Кроме микрокопирования закваски исследовались на присутствие бактерий группы кишечной палочки, характер сгустка, органолептику. Результаты приведены в таблице 7.

Таблица 7.

Санитарно-гигеинические и органолептические показатели заквасок для производства Бифилина-М и Ацидолакта.

Название закваски и количество исследований проб.	БГКП	Сгусток	Органические показатели
B.longum (10)	-	Нежный, колющийся.	Вкус кислый
L.acidophilus (10)	-	Плотный, колющийся, однородный (иногда небольшое отделение сыворотки)	Вкус резкий (острый)
str.thermophilus (10)	-	Плотный, консистенция вязкая.	Вкус кислый, мягкий.

Для производства кисломолочного напитка Бифилакт используются те же закваски, что и для производства Ацидолакта, Бифилина-М, т.е. B.longum, Str.thermophilus, L.acidophilus. Картина исследования та же.

Результаты исследования заквасок (сухих и восстановленных) для приготовления кисломолочных напитков Бифилин-М, Ацидолакт, Бифилакт показали полное соответствие требованиям, предъявляемым к закваскам для производства кисломолочных продуктов для детского лечебно-профилактического питания.

3.3. Микробиологические и физико-химические показатели готовых продуктов Бифилина-М, Ацидолакт, Бифилакт.

Исследование молочнокислых готовых продуктов для детского питания Бифилин-М, Ацидолакт, Бифилакт проводилось по следующей схеме (рис.7).

Рис.7. Схема исследования готовых кисломолочных продуктов «Бифилин-М», «Ацидолакт», «Бифилакт».

Исследование микробиологические и физико-химические характеристики готовых реализации кисломолочных напитков Бифилин-М, Ацидолакт, Бифилакт. Результаты исследования напитков отражены в таблицах 8,9,10.

Таблица 8.

Физико-химические и микробиологические показатели кисломолочного напитка «Бифилин-М».

Дата реализации	Жирность %	Кислотность оТ	БГКП	Количество бифидобактерий в 1 см3.
11.04.05	3.5	50	-
12.04.05	3.5	53	-
13.04.05	3.5	50	-	109
14.04.05	3.5	50	-
15.04.05	3.5	48	-
18.04.05	3.5	46	-
19.04.05	3.4	48	-
20.04.05	3.5	50	-	109
21.04.05	3.5	51	-
22.04.05	3.5	50	-

Кислотность продукта Бифилин-М ниже нормы (75-90⁰Т), что, однако не ухудшает его вкусовых качеств. Массовая доля жира выше установленной техническими условиями (3.3%), что происходит из-за того, что продукт готовится на основе цельного, не нормализованного молока. По своему бактериальному составу (количество бифидобактерий, отсутствие БГКП) готовый продукт соответствует требованиям микробиологического контроля.

Микроскопия препарата готового к реализации Бифилина-М показывает наличие Гр⁺ тонких, прямых и слегка изогнутых палочек, (это характерно для бифидобактерий; в данном случае форма меняется в зависимости от качества молока).

Вкус нежный, кисломолочный, консистенция нежная, сгусток нарушенный, т.к. продукт перед разливом перемешивается.

Таблица 9.

Физико-химические и микробиологические показатели готового к реализации кисломолочного напитка « Ацидолакт».

Дата реализации	Жирность %	Кислотность 0Т	БГКП	Количество молочнокислых бактерий в 1 см3.
11.04.05	3.5	49	-
12.04.05	3.5	52	-
13.04.05	3.5	53	-
14.04.05	3.5	51	-
15.04.05	3.5	52	-	108
18.04.05	3.5	52	-
19.04.05	3.4	58	-
20.04.05	3.5	49	-	1010
21.04.05	3.5	50	-
22.04.05	3.5	52	-

Кислотность готового продукта Ацидолакт ниже рекомендуемой (65 ⁰Т-70 ⁰Т). Жир выше установленного. Количество молочнокислых бактерий в 1 см³ готового продукта и отсутствие посторонней микрофлоры соответствует норме.

Микроскопический препарат кисломолочного напитка Ацидолакт показывает наличие Гр⁺ прямых неподвижных палочек палочки L.acidophilus средней длины, т.е. меньше чем наблюдались в препарате закваски, что, видимо, можно связать с влиянием str.thermophilus. и цепочек кокков.

Вкус продукта мягкий кисломолочный, характерный. Консистенция вязкая, сгусток нарушенный.

Таблица 10.

Физико-химические и микробиологические показатели готового к реализации кисломолочного напитка «Бифилакт».

Дата реализации	Жирность %	Кислотность 0Т	БГКП	Количество молочнокислых бактерий в 1 см3.	Количество бифидобактерий
11.04.05	3.5	57	-
12.04.05	3.5	61	-
13.04.05	3.5	56	-
14.04.05	3.5	61	-	109	-
15.04.05	3.5	56	-
16.04.05	3.5	56	-
17.04.05	3.5	50	-
18.04.05	3.5	58	-
19.04.05	3.4	68	-	108	104
20.04.05	3.5	61	-
21.04.05	3.5	56	-
22.04.05	3.5	58	-

Кислотность готового продукта Бифилакт ниже рекомендуемой (70⁰Т). Жир выше, чем установлено (3.2%). Количество молочнокислых бактерий и отсутствие посторонней микрофлоры соответствует норме.

Следует отметить очень небольшое количество, либо полное отсутствие бифидобактерий в продукте, что нарушает ТУ. Данное обстоятельство следует связать с нарушением технологического процесса или антагонистическим воздействием ацидофильной палочки на бифидобактерии.

Микроскопический препарат напитка Бифилакт показывает наличие Гр⁺ прямых палочек, и кокковидных клеток, соединённых в цепочки.

Вкус продукта лёгкий кисломолочный. Консистенция вязкая, сгусток нарушенный.

Выводы.

1. Молоко поставляемое ОПХ «Пивовариха», на МУЗ «Детская молочная кухня» соответствует требованиям, предъявляемым к сырью для производства детских кисломолочных продуктов, за исключением органолептического показателя: у молока имеется слабый кормовой привкус.

2. Восстановленные закваски для приготовления кисломолочных напитков «Бифилин-М», «Ацидолакт», «Бифилакт» полностью соответствуют требованиям инструкции по приготовлению и применению заквасок для кисломолочных продуктов на предприятиях молочной промышленности. (М.81)

3. Микрофлора напитка «Бифилин-М» соответствует ТУ 10-02-02-789-202-95 по приготовлению лечебно-профилактического бифидопродукта «Бифилин-М».

Микрофлора напитка «Ацидолакт» соответствует ОСТ 10-194-96.

Микрофлора напитка «Бифилакт» не соответствует ТУ БГ-003-00-98: количество бифидобактерий значительно ниже нормы.

Рекомендации.

1) Так как технология обработки сырого молока в условиях детской молочной кухни не позволяет устранить кормовой привкус, а обращение непосредственно к руководителям ОПХ «Пивовариха» и в городскую администрацию результатов не принесли, предлагаю пересмотреть пункты договора о поставке сырья и заключить соглашение еще с одним хозяйством на приемку молока : в качестве запасного варианта или полной замены поставщика.

2) Для соблюдения всех стадий процесса производства «Бифилакта», считаю необходимым увеличение персонала (не одна, а две санитарки), чтобы работники имели возможность вовремя подготовить оборудование к приемке молока.

Литература.

1. Абрамова-Оболенская Н.И., Прохорова И.И. и др. Коррекционная активность ацидофильных лактобактерий при дисбактериозах кишечника у рабочих молочной промышленности и производства антибиотиков.// в кн. Антибиотики и колонизационная резистентность. М., 1990, в.ХЙХ. с.160-166.

2. Андросова Н.Л., Никонова Н.К., Барышенкова Е.П. Разработка новых видов кисломолочных продуктов для детского питания.// Мат. 1-го Всерос. Конгресса «Питание детей ХХЙ век ». М.,2000, с.143.

3. Бойцов А.Г., Лифляндский В.Г. Как победить дисбактериоз у детей и взрослых. М., изд. Олма-Пресс, 2002.

4. Бочков И.А. Особенности формирования аутомикрофлоры у новорожденных детей в раннем неонатальном периоде. Дисс. докт. мед. наук. М., 1998.

5. Гончарова Г.И. Бифидофлора человека и необходимость ее оптимизации.- В кн. Бифидобактерии и их использование в клинике, медицинской промышленности и сельском хозяйстве. ( ред. Никитин ). М., 1986. с 10-17.

6. Груздева Т.А. Бифидосодержащие биологически активные добавки к детскому питанию и состояние микрофлоры при их применении / Автореф. дисс. канд. биол. наук. М., 1990.

7. Зимина В.С. и др. Технология приготовления кисломолочных продуктов лечебного питания на основе комплексных заквасок из лакто- и бифидобактерий. М., 1986.

8. Коршунов В.М. Проблема регуляции микрофлоры кишечника // Ж. микробиол. 1995. №3 с. 48-53 .

9. Кузнецова Г.Г. К оценке эффективности коррекции дисбактериозов.// Тез.конф. «Дисбактериозы и эубиотики». М., 26-28 марта 1996. с.17.

10. Ладодо К.С., Боровик Т.Э., Рославцева Е.А. Использование продуктов-пробиотиков в лечебном питании детей // Мат. Всерос. конференции «Пробиотики и пробиотические продукты в профилактике и лечении наиболее распространенных заболеваний человека». М., 21-23 апреля 1999. с. 56-57.

11. Лихачева А.Ю., Бондаренко В.М. Современное состояние вопроса о номенклатуре и таксономии бактерий рода Lactobacillus // Тез.конф. «Пробиотики и пробиотические продукты в профилактике и лечении наиболее распространенных заболеваний человека». М., 21-23 апреля 1999. с.30-31.

12. Лыкова Е.А., Бондаренко В.М., Изачик Ю.А. и др. Коррекция пробиотиками микроэкологических и иммунных нарушений при гастродуоденальной патологии у детей // Ж. Микробиол. 1996. №2. с.88-91.

13. Лянная А.М., Интизаров М.М., Донских Е.Е. Биологические и экологические особенности рода Bifidobacterium.- В кн.: Бифидобактерии и их использование в клинике, медицинской промышленности и сельском хозяйстве (ред. Никитин). М.,1986. С.32-38.

14. Манвелова М.А., Турсункулова С.Ф., Саранцев А.Н. и др. Оценка эффективности бифидосодержащего продукта БИВИТ в комплексной терапии.// Тез.конф. «Пробиотики и пробиотические продукты в профилактике и лечении наиболее распространенных заболеваний человека». М., 21-23 апреля 1999. С.32.

15. Манвелова М.А., Плясунова Н.Г., Чешева В.В. Лечебно-диетические кисломолочные продукты питания.- В кн.: Медицинские аспекты микробной экологии (ред. Б.А.Шендеров). М.,1992. т.6. С. 17-20.

16. Молокеев А.В., Криницина Э.В., Ильина Р.М. Рецептуростроение комплексных эубиотиков, адекватных возрастному микробиоценозу человека.// Тез.конф. «Пробиотики и пробиотические продукты в профилактике и лечении наиболее распространенных заболеваний человека». М., 21-23 апреля 1999. С. 34-35.

17. Мурашева А.О., Новокшонов А.А., Учайкин И.Ф. Эффективность бифидокефира для лечения острых кишечных инфекций и коррекции дисбиоза у детей. // Ж. Микробиол. 1994 №6 С.108-110.

18. Поспелова В.В., Шабанская М.А., Морозова Л.В. Биологическая характеристика некоторых производственных и свежевыделенных штаммов лактобацилл.- В кн. Медицинские аспекты микробной экологии (ред.Шендеров Б.А.).М., 1992. Вып.6. С.54-57.

19. Поспелова В.В., Манвелова М.А., РахимоваН.Г. и др. Ацидофильные лактобактерии и их значение в системе средств, регулирующих бактериоценоз. - В кн.: Медицинские аспекты микробной экологии (ред. Шендеров Б.А.). М., 1991. С. 175-182.

20. Рахимова Н.Г., Ханина Г.И. и др. Биопрепараты, нормализующие микрофлору кишечника: итоги двадцатилетних исследований по проблеме.- В кн.: Антибиотики и колонизационная резистентность.(ред. Шендеров).М., 1990.

21. Тимакова Г.А. Кисломолочные продукты в структуре детского питания // Мат. Всерос.конференции «Пробиотики и пробиотические продукты в профилактике и лечении наиболее распространенных заболеваний человека». М., 21-23 апреля 1999 . С. 52-53.

22. Тюрин М.В. Антибиотикорезистентность и антагонистическая активность лактобацилл // Дисс.канд.мед.наук. М., 1990. 146с.

23) Учайкин В.Ф., Новокшонов А.А., Соколова Н.В. Современные подходы к лечению острых кишечных инфекций у детей // Педиатрия, 1996. №3. С. 49-54.

24. Шаманова Г.П. и др. Способ получения сухого кисломолочного продукта.//Авт. Свид. № 1285644. С.1986.

25. Шендеров Б.А. Медицинская микробная экология и функциональное питание.Т.1. М., Изд. Грантъ, 1998.

26. Шендеров Б.А. Медицинская микробная экология и функциональное питание.Т.2. М., Изд. Грантъ, 1998.

27. Шендеров Б.А. Медицинская микробная экология и функциональное питание.Т.3. М., Изд. Грантъ, 1998.

28. Питание детей грудного и раннего возраста . Сборник статей. М., ООО «Нью Информ». 2002.

29. Гигиенические требования к качеству и безопасности продовольственного сырья и пищевых продуктов. СанПин 2.3.2560-96.- М., Госсанэпиднормирование РФ, 1997.

30. ГОСТ 9225-84. Молоко и молочные продукты. Методы микробиологического анализа.

31. Инструкция по микробиологическому контролю производства на предприятиях молочной промышленности.- М.: Госагропром СССР, 1988.

32. Производство молока и молочных продуктов. Санитарные правила и нормы.- М.: Госкомсанэпиднадзор России, 1996.

33. Технологическая инструкция по приготовлению продуктов на молочных кухнях и специализированных участках. Министерство здравоохранения РФ. М., 1998.

34. ТУ 10-02-02-789-202-95 по приготовлению лечебно-профилактического кисломолочного продукта «Бифилин-М».

35. ТУ БГ-003- 00-98 по приготовлению лечебно-профилактического кисломолочного продукта «Бифилакт».

36. ОСТ 10-194-96 по приготовлению лечебно-профилактического кисломолочного продукта «Ацидолакт».

37. Bibiloni R. et al An enzymatic-colorimetric assay for the quantification of Bifidobacterium // J. Food protection, 2000, №3 322-326.

38. Kabir A.M. et al. Prevention of Helicobacter pylori infection by lactobacilli in a gnotobiotic murine model // Gut, 1997, v.41, 49-55.

39. Klebanoff S.J., R.W.Coombs. Viricidal effect of Lactobacillus acidophilus on human immunodeficiency virus type 1 : possible role in heterosexual transmission // J. Exp. Med. 1991, v.174, №1, 289-292.

40. Rolfe R.D. The role of probiotic cultures in the control of gastrointestinal health.// J. Nutrition, 2000,v.130, (2S Suppl), 396-402 .

41. Saxelin M., Ahokas M., S.Salminen. Dose Response of the faecal Colonisation of Lactobacillus Strain GG administered in two different Formulations // Micrib. Ecol. Health. Dis., 1993, v.6, 119-122.

42. Tannock G.W. Identification of lactobacilli and bifidobacteria // In : Probiotics : a critical review (ed Tannock ), Wymondham ( United Kingdom), Horizont Scientific press., 1999, 45-56.