Действие экстракта гриба Fusarium на биохимические показатели прорастания семян

В работе использованы реактивы: 70% этанол, реактив Фолина-Чиокальто, 10% р-р Na₂CO₃, 2% р-р FeNH₄(SO₄)₂, 1н HCL, н-бутанол, 0,25% раствор ТБК, 10% раствор ТХУ.

Оборудование: спектрофотометр, весы аналитические, центрифуга, водяная баня, термостат

2.3 Методика проращивания семян

Чашки Петри протирали спиртом, прогревали 1 час в сушильном шкафу. Нарезанную фильтровальную бумагу кипятили 5 минут в дистиллированной воде. В чашки Петри на 2 слоя фильтровальной бумаги раскладывали семена. Ставили чашки Петри в термостат при температуре 25⁰С на 4 суток. По истечении этого времени отбирали по 30 семян из каждой группы с длиной корешков 0,5-1,2 см. У отобранных семян измеряли длину корешков, взвешивали общую массу семян в одной чашке Петри. Измеренные семена помещали в чашку Петри на новую фильтровальную бумагу с исследуемым раствором удобрения в количестве 10 мл. В контрольную группу приливали 10 мл дистиллированной воды, ставили в термостат на 24 часа. Через 24 часа делали замеры длины проростков и общей массы проростков и перекладывали семена в чашки Петри на дистиллированную воду для прорастания при естественном освещении. Через 8 суток сделали замеры длины корешков, побегов и общей массы в одной чашке.

Основной момент в прорастающем зерне - начало роста зародыша и его превращение в самостоятельное растение. При прорастании зерна важно наличие влаги, тепла и кислорода. Для прорастания семян ячмень требует 50% воды от массы семян, пшеница -55%, овес - 65%.

Ячмень довольно требователен к теплу [36], начинает прорастать при сравнительно низкой температуре -1 - -3°С. Оптимальной считается температура от 18 до 25°С. Смена дневных и ночных температур благоприятна для ускоренного прорастания. Препятствовать этому могут неблагоприятные факторы среды (недостаток влаги, низкие температуры, избыточное увлажнение), которые приводят к неполноценному появлению проростков [24].

Наряду с оптимальным количеством влаги и режимом температур для нормального роста зародыша необходим кислород воздуха, который обеспечивает дыхание и ферментные процессы в зерновке. При набухании зерна многие ферменты синтезируются вновь. Одновременно с этим существующие ферменты разрушаются, что означает интенсивную смену ферментативных систем. Это, вероятно, вызывает значительные изменения в метаболизме запасных веществ в тканях. Клетки, которые синтезировали нерастворимые крахмал, белки и липиды, во время развития зерна приступают к гидролизу этих веществ. В результате прорастания резко усиливается действие ферментов зерна, начинается процесс растворения отложенных в эндосперме сложных веществ с образованием более простых. Крахмал превращается в декстрины и мальтозу, белок - в аминокислоты, жир - в глицерин и жирные кислоты. Они служат питанием для развивающегося зародыша. Так запасные белки разрушаются протеолитическими ферментами до растворимых азотистых соединений, которые затем используются различными частями проростка. Количество запасных белков уменьшается с увеличением доли аминокислот и амидов, за счет которых происходит синтез новых белков в растущих частях зародыша. Лишь небольшое количество азотистых веществ накапливается в запасающих тканях, так как в процессе быстрого синтеза новых белков в развивающемся зародыше расходуются имеющиеся азотистые соединения. Сухие зерна содержат лишь некоторые белки, основная их часть появляется в процессе прорастания. Сухая масса зерна в этот период очень сильно понижается, так как зерно теряет большое количество содержащихся в нем органических веществ [21].

2.4 Определение активности каталазы

Каталаза (КФ 1.11.16) широко распространена в растительных тканях. Она обнаружена во всех аэробно дышащих клетках и у некоторых факультативных анаэробов. Подобно пероксидазе и цитохромоксидазе каталаза относится к Fe-порфириновым ферментам [32].

Сущность каталитического действия каталазы состоит в разложении пероксида водорода с выделением молекулярного кислорода. Реакция с участием каталазы требует двух молекул пероксида водорода, из которых одна действует как донор, а другая как акцептор электронов.

Чане представил следующий механизм каталитической реакции:

2Н₂О₂ > 2Н₂О + О₂

FeOH + НООН > FeOOH + Н₂О

FeOOH + НООН > FeOH + Н₂О + О₂

Пероксид водорода, образующийся в обменных реакциях, в известных концентрациях для клетки токсичен, в связи с чем нельзя недооценивать роль каталазы, активирующей процесс разложения пероксида водорода с образованием воды и неактивного кислорода. Известно, что каталаза проявляет каталитическую функцию независимо от присутствия пероксидазы.

Для определения активности каталазы использовали модифицированный метод, основанный на определении количества Н₂О₂, не разложившегося после инкубации его с каталазой путем спектрофотометрической регистрации окрашенного продукта реакции взаимодействия пероксида водорода с молибдатом аммония.

В опытной пробе к 1 мл 0,03% пероксида водорода добавляли 0,1 мл частично очищенного цитозоля (гомогенат ткани 1:10, приготовленный на 0,1 М трис-HCl буфере (рН=7,4), центрифугировали 30 минут (3000 g) при 4°С и разбавить до разведения 1:500 (0,1 мл + 4,9 мл буфера).

В контрольной пробе вместо пероксида водорода использовали дистиллированную воду. В “холостой” пробе к Н₂О₂ вместо биологического материала добавляли 0,1 мл Н₂О. Реакционную смесь инкубировали в течение 10 минут при комнатной температуре и затем добавляли 0,5 мл 4% молибдата аммония. Оптическую плотность измеряли на спектрофотометре при длине волны 412 нм.

Активность каталазы рассчитывали по формуле:

где Ехол, Еоп - оптическая плотность «холостой» и опытной пробы;

V - конечный объем реакционной смеси, мл;

? - коэффициент молярной экстинкции, 22200 см^-1 ? М^-1;

t - время инкубации пробы, мин;

l - длина кюветы, см;

m_ткани - масса ткани в реакционной смеси, мг;

Активность фермента выражали в мкмоль/ г ткани.

2.5 Количественное определение суммы фенольных соединений

К 0,2 мл полученного извлечения прибавляли 7,7 мл воды очищенной, 0,1 мл реактива Фолина-Чиокальто и 2 мл 10% раствора карбоната натрия, все тщательно перемешивали и вьдерживали в темном месте. Через 15 минут измеряли оптическую плотность полученного раствора на фотоколориметре при длине волны 720 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. Раствором сравнения служила вода очищенная.

Содержание суммы фенольных соединений в процентах (X) в пересчете на галловую кислоту в абсолютно сухом сырье вычисляли по формуле:

А - оптическая плотность исследуемого раствора;

V1 - объем экстракта, мл;

V2 - объем раствора для спектрофотометрирования, мл;

V3 - объем экстракта, взятый для определения, мл;

- удельный показатель поглощения галловой кислоты в комплексе с реактивом Фолина-Чиокальто при длине волны 720 нм, равный 90;

m - масса сырья в граммах;

W - потеря в массе при высушивании сырья в процентах.

2.6 Количественное определение суммы проантоцианидинов

Действие проантоцианидинов обусловлено их способностью связывать свободные радикалы (активные биомолекулы, уменьшать интенсивность окислительных процессов в организме. Замедляют процессы старения и износа клеточных мембран и самих клеток, а следовательно и всего организма в целом; повышают устойчивость к воздействию радиации и других вредных факторов внешней среды, усиливают иммунитет, нормализуют функции сердечнососудистой и нервной систем, обладают анитиканцерогенным действием, что препятствует развитию рака; оказывают выраженный косметический эффект. Проантоцианидины легко проникают через гематоэнцефалический барьер, осуществляя защиту и восстановление клеток мозга [27].

К 0,1мл полученного извлечения прибавляли 0,1 мл железосодержащего реактива (2% раствор FeNH₄(S0₄)₂ в 1 н кислоте хлористоводородной) и 2,8 мл 5% раствора кислоты хлористоводородной в н-бутаноле. Флакон с полученным раствором закрывали пробкой и нагревали на кипящей водяной бане в течение 1 часа. После охлаждения измеряли оптическую плотность при длине волны 550 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм, используя в качестве раствора сравнения такой же раствор без нагревания.

Содержание суммы проантоцианидинов в процентах (X) в абсолютно сухом сырье вычисляли по формуле:

А - оптическая плотность исследуемого раствора;

- удельный показатель поглощения цианидин-хлорида, равный 136;

V1 - объем экстракта, мл;

V2 - объем раствора для спектрофотометрирования, мл;

V3 - объем экстракта, взятый для определения, мл;

m - масса сырья в граммах;

W - потеря в массе при высушивании сырья в процентах.

2.7 Определение ТБК-реагирующих соединений

Различные токсиканты, в том числе тяжелые металлы, могут вызывать окислительный стресс у растений, стимулируя образование в клетках активных форм кислорода (АФК). Супероксидный радикал (О₂^.-),пероксид водорода (Н₂О₂) и гидроксильный радикал (НО^.) обладают очень высокой агрессивностью и способны повреждать практически все компоненты клетки. Активные радикалы, главным образом НО^., взаимодействуя с органическими веществами, образуют гидропероксиды ДНК, белков, липидов (ROOH). Гидропероксиды, также как и пероксиды, химически активны и в ходе метаболизма переходят в спирты, альдегиды, эпоксиды и другие окисленные соединения. Образование ROOH называют перекисным окислением. В липидах в основном в полиненасыщенных жирных кислотах АФК вызывают цепные реакции с накоплением липидных (L^.), пероксильных (LOO^.), алкоксильных (L0^.) и других радикалов. Участие тяжелых металлов с переменной валентностью, таких как медь, железо, кобальт и др. приводит к разветвлению этой цепи. Перекисное окисление липидов является индикаторной реакцией повреждения клеточных мембран. В результате ПОЛ образуются конечные метаболиты (малоновый диальдегид, этан, пентан и др.), реагирующие с тиобарбитуровой кислотой (ТБК-реагирующих продуктов) [39].

Приготовление реакционной среды:

В 100 мл дистиллированной воды растворяли 10 г трихлоруксусной кислоты и 250 мг тиобарбитуровой кислоты.

Ход определения. Растительный материал (300 мг сырых листьев) растирали в ступке с небольшим количеством реакционной смеси, состоящей из 0,25% раствора тиобарбитуровой кислоты (ТБК) в 10% растворе трихлоруксусной кислоты (ТХУ). Для лучшего растирания добавляли стеклянный песок. Гомогенат переносили в мерную пробирку и доводили объем реакционной средой до 4 мл. Пробы перемешивали и помещали в нагретую до 95°С водяную баню на 30 мин. Затем пробы резко охлаждали, помещая в сосуд с холодной водой. Содержимое проб переносили в центрифужные пробирки и центрифугировали 10 мин при 10000 об/мин. Оптическую плотность измеряли на спектрофотометре СФ-2000 при ? = 532 нм и 600 нм против контроля, содержащего 0,25% раствор ТБК в 10% растворе ТХУ. Концентрацию ТБК-реагирующих соединений рассчитывали с учетом коэффициента экстинкции 155 мМ^-1 см^-1.

А (ммоль/г ) = (?₅₃₂-?₆₀₀)/(155*0,3)

3. Результаты исследований и их обсуждение

3.1 Морфометрические параметры прорастания зерна

Всхожесть семян

Это способность семян образовывать нормально развитые проростки, то есть стебли растения в самом начале его развития из семени (ростки) вместе с развившимися зародышевыми корешками. Всхожесть определяют проращиванием семян в течение 7-10 дней при оптимальных условиях, установленных для каждой культуры.

Энергия прорастания

Это способность семян быстро и дружно прорастать. Энергию прорастания определяют в тех же условиях и одновременно со всхожестью (в первые 3-4 дня). Энергия прорастания считается важным показателем посевных качеств семян, она характеризует одновременность роста и развития растений, а также созревания и налива зерна, что улучшает его качество и облегчает уборку.

Степень всхожести семян ячменя, прораставших в среде экстракта Fusarium sambucinum и взятых для анализа, практически не отличается от всхожести семян в контрольной группе (таблица 3.1). Ни количество корешков, ни их средняя длина не изменились. При оценке изменения массы установлено, что масса контрольных зерен статистически значимо увеличилась на 0,38 г. При использовании экстракта гриба Fusarium sambucinum в разведении 1:1000 и 1:10000 отмечено более значительное увеличение массы зерен - на 0,43 г и 0,47 г, соответственно.

Таблица 3.1. Влияние различных концентраций экстракта гриба Fusarium sambucinum на биометрические параметры прорастания семян (M±?)

Если говорить об энергии прорастания семян ячменя, то здесь наблюдалась ярко выраженная неоднородность прорастания. Некоторые исследуемые образцы при выращивании в среде, содержащей экстракт Fusarium samb. 1:10000, при одинаковых условиях уже на 3-и сутки обладали множеством равномерных длинных здоровых вершков, другие же (разведение экстракта Fusarium samb. 1:1000 и 1:100000) подверглись гнили, фузариозному заболеванию. В результате часть образцов была утрачена. Вероятно, это связано с тем, что непатогенный штамм Fusarium sambucinum, при некоторых условиях способен оказывать токсическое действие, либо же изначально в образцы попали семена плохого качества.

Так, гриб Fusarium oxysporum (возбудитель трахеомикозных болезней у двудольных растений), проникая в клетки корней злаков, не вызывает в тканях серьезных повреждений и его мицелий обычно развивается нормально. Однако иногда гифы подвергаются частичному или полному перевариванию. Эти фагоцитарные свойства клеток сдерживают распространение гриба, не дают ему перейти к паразитическому образу жизни, но и не убивают его полностью. Такое равновесие между корнями злаков и грибом непостоянно и зависит от влияния факторов внешней среды [34].

3.2 Влияние различных концентраций экстракта гриба Fusarium sambucinum на активность каталазы и содержание ТБК - реагирующих соединений в проростках ячменя

Как видно из результатов таблицы 3.2 действие экстракта гриба Fusarium sambucinum в разведении 1:1000 статистически значио увеличивает активность каталазы в 1,8 раз по сравнению с активностью каталазы в проростках семян контрольной группы. Увеличение активности каталазы отмечалось и в группах с разведением экстракта гриба 1:10000 и 1:100000 - в 1,3 и 1,4 раза, соответственно.

Параллельно с увеличением каталазы в экспериментальной группе с разведением экстракта гриба 1:1000 наблюдалось статистически значимое уменьшение содержания ТБК - реагирующих соединений в 1,2 раза.

Таблица 3.2. Содержание ТБК-реагирующих соединений (мкМ/г ткани) и активность каталазы (мкмоль/г ткани) в проростках ячменя, подверженного воздействию экстракта гриба Fusarium sambucinum (M±?).

Полученные результаты свидетельствуют о возможности участия каталазы в формировании защитных функций растительного организма от патогенных доз штамма. Повышенное образование продуктов ПОЛ способно оказывать цитотоксическое действие, проявляющееся в повреждении мембран клеток. При этом изменяется структура мембран, вплоть до их разрыва, ингибируется активность цитохромоксидазы.

3.3 Влияние экстракта гриба Fusarium sambucinum на содержание фенолов и проантоцианидинов в проростках ячменя

Из результатов, представленных в таблице 3.3, видно, что количество фенольных соединений в проростках под воздействием экстракта гриба Fusarium при всех разведениях статистически значимо уменьшилось в среднем в 1,2 раза по сравнению с контрольной группой.

Содержание проантоцианидинов в проростках ячменя, подверженных влиянию экстракта гриба Fusarium sambucinum в разведениях 1:1000 и, статистически значимо увеличилось в 1,1 и 1,3 раза, соотвественно и практически не изменился в соотношении 1:1000.

Таблица 3.3. Содержание суммы фенолов (%) и проантоцианидинов (%) в проростках ячменя, подверженного воздействию экстракта гриба Fusarium sumbucinum (M±?).

Заключение

гриб fusarium культурный растение

Микоризные грибы играют положительную роль в питании высших растений. Наряду с широко распространенным представлением о фузариумах как о факультативных паразитах, высказывается мнение об их фитосимбиотрофной природе и принадлежности к микоризным грибам. Некоторые виды рода фузариум развиваются в корневой зоне растений или на их корнях и не всегда обладают паразитическими свойствами. Эти грибы накапливаются в почве при длительном выращивании растений и используют в качестве питания не только органические вещества почвы, но и корневые выделения растений. Находясь в тесном контакте с клетками корня, фузариум усваивает их питательные вещества и в то же время предоставляет растению соединения, необходимые для его развития. Таким образом, тот фузариум, который развивается в тканях корней определенных растений и не вызывает губительного действия на рост и развитие последних, может быть отнесен к микоризным или фитосимбионтным грибам. Например, грибы F. sambucinum и F. heterosporum, развивающиеся на корнях злаков, оказывают положительное влияние на рост и развитие последних и особенно на их корневую систему. Многие представители рода фузариум являются лишь спутниками возбудителей болезней.

Полученные результаты позволяют сделать следующие выводы:

1. При действии экстракта гриба Fusarium sambucinum в разведении 1:1000 - 1:10000 происходит статистически значимое увеличение массы семян на 0,4 - 0,5 г.

2. Экстракт гриба Fusarium sambucinum в разведении 1:1000 в проростках ячменя увеличивает активность каталазы на 81% и уменьшает содержание продуктов перекисного окисление липидов (ТБК - реагирующих соединений) на 13%.

3. Применение экстракта гриба Fusarium sambucinum в разведении 1:1000 - 1:10000 уменьшает содержание фенольных соединений на 20% и увеличивает содержание проантоцианидинов на 14%.

4. По суммарным результатам проведенных исследований наиболее оптимальным разведением экстракта гриба Fusarium sambucinum для прорастания семян ячменя является разведение 1:1000.

ПРЕДЛОЖЕНИЯ ПРОИЗВОДСТВУ

Для улучшения посевных качеств семян, повышения урожайности и качества зерновых культур не рекомендуется использование штамма гриба Fusarium sumbucinum BKMF 3051 в производственных масштабах, так как затраты на его выделение и изготовление препарата будут превышать рентабельную способность, так как вызванная им активизация физиолого-биохимических процессов при прорастании семян очень низка.

Список использованных источников

1.Айтымбетова, К.Ш. Требования, предьявляемые к качеству зерна: курс лекций / К.Ш. Айтымбетова. - М. - 2004.

2.Андрианова Г.В. Применение БАД «Флоравит Э» на основе Fusarium sambucinum в комплексной терапии геморроя / Г.В. Андрианова // Успехи медицинской микологии: материалы 4 Всероссийского конгресса по медицинской микологии. - Т.9.-М.:Национальная академия микологии., 2007. - 376с.

3.Асалиев, А.И. Практикум по физиологии и биохимии растений / А.И. Асалиев, А.А. Беловолова. - Став рополь: АГРУС, 2003. - 160 с.

4.Бессарабов, Б.Ф. Инфекционные болезни животных / Б.Ф.Бессарабов, А.А.Вашутин, Е.С.Воронин, А.А.Глушков и др. / Под ред. А.А.Сидорчука. - М.: КолосС, 2007. - 671с.

5.Биологически активная добавка «Флоравит Э» в гастроэнтерологии: методические рекомендации для врачей / Издание Российской медицинской академии последипломного образования. - М., 2002г.

6.Биологически активная добавка к пище (варианты) и способ ее получения (варианты): пат. 2177699 Российской Федерации, A23L1/29, A23L1/30, A23L1/054 / Брагинцева Л.М.; Григораш А.И.; Коваленко В.А.; Макланов А.И.; Устынюк Т.К.; заявители Брагинцева Лидия Михайловна; Григораш Александр Ильич; Макланов Анатолий Иванович; Устынюк Тамара Кирилловна; Коваленко Вера Алексеевна. - №2000116338/13 ; заявл. 27.06.2000; опубл. 10.01.2002 // База патентов на изобретения РФ. - 1995

7.Бойко, А.К. Поражаемость сортов ярового ячменя фузариозом колоса/ А.К. Бойко// Весці нацыянальнай акадэміі навук беларусі. Серыя аграрных навук. № 5 - 2006.

8.Булгаков Н. И. Биохимия солода и пива. М.: Пищевая промышленность, 1976, с. 48 - 49.

9.Гагкаева, Т.Ю. Болезни сельскохозяйственных культур // Агроэкономический атлас России и сопредельных стран: экономические значимые растения, их болезни, вредители и сорные растения. [Электронный ресурс]. - 2011. - Режим доступа: http://www.agroatlas.ru/ru/content/diseases/Hordei/Hordei_Fusarium. - Дата доступа 27.04.2011.

10.Гиляров, М.С. Род фузариум (Fusarium)/ М. С. Гиляров // Биологический энциклопедический словарь. -- 2-е изд., исправл. -- М.: Сов. Энциклопедия, 1986

11.Гогин, А.Е. Микотоксины: Значение и контроль // Ветеринария. - 2006. - №3. - с.9-11.

12.Гриба фузариум биомасса: инструкция и применение / Государственный реестр лекарственных средств. Официальное издание: в 2 т.- М.: Медицинский совет, 2009. - Т.2, ч.1 - 568 с.; ч.2 - 560 с.

13.Григораш, А.И. БАД «Флоравит-Э» на основе экстрактов гриба Fusarium sambucinum - эффективный иммуномодулятор и адаптоген/ А.И. Григораш, М.Ю. Зайкина, Л.В. Погорельская, Н.А. Бредихина, А.В. Трифонов// Успехи медицинской микологии: материалы 4 Всероссийского конгресса по медицинской микологии. - Т.7.-М.:Национальная академия микологии.,2006. - 346с.

14.Григораш, А.И. «Флоравит Э» - перспективы использования, как регулятора репродуктивной функции человека / А.И. Григораш, Н.Н. Лоенко, М.Ю. Зайкина, И.В. Буякова // Успехи медицинской микологии: материалы 4 Всероссийского конгресса по медицинской микологии. - Т.9.-М.:Национальная академия микологии., 2007. - 376с.

15.Григораш, А.И. Новое лекарственное средство из экстракта гриба Fusarium sambucinum обладающее высоким гепетопротектерным действием/ А.И. Григораш, А.И. Макланов, В.И. Бобров, О.Н. Окунев, В.А. Самойленко, В.М. Терешина, Е.П. Феофилова// Успехи медицинской микологии: материалы 4 Всероссийского конгресса по медицинской микологии. - Т.7.-М.:Национальная академия микологии.,2006. - 346с.

16.Данченко, Е.О. Чиркина, А.А. Планирование и обработка эксперимента по биохимии: Учебно-методическое пособие для студентов биологического факультета / Е.О. Данченко, А.А. Чиркин. - Витебск: Изд-во «ВГУ им. П.М. Машерова, 2006. - 130с.

17.Зайкина, М.Ю. Применение оздоровительной косметики и БАД «Флоравит» на основе экстрактов гриба Fusarium sambucinum для лечения трофических нарушений/ М.Ю. Зайкина, И.В. Буякова, Н.В. Острокостова, Н.М. Шилкина, Т.Н. Сеселкина// Успехи медицинской микологии: материалы 4 Всероссийского конгресса по медицинской микологии. - Т.7.-М.:Национальная академия микологии.,2006. - 346с.

18.Иващенко, В.Г. Географическое распространение и особенности биоэкологии Fusarium graminearum schwabe/В.Г. Иващенко, Л.А. Назаровская//Микология и Фитопатология. - 1998. - Т. 32, Вып. 5.- с.1-10.

19.Какшинцев, А.В. / Систематика и характеристика фитопатогенных грибов класса Deuteromycetes: Лекция. / А.В. Какшинцев, Л.Г. Коготько, Н.Г. Онуфрейчик - Горки: Белорусская государственная сельскохозяйственная академия, 2007. 56 с.

20.Калунянц, К.А. Химия солода и пива. М.: Агромпромиздат, 1990. С. 9 - 18.

21.Кунце, В.А.Технология солода и пива. Сырьё и вспомогательные материалы в пивоварении/ В.А. Кунце, Т.В.Меледина // Энциклопедия пивовара. - М. - 2010

22.Ларькин, А.В. Грибные болезни хлебных злаков/ А.В. Ларькин/ Оренбургский государственный педагогический университет им. Чкалова В.В.; Оренбург, 2001 г.

23.Лоенко, Н.Н. Использование в рационах норок и соболей БАД «Флоравит э» на основе Fusarium sambucinum в качестве кормовой добавки / Н.Н Лоенко, А.В. Пучков, И.Е. Чернова // Успехи медицинской микологии: материалы 4 Всероссийского конгресса по медицинской микологии. - Т.9.-М.:Национальная академия микологии.,2007. - 376с.

24.Малюга, А.А. Видовой состав и патогенность грибов рода Fusarium, вызывающих сухую гниль клубней картофеля в Западной Сибири/А.А. Ма люга//Микология и фитопатология. - 2003. - Т.37, Вып.4.- С. 84-91.

25.Орешков, А.В. Экологизация защиты растений от фитопатогенов / А.В.Орешков; Московская сельскохозяйственная академия имени К.А. Тимирязева. - М. - 2005.

26.Платонова, Ю.В. География грибов рода Fusarium (литературный обзор) / Ю.В. Платонова, Н.А. Сурин// Журнал "Фундаментальные исследования". - 2004. - №4. - С.95-99.

27.Плешков, Б.П. Практикум по биохимии растений / Б.П. Плешков. - М.: Агропромиздат, 1985. - 255 с.

28.Практикум по физиологии растений. / Под ред. Н.Н.Третьякова.- М.: Агропромиздат,1990.-2

29.Препарат, влияющий на тканевой обмен и применение штамма гриба Fusarium sambucinum Fuckel var ossicolum (Berk et Curt) bilai для его получения: пат. 2040932 Российской Федерации, A61K35/70 / Г.Р. Морозова, А.Л. Морозов; заявитель Крестьянское хозяйство "Агрофирма Дижа". - №93057876/14 ; заявл. 21.12.1993 ; опубл. 09.08.1995 // База патентов на изобретения РФ. - 1995

30.Резватова, О.Н. Биологический метод защиты сельскохозяйственных растений от вредителей и болезней / О.Н. Резватова. - Киев, 1988.

31.Способ получения биологически активных веществ: пат. 2054484 Российской Федерации, C12P7/64, C07C405/00 / Л. М. Брагинцева; Т.К. Устынюк; Р. Н. Зеленева; В.А. Коваленко; Н.Р. Лебедева; заявитель Малое предприятие "Макофарм" . - № 5055932/13; заявл. 23.07.1992; опубл. 20.02.1996// База патентов на изобретения РФ. - 1996.

32.Тарасенко, С.А., Дорошкевич Е.И. Практикум по физиологии и биохимии растений. - Гродно: Облиздат, 1995.- 122 с.

33.Токарев, С.В. Особенности токсинообразования у гриба Fusarium poae (peck) wollenweber, распространенного в зернофураже / С.В. Токарев - М., 2009г.

34.Третьяков, Н.Н. Физиология и биохимия сельскохозяйственных растений / Н.Н. Третьяков [и др.]; под общ. ред. Н.Н. Третьякова. - М.: Колос, 2000. - 639 с.

35.Тутельян, В.А., Кравченко Л.В. Микотоксины (медицинские и биологические аспекты). - М.: Медицина, 1985. - 320 с.

36.Удовенко, Г.В. Биохимия растений / Г.В. Удовенко. - М.: Колос, 1977. - 214 с.

37.Урбан, В.П. Практикум по эпизоотологии и инфекционным болезням с ветеринарной санитарией / В.П.Урбан, М.А.Сафин, А.А. Сидорчук, М.В.Харитонов и др. - М.: КолосС, 2004. - 216с.

38.Фетисов, Л.Н. Микотоксины в кормах - одна из проблем современного животноводства в южном федеральном округе/Л.Н.Фетисов., Н.А.Солдатенко, В.А. Русанов// Успехи медицинской микологии: материалы 4 Всероссийского конгресса по медицинской микологии. - Т.7.-М.:Национальная академия микологии.,2006. - 346с.

39.Чиркин, А.А., Данченко, Е.О. Биохимия с основами молекулярной биологии: Учебно-методический комплекс для студентов биологического факультета / А.А. Чиркин, Е.О. Данченко. - Витебск: Изд-во «ВГУ им. П. М. Машерова, 2006. - 295с.

40.Чулкина, В.А. Защита зерновых культур от обыкновенной гнили/В.А. Чулкина. - М.: Россельхозиздат, 1979. - 72 с.

41.Шемшура, О.Н. Перспективы применения некоторых токсинов микроскопических грибов для защиты растений от патогенов/ О.Н.Шемшура// Успехи медицинской микологии: материалы 4 Всероссийского конгресса по медицинской микологии. - Т.7.-М.:Национальная академия микологии.,2006. - 346с.

42.Шипилова, Н.П. Видовой состав и биоэкологические особенности возбудителей фузариоза семян зерновых культур. автореф. дисс. к.б.н./ Н.П.Шипилова; 1994. 21 с.

43.Шкаликов, В.А. Защита растений от болезней / В.А. Шкаликов, О.О. Белошапкина, Д.Д. Букреев и др.; под ред. В.А. Шкаликова. - М.: Колос, 2001. - 248 с.

44.Штамм гриба Fusarium sambicinum-продуцент убихинона Q 10: патент 2064499 Российской Федерации, C12N1/14, C12P7/66, C12N1/14, C12R1:77 / А.Г. Халмурадов, Л.С. Юлдашева, Р.В. Уланова, Л.И. Чепенко; заявитель Институт микробиологии АН РУз. - № 5068099/13 ; заявл. 24.09.1992; опубл. 27.07.1996 // База патентов на изобретения РФ. - 1996.

45.Экспериментальные исследования возможности нейтрализации развития острого алкогольного гепатита путем применения БАДов «Флоравит», полученных способом глубинного культивирования гриба Fusarium sambucinum»: отчет ОАО «ВНЦ БАВ». - Москва, Купавна, 2005г.46.Юдеева, Я.Н. Современное представление об интегрированной защите растений/ Я.Н. Юдеева/ Российский государственный аграрный университет - МСХА имени К.А. Тимирязева. - М.: 2006.

Размещено на Allbest.ru