Лабораторная диагностика риккетсиозов сельскохозяйственных животных

Краткие эпизоотологические данные

Эпиритризооноз - болезнь видоспецифическая. Ее вызывает только Eperythrozoon suis и наблюдается она только у домашних свиней.

Эперитрозооноз регистрируется на всех континентах. Кроме свиней болеют грызуны и жвачные. Болезнь зарегистрирована в Англии, Германии, Румынии, Чехии, Словакии, Франции, Югославии, Сардинии, Канаде, Тайване, Польше.

К болезни восприимчивы свиньи всех возрастов. Особенно предрасположены к заболеванию поросята-отъемыши и поросята в течении нескольких дней после кастрации. Поросята болеют чаще в возрасте 1-14 дней и до 3-6 мес.

Источником возбудителя инфекции являются больные животные.

Во внешнюю среду возбудитель выделяется с секретами организма, содержащих кровь.

Факторами передачи являются предметы ухода, подстилка, пол, кормушки, корма загрязненные кровью, а также различный инструмент при ветеринарных обработках.

Заражение происходит алиментарным, контактным, внутриутробным и трансмиссивным путем (клещи, комары, мухи-жигалки, вши).

Для эперитрозооноза характерна стационарность, что можно объяснить длительным носительством возбудителя в организме переболевших и клинически здоровых животных.

Выраженной сезонности нет, так как больные выявляются в течение всего года, но большинство случаев заболевания приходится на летний период. У свиней болезнь чаще наблюдают в период массовых опоросов.

Клинические признаки: анемия, лихорадка, желтуха, некрозы будут наблюдаться только в ослабленном организме животного. Стресс факторы, неудовлетворительные условия содержания и кормления, хронические генерализованные инфекции предрасполагают к клиническому проявлению болезни.

Эперитрозооноз осложняет течение сопутствующих ему болезней, в свою очередь ряд заболеваний обуславливающих возникновение рецидивов. Отмечена интерференция эпиритрозоонов с анаплазмами, бабезиями и другими простейшими.

Заболеваемость зависит от имунного статуса поголовья и достигает 30% и более. Смертность менее 1%.

Патогенез

Эперитрозооны обладает тропизмом к эритроцитам, тромбоцитам и лейкоцитам. Вобудитель может располагаться отдельно или цепочкой на внешней оболочке эритроцита, а также может находиться внутри эритроцита.

Свободные микроорганизмы замечены только в плазме крови. Эти деформированные эритроциты удаляются, а затем гемолизируются в селезенке. В крови нарушается кислотно-щелочное равновесие, развивается ацидоз. В острых случаях может наблюдаться генирилизованная гемолитическая желтуха.

Эпиритризооноз вызывает аутоиммунную гемолитическую анемию, ассоцированную с холодной агглютинацией. В процессе взаимодействия Eperythrozoon suis с поверхностью (мембраной) эритроцита - изменяется структура мембраны заканчивающаяся освобождением замаскированных антигенов или модификацией уже существующих антигенов - то есть чуждый ответ иммунной системы организма.

После прилипания микроорганизма к мембране эритроцита, производятся аутоантитела как часть защитного механизма, они нападают на эритроциты инфицируя животное.

Присутствие микроорганизмов в плазме приводит к микроагглютинации эритроцитов, в тех частях тела, где ниже температура в частности на ушах, хвосте и конечностях. При недостаточном кровотоке происходит посинение ушей, в результате чего, позднее появляются ишемии. Клинически это может проявляться в виде некрозов.

Основные симптомы и патологоанатомические изменения

У эксперементально инфицированных и заболевших свиней инкубационный период длится в среднем 7 дней (но может быть от 2 до 26 дней), после подсадки зараженных клещей от 8 до 90 дней.

Эперитрозооноз может протекать остро и хронически.

Может быть субклиническая, генитальная и латентная формы.

Инкубационный период зависит от вирулентности E. suis, возраста и состояния иммунной системы организма, а также от дозы заражения, условий содержания и кормления животных. Наиболее характерные для эперитрозооноза свиней клинические признаки проявляются у поросят сосунов между рождением и 1-м днем жизни, повышение температуры тела на 1 - 3 день после заражения в пределах 40,0 - 41,5 С. У больных поросят первым клиническим признаком является кратковременная (1-3 дня) лихорадка до 41,5 С, бледность кожи, апатия, анемия или периодически проявляющаяся желтизна. Эти признаки исчезают через несколько дней. Клинические признаки могут проявляться не у всех поросят приплода. Через несколько дней появляются изменения в крови. Нарушения в работе печени - увеличение выделения желчи.

У поросят на откорме наблюдается апатия, кратковременная лихорадка, затрудненное дыхание (одышка), потеря аппетита, анемия, иногда желтуха. У больных животных наблюдают слезотечение, гиперемия, а затем бледность слизистых оболочек, иногда желтушность, периодическую диарею, запоры, иногда клонические судороги. Больные поросята погибают при явлениях комы, гипотермии и острой анемии.

Клинические признаки при остром течении: бледность, лихорадка до 42С, желтушность, а также цианоз конечностей, особенно в области хрящевой ткани ушей. Указанные процессы ведут к ослаблению и гибели молодых особей.

Классическая форма желтухи встречается очень редко. Анорексия (диареи), апатия, затрудненное дыхание (одышка) встречаются в зависимости от степени анемий. У свиней снижаются привесы.

Мраморность или обескровливание ушей встречается из-за ухудшения кровоснабжения в микроциркуляторном русле ушей. Характерным признаком так называемой холодной агглютинации при остром течении болезни, является темно-красное окрашивание конечностей и кончиков ушей. Это происходит из-за микроагглютинации и тромбоцитоза в капиллярах кровеносного русла. В некоторых случаях отмечается цианоз, особенно у поросят после ветеринарно-зоотехнических мероприятий - кастрации, отьем. Также у поросят-сосунов, отъемышей и на откорме наблюдают анемичность всей области уха, хвоста и конечностей ног. Некроз ушных раковин и больших областей хрящевой ткани ушей может происходить в результате длительного воздествия Eperythrozoon suis или же в следствие острого течения болезни. Некрозы могут быть не только на верхушках ушей, но и на боках, в области живота. Вылеченное животное (стадо) может снова заболеть в результате ослабления иммунитета. Реинфекция воможна в любое время года. При реинфекциях клинические признаки слабо выражены.

Хроническое течение болезни характеризуется бледностью и некоторыми аллергическими реакциями кожи в форме «крапивницы». Характерным признаком является омертвление верхушек ушей. При хроническом течении болезни у свиней в старших группах откорма поражения выражены на ушах, на боках, на животе между передними и задними конечностями. У свиней старших групп изменения на боках размером с маленькую тарелку. У заболевших поросят часто возникают сопутствующие вторичные инфекционные болезни из-за ослабления иммунной системы. Некоторые свиньи на откорме проявляют апатию, потерю аппетита, лихорадку 40,5 - 41,5 С, затрудненное дыхание и снижение привесов.

У свиноматок клинические признаки появляются на 3 - 4 день после опороса, и характеризуются анорексией, лихорадкой до 42С и протекает в грудной или генитальной форме в течение 1 - 3 дней. Эти свиньи характеризуются угнетенным молокообразованием и молокоотдачей и ненормальным или отсутствием материнского поведения. Начало клинических признаков может приходиться и на послеродовой период. После нескольких дней после заражения у свиней наблюдается лихорадка в течении 1-3 дней и потеря аппетита, угнетено молокообразование.

При генитальной форме у свиней наблюдают репродуктивные проблемы: нерегулярность циклов, плохая оплодотворяемость, аборты, рождение мертвых или слабых (нежизнеспособных) поросят. Эти признаки наблюдаются в серологически позитивных стадах. В стадах инфицированных Eperythrozoon suis 65% поросят после отьема в течении 7 дней находятся без видимых клинических признаков болезни. Проблемы с нерегулярностью половых циклов (анэструс) может достигать у 60% поголовья свиней.

При субклинической форме уровень гемоглобина понижен, температура тела субфебрильная, молодые животные болеют тяжелее. У них наблюдают угнетение, потеря аппетита, лихорадка, слабость, одышку, анемичность слизистых.

Латентная форма клинически не проявляется.

Патологоанатомические изменения в основном не характерны и зависят от сопутствующих инфекций. У поросят отмечают истощение, желтушность кожного покрова, иногда за ушами дерматит. При вскрытии наблюдают увеличение селезенки, лимфоузлов и стенки (оболочки) желудка, в выстилающих кровеносных сосудах наблюдается желтушность. Слизистые и серозные оболочки, подкожная клетчатка желтушные. Желтушность может быть и в других органах. Печень желтая или желто-коричневая. Иногда наблюдают гидроторакс, гидроперикардит и асцит. Под серозной оболочкой почек и мочевого пузыря возможны петехии. Содержимое желудка и кишок желтоватой окраски.

Гистопатологически обнаруживают увелечение содержания гемосидерина в Купферовских клетках печени, а также в клетках сетчато-клетчатого слоя желудка.

Характеристика возбудителя

Морфология и тинкториальные свойства.

Возбудитель эперитрозооноза полиморфен, может иметь округлую, овальную, палочковидную, гантелевидную, кольцевидную формы, могут встречаться в виде запятой и иметь зернистость. Размер от 0,2 до 2 мкм, у скоплений от 1,0 до 2,5 мкм. В препаратах из крови лежат индивидуально или цепочкой на внешней оболочке эритроцита и могут находиться внутри эритроцита. При лихорадочном состоянии можно обнаружить свободно лежащие бактерии.

Эперитрозооны паразитируют на эритроцитах, тромбоцитах, лейкоцитах и имеют в мазках крови окрашенных по Романовскому - Гимзе вид нежных розоватых или розовато-фиолетовых полиморфных образований. По Здродовскому эперитрозооны окрашиваются в розово-красный цвет.

Лабораторная диагностика.

Для лабораторной диагностики нужна сыворотка крови, или цельная кровь стабилизированная гепарином или другим антикоагулянтом.

Диагноз на Eperythrozoon suis ставится комплексно на основании эпизоотологических данных, клинических признаков, патологоанатомических изменений. Решающим в постановке диагноза является лабораторная диагностика. Лабораторная диагностика включает:

Микроскопический метод - приготовление мазков крови, окраска по Романовскому - Гимзе и Здродовскому, микроскопия с целью обнаружения эперитрозоонов;

Серологический метод - обнаружение специфических антител в сыворотке крови с помощью РСК, ИФА, идентификация антигена в ИФА;

Молекулярно-генетический метод - полимеразная цепная реакция (ПЦР);

Биологический метод - заражение восприимчивых к эперитрозоонозу животных;

Гематологические исследования - выведение лейкограммы, определение гемоглобина, количества эритроцитов, уровня гематокрита и железа в крови.

Гистологический метод - проводят гистологическое исследование печени, почек и селезенки с целью установления скоплений гемосидерина.

Микроскопический метод.

У больных и подозрительных по заболеванию животных берут кровь из периферических сосудов (ухо, кончик хвоста, иногда глазной синус), не допуская гемолиза эритроцитов. Кровь стабилизируют Трилоном Б, гепарином, лимоннокислым натрием. Лучшие результаты животных получают при исследовании крови от животных с острым течением эперитрозооноза. Готовят мазки крови по общепринятой методике сразу после взятия крови. Предметные стекла должны быть идеально чистыми и обезжиренными. Температура крови должна быть 37 ?С, иначе эритроциты агглютинируются из-за холодной агглютинации, затрудняющей выявление Eperythrozoon suis в мазках. После приготовления мазков крови их высушивают и фиксируют химическим способом: метиловым спиртом - 5 минут, этиловым спиртом - 30 минут, жидкостью Никифорова (этиловый спирт ректификат 96? и эфир для наркоза в соотношении 1:1) - 30 минут.

Мазки окрашивают по Романовскому - Гимзе или Здродовскому.

Техника окраски по Романовскому - Гимзе.

На фиксированный мазок наносят краску разведенную дистиллированной водой (рН 7,0 - 7,2 ) в соотношении 3 капли краски на 2 мл воды, окрашивают в течение 30 - 45 минут. Промывают дистиллированной водой, высушивают на воздухе и микроскопируют при общем увеличении в 900 - 1800 раз.

Eperythrozoon suis окрашивается в голубой цвет с различными оттенками в виде полимофных микроорганизмов на мембране эритроцита. Эритроциты розовые.

Техника окраски по Здродовскому.

На фиксированный мазок наносят карболовый раствор Циля предварительно растворенный в бидистиллированной водой или фосфатным буфером при рН 7,4 в соотношении 10 - 15 капель краски на 10 мл воды или буфера на 5 минут. Затем быстро (1 - 3 секунды) дифференцируют в 0,5%-ной лимонной или 0,15%-ной уксусной кислоте путем погружения мазка в ванночку с кислотой. Промывают водой (обильно) и докрашивают 0,5%-ным раствором метиленовой сини 10 секунд. Промывают, высушивают на воздухе и микроскопируют.

Эперитрозооны окрашиваются в рубиново-красный цвет, клеточные элемнты в голубой (протоплазма) или синий (ядра) цвет.

При остром течении риккетсии в виде зерен поражают 80 - 100% эритроцитов; при хронической и субклинической - 10 - 30% эритроцитов с единичными зернами; в латентной форме не обнаруживаются.

Обнаружение микроорганизмов с характерной морфологией и тинкториальными свойствами является основанием для постановки диагноза на эперитрозооноз.

Серологический метод

Включает исследование сыворотки крови в РСК и ИФА с целью выявления антител. ИФА может быть использована для идентификации возбудителя. Постановка серологических реакций проводится согласно наставлению по применению тест-систем.

Молекулярно-генетический метод.

Предусматривает постановку ПЦР. Данный метод является наиболее чувствительным и специфичным в идентификации Eperythrozoon suis.

Биологический метод.

Проводится на поросятах 2 - 4 месячного возраста. Поросят инфицируют кровью или переливанием крови от больного животного здоровому. Клинические признаки заболевания проявляются через 3 максимум 4 недели. Биопробу считают положительной при характерной клинической картине и обнаружении возбудителя микроскопическим методом.

Гематологические исследования.

Кровь, взятая непосредственно в течении лихорадки, имеет блестящую поверхность и не осаждается на стенках пробирки, а агглютинируется при комнатной температуре. Микроагглютинация характерный признак для Eperythro-zoon suis. Кровь исследуется сразу же после взятия. Температура крови и материалов должна быть 37 ?С.

Eperythrozoon suis вызавает гемолитическую анемию с характерными нормахромной и хромоцитной анемиями. Показатели болезни и ее тяжести - количество эритроцитов в крови животных, содержание гемоглобина и гематокрит. У больных животных наблюдается снижение количества эритроцитов до 2,6 млн/мл и 80% эритроцитов пораженены. Также прогрессирует нейтрофильный лейкоцитоз, снижается количество тромбоцитов и плазма крови приобретает желтушное окрашивание.

В крови снижение количества эритроцитов, и снижение значений гемотокрита и гемоглобина.

В сыворотке исследуется содержание билирубина и способность связывания железа.

На результат исследования указывают: количество эритроцитов от 1 до 2 1012/л, гемоглобин 20-40 г/л, часто 70-90 г/л., лейкоцитов 20-50 109 /л.

На лейкограмме увеличение количества лимфоцитов и моноцитов.

При субклинической форме количество эритроцитов уменьшается до 2,4-5 млн, лейкоцитов возрастает до 8,5 тыс., СОЭ ускорена, возможны нейтрофилия и эозинофилия. Пораженность эритроцитов достигает 90%.

Гистологический метод.

Проводят гистологическое исследование печени, почек и селезенки с целью установления скоплений гемосидерина. Решающего значения не имеет.

Диагноз на эперитрозооноз считают установленным в одном из следующих случаев:

При обнаружении микроскопическим методом в мазках крови клинически больных животных эперитрозоонов с характерной морфологией и тинкториальными свойствами;

При обнаружении специфических антител в РСК, ИФА;

При идентификации возбудителя в ИФА или ПЦР.

Иммунитет, средства специфической профилактики и терапия.

Иммунитет окончательно не изучен. Установлено, что в результате переболевания иммунный ответ неполный и кратковременный. В процессе болезни вырабатываются антитела класса Ig M.

Средств спецефической профилактики и терапии не разработано.

Больных изолируют и лечат, а подозрительных в заболевании и паразитоносителей обрабатывают одно- или двукратно лекарственными препаратами.

Больным животным создают покой и улучшают кормление. Свиньям на откорме с признаками острого течения заболевания для лечения применяется парэнтеральное введение окситетрациклина в дозе 20 - 30мг/кг живой массы. Парэнтерально окситетрациклин можно также давать свиньям в инфицированных стадах (неблагополучных) время от времени при стрессах: перегрупировках и после ветеринарных и зоотехнических процедур. Тем не менее наряду с парэнтеральным введением можно проводить и оральные обработки, а также сочетанные обработки. Это может уменьшить возникновение анемий.

Здоровым поросятам и отстающим в росте дополнительно нужно давать препараты железа.

Свиньям также назначают неоарсфенамин (новарсенол) - 15 - 45 мг на 1 кг живой массы. Хорошие результаты дают препараты азидина и мышьяковистой кислоты. Симтоматические средства в зависимости от показаний.

Курс лечения составляет 3 - 4 недели.

С целью профилактики в хозяйстве должна иметься программа обработак против экто- и эндопаразитов. Должны быть приняты меры предосторожности перезаражения животных при любых процедурах с кровью: передача при хирургических операциях, ветеринарных обработках - эти операции должны быть ограничены при работе с инфицированными животными. Должны иметься отдельные стерильные инструменты и материалы для каждой зоотехнической процедуры: перегруппировках, кастрациях, обрезании хвостов и других операциях не менее двух наборов инструментов в достаточном количестве. Проводить тщательные дезинфекции после каждой зоотехнической процедуры.

Список использованной литературы

1. Авроров В.Н., Черванев В.А. Электронно-микроскопические исследования при риккетсиозе крупного рогатого скота // Ветеринария. - 1991. - № 10. - С. 29-31.

2. Андриасян В.Б., Урбан В.П. Инфекционный кератоконъюнктивит у крупного рогатого скота в Северо-Западной зоне РСФСР // Инфекционные болезни сельскохозяйственных животных и птиц: Сб.науч.тр./Л., 1987. - С. 14-20.

3. Ветеринарная микробиология / Под ред. Профессора Е.В. Козловского и П.А. Емельяненко. - М.: Колос, 1987. - С. 226-272.

4. Ветеринарная микробиология и иммунология / Н.А. Радчук, Г.В. Дунаев, Н.М. Колычев и др.; Под ред. Н.А. Радчука. - М.: Агропромиздат, 1991. - С. 312-322.

5. Гусев М.В., Михеева Л.А. Микробиология. - М.: Изд. Московского университета, 1987. - С. 171-172.

6. Даниэл М. Тайные тропы смерти: Пер с чеш./ Под ред. Б.А. Черкасского. - М.: Прогресс, 1990. - 186 с.

7. Инфекционные болезни животных: Справочник / Сост. Ю.Ф. Борисович, Л.В. Кириллов; Под ред. Д.Ф. Осидзе. - М.: Агропромиздат, 1987. - С. 151-157.

8. Карантинные и малоизвестные болезни животных / Под ред. И.А. Бакулова. - М.: Колос, 1983. - С. 260-264.

9. Колешко О.И. Микробиология. - Мн.: Вышэйшая школа, 1977. - С. 73.

10. Коляков Я.Е. Ветеринарная микробиология. - 2-е изд., доп. и перераб. - М.: Сельхозгиз, 1960. - С. 322-328.

11. Лабораторные исследования в ветеринарии: вирусные, риккетсиозные и паразитарные болезни: Справочник / Под ред. Б.А. Антонова. - М.: Агропромиздат, 1987. - С. 191-198.

12. Лочкарев В.А., Дмитриев В.А. Лечение при риккетсиозе глаз у крупного рогатого скота // Ветеринария. - 1990. - № 6. - С. 47.

13. Малоизвестные заразные болезни животных / Сост. Ф.М. Орлов. - 2-е изд., доп. и перераб. - М.: Колос, 1973. - С. 186-206, 289-295.

14. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология: Учебник / Л.Б. Борисов, А.М. Смирнова, И.С. Фрейдлих и др.; под ред Л.Б. Борисова, А.М. Смирновой. - М.: Медицина, 1994. - 528 с.

15. Молекулярная микробиология: Пер. с англ. / Под. ред. Б.Н. Ильяненко. - М.: Мир, 1977. - С. 379-419.

16. Моноцитарный эрлихиоз лошадей/ обзор иностранной литературы // Ветеринария. - 1988. - № 2. - С. 69-71.

17. Никитин В.Л., Тимченко Л.Д. Роль риккетсий в заболеваемости коров послеродовым метритом // Ветеринария. - 1994. - № 10. - С. 44-45.

18. Определитель бактерий Берджи. В 2-х т. Т.1: Пер. с англ./Под ред. Дж. Хоулта, Н. Крига, П. Снита и соавт. - М:., Мир, 1997. - 432 с.

19. Паразитология и инвазионные болезни сельскохозяйственных животных / К.И. Абуладзе, Н.В. Демидов, А.А. Непоклонов и др.; Под ред.: К.И. Абуладзе. - 3-е изд., перераб. и доп. - М.: Агропромиздат, 1990. - С. 358-362.

20. Практикум по частной микробиологии / Под ред. А.А. Гласкович. - Мн.: Ураджай, 2000. - 250 с.

21. Практикум по ветеринарной микробиологии и иммунологии / Т.С. Костенко, Е.И. Скаршевская, С.С. Гительсон. - М.: Агропромиздат, 1989. - С. 245-248.

22. Руководство по лабораторной диагностике вирусных и риккетсиозных болезней / Под ред. Действительного члена АМН СССР, профессора П.Ф. Здродовского, профессора М.И. Соколова. - М.: Медицина, 1968. - С. 468-591.

23. Смирнова Н.И. Ветеринарная микробиология: Уч. пособие для ветеринарных ВУЗов. - Мн.: Вышэйшая школа, 1979. - С. 198-200.

24. Справочник по болезням сельскохозяйственных животных / Д.Д. Бутьянов, И.М. Карпуть, М.В. Якубовский и др.; 2-е изд., перераб. и доп. - Мн.: Ураджай, 1990. - С. 257.

25. Справочник специалиста ветеринарной лаборатории / Н.В. Коротченко, Ю.П. Смиян, А.П. Адаменко и др.; Под ред. Ю.П. Смияна. - К.: Урожай, 1987. - С.200.

26. Тропические болезни животных / А.А. Конопаткин, А.В. Степанов, Г.И. Забалуев и др.; Под ред. А.А. Конопаткина. - М.: Агропромиздат, 1990. - С. 99-104, 160-165.

27. Тузова Р.В. Микробные и вирусные заболевания животных, опасные для человека (зоонозы). - Мн.: Ураджай, 1969. - С. 247-251.

28. Юров Н.П. Инфекционные болезни лошадей. М.: Росагропромиздат, 1991. - С. 153-157.

Размещено на Allbest.ru