Фармакогностическое изучение сырья фенхеля обыкновенного в сравнительном аспекте

Содержание суммы полифенольных соединений (Х, %) в сырье в пересчете на галловую кислоту вычисляли по формуле:

А ^. 25 ^. 100 ^. 25^. 100

Х = --------------------------------,

540 ^. m ^. 1 ^. (100 - W)

где А - оптическая плотность;

m - масса навески, г;

540 - коэффициент удельного поглощения раствора кислоты галловой в 40% спирте этиловом при длине волны 270 нм;

W - потеря в массе при высушивании сырья, %.

Результаты определения содержания полифенольных соединений представлены в таблице 8.

Таблица 8. Содержание полифенольных соединений в сырье фенхеля лекарственного (среднее из 5 измерений)

Как видно из данных таблицы 8 содержание полифенольных соединений (в пересчете на галловую кислоту) также максимально в траве, собранной в фазе цветения.

Для проведения сравнительного анализа результаты количественного определения суммы окисляемых полифенолов по двум методам мы представили в виде диаграммы на Рис. 3. 4.

Рис. 3.4. Диаграмма результатов сравнения содержания окисляемых полифенолов по двум методам

Данные диаграммы свидетельствуют о том, что содержание суммы полифенольных соединений в пересчете на галловую кислоту, определенное спектрофотометрическим методом, значительно выше нежели данные, полученные в ходе титриметрического метода. Это можно объяснить тем, что спектрофотометрический метод более чувствителен и, как следствие, дает более точные результаты. А также тем, что содержание фенольных соединений определяется в сумме и в случае пересчета на галловую кислоту возможно определение и других фенольных соединений.

8.7 Определение содержания органических кислот

5,0 г (точная навеска) измельченного сырья помещали в колбу со шлифом на 250 мл, заливали 200 мл воды очищенной и выдерживали 2 часа на кипящей водяной бане, охлаждали, количественно переносили в мерную колбу на 250 мл, доводили объем до метки (раствор А). 10 мл раствора А помещали в колбу на 500 мл, добавляли 250 мл свежепрокипяченой воды, 2 капли 1% спиртового раствора фенолфталеина, 1каплю 0,1% раствора метиленового синего и титровали 0,1 М раствором гидроксида натрия до появления в пене лилово-фиолетового окрашивания. Содержание свободных органических кислот (Х, %) в пересчете на яблочную кислоту в абсолютно сухом сырье высчитывали по формуле:

V ^. 0,0067^. 250 ^. 100 ^. 100 ^.КП

Х = ---------------------------------------,

m ^. 10 ^. (100 - W)

где 0,0067 - количество яблочной кислоты которая соответствует 1 мл раствора 0,1 М гидроксида натрия, г;

V - объем гидроксида натрия, мл;

m - масса навески, г;

W - потеря в массе при высушивании сырья, %.

Таблица 9. Содержание органических кислот в сырье фенхеля обыкновенного (среднее из 5 измерений)

Данные таблицы свидетельствуют, что органических кислоты максимально накапливаются в траве, собранной в фазе до цветения.

8.8 Определение содержания аскорбиновой кислоты

20,0 г грубо измельченного сырья (точная навеска) помещали в фарфоровую ступку и растирали с 5,0 г стеклянного порошка. Постепенно добавляли при перемешивании 300 мл воды очищенной. Настаивали 10 минут и отфильтровывали. В коническую колбу на 50-100 мл вносили 1 мл извлечения, 1 мл 2% хлористоводородной кислоты, 13 мл воды очищенной, перемешивали. Оттитровывали 0,001 М раствором 2,6 - дихлорфенолиндофенолятом натрия до розовой окраски, не исчезающей 30-60 секунд. Титрование проводили не более 2-х минут. Содержание аскорбиновой кислоты (Х, %) в абсолютно сухом сырье высчитывали по формуле:

V ^. 0,000088^. 300 ^. 100 ^. 100^. КП

Х = ---------------------------------------,

m ^. 1 ^. (100 - W)

где 0,000088 - титр тиранта по определяемому веществу, г/мл;

V - объем титранта, пошедшего на титрование, мл;

m - масса навески, г;

W - потеря в массе при высушивании сырья, %.

Таблица 10. Содержание аскорбиновой кислоты в сырье фенхеля обыкновенного (среднее из 5 измерений)

Как видно из данных таблицы содержание аскорбиновой кислоты в объектах исследования незначительно и максимально в плодах.

Данные диаграммы на Рис. 3.5. позволяют сделать вывод о динамике накопления различных групп БАВ в зависимости от фазы вегетации.

Наибольшее количество органических кислот накапливается в траве, заготовленной в фазе до цветения. Гидроксикоричные кислоты, аскорбиновая кислота, полисахариды и дубильные вещества количественно преобладают в траве, собранной в фазе цветения, а содержание кумаринов максимально в зонтиках, остающихся после обрушения плодов.

Рис. 3.5. Обобщенная диаграмма содержания определенных групп БАВ в сырье фенхеля обыкновенного

9.Получение липофильной фракции из плодов фенхеля

9.1 Получение липофильной фракции

Липофильную фракцию получали из двух видов сырья: плодов и травы фенхеля в аппарате Сокслета (рис. 4.1.) путем исчерпывающего обезжиривания сырья хлороформом по стандартной методике [10].

Рис. 4.1 Схема аппарата Сокслета

Примечание: 1 - экстрактор; 2 - пакетик с сырьем; 3 - холодильник; 4 - приемник; 5 - электрическая плитка с закрытой спиралью.

Достигнув полноты извлечения, растворитель отгоняли и приемник взвешивали, предварительно высушив его в сушильном шкафу при 90-95⁰ до постоянного веса. Выход липофильных веществ (%) вычисляли по формуле:

(А - Б) ^. 100

Х = ------------------- ,

В

где А - вес приемника с липофильным экстрактом;

Б - вес пустого приемника;

В - навеска сырья.

Результаты определения содержания липофильных веществ в плодах фенхеля представлены в таблице 11.

Таблица 11. Содержание липофильных веществ в плодах фенхеля обыкновенного (среднее из 5 измерений)

Как видно из таблицы 11, содержание липофильных веществ в плодах фенхеля составило 7, 88 %, что на 1,84 % больше, чем в траве.

9.2 Хроматографическое изучение качественного состава липофильной фракции

Изучение качественного состава липофильной фракции из травы и плодов фенхеля проводили методом двумерной тонкослойной хроматографии на пластинках «Силуфол UV₂₅₄» в системах растворителей гексан-ацетон (6:2) - I направление и гексан-ацетон (6:4) - II направление. Идентификацию веществ проводили по характерной окраске в видимом, УФ-свете и после обработки соответствующими хромогенными реактивами.

Локализацию хлорофиллов на хроматограмме определяли по характерной темно-зеленой окраске пятен в видимом свете и по ярко-красной флуоресценции в УФ-свете. Кумарины имели голубую флуоресценцию в УФ-свете и оранжевое окрашивание после обработки диазореактивом. После обработки 10% раствором кислоты фосфорномолибденовой в этаноле пятна окрасились в темно-синий цвет на зеленом фоне, а после обработки хроматограммы 2% раствором n-диметиламинобензальдегида в смеси с хлористоводородной кислотой с последующим высушиванием хроматограммы при 80-90?С в течение 5 минут приобрели розово-сиреневое окрашивание, что позволило отнести их к каротиноидам. Флавоноиды идентифицировали по желтой флуоресценции в УФ-свете и по грязно-желтой окраске после обработки 2% спиртовым раствором алюминия хлорида.

Схемы хроматограмм представлены на рисунке 5.2. и 5.3.

Рис. 4.2. Схема хроматограммы липофильного экстракта из травы фенхеля обыкновенного

Рис. 4.3. Схема хроматограммы липофильного экстракта плодов фенхеля обыкновенного

В результате хроматографического изучения липофильной фракции из плодов и травы фенхеля было обнаружено 18 и 12 веществ соответственно, из них идентифицировано 3 темно-зеленых вещества в траве, что свидетельствует о наличии хлорофиллов, 2 вещества в траве и 6 веществ в плодах имели грязно-желтую окраску и были отнесены к флавоноидным агликонам, окрашенные в синий и сиреневый цвета 5 веществ в траве и 6 веществ в плодах были определены как каротиноиды, 2 и 6 оранжевых вещества в траве и плодах соответственно идентифицированы как кумарины.

Таким образом, в липофильных фракциях, полученных из плодов и травы фенхеля обыкновенного, были обнаружены вещества флавоноидного и терпеноидного характера, кумарины и хлорофиллы.

Выводы

1. Анализ данных литературы показал, что фенхель обыкновенный широко культивируется на территории Украины и используется не только как пищевое, но и как лекарственное растение. Однако основным видом лекарственного сырья фенхеля являются плоды, содержащие значительное количество эфирного масла и которые достаточно хорошо изучены, химический состав травы изучен недостаточно. Поэтому углубленные фитохимические исследования травы являются актуальными.

2. С помощью качественных реакций и тонкослойной хроматографии в траве фенхеля были обнаружены вещества гликозидной природы, полисахариды, гидроксикоричные кислоты, органические кислоты, аминокислоты, кумарины, флавоноиды, конденсированные дубильные вещества, сапонины.

3. Определенное количественное содержание отдельных групп БАВ показывает, что наибольшее их количество накапливается именно в траве, заготовленной в фазе цветения, которая может стать их сырьевым источником. Кумарины же превалируют в зонтиках, оставшихся после обрушения плодов, что может быть основой для более рационального использования всего растения - фенхеля обыкновенного.

4. Методом тонкослойной хроматографии изучен качественный состав полученных липофильных фракций. Установлено наличие каротиноидов, хлорофиллов, флавоноидов и кумаринов.

5. Трава фенхеля обыкновенного содержит разнообразные группы БАВ, отличные от состава плодов, которые при данной комбинации могут служить основой для дальнейшего исследования этого сырья с целью создания новых, усовершенствованных ЛС с расширенным спектром действия, что немаловажно для комплексного лечения ряда заболеваний.

Список литературы

1.Атлас ареалов и ресурсов лекарственных растений СССР. - М.: ГУГК, 1983. - 340с.

2.Бестужева А. А. Аромомасла, фенхель / А. Бестужева // Perfect Lady. - 2007. - № 2. С. 17.

3.Блинова К.Ф., Яковлева Г. П. Ботанико - фармакогностический словарь. - М.: Высшая школа, 1990.

4.Бондаренко А.К., Чуб В.Г., Бондаренко Б.С., Овдиенко О.А. Лекарственные растения Украины. Заготовка, воспроизводство, применение.- К.-1992.-262 с.

5.Ботаника. Учебник для вузов: в 4 т. = Lehrbuch der Botanik fur Hochschulen Begrundet von E. Strasburger, F.Noll / Под ред. А. К. Тимонина, И. И. Сидоровой. -- М.: Изд. центр «Академия», 2007. -- Т. 3. -- С. 379. -- 576 с.

6.Гаммерман А.Ф. Лекарственные растения (растения-целители). Справ. пособие/ А.Ф. Гаммерман, Г.Н. Кадаев, А.А. Яцена и др. -4-е изд., испр. и доп.-М.: Высшая школа,1990.-544с.

7.Гончарова Т.А. Энциклопедия лекарственных растений. - М.: Дом МСП, 1997. - 824с.

8.Государственная фармакопея СССР. - Вып.2 Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье / МЗ СССР. - 11-е изд., доп.-М.: Медицина,1989.-400с.

9.Гродзинський А.М. Лікарські рослини: К.: Вид-во «Українська радянська енциклопедія», 1992. - 542с.

10.Державна фармакопея України/ Державне підприємство, «Науково - експертний фармакологічний центр». - 1-е вид. - Доповнення 2. - Харків: Державне підприємство, «Науково - експертний фармакологічний центр», 2008. - 620с.

11.Иванов В.И. Лекарственные растения в народной медицине. - М.: Воениздат, 1992. - 448с.

12.Иващенко Н.В., Самылина И.А., Нестерова О.В., Сорокина А.А., Зорин Е.Б. Лекарственные растения и лекарственное растительное сырье, содержащее эфирные масла и горечи (учебно-методическое пособие), М., «Чародей», 2001.

13.Кобзар А. Я. Фармакогнозія в медицині: Навч. посібник. - К.: Медицина, 2007. - 544 с.

14.Ковалев Н.В. Попова, В.С.и др. Практикум по фармакогнозии: Учеб.пособие для студентов вузов/ Под общ. ред. В.Н. Ковалева.-Х.: НФаУ; Золотые страницы, 2003.-512с.

15.Ковальов В.М., Павлій О.І., Ісакова Т.І. Фармакогнозія з основами біохімії рослин. За ред. Професора В.М. Ковальова. Підручник для студентів вищих фарм.установ освіти та фарм факультетів вищих медичних установ освіти ІІІ-ІV рівнів акред. -Х.: «Прапор»,Вид-во НФАУ,2000 - 703с.

16.Кьосев Г.А. Полный справочник лекарственных растений. - М.: ЭКСМО-Пресс, 2001. - 992с.

17.Лекарственое растительное сырье. Фармакогнозия: Учеб. пособие / Под. ред. Г. П. Яковлева и К. Ф. Блиновой. - СПб.: СпецЛит, 2004. - 765 с.; ил.

18.Лекарственное сырье растительного и животного происхождения. Фармакогнозия: учеб. Пособие под ред. Яковлева Г.П.- СПб.: СпецЛит, 2006.-845с.: ил.

19.Лекарственные растения Государственной фармакопеи. Фармакогнозия./Под. ред. Самылиной И.А., Северцова В.А./.-М.: «АНМИ», 2003.-534с.

20.Лікарські рослини: Енциклопедичний довідник / Відп. ред. А. М. Гродзінський. - К.: Видавництво «Українська Радянська Енциклопедія» ім. М. П. Бажана, український виробничо-комерційний центр «Олімп», 1992. - 544 с.: іл.

21.Мазулін О.В., Калошина Н. О. Вирощування лікарських рослин на присадібних ділянках. - Х.: Прапор, 2001. - 240 с., іл.

22.Миркин Б.М., Наумова Л.Г., Мулдашев А.А. Высшие растения: краткий курс систематики с основами науки о растительности: Учебник. -- 2-е, перабот. -- Москва: Логос, 2002. -- 256 с.

23.Моно- та біциклічні монотерпеноїди ефірної олії Ptarmica speciosa DC. / О.А. Кисличенко, А.М. Ковальов, А.М. Комісаренко, С.М. Комісаренко // Вісник фармації. - 2007. - №3(51). - С. 18-20.

24.Муравьева Д.А., Самылина И.А., Яковлев Г.П. Фармакогнозия: Учебник - Н-е изд.,перераб. и доп. - М.: Медицина,2002. - 656с.

25.Правила сбора и сушки лекарственных растений: Сборник инструкций. - М.: Медицина, 1997. - 275с.

26.Савельева Л. Ф. Фенхель - волошский укроп / Л. Савельева // Здоровье и экология. - 2007. - № 7. С. 43-45.

27.Сапронова Н.Н., Сорокина А.А. Формулы биологически активных соединений (справочник), М., «Русский врач», 2000.

28.Сербін А.Г., Сіра Л.М., Слободняк Т.О. Фармацевтична ботаніка. Підручник / Під. Ред.. М.М. Сірої. - Вінниця: НОВА КНИГА, 2007. - 488с.

29.Сировинні джерела продуктів біотехнології та їх аналіз: навч. посібник для студ. вищ. навч. закл. / В. С. Кисличенко, І. О. Журавель, О.В. Бухаріна та ін.; за ред. В. С. Кисличенко. - Х.: НфаУ: Золоті сторінки, 2009. - 304 с.

30.Сокольский И. А. Сельдерей и фенхель / И. Сокольский // Наука и жизнь. - 2006. - №. 6. - С. 64-65.

31.Солодовніченко Н.М., Журавльов М.С., Ковальов В.М. Лікарська рослинна сировина та фітопрепарати: Навч .посіб. з фармакогнозії з основами біохімії лікар. рослин для студ. вищих фарм. навч. Закладів ІІІ-ІV рівнів акред. (2-е вид.).- Х.: НФаУ; МТК-книга,2003.-408с.

32.Справочник по заготовкам лекарственных растений / Д. С. Ивашин, З. Ф. Катина, И. З. Рыбачук и др. - 6 -е изд., испр. И доп. - К.: Урожай, 1989. - 288 с.: ил.

33.Тернинко І. І. Визначення кількісного вмісту флавоноїдів у надземних частинах окремих представників родини Селерових / Тернинко И.И., Кисличенко В.С., Онищенко У.Е. // Фармацевтичний часопис.-2009.- №4(9). - С.11-15.

34.Тернинко І. І. Дослідження елементного складу представників родини Apiaceae / Тернинко И.И., Кисличенко В.С., Онищенко У.Е. // Фітотерапія. Часопис. - 2009. - №2. - С. 59 - 63.

35.Тернинко І. І. Порівняльне хромато-мас-спектрометричне вивчення ефірних олій плодів анісу та фенхелю / Тернинко И.И., Кисличенко В.С., Онищенко У.Е. // Український журнал КЛМ. 2009. - Т. 4, № 3. - С. 73 - 75.

36.Тонкослойная хроматография в фармации и клинической биохимии: В 2 ч. / М. Шаршунова, В. Шварц, А. Михалец; Под. ред. В. Г. Берукина и С. Д. Соколова. - М.: Мир, 1985. - Ч. 1. - 386 с.

37.Фармакогнозия. Атлас: Учебное пособие / Под ред. проф. Н.И.Гринкевич, Е.Я.Ладыгиной. - М.: Медицина, 1989 - 512с.

38.Фенхель - кандидат на грядку / ред. Дриго А. В. // Пряно-ароматические растения. - 2007. - № 5. С. 93.

39.Харбон Дж. Биохимия фенольных соединений. - М.: Мир, 1968. 572 с.

40.Яковлев Г.П., Челомбитько В.А. Ботаника: Учебное пособие для фармацевтических университетов и фармацевтических факультетов мед. ВУЗов/ Под ред. И.В. Грушвицкого. - М.: Высшая школа., 1990. - 367с.

41.Davides N.W.//J. Chromatogr. - 1990. - Vol. 503. - P. 1-24.

42.European Pharmacopoea 1998. - 5- th ed. - Strasbourg: Maisonneuve, 1998. - 520 p.

Размещено на Allbest.ru