Современные методы диагностики различных инфекций

Размещено на http://www.allbest.ru/

Размещено на http://www.allbest.ru/

ПЕНЗЕНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ

МЕДИЦИНСКИЙ ИНСТИТУТ

КАФЕДРА «МИКРОБИОЛОГИИ, ЭПИДЕМИОЛОГИИ И ИНФЕКЦИОННЫХ БОЛЕЗНЕЙ»

Учебно-методическое пособие для студентов медицинских вузов

Иммунология

Н.Н. Митрофанова

В.Л. Мельников

ПЕНЗА 2013

Учебно-методическое пособие для студентов медицинских вузов «Иммунология» составлено в соответствии с программой для студентов 2 курса специальности «Лечебное дело» по иммунологии 2010 г.

По каждой теме сформулирована цель занятия. Имеется план и методика выполнения различных экспериментальных работ. Приведены современные методы диагностики различных инфекций.

Руководство рекомендовано для самостоятельной подготовки студентов к практическим занятиям.

Рецензенты:

доктор медицинских наук, профессор, заведующий кафедрой аллергологии и иммунологии ГБОУ ДПО «Пензенский институт усовершенствования врачей» Б.А. Молотилов;

кандидат медицинских наук, доцент, заведующий кафедрой инфекционных болезней УО «Гомельский государственный медицинский университет» Е.Л. Красавцев.

Тема 1: Иммунологическая лаборатория. основные модели в иммунологии. особенности работы с иммунокомпетентными клетками

иммунитет инфекция злокачественный опухоль

Цель: Познакомиться с предметом и задачами иммунологии, с историей развития и основными теориями иммунитета. Выучить и научиться выполнять правила противоэпидемического режима и техники безопасности в иммунологической лаборатории. Изучить объекты исследования в иммунологии.

Вопросы для самостоятельной подготовки:

1. Предмет и задачи иммунологии

2. История развития иммунологии.

3. Инструктивные и конструктивные теории иммунитета.

4. Клонально-селекционная теория Бернета

5. Оснащение и режим работы иммунологической лаборатории

6. Основные подходы к стандартизации лабораторного иммунологического обследования

7. Объекты исследования в иммунологии

8. Инбредные животные.

9. Биологические материалы для исследований.

10. Особенности работы с иммунокомпетентными клетками.

11. Иммунологические методы, применяемые в эксперементальных и клинических исследованиях.

План

Программа:

1. Предмет и задачи иммунологии, история развития.

2. Теории иммунитета

3. Правила по технике безопасности.

4. Основное оборудование иммунологической лаборатории.

5. Объекты исследования в иммунологии

Демонстрация:

Оборудование лаборатории.

Приемы работы с бактериологической петлей, спиртовкой, чашкой Петри, бактериологической пробиркой.

Фламбирование бактериологической петли

Задание студентам:

1. Освоить работы с бактериологической петлей.

2. Освоить правила работы с чашкой Петри, бактериологической пробиркой, спиртовкой, шпателем.

3. Научиться фламбировать бактериологическую петлю.

4. Научиться забирать ПБА с поверхности питательной среды.

5. Заполнить таблицу: Теории иммунитета

Информационный материал

Все иммунологические исследования проводят в специальных лабораториях, структура и оборудование которых зависят от объектов исследования и от целевой направленности.

Объекты исследования:

1. Бактерии

2. Вирусы

3. Грибы

4. Простейшие

5. Человек

Целевая направленность:

1. Научные исследования

2. Диагностика заболеваний.

Изучение иммунного ответа и серодиагностика заболеваний человека и животных осуществляют в иммунологических и серологических лабораториях.

Иммунологические лаборатории могут входить в состав:

1. Центров Роспотребнадзора

2. Диагностических центров

3. Лабораторий крупных больниц

4. НИИ

В центрах Роспотребнадзора проводят серологические анализы материалов, полученных от больных и контактных лиц, обследуют бактерионосителей, проводят санитарно-микробиологические исследования объектов внешней среды.

В серологических лабораториях больниц и диагностических центров проводят исследования с целью диагностики инфекционных заболеваний.

В иммунологических лабораториях НИИ проводят научные исследования.

Иммунологические лаборатории размещаются в нескольких помещениях. В лаборатории предусмотрены:

1. Помещение для иммунологических исследований

2. Помещение для серологических исследований

3. Помещение для мойки и стерилизации посуды

4. Виварий с боксами

5. Регистратура

Оборудование: перечислить, указать назначение.

Иммунологические методы

1. Методы определения веществ, характеризующихся наличием АТ против них

Методы иммуноанализа

а) РА

б) Методы гемолиза

в) РП

г) ИФА, РИА, иммунофлюоресцентный анализ

2. Методы фракционирования

а) Выделение Ig солями серной кислоты

б) Методы хроматографии

в) Центрифугирование в средах с градиентами плавучей плотности

г) Электрофорез

д) Проточная цитофлюометрия

3. Иммуногистохимические методы

4. Методы молекулярной биологии (ПЦР)

1. Генетические методы

а) Методы направленного мутагенеза

б) Методы изучения экспрессии генов и методы картирования и исследования мутаций

5. Методы биотехнологии - клонирование молекул, ПЦР, получение рекомбинантных белков, создание инбридных генов

6. Методы изучения свойств нативных клеток иммунной системы в культурах in vitro

7. Методы исследования функции и взаимодействия клеток in vivo

По определению экспертов ВОЗ Клиническая иммунология - это клиническая и лабораторная дисциплина, занимающаяся изучением вопросов диагностики и лечения больных с различными патологическими состояниями, в основе которых лежат иммунологические состояния (механизмы) и состояния, в терапии и профилактике которых иммунопрепараты играют ведущую роль.

Клиническая иммунология и иммунологическая служба должны состоять из клинической и лабораторной составляющих.

Лабораторная иммунологическая диагностика - одно из направлений клинической лабораторной диагностики должна развиваться в соответствии с нормативной базой, принятой для подразделений лабораторной службы.

В РФ создана сеть лабораторной клинической иммунологии, разработана методология оценки иммунного статуса населения. В соответствии с решением Комиссии МЗ СССР (№16-1 от 22.08.1990 г.) «О развитии клинической иммунологии» в стране в некоторых городах (Москва, Владивосток, Омск, Тюмень, Екатеринбург) созданы региональные центры клинической иммунологии.

Для того, чтобы иммунологическая диагностика могла эффективно использоваться клиницистами, необходимо сформулировать основные принципы организации иммунологической лаборатории.

1. Востребованность клиницистами

2. Минимум «ненужных» анализов,

3. Преемственность лабораторных иммунологических исследований

4. Стандартные протоколы методов

5. Контроль качества

6. Рентабельность лаборатории.

Первый официальный документ, регламентирующий деятельность иммунологической лаборатории - Приказ МЗ СССР (№539 от 18.04.1986 г.) «Об организации лабораторий клинической иммунологии» обязывал определять 6 показателей периферической крови:

1. Количество Т-лимфоцитов

2. Количество В-лимфоцитов

3. Количество фагоцитирующих нейтрофилов

4. Иммуноглобулины А, М, G сыворотки крови

Успехи фундаментальной иммунологии, основанные на достижениях молекулярной биологии и генной инженерии, обусловили новый этап в развитии иммунологических лабораторий. В конце прошлого века стало очевидно, что большинство областей клинической медицины нуждаются в помощи иммунологических лабораторий. Инфекционисты, кардиологи, дерматологи, эндокринологи, ревматологи и другие врачи нуждаются в обнаружении и количественном определении специфических антител или аутоантител в сыворотке крови, на мембранах циркулирующих клеток и в тканях.

С заболеваниями, в патогенезе которых ведущую роль играют аллергические реакции, сталкиваются представители других клинических специальностей.

Таблица 1.Участие аллергических реакций разных типов в патогенезе патологических состояний, встречающихся в различных клинических дисциплинах

Тип аллергической реакции	Диагноз	Клиническая дисциплина
I	Анафилаксия	Внутренние болезни Реаниматология
I, II, III, IV	Лекарственная аллергия	Анестезиология Внутренние болезни Кожные болезни Стоматология
I - III	Ангионевротический отёк	Внутренние болезни
I - IV	Бронхиальная астма Хроническое обструктивное заболевание лёгких Бронхит	Пульмонология
I - IV	Атопический дерматит Экзема Контактный дерматит	Кожные болезни
I - IV	Пищевая аллергия	Гастроэнтерология
I - IV	Острый отит Хронический отит Ринит, синусит	ЛОР
IV - I	Конъюнктивит	Глазные болезни

Врачи разных специальностей ставят перед иммунологической лабораторией задачу выявления иммунодефицитных состояний. Диагноз «иммунодефицит» является лабораторным диагнозом.

При многих заболеваниях иммунологическая лаборатория необходима при оценке прогноза заболевания, стойкости ремиссии, вероятности рецидива, полноты выздоровления, при назначении иммунокорректирующей терапии.

Современная иммунологическая лаборатория имеет возможность провести:

1. Оценку иммунного статуса

2. Диагностику первичных иммунодефицитов

3. Аллергодиагностику

4. Диагностику аутоиммунных, инфекционных, онкологических заболеваний

5. Обеспечить трансплантацию.

Необходимо построение системы медицинских стандартов иммунологического обследования больного. Составляющие стандартизации иммунологического обследования:

1. Стандартизация показаний к лабораторному иммунологическому обследованию

2. Стандартизация определения лабораторных иммунологических показателей

3. Стандартизация интерпретации результатов.

1. Стандартизация показаний к лабораторному иммунологическому обследованию включает:

Цель и задачи обследования

Диагностика

Мониторинг

Назначение иммунокорректирующей терапии

Выбор показателя с позиций доказательной медицины

Определение объема иммунологического обследования.

2. Стандартизация определения лабораторных иммунологических показателей включает:

А) Стандартизация доаналитического этапа

Подготовка больного

Взятие биологического материала

Режим хранения и доставки материала в лабораторию

Регистрация и маркировка образцов

Первичная обработка биоматериала

Банкирование биоматериала

Б) Стандартизация аналитического этапа

Протоколы методов

Стандарты внутреннего контроля качества

Программы внешнего контроля качества

В) Стандартизация постаналитического этапа

Форма представления окончательного результата

Унификация значения нормы

3. Стандартизация интерпретации результатов включает:

Сопоставление результатов с клиническими данными

Сравнение диагностической информативности отдельных показателей

Алгоритмы диагностики

Заключение

Подтверждение диагноза

Определение фазы заболевания

Описание иммунной системы

Рекомендации

Проведение дополнительного обследования

Назначение иммунокорректирующей терапии

Специализированные программы внешней оценки качества

Объекты исследования

Для проведения фундаментальных исследований в иммунологии лучший объект - инбредные мыши.

Инбредные животные - животные, полученные путём инбридинга, т.е. последовательных близкородственных скрещиваний с целью получения гомозиготного и генетически идентичного потомства.

Среди потомков для дальнейших скрещиваний сначала отбирают особей по признакам внешнего сходства, в последних поколениях тестируют на совпадение групп крови и приживления кожных лоскутов. Через 20 поколений и более получают мышей с высокой степенью гомозиготности, обозначенных как чистая линия.

Главная цель выделения чистых линий - получение возможности много кратного повторения экспериментов на генетически одинаковых организмах, т.е. обеспечение воспроизводимости результатов исследования. Мыши стали основными экспериментальными животными в иммунологии, так как:

1. Имеют короткий срок беременности (21 сут), множественное потомство, что позволяет быстро вывести чистые линии

2. Себестоимость содержания

3. Структура и функции иммунной системы мыши и человека сходны

4. Выведение чистых линий мышей показало, что некоторые из них жизнеспособны, несмотря на гомозиготность, т.е. не всегда инбридинг приводит к вырождению.

Созданы линии мышей с заданными характеристиками, что позволяет выбирать особей для достижения конкретных целей. Характеристики животных разных линий документированы. Наиболее известные питомники: Джексоновская лаборатория в США ежегодно поставляет 2 млн. животных 2500 различных линий. 97% этих животных можно приобрести только у них. В каждом питомнике линии мышей имеют паспорт - систематизированы в базах данных. Известен гаплотип (Н-2) мышей разных линий, окрас, поведенческие реакции, особенности функционирования иммунной системы и др.

Кроме чистых линий выводят конгенных мышей. Это линии, отличающиеся небольшой частью генома. В основе выведения конгенных мышей лежит возвратное скрещивание - получение потомства в ряду поколений от скрещивания гетерозиготы (потомков гомозиготных родителей, генетически отличающихся между собой) с одним из исходных гомозиготных родителей. Это скрещивание проводится для внедрения комплекса Н2 донорской линии А в генотип основной линии В.

Например, при скрещивании маркирующей линии А и основной линии В получают гибриды первого поколения F1 (а/b, генерация I). При дальнейшем скрещивании гибридов F1 с особями основной линии В, получают потомство, состоящее из гомозигот (b/b) и гетерозигот (а/b) по комплексу Н2. В последующих скрещиваниях отбираются только гетерозиготные особи, имеющие признак А (Н2а), которые определяются по приживлению кожного трансплантанта от маркирующей линии А и положительной серологической реакции клеток крови с анти-А-сывороткой. По мере продолжения скрещиваний б-положительных особей с особями основной линии В доля генома линии А постоянно снижается, но при этом для дальнейшего размножения из потомства отбирают только тех особей, которые сохраняют признак А (Н2а). К 12 поколению (генерация №12) практически весь геном отбираемых после гибридизации мышей представлен основной линией В, за исключением признака А, по которому шёл отбор.

Дальнейшая задача состоит в переводе признака в гомозиготное состояние. Для этой цели гетерозигот (а/b) скрещивают между собой и отбирают для дальнейшего размножения только тех особей из потомства, которые отторгают кожный трансплантат, взятый от особи линии В и не дают реакции с анти-В-сывороткой. Этот отбор выявляет особей с присутствием признака В (Н2b) и гомозиготность по признаку А (Н2а). Таким образом, в результате применения данной схемы скрещивания, в геном основной линии В внедряется комплекс Н2 маркирующей линии А. С момента перевода комплекса Н2а в гомозиготное состояние констатируется получение новой конгентной (по отношению к основной) линии В.

Основные линии инбрендных мышей

1. Линии мышей с генетическими дефектами, затрагивающими иммунную систему. SCID - мыши, страдающие тяжелым иммунодефицитом в результате мутации в генах RAG, ответственных за перегруппировку генов Ig и Т-клеточного рецептора. Животные практически лишены Т- и В-лимфоцитов и могут жить в безмикробных условиях. Эти мыши не отторгают ксеногенные ткани.

В 1959 году Расселом описаны определенные частично инбредные мыши - спонтанные мутанты - самцы, которые вскоре после рождения покрывались чешуйчатой перхотью, отставали в росте, страдали диареей, умирали в возрасте 3 недель. У них наблюдалась массивная лимфоаденопатия, спленомегалия, аномальная инфильтрация лимфоцитами кожи, печени, лёгких. Мутантных самцов назвали «скурфи». В 2001 году было выявлено, что мутация «скурфи» затронула ген фактора транскрипции, локализованного в Х-хромосоме.

Nude (лишенные волосяного покрова) - выведенные в 1960 году мыши со спонтанной мутацией, в результате которой у мышей-гомозигот по данной мутации отсутствуют тимус и волосяной покров. Мутантный ген поддерживают при размножении мышей в гетерозиготном состоянии.

AKR - белые мыши. У 90% мышей к 6-8 месяцу развиваются «спонтанные» тимомы и лейкоз.

2. Мыши с аутоиммунной патологией. NZB - новозеландские чёрные мыши с аутоиммунной гемолитической анемией. Сывороточные антиэритроцитарные Ат мыши связывают эритроциты, но не агглютинируют их.

(NZBЧNZW) F1 - гибриды первого поколения чёрных и белых новозеландских мышей. У них спонтанно развивается синдром, напоминающий красную волчанку человека с гломерулонефритом. В крови содержатся Ат к ДНК.

ЕАЕ - мыши с аутоиммунным энцефалитом.

Биологические материалы для исследований в иммунологической лаборатории:

Цельная и периферическая кровь

Сыворотка крови

Плазма крови

Клетки крови, отделенные от жидкой фракции

Цереброспинальная жидкость

Синовиальная жидкость

Бронхоальвеолярный лаваж

Выделения слизистых секретов половых органов

Выделения из носа

Моча

Супернатанты, полученные от культивирования in vitro клеток

Гомогенаты тканей

Цитоплазматические и ядерные компоненты клеток

Биологический материал отличается по биохимическому составу, рН, ионной силе, вязкости. Каждая тест-система разработана строго для конкретного вида биоматериала и в 99% случаев - для сыворотки крови.

Тест-системы для анализа сыворотки крови не могут использоваться для работы с другими биоматериалами из-за высокой вероятности получения ложных результатов. Тест-системы для человека не могут применяться для работы с животными. Исключение - перекрестнореагирующие агенты (цитокин - трансформирующий фактор роста человека и свиньи).

Методические указания

1. Приготовление препаратов для микроскопического и серологического исследования.

Для приготовления препарата исследуемый материал берут из пробирки или чашки Петри бактериологической петлей или стерильной пипеткой.

В своей научной и практической деятельности микробиолог работает обычно с “чистыми” культурами микробов (рост микробов только одного определенного вида), добиваясь их получения из исследуемого материала, а затем поддерживая рост чистых культур в течение необходимого (иногда длительного) срока. При пересеве их с одной среды на другую или при извлечении части культуры для приготовления мазка необходимо соблюдать условия, обеспечивающие предохранение чистой культуры от загрязнения посторонними микробами. Сохранение чистоты культуры является основой бактериологической работы, так как только при этом условии возможно точное выявление всех свойств изучаемого микроба (морфологических, биохимических, серологических и др.).

Извлекают микробов из пробирки с помощью металлической (предпочтительно платиновой) проволоки в виде петли или иглы . Последняя может быть погружена в пробирку только после стерилизации ее в пламени спиртовки-фламбирования. При этом петля быстро накаливается и так же быстро остывает без повреждения металла. При прокаливании петлю или иглу следует держать в пламени вертикально для того, чтобы проволока на всем протяжении была накалена докрасна. Затем, проведя несколько раз через пламя спиртовки, стерилизуют и ближайший к проволоке отрезок стеклянной или металлической палочки, в которую вмонтирована петля.

Лишь после такой тщательной стерилизации петля может быть внесена в пробирку с культурой микроорганизмов. Прикосновение к культуре слишком горячей петли может повредить микробам. Поэтому рекомендуется остудить петлю, предварительно прикоснувшись ею к внутренней поверхности пробирки или же к питательной среде, свободной от бактериального налета (если имеют дело с твердой средой); если проволока недостаточно остыла, то среда при прикосновении петли с треском расплавляется или “кипит”.

2.Забор биологического материала с поверхности питательной среды в бактериологичесой пробирке.

1. Для извлечения культуры с целью приготовления мазка пробирку берут в левую руку между большим и указательным пальцем в почти горизонтальном положении; при этом должна быть хорошо видна вся поверхность питательной среды с культурой бактерий.

2.Простерилизовав петлю, безымянным пальцем и мизинцем правой руки (остальные пальцы правой руки заняты петлей) вынимают из пробирки ватную пробку и так держат ее во время последующих манипуляций;

3. Вынув пробку, стерилизуют края пробирки, обжигая их на пламени горелки,

4. Затем погружают петлю в пробирку, слегка касаясь внутренней поверхности стекла, для того, чтобы остудить петлю.

5.Остудив петлю, берут ею небольшое количество культуры (избыток культуры излишен) для приготовления мазка, стараясь не захватить при этом питательной среды;

6.Вынув петлю, опять обжигают край пробирки, а также слегка обжигают и пробку,

7. Пробкой закрывают пробирку.

8.Не выпуская петли из рук, ставят пробирку в штатив и приступают к приготовлению мазка .

3. Забор биологического материала с поверхности питательной среды в чашке Петри:

1. Для извлечения культуры с целью приготовления мазка чашку Петри берут в левую руку в горизонтальном положении; большим и указательным пальцами приоткрывают крышку чашки Петри, при этом должна быть хорошо видна вся поверхность питательной среды с культурой бактерий.

2.Простерилизовав петлю, вносят ее в чашку, слегка касаясь внутренней поверхности крышки чашки Петри, чтобы остудить петлю

3. .Остудив петлю, берут ею небольшое количество культуры для приготовления мазка, стараясь не захватить при этом питательной среды;

4.Вынув петлю, закрывают чашку и переворачивают ее вверх дном.

Контрольные вопросы

1. Какие методы иммунологических исследований Вам известны?

2.Что изучает клиническая иммунология?

3.Сформулируйте основные принципы организации иммунологических лабораторий?

4.Какие показатели периферической крови определяют в иммунологических лабораториях?

5. Что такое инбредные животные?

6. Почему в качестве инбредных животных в основном используют лабораторных мышей?

Список литературы

Обязательная:

1. Хаитов P.M., Игнатьева Г.А.,Сидорович И.Г. Иммунология:Учебник.--М.:Медицина,2000.-- 432 с : ил.(Учеб. лит. для студ. медвузов).

2. Ковальчук Л.В и др. Иммунология: практикум: учеб. пособие - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2012. - 176 с.

3. Поздеев О.К. Медицинская микробиология / под ред. акад. РАМН В.И. Покровского - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2001. - 768 с.

4. Борисов Л.Б. Руководство к практическим занятиям по микробиологии. М. 1997 г.

Дополнительная:

1. Генкель П.А., Микробиология с основами вирусологии. М.,1974 г.

2. Коротяев А.И., Бабичев С.А. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология: учебник для мед. вузов.- 3-е издание, испр. и доп. - СПб, СпецЛит. 2002. - 591 с.

3. Борисов Л.Б., Смирнова А.М., Медицинская микробиология, вирусология, иммунология, М., Медицина. 1994 г.

4. Тимаков В.Д., Левашов В.С., Борисов Л.Б. Микробиология. М. 1983 г.

Тема № 2: ИММУНИТЕТ: ВИДЫ ИММУНИТЕТА, НЕСПЕЦИФИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ ЗАЩИТЫ

Цель: изучить строение иммунной системы организма человека, строение и функции иммунокомпетентных клеток, изучить виды иммунитета и неспецифические факторы защиты организма. Познакомиться с основными этапами филогенеза и онтогенеза иммунной системы

Вопросы для самоподготовки:

1. Виды невосприимчивости макроорганизма к возбудителям инфекционных заболеваний (врожденная и приобретенная невосприимчивость, видовая невосприимчивость, естественная резистентность, иммунитет: естественный и искусственный, активный и пассивный).

2. Видовая невосприимчивость к возбудителям инфекционных болезней и ее механизмы.

3. Физиологические (барьерная функция покровов, антимикробное действие секретов, выведение микробов физиологическими путями, антагонистическое действие нормальной микрофлоры, барьерная и адсорбционная функция тканей, действие тканевых ингибиторов, фагоцитоз, антимикробное действие лизоцима, комплемента, интерфероны и др.) механизмы неспецифической резистентности

4. Механизм фагоцитоза. Макро- и микрофаги, их функциональные отличия. Завершенный и незавершенный фагоцитоз.

5. Комплемент. Пути активации.

6. Патофизиологические (стресс, воспалительная реакция) механизмы неспецифической резистентности

8. Иммунная система организма. Центральные и периферические органы иммунной системы.

9. Филогенез и онтогенез иммунной системы.

10. Иммунокомпетентные клетки. Клеточные и гуморальные механизмы иммунитета (Т и В системы).

План:

Программа:

1. Иммунитет, виды и формы иммунитета.

2. Неспецифические факторы защиты.

3. Фагоцитоз.

4. Система комплемента.

5. Воспалительная реакция.

6. Интерфероны.

7. Иммунная система организма

8.Филогенез и онтогенез иммунной системы

9. Иммунокомпетентные клетки

Демонстрация:

1. Схемы и таблицы с механизмами неспецифического иммунитета.

2. Микропрепарат незавершенного фагоцитоза гонококков.

Задание студентам:

1. Зарисовать схемы механизмов активации комплемента.

2. Зарисовать схему действия интерферонов.

3.Поставить Опыт действия лизоцима на различные виды микробов

4.Изучить микропрепарат незавершенного фагоцитоза гонококков. Зарисовать.

5.Заполнить таблицу: Особенности строения и функций иммунокомпетентных клеток

6.Заполнить таблицу: Эволюция иммунной системы

Информационный материал:

Иммунитет (от лат. immunitas -- неприкосновенный, находящийся под защитой, освобождение, избавление от болезни) -- это система биологической защиты внутренней среды многоклеточного организма (гомеостаза) от генетически чужеродных веществ экзогенной и эндогенной природы.

Факторы неспецифической резистентности:

* ареактивность клеток макроорганизма к патогенным микроорганизмам и токсинам, обусловленную генотипом и связанную с отсутствием на поверхности таких клеток рецепторов для адгезии патогенного агента;

* барьерная функция кожи и слизистых оболочек, которая обеспечивается отторжением клеток эпителия кожи и активными движениями ресничек мерцательного эпителия слизистых оболочек. Кроме того, она обусловлена выделением экзосекретов потовых и сальных желез кожи, специфических ингибиторов, лизоцима, кислой средой желудочного содержимого и другими агентами. Биологические факторы защиты на этом уровне обусловлены губительным воздействием нормальной микрофлоры кожи и слизистых покровов на патогенные микроорганизмы;

* температурная реакция, при которой прекращается размножение большинства патогенных бактерий.

* клеточные и гуморальные факторы организма.

В случае проникновения патогенов в организм включаются гуморальные факторы, к которым относятся белки системы комплемента, пропердин, лизины, фибронектин, система цитокинов (интерлейкины, интерфероны и др.). Развиваются сосудистые реакции в виде быстрого локального отека в очаге повреждения, что задерживает микроорганизмы и не пропускает их во внутреннюю среду. В крови появляются белки острой фазы -- С-реактивный протеин и маннансвязывающий лектин, которые обладают способностью взаимодействовать с бактериями и другими возбудителями. В этом случае усиливаются их захват и поглощение фагоцитирующими клетками, т. е. происходит опсонизация патогенов, а эти гуморальные факторы играют роль опсонинов.

К клеточным факторам неспецифической защиты относятся тучные клетки, лейкоциты, макрофаги, естественные (натуральные) киллерные клетки (NK-клетки, от англ. «natural killer»).

Фагоцитоз

Фагоцитозом (от phagein -- пожирать, cytos -- клетка) называется поглощение клетками каких-либо частиц с последующим их перевариванием (в большинстве случаев). Фагоцитоз микроорганизмов -- защитное приспособление организма.

Открытие этого явления и создание первой теории иммунитета как защитной реакции организма принадлежат И. И. Мечникову.

Дальнейшие работы отечественных исследователей установили подчиненность фагоцитоза, как и других иммунологиче-ских реакций, нервно-гуморальной корреляции, в частности, возможность условнорефлекторного воспроизведения фагоцитарной реакции.

Клетками фагоцитами являются лейкоциты (гранулоциты и моноциты), а также фиксированные клетки ретикуло-эндотелиальной ткани. Многих микробов лейкоциты способны фагоцитировать самостоятельно; наиболее же вирулентные микробы фагоцитируются только при участии антител -- опсонинов и тропинов.

Во всех случаях присутствие иммунной сыворотки способствует усилению фагоцитоза настолько закономерно, что по степени фагоцитоза можно судить о состоянии защитной способности организма (определение опсонического индекса)

Лизоцим

Одним из факторов видового иммунитета, губительно действующим на сапрофитную флору, а таюке на некоторых представителей патогенных микробов, является ферментоподобная субстанция, находящаяся в различных средах организма (плазма крови, перитонеальная жидкость, хрящ), а также в секретах различных желез (слезных, слюнных). При действии лизоцима на различные микроорганизмы наблюдается их лизис. Лизоцим был впервые открыт П. Н. Лащенковым в белке куриного яйца, который и является одним из источников его получения. Лизоцим получил некоторое применение в качестве биологического антисептика как в медицине (особенно в глазной клинике), так и в народном хозяйстве (как консервант некоторых продуктов).

Сила лизоцима определяется его титром -- наибольшим его разведением, вызывающим лизис культуры Micrococcus lysodeicticus. Для выявления силы действия лизоцима на различные виды микроорганизмов можно поставить следующий опыт.

Органы иммунной системы. Центральные органы иммунной системы.

Костный мозг является одновременно органом кроветворения и органом иммунной системы. Общая масса костного мозга равна 2,5 - 3 кг. Структурной основой (стромой) костного мозга является ретикулярная ткань, представленная ретикулярными клетками и образуемыми ими ретикулярными волокнами. К стромальным элементам кроме ретикулярных клеток (фибробластов костного мозга)относят остеогенные, адвентициальные, жировые, эндотелиальные клетки и макрофаги.

Выделяют красный и желтый костный мозг. По функциональному назначению в красном костном мозге различают миелоидную (гемоцитопоэтическую) и лимфоидную ткани, из которых идет образование клеток крови, моноцитов и В - лимфоцитов.

Желтый костный мозг представлен в основном жировой тканью, которая заместила ретикулярную. Кровеобразующие элементы в желтом мозге отсутствуют. Но при больших кровопотерях на месте желтого костного мозга могут вновь появиться очаги кроветворения за счет стволовых клеток, поступивших с кровью.

Тимус (вилочковая железа) расположен в грудной полости, позади верхней части грудины. Состоит из двух неодинаковых по форме и размеру долей, которые плотно прижаты друг к другу. Снаружи он покрыт капсулой из соединительной ткани. Вглубь органа от нее отходят тяжи - перегородки. Они делят всю ткань железы на маленькие дольки. В вилочковой железе различают наружное более темное корковое вещество, где господствуют лимфоциты, и центральное, светлое мозговое вещество, где располагаются железистые клетки. Под капсулой находится базальная мембрана, на которой в один слой лежат плоские эпителиоретикулоциты. Две главные артерии входят в тимус из капсулы, разветвляясь, идут по междольковым перегородкам и входят в мозговое вещество, окруженные тонким слоем рыхлой волокнистой соединительной ткани и эпителиоретикулоцитами с базальной мембраной. По мере продвижения сосудов к корковому веществу и ветвления на капилляры количество сопровождающей соединительной ткани уменьшается. Среди клеток периваскулярной соединительной ткани встречаются фибробласты, лейкоциты, тучные клетки и макрофаги. В результате этого просвет капилляра в корковом веществе оказывается отделенным от лимфоэпителиальной основы эндотелиоцитами на непрерывной базальной мембране, периваскулярным пространством, базальной мембраной эпителиоретикулоцита и его цитоплазмой - своеобразным гематотимусным барьером. Полагают, что этот барьер не пропускает антигены кровотока к развивающимся Т-лимфоцитам. В мозговом веществе гематотимусный барьер менее плотен. Венозная система складывается из сосудов, повторяющих ход артерий, и добавочных сосудов, обеспечивающих отток из коркового вещества, минуя мозговое.

Лимфатические капилляры коркового и мозгового вещества образуют во внутреннем мозговом веществе выносящие лимфатические сосуды, направляющиеся в соединительнотканные перегородки и далее в региональные (медиастинальные) лимфоузлы.

Основная масса лимфоцитов покидает тимус через стенку венозных отделов капилляров и посткапиллярных венул на границе коркового и мозгового вещества и лишь небольшая их часть - по лимфатическим путям.

Бурса (сумка Фабрициуса) является центральным органом иммунной системы у птиц. У млекопитающих и человека этой сумки нет. Бурса представляет нечто подобное человеческому аппендиксу, слепому отростку кишечника. Только аппендикс располагается в середине кишечника, а Фабрициева сумка вблизи анального отверстия у птиц. Основным структурным элементом сумки служит лимфоидный узелок с корковой и мозговой зонами. Корковая зона содержит несколько плотных слоев лимфоцитов. Под ними расположен базальный эпителиальный слой. В центральной части среди ретикулоцитов находятся преимущественно малые лимфоциты. По периферии мозговой зоны расположены менее зрелые базофильные клетки лимфоидного ряда.

Клеточный состав тимуса полностью обновляется за 4 -6 дней. Из тимуса в периферические лимфоидные ткани мигрирует около 5 % новообразующихся лимфоцитов. Для большинства других клеток, образующихся в тимусе, он же становится «могилой»: клетки погибают в течение 3 - 4 дней. Причина гибели не расшифрована.

Периферические органы иммунной системы

Селезенка - кроветворный орган, а также периферический орган иммунной системы, располагается слева от желудка, в левом подреберье, на пути тока крови по главным магистральным сосудам. Ежедневно через нее проходит около 800 мл крови. Это мощный фильтр для чужеродных белков, погибших форменных элементов и микроорганизмов, попавших непосредственно в кровоток. Селезенка является главным источником антител при внутривенном введении антигена. Именно в селезенке раньше, чем в каком-либо ином органе, в ответ на введение антигенных частиц начинается синтез JgM. Селезенка способна продуцировать факторы, стимулирующие фагоцитоз лейкоцитами и макрофагами.

Лимфатические узлы - выполняют роль биологических фильтров. Они расположены на пути следования лимфы по лимфатическим сосудам от органов и тканей к лимфатическим протокам. Они находятся в хорошо защищенных местах и в области суставов.

Система лимфоэпителиальных образований

Лимфоидные образования глотки - это 6 миндалин лимфоидного глоточного кольца. Каждая миндалина - это довольно крупное скопление лимфоидной ткани. Поверхность миндалин неровная, как будто изрыта оврагами. Эти складки называют криптами. Они задерживают частички пищи, пыли и т.д. Микроорганизмы попадая сюда, могут размножаться, что служит сигналом для запуска иммунологических реакций.

Лимфоидные образования пищевода. В толще складок слизистой оболочки пищевода, а также между ними, в глубине его борозд расположены лимфоидные узелки. Находясь на пути пищевых масс, а, следовательно, и антигенного воздействия, лимфоидные узелки осуществляют контроль и защиту стенок органа от генетически чужеродного материала. Лимфоидные узелки формируют цепочки на всем протяжении органа, повторяя извилистый ход складок. Кроме того, в стенках пищевода присутствуют так называемые диффузно рассеянные клетки лимфоидного ряда, залегающие между цепочками.

Лимфоидные образования желудка. В слизистой оболочке желудка обнаруживаются лимфоциты, относящиеся к В- и Т- популяциям, плазматические клетки и макрофаги. На разных этапах онтогенеза скопления лимфоидных узелков в различных частях желудка колеблется.

Лимфоидные образования кишечника. Лимфоидные образования в стенках толстой и тонкой кишок имеют анатомические особенности. Строение и имммунологическая функция этих органов соответствуют физиологическому назначению тонкой и толстой кишок.

Лимфоидный аппарат включает в себя: лимфоидные (пейеровы бляшки) одиночные лимфоидные узелки, диффузно расположенные лимфоциты. У начала толстой кишки, располагается червеобразный отросток с его лимфоидными узелками.

Лимфоидные образования органов дыхания. В стенках органов дыхания, в которые вместе с воздухом попадают чужеродные частицы, имеется хорошо развитый аппарат иммунной защиты. Это скопления лимфоидной ткани расположенные в слизистой оболочке гортани, трахеи и бронхов под покровным эпителием, а также рассеянные в слизистой оболочке довольно многочисленные клетки лимфоидного ряда, получившие название лимфоидной ткани, ассоциированной с бронхами.

Скопления лимфоидной ткани (лимфоидные узелки) зависит от возраста, а также функционального состояния организма

Лимфоидные образования мочевыводящих путей. Лимфоидные скопления (узелки) в стенках мочевыводящих путей выполняют «сторожевые» функции по отношению к тем чужеродным веществам, которые попадают в них извне восходящим путем или образуются в верхних их отделах.

Таблица 1. Особенности строения и функций иммунокомпетентных клеток

Клетка	Функция
Микрофаги: Фагоцитоз нейтрофилы базофилы эозинофилы	Фагоцитоз
Макрофаги: моноциты гистиоциты	Фагоцитоз, участие в иммунном ответе, синтез медиаторов и биологически активных веществ
0-(ни-В/ни-Т-) лимфоциты:
NK-клетки (нормальные киллеры)	Неспецифическая цитотоксичность.
К-клетки	Антителозависимая клеточная цитотоксичность.
Т-лимфоциты:
1 Т-хелперы	Участие в иммунном ответе (стимуляция)
Т-супрессоры	Участие в иммунном ответе (ингибиция)
Т-киллеры	Антигензависимая клеточная цитотоксичность
Т- эффекторы	Участие в ГЗТ и отторжении трансплантата
В-лимфоциты	Участие в иммунном ответе (предшественники антителопродуцирующих клеток - плазмоцитов

Таблица 2. Эволюция иммунной системы

Этап эволюции или фактор отбора	Элементы иммунной системы
Одноклеточные организмы	Распознавание и различение
Многоклеточные (включая колониальные)	Система гистосовместимости, аллогенное распознавание и кратковременная иммунологическая память
Мезодерма и кровеносная система, разделение функций питания и защиты	Свободноциркулирующие и более разнообразные виды клеток крови, клеточный иммунитет и эритроциты
Рак и вирусные инфекции, сопряженные с усложнением организмов и возрастанием продолжительности жизни	Иммунологический надзор со стороны собственных клеток для выявления инфицированных и раковых клеток
Предковые позвоночные	Совершенствование распознавания и различения
Низшие позвоночные: увеличение размеров и продолжительности жизни, меньшая, чем у беспозвоночных способность к размножению	Настоящие лимфоциты, лимфоидная ткань и продукция антител (Ig M), долговременная иммунологическая память
Выход на сушу, воздействие радиации и развитие сосудистой системы с высоким давлением крови	Костный мозг, дополнительные классы антител, Т- и В-лимфоциты, усложнение лимфоидных органов, ЛТК
Амниоты (рептилии, птицы, млекопитающие), утрата свободноживущих личиночных форм	Развитие дифференцировки иммунокомпетентных клеток для большего разнообразия реакций и эффективности иммунной системы
Гомойотермия, создающая благоприятные условия для роста патогенных микроорганизмов	Повышение эффективности иммунной системы, интеграция клеточных и гуморальных реакций, центры размножения во вторичных лимфоидных органах, лимфоузлы
Живорождение, взаимосвязь организма матери и плода	Дополнительная тонкая регуляция иммунной системы для предотвращения отторжения плода

Методические указания.

Опыт действия лизоцима на различные виды микробов.

В 5 пробирок наливают по 0,9 мл 0,5% раствора поваренной соли, после чего в первую пробирку добавляют 0,1 мл лизоцима и готовят десятикратные разведения путем переноса из предыдущей пробирки в последующую по 0,1 мл до разведения 1 : 10000 (четвертая пробирка). Пятая пробирка, контрольная, она не содержит лизоцима. Во все пробирки вносят по 0,5 мл стандартизованной одномиллиардной взвеси Е. coli , содержимое пробирок перемешивают и помещают в термостат при 37° на 3 часа, после чего учитывают результаты и отмечают наибольшее разведение лизоцима, вызвавшее лизис микроорганизмов.

Для приготовления одномиллиардной взвеси бактерий необходимо взять односуточную культуру бактерий на скошенном МПА и смыть 0,5% раствором поваренной соли. Для смыва в пробирку с культурой микробов стерильно добавляют пипеткой 1--1,5 мл 0,5% раствора поваренной соли, вращая пробирку между ладонями. Полученную суспензию стерильной пипеткой перемещают в пустую пробирку и стандартизуют по оптическому стандарту, разводя имеющуюся суспензию микробов до 1 млрд. микробных тел в 1 мл 0,5% раствором хлористого натрия.

Морфология бактерий - размер, форма и взаимное расположение бактериальных клеток

Схема описания морфологии бактерий в мазке:

1. Форма

2. Размеры

3. Характер концов (для палочек)

4. Взаиморасположение

Контрольные вопросы

1. Какие виды и формы иммунитета Вы знаете?

2. Перечислите факторы неспецифической резистентности.

3. Охарактеризуйте пути активации комплемента.

4. Механизмы действия интерферонов.

5. Назовите стадии фагоцитоза

6. Какова биологическая роль незавершенного фагоцитоза?

Список литературы

Обязательная

1.Хаитов P.M., Игнатьева Г.А.,Сидорович И.Г. Иммунология:Учебник.--М.:Медицина,2000.-- 432 с : ил.(Учеб. лит. для студ. медвузов).

2.Ковальчук Л.В и др. Иммунология: практикум: учеб. пособие - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2012. - 176 с.

3.Поздеев О.К. Медицинская микробиология / под ред. акад. РАМН В.И. Покровского - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2001. - 768 с.

4.Борисов Л.Б. Руководство к практическим занятиям по микробиологии. М. 1997 г.

Дополнительная

1.Генкель П.А., Микробиология с основами вирусологии. М.,1974 г.

2.Коротяев А.И., Бабичев С.А. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология: учебник для мед. вузов.- 3-е издание, испр. и доп. - СПб, СпецЛит. 2002. - 591 с.

3.Борисов Л.Б., Смирнова А.М., Медицинская микробиология, вирусология, иммунология, М., Медицина. 1994 г.

4.Тимаков В.Д., Левашов В.С., Борисов Л.Б. Микробиология. М. 1983 г.

Тема № 3: ИММУНИТЕТ: АНТИГЕНЫ И АНТИТЕЛООБРАЗОВАНИЕ, ИММУННЫЕ РЕАКЦИИ

Цель: Познакомиться со строением и свойствами антигенов и антител, познакомиться с основными формами иммунного реагирования. Познакомиться с особенностями протекания реакций Аг+Ат. Научиться осуществлять постановку ориентировочной и развернутой реакции агглютинации

Вопросы для самоподготовки:

1. Антигены. Химическая природа, антигенность, иммуногенность, специфичность, детерминантные группы. Гаптены. Т-зависимые и Т-независимые антигены. Микробные антигены,

2. Антитела. Классификация, строение. Биологическая роль.

3. Схема иммунного ответа. Первичный и вторичный иммунный ответ.

4. Динамика накопления антител, фазы антителообразования. Иммунизация и гипериммунизация, ревакцинация.

5. Механизм реакций АГ+АТ. Стадии и компоненты

6. Реакция агглютинации.

7. Получение диагностических препаратов (агглютинирующая сыворотка, диагностикум.

План:

Программа:

1. Строение и свойства антигенов.

2. Строение и свойства антител.

3. Основные формы иммунного реагирования.

4. Методы выявления и идентификации специфических антигенов, основанные на реакциях связывания антигена с антителами, проявляющихся изменением свойств антигена: реакция агглютинации.

Демонстрация:

1. Наборы ингредиентов для реакции агглютинации.

2. Постановка ориентировочной реакции агглютинации

3.Результаты постановки развернутой реакции агглютинации

Задание студентам:

1.Зарисовать схемы первичного и вторичного иммунного ответа, отметить сходства и различия.

2.Поставить ориентировочную реакцию агглютинации на стекле с целью идентификации выделенной чистой культуры бактерий. Сделать заключение по результатам реакции.

3. Поставить развернутую реакцию агглютинации для определения серотипа бактерий.

4.Протоколировать и оценить результаты развернутой реакции агглютинации.

Информационный материал

Основная схема иммунного ответа

1. Антиген, попадая в организм, в первую очередь сталкивается с естественными барьерами - кожей, слизистыми оболочками и т.д. Многим микроорганизмам не удается преодолеть их.

2. Если вторжение все же произошло, антиген встречается с фагоцитирующими клетками.

3. Макрофаг (фагоцит) пожирает и переваривает антиген.

4. Если он не справляется с ним самостоятельно, то представляет на поверхности своей мембраны информацию о проникшем враге. Это сигнал Т- или В- лимфоцитов.

5. В ответ на полученный сигнал о вторжении в периферических органах иммунной системы начинается отбор клеток, необходимых для борьбы именно с этим антигеном. Образуется клон соответствующих клеток. Одновременно формируется небольшое количество клеток памяти.

6. «Солдаты» вступают в бой.

Иммунологический ответ по клеточному типу

Иммунный ответ на различные антигены может происходить по-разному. Если в борьбу вступают Т-клетки, это называется иммунный ответ по клеточному типу.

1. Антиген встречает первые препятствия - кожу и т.д.

2. Макрофаг поглощает антиген и представляет его на мембране.

3. Информация о противнике передается Т-хелперу.

4. Т-хелпер способствует формированию клона Т-киллеров. Образуются клетки памяти.

5. Т- киллеры способны разрушать вторгшиеся «чужие» клетки и клетки, зараженные вирусом.

6. Реакция завершается при участии Т- подавляющих клеток.

Иммунологический ответ по гуморальному типу с помощью Т- хелперов

При проникновении бактерий и некоторых вирусов может понадобиться гуморальный ответ.

Возможны два его варианта: с участием Т- хелперов и без их вмешательства.

1. Проникновение антигена.

2. Поглощение антигена и появление информации о нем на макрофаге.

3. Передача информации Т- хелперу.

4. Т - хелпер способствует активации В-клеток. Образуются клетки памяти.

5. В - клетки превращаются в плазматические клетки, способные к синтезу антител.

6. Плазматическая клетка вырабатывает именно те антитела, которые нужны для борьбы с поступившим антигеном. Они связывают его, образуя иммунный комплекс.

7. Комплекс антиген - антитело захватывается макрофагом и разрушается.

8. Завершение иммунологической реакции происходит при участии Т- подавляющих клеток.

Иммунологический ответ по гуморальному типу без помощи Т- клеток

1. Проникновение антигена.

2. Поглощение антигена и представление его на макрофаге.

3. Информация с макрофага передается на В - клетку.

4. В - клетки превращаются в плазматические клетки, вырабатывающие антитела.

5. Антитела связывают антигены.

6. Комплекс антиген - антитело удаляется макрофагом.

Для развития эффективного иммунного ответа необходимо участие целого ряда эффекторных и регуляторных клеток иммунной системы, клеток, участвующих в реакциях воспаления, гемопоэтических и других типов клеток. Взаимодействие между этими клетками осуществляется с помощью цитокинов.

Цитокины - эндогенные низкомолекулярные белковые регуляторы, принимающие участие в наиболее эффективном проявлении иммунного ответа.

Цитокины в основном играют регулирующую роль в межклеточных взаимодействиях, активируя или, ингибируя активность определенных клеток. Некоторым цитокинам свойственна прямая эффекторная функция.

Цитокины секретируются разными типами клеток, в основном разными популяциями лейкоцитов, и действуют локально от клетки к клетки, соединяясь со специфическими высокоаффинными рецепторами.

Термином «цитокины» объединяют разнообразные факторы роста, интерфероны, хемокины и интерлейкины. В настоящее время идентифицировано около 80 цитокинов. Однако предполагают, что их количество приближается к 1000.

Реакция агглютинации

Агглютинацией называется склеивание микробов или других клеток при воздействии на них иммунной сыворотки, содержащей антитела-агглютинины. Реакция агглютинации проявляется в том, что в равномерной взвеси клеток, например, бактерий, при добавлении иммунной сыворотки происходит скучивание клеток, образование зернышек или хлопьев, которые постепенно оседают на дно, жидкость же над осадком совершенно просветляется . Однако зернышки или хлопья образуются только в том случае, если реакция происходит в присутствии электролитов. Таким образом, для проявления реакции агглютинации нужно иметь: 1) антиген (агглютиноген) в виде взвеси клеток, 2) антитела (агглютинины в виде иммунной сыворотки) и 3) электролиты -- обычно физиологический раствор.

Внешнее проявление положительной реакции агглютинации бактерий имеет двоякий характер в зависимости от свойств антигена: у безжгутиковых бактерий, имеющих только один соматический или 0-антиген, происходит склеивание непосредственно самих микробных клеток, и образующиеся кучки имеют вид мелких компактных зернышек. Такая агглютинация называется тонкозернистой; она происходит медленно -- в течение 18--22 часов. У бактерий со жгутиками имеется два антигена -- соматический, О-антиген, в самой клетке и жгутиковый, Н-антиген, находящийся в жгутиках. Клетки склеиваются друг с другом жгутиками и образуют рыхлые крупные хлопья.

Такая агглютинация называется крупнохлопчатой; она наступает быстро -- в течение 2--4 часов.

Реакция агглютинации, благодаря своей специфичности, простоте постановки и демонстративности, получила широкое распространение в микробиологической практике для диагноза многих инфекционных заболеваний: брюшного тифа, паратифов, дизентерии, холеры, сыпного тифа, бруцеллеза и т. д. Ею пользуются с диагностической целью в двух направлениях.

1. Для определения выделенного из какого-либо субстрата неизвестного микроба. В этом случае агглютинацию ставят с определенной, заранее приготовленной агглютинирующей сывороткой, полученной путем иммунизации кроликов определенным видом бактерий и, следовательно, содержащей агглютицины в отношении этих бактерий.

В качестве антигана берут культуру неизвестного исследуемого микроба; положительный (результат (реакции указывает, что неизвестный микроб идентичен тому, который был взят в качестве антигена для приготовления агглютинирующей сыворотки.

2. Для обнаружения агглютининов к тому или другому определенному виду бактерий в сыворотке больного. В этом случае для агглютинации берут определенную лабораторную культуру бактерий (или несколько культур разных видов) в качестве антигена и сыворотку больного; положительный результат агглютинации указывает на то, что в сыворотке больного имеются агглютинины к определенному, известному виду микроба, т. е. что данный микроб является возбудителем заболевания, в процессе которого в сыворотке больного накопились защитные антитела.

В качестве примера можно привести использование реакции агглютинации для диагноза брюшного тифа. На первой неделе болезни в посеве из крови больного обнаруживают бактерий и для того, чтобы установить, что эти бактерии являются брюшнотифозными палочками, ставят реакцию с лабораторной брюшнотифозной агглютинирующей сывороткой: если наступит агглютинация выделенных из крови больного неизвестных бактерий, это значит, что они являются брюшнотифозными бактериями.

Начиная со второй недели болезни, диагноз брюшного тифа устанавливают путем обнаружения в сыворотке больного антител-агглютининов. Для этого ставят реакцию агглютинации с сывороткой больного и с лабораторной культурой брюшнотифозных бактерий (обычно в опыт вводят еще культуры паратифа А и паратифа В): наступившая агглютинация покажет наличие агглютининов к брюшнотифозной палочке (или одной из паратифозных) в сыворотке больного, которые появились у него в процессе заболевания брюшным тифом. Эта реакция носит наименование реакции Видаля и широко применяется для диагноза брюшного тифа. Аналогичная реакция агглютинации для постановки диагноза сыпного тифа называется реакцией Вейль-Феликса, для диагноза бруцеллеза -- реакцией Райта.

Получение иммунных сывороток

Иммунные сыворотки, применяемые в медицинской практике, содержат антитела к микробам или их токсинам: они готовятся для лечебных и диагностических целей. Лечебные сыворотки применяются для лечения инфекционного заболевания так как введение больному большого количества готовых антител приводит к гибели микробов -- возбудителей болезни или к обезвреживанию их ядов. Эти сыворотки реже применяются с профилактической целью, так как они сообщают лишь пассивный иммунитет, длящийся короткое время (2--3 неделя).