Комплексные пробиотические бактерии для лечения кишечных заболеваний

Показатель	Время выращивания, ч
	15	21	24	30	36	48
рН	5,91±0,02	6,24±0,04	6,80±0,02	6,65±0,03	6,01±0,04	4,96±0,07
Концентрация клеток, млрд.кл*см-3	0,71±0,14	0,84±0,14	1,94±0,12	2,56±0,08	2,31±0,16	2,21±0,12

Таким образом, на основании данных литературы и собственных экспериментальных исследований показано, что выращивание культуры штамма L. plantarum FK 20 в статических условиях в капустной или казеиново-дрожжевой среде обеспечивает выход биомассы, в среднем, в концентрации 10*109кл*см-3. При выращивании культуры В. Subtilis F7 в жидкой питательной среде на основе гидролизата соевой муки с использованием аэрации концентрация биомассы составляла 2,56*109кл*см-3. При выращивании культур штаммов L. plantarum FK 20 и В. Subtilis F7 глубинным способом их биологические свойства и специфическая активность не изменились.

1.4 Выводы и предложения для технологической части

На основании приведенных данных следует заключить, что качество питательных сред и принятые условия глубинного выращивания антагонистически активных бактерий обеспечивают воспроизводимое получение культур микроорганизмов В. Subtilis F7 и L. plantarum FK 20, обладающих высокими биологическими свойствами.

Пробиотические препараты изготовляемые на основе молочнокислых бактерий желудочно-кишечного тракта, в отличие от химиотерапевтических средств, способствуют нормализации микрофлоры желудочно-кишечного тракта и не вызывают вредных побочных явлений. Они могут использоваться в качестве биологических консервантов при заготовке сочных кормов, переработке плодов и овощей, в составе кормовых добавок и лечебно- профилактических препаратов для молодняка сельскохозяйственных животных.

Таким образом, создание пробиотиков и их широкое применение являются сегодня стратегическим направлением в борьбе со многими инфекционными, а также некоторыми неинфекционными заболеваниями.

Микробные препараты (пробиотики) в животноводстве являются лечебно - профилактическими средствами в борьбе с бактериальными заболеваниями молодняка. Их применение способствует нормализации кишечной микрофлоры, улучшению пищеварения, появлению гнилостных процессов, что оказывается на повышении продуктивности животных, снижения себестоимости продукции и обеспечивает уменьшение случае заболеваний.

Пробиотики применяют для профилактики и лечения дисбактериозов различного происхождения, колибактериоза и сальмонеллеза, для повышения естественной резистентности организма, а также в качестве экологически чистых стимуляторов роста при откорме животных. Они выгодно отличаются от антибиотиков тем, что не оказывают побочного действия, не накапливаются в органах и тканях, не вызывают селекции резистентных вариантов у возбудителя кишечных заболеваний и не загрязняют окружающую среду.

В клинической практике многолетнее и широкое применение бактериальных препаратов при лечение и профилактики дисбактериозов доказало их применение и удовлетворительную эффективность.

2. Технологическая часть

2.1 Характеристика сырья, вспомогательных материалов, и их подготовка

Для приготовления питательных сред необходимы следующие компоненты: соевая мука, капустный отвар, агар, пивное сусло, вода.

Соевая мука - мука, изготовленная из переработанных семян соевых бобов, шрота и жмыха.

Капустный отвар - водный раствор, полученный при варке капусты.

Агар (агар-агар) - продукт, получаемый из морских водорослей и используемый как уплотнитель сред в микробиол. и пищевой промышленности. Представляет собой желтовато-белый порошок или пластинки. Содержит около 1,5 - 4% минеральных солей, 10 - 20% воды и 70 - 80% полисахаридов, в составе к-рых выявлены D- и L-галактозы, 3,6-ангидро-галактозы, пентозы, D-глюкуроновая и пировиноградная к-ты.

Пивное сусло - водный раствор экстрактивных веществ растительного сырья или солода, предназначенный к сбраживанию.

Вода. Для технологических целей требуется питьевая вода (ГОСТ 2874-73).

Для приготовления питательных сред из водопровода или открытых водоемов после соответствующей обработки. Она должна быть биологически чистой, бесцветной, без вкуса и запаха, сухой остаток меньше 1 г/л, общая жесткость менее 7 мг экв/л, с содержанием вредных веществ менее (мг/л), свинец - 0,1, мышьяк - 0,05, железо - 1,5, цинк - 5, медь -3. Общее число м.о. в 1мл менее 100.

Для охлаждения требуется вода с возможно более низкой температурой (не выше 12°С) и отсутствием механических примесей. Вода с повышенным содержанием железа недопустима.

Для мойки оборудования и помещений вода должна быть биологически чистой.

Силиконовые пеногасители. Изготовляют на основе кремнийорганических соединений. При введении в силиконовые пеногасители органических радикалов С2Н5 или СН3 образуются этил или метилполисилоктаны, обладающие пеногосящим действием. Пеногасящая способность увеличивается с введением гидроксильных групп.

2.2 Выбор штамма микроорганизмов

Для получения пробиотического препарата используют штамм бактерии Lactobacterium plantarum и Bacillus subtilis.

Lactobacterium plantarum - широко распространенный вид грамположительных анаэробных неспорообразующих молочнокислых бактерий. Вид Lactobacillus plantarum относится к роду Лактобактерии (или Лактобациллы, лат. Lactobacillus), который входит в семейство Lactobacillaceae, порядок Lactobacillales, класс Bacilli, тип Firmicutes, царство Бактерии. Lactobacillus plantarum растут при температуре от 15 до 45 °C. Оптимальной для роста температурой является 30 °C. При 45 °C рост очень мал или отсутствует вообще. Lactobacillus plantarum имеет один из самых крупных геномов в роде Lactobacillus.

Bacillus subtilis - вид грамположительных спорообразующих аэробных бактерий, представителей рода бациллы (Bacillus). Bacillus subtilis -- один из наиболее хорошо изученных микроорганизмов. Название сенная палочка происходит из-за того, что ранее Bacillus subtilis изолировался исключительно из сенных отваров. Bacillus subtilis имеет вид бесцветной прямой палочки, размером примерно 0,7 мкм в толщину и 2--8 мкм в длину. Bacillus subtilis может размножаться делением и спорами. Иногда отдельные Bacillus subtilis, после поперечного деления, остаются соединенными в нити. Bacillus subtilis (сенная палочка), благодаря продуцируемым антибиотикам и способности закислять среду обитания, является антагонистом патогенных и условно-патогенных микроорганизмов, таких как сальмонелла, протей, стафилококки, стрептококки, дрожжевые грибки; продуцируют ферменты, удаляющие продукты гнилостного распада тканей; синтезируют аминокислоты, витамины и иммунноактивные факторы [45].

2.3 Разработка технологического режима и схема производства

Для разработки схемы производства необходимо в первую очередь обосновать все необходимые стадии производства.

В лаборатории, из пробирки с чистой культурой пересеиваем в три пробирки с твердой питательной средой. По мере роста из трех пробирок происходит пересев в три колбы на 50 мл, уже с жидкой питательной средой, культивирование происходит на качалке. Затем биомасса переносится в колбы на 1 л и из них в бутыли на 10 л, которые аэрируются стерильным воздухом. Биомасса, содержащаяся в бутылях, являются посевным материалом.

Подготовка питательной среды. Для осуществления метаболизма, т.е роста, размножения и накопления м.о. используется питательными средами, которые должны содержать все необходимые питательные вещества. Питательные среды должны быть абсолютно стерильными для этого существует стадия стерилизации питательной среды, так как производство непрерывное, то и стерилизация должна происходить непрерывно. В стерилизационной колонне среда нагревается паром до температуры 135 - 140°С в течение 3 -10 с. Затем выдерживаются до 1 мин. В выдерживателе и охлаждается водой в теплообменнике - холодильнике. Непрерывная стерилизация экономична во времени, обеспечивает высокое качество стерилизации, меньший расход пара, а так же возможна автоматизация.



1 - сборник; 2, 4 - дозаторы; 3 - стерилизатор пеиогасителя; 6 - висциновый фильтр для очистки воздуха от механических взвешенных примесей; 7 - турбокомпрессор для сжатия воздуха до 0,03 МПа и нагревания его до 180-240 °С; 8 - трубчатый холодильник; 9 - вла-гоотделитель; 10 - головной фильтр; 11 - кожухотрубный теплообменник для подогрева воздуха; 12, 13 - фильтры тонкой очистки воздуха; 14 - смеситель для приготовления питательной среды; 15 - нагревательная колонна; 16 - трубчатый выдерживатель;.17 - теплообменник типа «труба в трубе»; 18 - посевной аппарат; 19 - ферментатор; 20 - сборник культуральной жидкости; 21 - сепаратор-разделитель типа АСЭ-Б; 22 - сборник пасты препарата; 23 - напорный сборник; 24 - воздушный фильтр; 25 - паровой калорифер; 26 - распылительная сушилка; 27 - вентилятор; 28 -циклоны; 29 - скруббер для очистки отработавшего воздуха; 30, 38 - шнековые разделители; 31 -сборник сухого порошка; 32 - автовесы; 33 - шнековый смеситель; 34 - сборник каолина; 35 - бункер промежуточный; 36 - вибрационная мельница; 37 - смеситель препарата с наполнителем; 39 -бункер готового препарата.

Рисунок 7. Технологическая схема производства пробиотического препарата

Подготовка стерилизации воздуха. Воздух, поступающий в ферментер должен быть абсолютно стерильным. Ни один отдельный способ очистки атмосферного воздуха не является полностью эффективным, поэтому используют комплексную очистку воздуха. Забор воздуха происходит через специальные шахты высотой 8-10 м, затем воздух поступает на масляный фильтр. Далее воздух сжимается до 140-160 °С, за счет выделившийся теплоты адиабатического сжатия. В холодильнике происходит охлаждение водой воздуха, при этом из него выделяется влага, которая отделяется во влагоотделителе. Окончательная очистка происходит на головных фильтрах, которые установлены для каждого ферментера.

Процесс ферментации. Культивирование проводят в биореакторах (ферментерах). Сначала в МИН объемом 0,5 м3, затем в БИН на 0,75 м3 и основной ферментер объемом 1 м3

Затем в сборнике щелочи 1 через дозатор 2 подается раствор щелочи в ферментатор 19. Пеногаситель загружается в стерилизатор 3 и с помощью дозатора 4 подается в смеситель для приготовления питательной среды 14 и в ферментер 19. Посевной материал через инокулятор 5 поступает в посевной аппарат 18, а затем в ферментатор.

Воздух через висциловый фильтр 6 поступает в турбокомпрессор для сжатия воздуха до 0,03 МПА и нагревания его до 180 - 240°С, затем для охлаждения в трубчатый холодильник 8 и через влагоотделитель 9 в головной фильтр 10, затем в кожухоотрубный теплообменник для подогрева. Далее воздух поступает в фильтры тонкой очистки воздуха 12, 13, а затем в посевной аппарат и в ферментатор. Соли, витамины, молочная сыворотка поступают в смеситель для приготовления питательной среды и через нагревательную колонку 15 в трубчатый выдерживатель 16, затем в теплообменник типа «труба в трубе» и далее в посевной аппарат. Из ферментатора КЖ поступает в сборник культуральной жидкости 20 и через сепаратор - разделитель типа АСЭ - Б 21 поступает в сборник пасты препарата 22. Далее паста поступает в напорный сборник 23 и затем в распылительную сушилку 26 и через вентилятор 27 в циклоны. С циклонов выходит готовый продукт, а также воздух который поступает в скруббер для очистки 29. В распылительную сушилку воздух подается через воздушный фильтр 24 паровой калорифер[46-47].

2.4 Выбор основного и вспомогательного оборудования

Ферментеры, или биореакторы, представляют собой камеры, в которых в жидкой или на твердой среде выращивают микроорганизмы. Процесс, происходящий в ферментере, называется ферментацией. Термин ферментация первоначально применялся только к анаэробным процессам, однако сейчас он используется более широко и включает все процессы, как аэробные, так и анаэробные. На рис. 12.16 изображен типичный ферментер. Это довольно сложное техническое сооружение, поэтому необходимо потратить некоторое время для изучения его устройства. Не забывайте также о проблемах, возникающих при расширении масштабов производства, которые были перечислены в предыдущем разделе. Содержимое ферментеров во время работы, как правило, тем или иным способом перемешивается. Например, при производстве белка одноклеточных прутина компанией IC1 перемешивание достигается с помощью воздуха, подаваемого с высокой скоростью со дна сосуда[48].

Для культивирования используется ферментер с пневматическим перемешиванием и аэрированием среды. Конструктивно такой ферментер внешне аналогичен ферментеру с механическим перемешиванием, но в нем отсутствуют механические перемешивающие устройства. Аэрирующим устройством является диффузор, выполняемый в виде цилиндра с раструбом у основания, вмонтированный внутри ферментера. Аэратор смонтирован по осевой линии аппарата.



Рисунок 8. Конструкция ферментера

Воздух под давлением с помощью направляющих лопаток вводится в аэратор по касательной к окружной розетке, за счет чего придается вихревое движение воздушно - жидкостной эмульсии. Эмульсия непрерывно циркулирует по внутреннему замкнутому контуру через верхние кромки цилиндра, кольцевое пространство между внутренней стенкой аппарата и внешней стенкой аппарата, а затем вновь поднимается вверх через раструб. Вследствие создаваемого внутреннего циркуляционного контура происходит интенсивное перемешивание и аэрирование. С целью более эффективно отвоза физиологического типа помимо секционной многоярусной рубашки предусмотрена дополнительная поверхность охлаждения диффузора.

Данная конструкция ферментера рассчитана для работы под избыточным давлением.

Для стерилизации питательной среды используется змеевиковый теплообменник, внутрь которого подается питательная среда, во внешнюю трубу - пар.

Змеевиковый теплообменник представляет собой трубу, свернутую по определенному профилю. Чаще всего - это форма спирали (рис. 9); иногда в спираль сворачиваются 2 - 3 трубки, по которым параллельно проходит обычно горячий теплоноситель. Второй теплоноситель (чаще - нагреваемый) заполняет емкость, в которой и находится змеевик. Теплоноситель II может нагреваться либо в режиме непрерывного протока через аппарат, либо периодически. В таком погружном теплообменнике может устанавливаться перемешивающее устройство, повышающее интенсивность теплоотдачи от наружной поверхности трубки к внешнему теплоносителю. В отсутствие принудительного перемешивания наружная теплоотдача соответствует малоинтенсивной естественной гравитационной конвекции [49].

Рисунок 9. Змеевиковый теплообменник

Для охлаждения - теплообменник типа «труба в трубе». Устройство, которого заключается в том, что по внутренней трубе подается питательная среда, во внешнюю трубу хладагент - вода.

Теплообменники типа «труба в трубе». Теплообменный элемент такого аппарата показан на рисунке 10. Отдельные элементы соединены между собой патрубками и калачами, образуя цельный аппарат необходимого размера. Эти теплообменники находят себе применение при небольших расходах теплоносителей и при высоких давлениях.

Отделение биомассы от КЖ происходит в сепараторе, который представляет собой барабан, внутри которого находится конические тарелки.

Сепаратор -- аппарат, производящий разделение продукта на фракции с разными характеристиками (рис. 11).

В процессе работы любого сепаратора не происходит изменения химического состава разделяемых веществ. Качества, отличающие продукты сепарации, не обязательно должны совпадать с признаками, по которым разделяют смесь в сепараторах. В работе сепаратора принимает участие множество отдельных мелких частиц, среди которых встречаются частицы с промежуточными свойствами по отношению к необходимым признакам. Из исходной смеси после промышленных сепараций не могут получиться абсолютно чистые фракции разделяемых компонентов, только продукты с преобладающим их содержанием [50].

Рисунок 10. Теплообменник труба в трубе

Рисунок 11. Сепаратор

2.5 Характеристика готовой продукции

Готовый препарат представляет чистую культуру микроорганизмов: Lactobacterium plantarum и Bacillus subtilis.

Может быть в виде пасты или в сухом виде с влажностью 10 %, от белого до светло - серого цвета с характерными кисломолочным привкусом и запахом.

Препарат обладает следующими свойствами:

- микроорганизмы выделяют молочную кислоту, что блокирует развитие патогенной микрофлоры в кишечнике животных;

- регулирует метаболические процессы животных;

- высокая антагоническая активность по отношению к Е.Соli;

- оказывает профилактическое действие на организм животного;

- лечение диаррейных заболеваний;

- стимуляция роста молодых животных.

2.6 Технологические расчеты

Исходные данные:

1. Продуцент - Lactobacterium plantarum и Bacillus subtilis.

2. Р - 250 т в год

3. Vф-ра - 63 м3, Кзап - 0,6

4. Состав среды для культивирования:

Сухое обезжиренное молоко - 50%

МgSO4*5H2O - 0.25 %

MnSO4*5H2O - 0.03 %

CaCl2*5H2O - 0.44%

FeSO4*7H2O - 0.001 %

CuSO4 * 5H2O - 0.001 %

CaCl2 -1 %

Азот общий - 0,06 %

Азот аминный - 0,2 %

Глюкоза - 10%

Эмульсия пеногашения - 0,03%

Вода водопроводная - до 100%

5. Vпос.мат. - 10 % Vпит. среды.

6. Gвозд - 50 м3/м3 час

7. фкульт - 30 часа, t - 36 0C

8. ОРВнач - 50 кг/м3, ОРВкон - 5 кг/м3.

9. Унос к.ж. из ферментёра - 10 %

10.Потери на стадии сепарации - 2 %

11.Потери на стадии сушки - 3 %

12.Общий брак по всем стадиям - 5 %

13.W-8 %

Заключение

В работе были использованы современные биохимические, микробиологические, методы исследования:

- определение антимикробной активности методом диффузии в агар, определение резистентности микроорганизмов к антибиотикам - методом стандартных дисков, пропитанных антибиотиками;

- определение численности микроорганизмов проводили путем ряда последовательных разведений, культивирование микроорганизмов на различных по составу питательных средах;

- электронно-микроскопические исследования, выделение и разделение антибиотических комплексов колоночной и тонкослойной хроматографией.

Все практические работы по исследованию проводились на кафедре «Биотехнология» Химико - технологического факультета Южно-Казахстанского Государственного университета им. М.Ауэзова в микробиологической лаборатории 122 корпуса А.

Практическая база написания дипломной работы.

Практическая база оснащена современным оборудованием и приспособлена для проведения исследовательских работ. Основная часть дипломной работы проведена в микробиологической лаборатории кафедры «Биотехнология» ЮКГУ им.М.Ауезова.

Апробация и публикации результатов.

Основные положения и отдельные этапы дипломной работы докладывались:

- на пленарном и секционном заседаниях 17-ой студенческой научной конференции по естественным, техническим, социально-гуманитарным наукам: «Казахстанский путь - 2050: Единая цель, единые интересы, единое будущее», Южно-Казахстанского Государственного университета им. М. Ауэзова, проходившее с 8 по 10 апреля 2014г. За выступление получен диплом I категории;

- на конкурсе инновационных идей и проектов, организатором которого выступило ТОО «Шымкент инновация». Конкурс проходил на базе Южно-Казахстанского государственного университета им. М.Ауэзова 19 декабря 2013г. За выступление было получено благодарственное письмо;

- на первой международной научной конференции студентов и молодых ученых под названием «Будущее развития биологии, медицины и фармации», проходившей на базе Южно-Казахстанской Государственной фармацевтической академии 10-11 декабря 2013г. За выступление получен сертификат участника конференции;

- на 17-ой студенческой научной конференции, посвященной 70-летию Южно -Казахстанского государственного университета им.м.Ауэзова. За выступление получен диплом за I место.

Публикации результатов работы:

- в трудах 17-ой студенческой научной конференции по естественным, техническим, социально-гуманитарным наукам: «Казахстанский путь - 2050: Единая цель, единые интересы, единое будущее», Южно-Казахстанского Государственного университета им. М. Ауэзова, том I, стр. 59-60;

- в Республиканском научном журнале «Вестник», том III, стр. 86-89.

Список использованных источников

1 Biology-Online.org http://www.biology-online.org/dictionary/probiosis

2 Шевченко Ю.Л. Роль современных факторов во взаимодействии человека и микроорганизмов. Значение национального здравоохранения в профилактике и лечении инфекционных болезней // Журн, микробиол. - 2000. - № 6. - С.З.

3 Бойко А.В. Этнологическая структура острых кишечных инфекций, вызванных не холерными вибрионами, в дельте Волги //Журн. микробиол. - 2000. - № 1. - С. 15-17.

4 Инфекционная заболеваемость в Российской Федерации за январь декабрь 3997 года // Эпидемиология и инфекционные болезни -- 1993. -№3. - С. 63-64.

5 Инфекционная заболеваемость в РК за январь - декабрь 1999 года // Эпидемиология и инфекционные болезни, - 2000. - № 4. - С. 55.

6 Фролочкииа Т.Н. Вспышки под надзором // Фармацевтический вестник. -2002.-№23,-С.22.

7 Щербаков П.Н. Профилактика и лечение при желудочно-кишечных и респираторных болезнях телят // Ветеринария -2002. -№3, - С.15.

8 Субботин В.В. Влияние бифацидобактерина на кишечную микрофлору поросят // Ветеринария - 1998 - №5, - С.24,

9 Раицкая В.И. Новые препараты для лечения желудочно-кишечных болезней телят. //Ветеринария -2001. -№5. - С.4.

10 Новые пробиотические препараты ветеринарного назначения: Автореф. дисс.докт. биол. наук /Малик Н.И. -- М.,2002. - 200с.

11 Джупина С.И. Факторные инфекционные болезни животных. // Ветеринария -2001. -№3.-С.б.

12 Тараканов Б.В., Николичева Т.А. Пробиотический потенциал Lactobacillus саsei при выращивании телят//Ветеринария - 2001 -№3, - С.46.

13 Автореф. Дис. На соиск. Младзневская Ю.А.- СПГ: С.-Петербург.гос. хим.-фармац. Акад.,2005.- С. 21

14 Королева О.В., Енальева Л.В., Рябцева С.В. Стратегия развития АПК технологии, экономики, переработка, управление: Материалы Международной научно-практической конференции,пос. Персионовский, 2-8 февр.,2004.пос. Персионовский (Рост. обл) 2004,С.74-75.

15 Литусов Н.В., Поберий И.А. и др // Перспективы использования эубиотика "Биоспорин" в практике здравоохранения и военно -медицинской службы - Екатеринбург. - 1997.-С.6-10.

16 Курнецова О. С.- Вос.-Сиб. гос технологич. институт Улан-Удэ. 2005. -С19.

17 Шендеров Н.А., Нормальная микрофлора кишечника и некоторые вопросы микроэкологической токсикологии // Антибиотики и медицинская биотехнология. -1997.-№3.-С 164-170.

18 Гончарова Г.И., Дорофейчук В.Г., Смолянекая А.З., Соколова К.Я. Микробная экология кишечника в норме и при патологии // Антибиотики и химиотерапия. 1999.-34, №6.С. 462-466.

19 Бароновский А.Ю., Кондрашина Э.А, Дисбактериоз и дисбиоз кишечника. - С.б.,2000.

20 Шендеров Б.А. Медицинская микробная экология и функциональное питание. Том 1: Микрофлора человека и животных и ее функции. -- М, 1998. - 180с.

21 Коршунов В. М. Проблема регуляции микрофлоры кишечника // Журн. микробиол. - 1995. -№3.- С. 48-55.

22 Микроэкологические нарушения при экспериментально и дисбактериозен роль бактерицидных систем клеток организма хозяина: Автореф. дисс. канд. биол. наук / Патрушева Е. В. -- Волгоград.,2000. - 185с.

23 Петровская В.Г., Марко О.П., Микрофлора человека в норме и патологии. - М., Медицина, 1996. - 165с.

24 Пинсгин Б. В., Коршунов В. М., Мальцев В. П. Дисбактериозы кишечника. - М.. Наука, 1994. - 170с.

25 Эпидемиология и инфекционные болезни. - 1997, - №5 - С. 7.

26 Гончарова Г.И., Семенова Л.П., Лянная A.M. и др. Бифидофлора человека, ее нормализующие и защитные функции // Антибиотики и медицинская биотехнология. - 1997.-№3

27 Ruchim M.A., Makino D, Volatile Fatty Acids degradation By Human Fecal Suspensions // Gastroenterol. - 1994. -- Vol.86,

28 Бароновский А.Ю., Кондрашина Э.А, Дисбактериоз и дисбиоз кишечника. - М: Наука, 2000. - 200с.

29 Шендеров Б.А. Медицинская микробная экология и функциональное питание. Том 1: Микрофлора человека и животных и ее функции. -- М, 1998.

30 Коршунов В. М. Проблема регуляции микрофлоры кишечника // Журн. микробиол. - 1995. -№3.- С. 48-55.

31 Патент № 2119796. Авторы: Дзявго Л.А.; Маслов Д.В.; Панкратова Т.М.; Ширяев С.П. -С 7-10.

32 Патент № 2317089. Авторы: Молокеев Алексей Владимирович, Ильина Рома Мирославовна, Яцентюк Раиса Михайловна, Молокеева Наталья Валентиновна. - С. 4-7.

33 Патент № 2491079. Авторы: Яруллина Дина Рашидовна, Дамшкалн Лилия Григорьевна, Михеева Регина Олеговна, Ильинская Ольга Николаевна, Лозинский Владимир Иосифович. - С. 16.

34 Патент № 2781909. Авторы: Яцентюк Раиса Михайловна, Ильинская Ольга Николаевна. - С.19.

35 Микроэкологические нарушения при экспериментально дисбактериозе и роль бактериоцидных систем клеток организма хозяина: Авторск. дисс. канд. биол. наук / Патрушева Е.В. -- Волгоград., 2000

36 Петровская В.Г., Марко О. П, Микрофлора человека в норме и патологии. -М., Медицина, 1996. - 250с.

37 Пинсгин Б. В., Коршунов В. М., Мальцев В. П. Дисбактериозы кишечника. - М. Наука, 1994. - 230с.

38 Эпидемиология и инфекционные болезни. - 1997, - №5 - С. 7.

39 Гончарова Г.И., Семенова Л.П., Лянная A.M. и др. Бифидофлора человека, ее нормализующие и защитные функции // Антибиотики и медицинская биотехнология. - 1997.-№3 - С 179.

40 Кудрявцев В.А. Сафронова Л.А., Осадчая А.И. и др. Влияние живых культур Bacillus subtilis на неспецифическую резистентность организма // Микробиол. журн.. - 1999. -№2-С.46-55Г

Размещено на Allbest.ru