Применение Drosophila melanogaster в целях биотестирования

Исследования в области популяционной генетике, заложенные С.С. Четвериковым в Кольцовском институте, были продолжены под руководством Николая Петровича Дубинина. Им были организованы и выполнены экспериментальные и теоретические работы в области популяционной генетики. Был проведен ряд экспериментов, в которых было показано наличие в популяциях дрозофил генетического груза - летальных и сублетальных мутаций. Вместе с А.С. Серебровским в работах по ступенчатому аллеломорфизму гена scute были показаны «делимость» гена и явление комплементарности. Он опубликовал ряд важных научных работ по структуре и функциям хромосом, среди которых работы Н.П. Дубинина и В.В. Хвостовой по цитологическому анализу эффекта положения на уникальной модели cubitus interruptus D. melanogaster.

В 1957 году Н.П. Дубинин является основателем, а также назначен и избран директором - организатором Института цитологии и генетики Сибирского отделения АН СССР в Новосибирске (Этот институт положил начало возрождению генетики в СССР, в нем были заложены и получили свое развитие многие направления генетики). ИЦиГ СО РАН и в настоящее время остается самым крупным академическим институтом биологического профиля.

В 1959 году Н.П. Дубинин был снят с должности директора ИЦиГ СО АН СССР, но в 1966 году ему представилась возможность основывать еще один институт - Институт общей генетики АН СССР. В этот институт он пригласил ряд видных генетиков - Р.П. Мартынову, А.Н. Луткову, Ю.П. Мирюту и в их числе и генетиков, занимающихся дрозофилами - З.С. Никоро и Ю.Я. Керкиса. В последующие годы по приглашению директора ИЦиГ СО АН СССР Д.К. Беляева в институт приехали В.В. Хвостова и Р.Л. Берг. Р.Л. Берг организовала в Новосибирске лабораторию генетики популяций [Колосова и другие, 2003]. При исследовании природных популяций D. melanogaster Р.Л. Берг и другими представителями советской школы популяционной генетики было показано, что мутационный процесс в них не равномерен. В природных популяциях D. melanogaster были обнаружены периоды вспышек мутабильности и повышенной концентрации по ряду сцепленных с полом генов yellow, white и singed в динамики частоты видимых мутаций и мутационного процесса в течение длительного периода времени. А выделяемые при этом аллели этих генов были не стабильны, что указывало на их инсерционную природу [Берг и др., 1941; Грешензон, 1941; Дусеева, 1948; Берг, 1961; Иванов, Голубовский, 1977; Захаров, Голубовский, 1985; Голубовский и другие, 1987].

При исследованиях на дрозофиле впервые был обнаружен ряд важных результатов о природе наследования генов и генетических феноменов. Например, такие как эффект положения генов, дозовая компенсация, мобильные генетические элементы или транспозоны, тандемные дупликации и неравный кроссинговер, клонирование гена white и другие.

В 1970-х гг. с самого начала внедрения рекомбинативной ДНК, одной из первых была клонирована и охарактеризована ДНК дрозофилы. В исследованиях была показана прямая связь между мутантным фенотипом и молекулярными повреждениями в геноме у многоклеточного организма.

В ходе исследований с использованием дрозофилы в течение нескольких десятилетий продолжили путь к пониманию центральных регуляторных механизмов, которые лежат в основе развития животных. Во время исследований был выявлен ряд сигнальных систем, таких как Notch, Wnt и hedgehog. Нарушения, в которых приводит в настоящее время к возникновению широко распространенных человеческих болезней, в перечень которых входят сердечно - сосудистые, онкологические и неврологические расстройства.

В 1995 году Э. Льюис, Э. Вишаус и К. Нюсляйн - Фольхард за открытие генетического контроля эмбрионального развития получили Нобелевскую премию по физиологии и медицине.

Работы Э. Льюиса в области генетики развития были выполнены на Drosophila melanogaster и заложили основание современному пониманию универсальных эволюционно закрепленных правил, которые контролируют развитие животного организма.

Э. Вишаус так же проводил свои исследования на дрозофиле. Его работа была сфокусирована на изменениях, происходящих на ранних этапах развития в эмбрионе [Юрченко и другие, 2015].

Ричард Эксел и его коллеги изучили функции генов, отвечающих за восприятие вкуса у плодовой мушки. Они продолжили исследования молекулярных биологов из Йельского университета Питера Клайна и Джона Карлсона, идентифицировавших комплекс генов под общим названием GR, которые отвечают за формирование вкусовых рецепторов дрозофил: кодируемые ими белки присутствуют преимущественно в хоботках, ножках и усиках насекомых. Было обнаружено большое сходство между GR и обонятельными генами дрозофилы, что позволяет предположить, что у отдаленных предков мух за распознавание вкуса и запаха отвечали одни и те же гены, и лишь в процессе эволюции постепенно произошло их разделение на "вкусовые" и "обонятельные".

По мнению исследователей, дальнейшее изучение белков, отвечающих за распознавание вкуса и запаха, может привести к революции в сельском хозяйстве: можно будет создавать экологически чистые препараты, способные сделать сельскохозяйственные культуры невкусными или дурно пахнущими для насекомых-вредителей [Axel, 2001].

Так же имеется информация, что культуру дрозофил используют для исследований в космосе. На них исследуют влияние невесомости и условий космоса на иммунитет. Так, к примеру, дрозофилы, которые в течение нескольких дней жили на борту шаттла «Дискавери», оказались уязвимы для грибков - паразитов. В рамках эксперимента мух после полетов, заразили спорами паразитических грибов и болезнетворными бактериями. Результаты этих опытов позволили предположить, что гравитация напрямую влияет на работу Toll-рецепторов, которые отвечают за иммунную реакцию в случае взаимодействия с грибками [Жизнь в космосе сделала мушек уязвимыми для заражения плесневыми грибками, 2014]

Также был проведен другой эксперимент в космосе. Космонавты, которые работали на космической станции, выяснили, что дрозофилы в космических условиях размножаются лучше, чем на Земле. Ученые планируют изучить изменения, которые возникли в их белках, особенно в белках клеточного скелета, и оценить реакцию на стресс. А также проанализировать активность генов в космосе в сравнении с активностью генов контрольной группы мух на Земле и изучить влияние космической радиации на живые объекты в космосе [Маркина, 2014].

3.2 Особенности Drosophila melanogaster как тест - объекта

Drosophila melanogaster, так же имеет название плодовая, банановая, уксусная муха. Класс Insecta, отряд Diptera, семейство Drosophilidae. В природе обитает «дикий тип» дрозофилы (нормальный). Наиболее часто используется в генетических экспериментах. В современной научной литературе по биологии она часто упоминается как просто «дрозофила» или «плодовая мушка». Насекомое было причислено к роду Drosophila морфологически, тогда как современные генетические исследования относят её к роду Sophophora [Для сохранения дрозофилы…, 2009].

У дрозофилы жёлто - коричневая окраска с поперечными черными кольцами поперёк живота и красные глаза (рис. 1). Половой диморфизм выражен ярко: самцы заметно меньше самок, а также их задняя часть тела темнее. Самки в длину около 2,5 мм, для неопытного человека, пытающегося различить самцов и самок с применением микроскопа, возможно, наиболее отличительной отметкой будет, является группа остроконечных волос, которые окружают анус и гениталии самца.

Рисунок 1 - Внешний вид D. Melanogaster

У дрозофилы жизненный цикл зависит от температуры. При температуре равной 25 °C цикл составляет 10 дней, а при 18 °C - примерно в два раза больше. Самки откладывают яйца в загнивающий фрукт или другой органический материал. В среднем одна самка откладывает около 400 яиц (эмбрионов), каждое из которых около 0,5 мм в длину (рис. 2). Через 24 часа яйца раскрываются. Вылупившиеся из них личинки растут на протяжении 5 дней, при этом они дважды линяют за это время: через 24 и 48 часов после рождения (рис. 3). Личинки питаются микроорганизмами, которые разлагают фрукт, а также и самим сахаром, содержащиеся во фрукте. Потом личинки закупориваются в пупарий и претерпевают пятидневную стадию метаморфоза, в результате которого возникают взрослые особи (рис.4).



Рисунок 2 - Яйцо D. Melanogaster

Рисунок 3 - Личинка D. melanogaster

Рисунок 4 - Жизненный цикл D. melanogaster

Первое спаривание у самки может произойти не ранее чем через 12 часов после появления из кокона. Самки сохраняют сперму от самцов, с которыми они спариваются, для использования ее позже. Именно муху женского пола нужно отобрать до её первого спаривания (то есть девственную самку) и убедиться, что она спаривается только с конкретным самцом, которым выбран для эксперимента. Оплодотворённая самка может быть «возвращена в девственницы» путём длительной инкубации при температуре 10 °C. Эта температура убивает сперму дрозофилы.

Геном D. Melanogaster содержит 4 пары хромосом: X/Y пара и три аутосомы, маркируемых как 2, 3 и 4. Четвёртая хромосома точковидная и в ряде исследований её не принимают во внимание; X (или первая), 2 и 3-я хромосомы -- метацентрические. Геном состоит из порядка 132 миллионов оснований и приблизительно 13 767 генов. В настоящее время геном секвенирован и аннотирован.

Кариотип: 8 хромосом (2n) [Rasch и другие,1971].

Геном: 0,18 (0,12-0,21) пг [Detailed Record for Drosophila melanogaster].

Дрозофилам свойственно XY-определение пола. Важной и отличительной чертой механизма определения пола дрозофил от человека является то, что на пол влияет не наличие Y-хромосомы, а отношение числа Х-хромосом к числу аутосом. В дальнейшем, имеется в виду гаплоидный набор аутосом (n=4). Если отношение равно 1, то особь развивается в самку, а если равно 1/2 -- в самца. При нарушениях образуются бесплодные особи. Если отношение X-хромосом к аутосомам промежуточное между единицей и 1/2, то это интерсексы, если отношение меньше 1/2, то это суперсамцы, а при отношении больше 1 образуются суперсамки. Наличие Y-хромосомы никак не влияет на пол, но в ней находятся гены, ответственные за сперматогенез. Поэтому самцы без нее стерильны (табл. 2).

Таблица 2-- Хромосомное определение пола D. melanogaster

Число X-хромосом	Число аутосом в гаплоидном наборе	Отношение числа X-хромосом к числу аутосом	Пол (фенотип)
3	2	1,5	Суперсамка
2	2	1	Самка
2	3	0,(6)	Интерсекс
1	2	0,5	Самец
1	3	0,(3)	Суперсамец

В 1971 году Рон Конопка и Сеймур Бенцер опубликовали работу, озаглавленную «Clock mutants of Drosophila melanogaster». В этой работе были описаны первые мутации, влияющие на поведение дрозофилы. В природных условиях мушки демонстрируют активный ритм с периодом примерно 24 часа. Учёные нашли мутантов с более быстрыми и более медленными испорченными ритмами жизни -- мушек, которые двигались и отдыхали в произвольные интервалы времени. Исследования на протяжении 30 лет показали, что эти мутации (и другие похожие) затрагивают группу генов и их производные, отвечающие за биохимические или молекулярные часы.

3.3 Питательные среды для поддержания линий дрозофил

Помимо использованной нами (смотри главу 2) существуют и другие рецепты питательной среды для дрозофилы. Некоторые из них мы рассмотрим ниже.

1. Питательная среда Харвея Петерсона. 

В стандартном контейнере Deli (название марки контейнера) или в стаканчике на 24 или 32 унции (1 унция равна 29,56 мл.) смешиваются следующие ингредиенты:

· 1/2 чашки теплой воды;

· 1/2 столовая ложка сахара;

· 1 столовая ложка сухого молока;

· 4 - 6 столовых ложек растворимого картофельного пюре;

· 5 - 15 гранул пекарских дрожжей.

Сначала нужно растворить сахар в теплой воде и добавить в него сухое молоко. Затем все тщательно перемешать и добавить картофельное пюре. Количество добавляемого пюре зависит от уровня влажности, в которой будет находиться культура и от ее вентиляции. Если добавить недостаточное количество картофельного пюре, то среда будет влажной. А если добавить слишком много, то среды подсохнет. В первом случае влажность помешает доставанию мух и контейнера, а во втором случае мухи не смогут нормально размножаться. После добавления картофельного пюре нужно хорошо перемешать картошку с другими ингредиентами. Дать отстояться несколько минут до застывания и посыпать все дрожжами. Далее поместить на среду 25-- 50 плодовых мух. Этот метод хорош для приготовления большого количества питательной среды.

2. Питательная среда Power Mix

Сначала нужно вскипятить:

· 1 раздавленный банан;

· 1/2 банок концентрата грейпфрутового сока;

· 14 унций яблочного пюре (около 400 мл);

· 1/8 чашки черной патоки.

Нужно остудить вскипяченную смесь до терпимой температуры и вылить 6 ложек в контейнер. Добавить в этот контейнер 6 столовых ложек сухой смеси, которую готовят следующим способом: смешивают 1 чашку растворимого картофельного пюре и 1/2 чашку пивных дрожжей. Далее добавляют 2--4 столовые ложки водно--уксусной смеси (1 чашка воды смешивается с 1 чашкой уксуса) и все хорошо перемешивается. Количество добавления водно--уксусной смеси зависит от влажности места, в котором находится культура, а также от вентиляции контейнеров. После того как смесь застынет на нее помешают 25--50 плодовых мушек [Edmonds, 2007].

3.4 Метод учёта частоты доминантных летальных мутаций у Drosophila melanogaster

Метод учёта частоты доминантных летальных мутаций у Drosophila melanogaster -- это генетический тест, позволяющий установить мутагенен ли фактор в отношении половых клеток. Мутагенность фактора учитывается за счет не развившихся эмбрионов. Этот метод генотоксикологии очень простой, экономичный и высокочувствительный для выявления мутагенного эффекта самых различных факторов (как для суммарной мутагенной активности, так и для индивидуальных загрязнителей) [Прохорова, 2001; Schmid, 1961].

Метод учёта частоты доминантных летальных мутаций у Drosophila melanogaster получил широкую известность еще в 50-70-х годах. Тогда он использовался активно и повсеместно. С помощью его выяснили мутагенность химических соединений (напр. этиленимина) и особенно гамма - лучей. Важную роль в становлении метода сыграли работы Мэри Л. Александер [Schmid, 1961; Mary, 1964]. Метод до сих пор не потерял своей актуальности и используется в биотестирование в настоящее время [Песня и другие, 2011].

Данный метод используют для тестирования мутагенности:

1.Природных сред: воды и почвы

2.Химических веществ

3.Доз радиации

4.Электромагнитных излучений и полей [Песня и другие, 2011].

Кроме того, этот метод также рекомендован в качестве теста на канцерогены [Sobels, 1976].

Для этого метода объектом была выбрана Drosophila melanogaster, так как она обладает рядом полезных свойств. Drosophila melanogaster один из наиболее хорошо изученных модельных объектов генетики высших организмов. Около 2/3 генов, которые отвечают за болезни у человека, обнаруживают сходство в геноме дрозофилы.

Базовые биохимические процессы в клетках Drosophila melanogaster и млекопитающих совпадают. Достоинством Drosophila melanogaster можно считать микросомальную активацию веществ, происходящих в их процессе метаболизма, в результате которых промутагены превращаются в мутагены. Это позволяет выявить мутагены, приобретающие в процессе метаболизма [Sobels, 1976].

Всемирная организация здравоохранения рекомендует использовать тесты с Drosophila melanogaster для исследования токсической и мутагенной активности антропогенных ксенобиотиков [ВОЗ, 1989].

Для постановки опыта используют линии дрозофилы с очень низкой спонтанной мутагенностью по отношению мутаций некоторых типов (ДЛМ, РСПЛМ, некоторых хромосомных мутаций). Это делает дрозофил очень удобными для опытов, цель которых выяснение различий эффектов индуцированного мутагенеза.

Воздействию фактора подвергают только самцов. При изучении влияния электромагнитных излучений нужно подобрать емкость из материала с наименьшими отражающими свойствами. Если нужно изучить мутагенное действие химического соединения, то его в необходимой концентрации примешивают в питательную среду. Для того чтобы изучить мутагенную активность воды или почвы, используют стаканчики в качестве емкости, на дно которых наливают 5 мл исследуемой воды (или вытяжки из почвы). На дно этого стаканчика помещают металлическую сеточку таким образом, чтобы вода касалась только нижней ее поверхности. Затем на эту сеточку помещают самцов, которые предварительно были посажены на трехчасовое голодание. Параллельно с проводящими экспериментами ставится интактный контроль. По окончании экспозиции самцов их скрещивают с самками. Скрещивание проводят в чашках Петри, на дно которых заранее была залита агаризованная среда. В чашках мух содержат примерно трое суток, после этого через сутки отсаживают самцов, а через двое суток -- самок. Чашки Петри, в которые были отложены яйца, помещают в термостат на пять суток, чтобы личинки вышли из яйца. По истечении этого времени проводится подсчет яиц под микроскопом [Изюмов и другие, 1976].

Доминантные летальные мутации, вызываются факторами в сперматозоидах, что приводит к гибели зиготы. А также они могут вызываться за счёт возникновения в эмбриогенезе, дефицита в геноме в результате хромосомных аберраций, или за счёт различных повреждений, которые приводят к блоку редупликации. Поздние или ранние эмбриональные летали (ПЭЛ и РЭЛ) -- это два класса ДЛМ, которые можно хорошо определить визуально. В ПЭЛ яйца бывают коричневого, палевого или жёлтого цвета, а в РЭЛ -- они белые, а внутри них видны белые непрозрачные уплотнения. Это остатки этапов сегрегации эмбриона [Werner, 1961; Mary, 1964]. Ведется подсчет на стадии яйца, а точнее считается количество личинок, которые развились из яйца и количество неразвившихся яиц. Так же есть вероятность, что мухи при воздействии на них мутагенов могут откладывать неоплодотворенные яйца. Причиной этого являются физиологические повреждения сперматозоидов или же снижение половой активности самцов. Для определения частоты ДЛМ существуют два варианта. В первом варианте идет подсчет общего количества развившихся и неразвившихся яиц. Погибшие яйца считают как количество леталей [Mary, 1964]. Во втором варианте за летали учитываются только ПЭЛ и РЭЛ. Частота ДЛМ -- рассчитывается по формуле (2):

ДЛМ = n / N * 100 %,(2)

где n -- количество неразвившихся яиц,

N -- общее число отложенных яиц.

Глава 4. Пути повышения эффективности использования Drosophila melanogaster в биотестировании

4.1 Сложности, возникающие в биотестировании

Информация, содержащаяся в этом разделе, составляет секрет производства и не может быть размещена в открытом доступе.

4.2 Пути решения проблем биотестирования с использованием Drosophila melanogaster

Информация, содержащаяся в этом разделе, составляет секрет производства и не может быть размещена в открытом доступе.

Заключение

Целью дипломной работы была разработка методов оптимизации использования Drosophila melanogaster в целях биотестирования

В ходе решения поставленной цели были решены следующие задачи:

1. Выделены следующие проблемы, связанные с биотестированием Drosophila melanogaster: появление плесневых грибов на питательной среде, проблема внесения тестируемых продуктов и мух на субстрат.

2. Экспериментальным путем установлена эффективность собственных и известных из литературы путей повышения эффективности использования Drosophila melanogaster как тест - объекта. Добавление пропионовой кислоты снижает вероятность плесневых грибов на 14%. А опыты с содой и препаратом Липтобэк Эдванс Аква оказались неэффективными. В опыте с содой 100% смертность мух, а в опытах с препаратом Липтобэк Эдванс Аква 100% появление плесневых грибов.

На основании проведенного исследования были сделаны следующие выводы:

1. Drosophila melanogaster до сих пор является удобным и информативным модельным объектом для проведения исследований.

2. Плесневые грибы поражают питательную среду независимо от наличия в ней мух.

3. Для избавления от плесневых грибов наиболее эффективным средством является добавление спирта в питательную среду дрозофил.

4. Возможна пересадка тест -- объектов на стадии пупарии. Однако недостатком этого метода является невозможность прогнозирования половой принадлежности вылупившихся имаго. Кроме того, существует большой риск повреждения пупария при переносе.

5. Для снижения активности тест-объектов при температуре +1єС мух можно держать до 5 минут, а при -- 15єС не больше 3--х минут.

Список литературы

1. Александрова В.В. Биотестирование как современный метод оценки токсичности природных и сточных вод / В.В. Александрова // Монография: Нижневартовск государственного университета 2013: Монография. -- Нижневартовск: НВГУ, 2013. -- 119 с.

2. Бабков В.В. Московская школа эволюционной генетики / В.В. Бабков // М.:Наука,1985.

3. Балакирев И.В. Применение методов биоиндикации при экологическом мониторинге объектов добычи газа / И.В. Балакирев, А.С. Никишова, Е.Е. Ильякова, С.И. Липник // Научно - технический сборник вести газовой науки. - 2013. - №2. - С. 118 - 121.

4. Берг Р.Л. Генетический анализ двух природных популяций Drosophila melanogaster / Р.Л. Берг, Э.Б. Бриссенден, В.Т. Александрийская, К.Ф. Галковская // Журнал общей биологии, 1941. - 2(1). С. 143-158.

5. Берг Р.Л. Мутация «желтая» (yellow) в популяции Drosophila melanogaster / Р.Л. Берг // Умани. Вести. Ленингр. Университета. - Сер. Биология, 1961. - 1(3). - С. 77-89.

6. Бубнов А.Г. Биотестовый анализ - интегральный метод оценки качества объектов окружающей среды / А.Г. Бубнов, С.А. Буймова, А.А. Гущин и др.; под ред. В.И. Гриневича. - Иваново: ГОУ ВПО Ивановский государственный химико-технологический университет, 2007. - 112 с.

7. ВОЗ Руководство по краткосрочным тестам для выявления мутагенных и канцерогенных химических веществ. Женева: ВОЗ, 1989. --189 с.

8. Галицкая П.Ю. Тестирование отходов, почв, материалов с использованием живых систем / П.Ю. Галицкая, С.Ю.Селивановская, Р.Х.Гумерова // Казань: Казанский университет, 2011. - 47 с.

9. Гершензон С.М. Новые данные по генетике природных популяций Drosophila fasctata / С.М. Гершензон // Сборник работ по генетике.- Киев: Институт зоологии АН УССР, 1941.- С. 4-5.

10. Голубовский М.Д. Анализ нестабильности аллелей гена yellow, выделенных из природной популяции дрозофил в период вспышки мутабильности / М.Д. Голубовский, И.К. Захаров, О.А. Соколова // Генетика, 1987. - 23(9). - С. 1595 - 1603.

11. Для сохранения дрозофилы генетики решили переименовать мух [Электронный ресурс] -- Lenta.ru, 21 января 2009. - Режим доступа: https://lenta.ru/news/2009/01/21/drosophila

12. Дусеева Н.Д. О распространении высокой мутабильности в популяциях Drosophila melanogaster / Н.Д. Дусеева // Докл. АН СССР, 1948. - 59(1). - С. 151-153.

13. Жизнь в космосе сделала мушек уязвимыми для заражения грибком, 2014 [Электронный ресурс]. - Режим доступа: http://ria.ru/science/20140125/991251013.html.

14. Журавлева Н.В. Комплексная оценка токсичности промышленных отходов предприятий Кемеровской области / Н.В.Журавлева, Т.Н.Воропаева, О.В. Иваныкина // Вестник Кузбасского государственного технического университета. - 2006. - №6. - С. 86 - 89.

15. Захаров В.М. Асимметрия животных (популяционно - филогенетический подход) / В.М. Захаров // М.: Наука, 1987. - 216 с.

16. Захаров И.А. Феодосий Григорьевич Добржанский - 110 лет со дня рождения / И.А. Захаров // Москва: Вестник ВОГиС, 2010. - Т. 14. - № 2. - С. 213 - 222.

17. Захаров И.К. Возвращение моды на мутацию yellow в природной популяции Drosophila melanogaster / И.К. Захаров, М.Д. Голубовский // Умани. - Генетика, 1985. - 21(8). - С. 1298-1305.

18. Зерщикова Т.А. Изучение качества воды в реке Везелка методом биотестирования с использованием дафний / Т.А. Зерщикова, Л.П. Флоринская // Успехи современного естествознания. - 2004. - №11. - С. 109 - 110.

19. Иванов Ю.Н. Повышение мутабильности и появление мутационно нестабильных аллелей локуса singed в популяциях Drosophila melanogaster / Ю.Н. Иванов, М.Д. Голубовский // Генетика, 1977. - 13(4).- С. 655-666.

20. Иваныкина Т.В. Актуальность биоиндикации растений в условиях техногенного загрязнения / Т. В. Иваныкина // Вестник Амурского государственного университета. - 2010. - №51. - С. 81 - 83.

21. Изюмов Ю.Г. Реализация повреждений, индуцированных этиленнимином на разных стадиях сперматогенеза, при хранении спермы в семяприемниках интактных самок / Ю.Г. Изюмов, Е.М. Литвинова, П.Я. Шварцман; Л.: Изд.-во ЛГПИ им. А. И. Герцена, 1976. -- С. 64-70.

22. Козак М.Ф. Дрозофила - модельный объект генетики: учебно-методическое пособие / М.Ф. Козак. - Астрахань: Астраханский университет, 2007. - 87 с.

23. Колосова Л.Д. Раиса Львовна Берг: к 90-летию со дня рождения / Л.Д. Колосова, С.И. Малецкий, И.К. Захаров // Информационный вестник ВОГиС, 2003. - 24/25. - С. 11-17.

24. Корпакова И.Г. Методологические проблемы оценки токсичности компонентов среды методами биотестирования / И.Г. Корпакова, Д.Ф. Афанасьев, И.Е. Цибульский и др. // Защитник окружающей среды в нефтегазовом комплексе. - 2007. - №9. - С. 23 - 29.

25. Ляшенко О.А. Биоиндикация и биотестирование в охране окружающей среды / О.А. Ляшенко. - СПб.: СПб ГТУРП, 2012. - 67 с.

26. Маркина Н. Дрозофилы в условиях невесомости размножаются лучше, чем на Земле [Электронный ресурс]: Газета.ru, 2014. - Режим доступа: http://www.gazeta.ru/science/2014/11/12_a_6298353.shtml.

27. Маячкина Н.В. Особенности биотестирования почв с целью их экотоксикологической оценки / Н.В. Маячкина, М.В. Чугунова // Вестник Нижегородского университета им. Н.И. Лобачевского. - 2009. - №1. - С. 84 - 93.

28. Медведев Н.Н. Практическая генетика / Н.Н. Медведев. - М.: Наука, 1968. - 294 с.

29. Мелехова О.П. Биологический контроль окружающей среды: биоиндикация и биотестирование / О.П. Мелехова, Е.И. Егорова, Т.И. Евсеева и др.; под ред. О.П. Мелеховой и Е.И. Егоровой. - М.: Академия, 2007. - 288 с.

30. Мичукова М.В. Изучение токсичности сточных вод целлюлозно-бумажного производства методом биотестирования на Daphnia Magna Str. / М.В. Мичукова, А.В. Канарский, З.А. Канарская // Вестник Казанского технологического университета. - 2006. - №1. - С. 95 - 102.

31. Песня Д.С. Исследование токсического и генотоксических эффектов синтетических пищевых красителей методом Allium test / Д.С. Песня, А.В. Романовский, И.М. Прохорова // Ярославский педагогический вестник. - 2012. - №3. - С.86 - 93.

32. Песня Д.С., Романовский А.В., Прохорова И.М., Артёмова Т.К., Ковалева М.И., Фомичева А.Н., Соколов С.А., Кондакова Е.С., Шешина К.А., Вакорин С.А. Исследование биологического эффекта модулированного УВЧ излучения на растительных и животных организмах in vivo // Биомедицинские технологии и радиоэлектроника: статья. -- ИПРЖР: Москва "Радиотехника", 2011. -- С. 22.

33. Прохорова И.М. Система тестов для оценки генотоксической активности факторов среды / И.М. Прохорова // Ярославль, 2001.

34. Родичева Э.К. Биолюминесцентные биотесты на основе светящихся бактерий для экологического мониторинга / Э.К. Родичева, А.М. Кузнецова, С.Е. Медведева // Вестник ОГУ. - 2004. - №5. - С. 96 - 100.

35. Самин Д.К. Сто великих научных открытий / Д.К. Самин // М.: Вече, 2000.

36. Соколова Н. В. Лечение пищевой чайной содой [Электронный ресурс]. - Режим доступа: http://www.ayzdorov.ru/novosti_5_lechenie_pishevoii_sodoii.php.

37. Терехова В.А. Биотестирование почв: подходы и проблемы / В.А. Терехова // Почвоведение. - 2011. - №2. - С. 190 - 198.

38. Туманов А.А. Водные беспозвоночные как аналитические индикаторы / А.А. Туманов, И.Е. Постнов // Гидробиологический журнал. 1983. Т. 19. № 5. С. 3--16.

39. Фандо Р.А. Формирование научных школ в отечественной генетике в 1930-1940-е гг. / Р.А. Фандо // М.: Дом И.И. Шумиловой, 2005

40. Хмырева Н.А. Мониторинг качества питьевой воды в г. Кемерово / Н.А. Хмырева, А.Ю. Игнатова, Е.А. Макаревич // Вестник Кузбасского государственного технического университета. - 2010. - №6. - С.148 - 150.

41. Юрченко Н.Н. История открытий на дрозофиле - этапы развития генетики / Н.Н. Юрченко, А.В. Иванников, И.К. Захаров // Вавиловский журнал селекции и генетики. - Новосибирск: Институт цитологии и генетики СО РАН, 2015. - Т. 10. - №1. - С. 39 - 49.

42. Юрченко Н.Н. История открытий на дрозофиле - этапы развития генетики / Н.Н. Юрченко, А.В. Иванников, И.К. Захаров // Институт цитологии и генетики СО РАН (Новосибирск), 2015. - Т. 19.- №1. - С. 39 - 49

43. Юрченко Н.Н. Современная генетика локуса white у Drosophila melanogaster / Н.Н. Юрченко, М.Д. Голубовский // Генетика. - 1998. - №24(4). - С. 581 - 591.

44. Axel R. A chemosensory gene family encoding candidate gustatory and olfactory receptors in Drosophila / R. Axel, K. Scott, R Jr. Brady, A. Cravchik, P. Morozov, A. Rzhetsky, C. Zuker // Cell. - 2001. - 104(5). - P. 661-73.

45. Detailed Record for Drosophila melanogaster [Электронный ресурс] Режим доступа: http://www.genomesize.com/result_species.php?id=3942.

46. Devin Edmonds Culturing Fruit Flies / Перевод с английского - Е. Дедовская и А. Громов // [Электронный ресурс], 2007. - Режим доступа: http://vitawater.ru/terra/auth-mat/edmonds/droso.shtml.

47. Mary L. A. Dose rate effect in the developing germ cells of male Drosophila / Mary L. Alexander, Janet Bergendahl // Genetics, 1964. -- 49(1). - P. 1-16.

48. Rasch E.M. The DNA content of sperm of Drosophila melanogaster / E.M. Rasch, H.J. Barr, R.W. Rasch // Chromosoma, 1971. - 33(1). - P. 1-18.

49. Schmid W. The effect of carbon monoxide as a respiratory inhibitor on the production of dominant lethal mutations by X-rays in Drosophila / W. Schmid // Genetics, 1961. -- 46(6). - P. 663-670.

50. Sobels F.H. Assaying potential carcinogens with Drosophila / F.H. Sobels, E. Vogel // Environ Health Perspect, 1976. -- 15. - P. 141 - 146.

Размещено на Allbest.ru