Исследование бактерий по почвенному профилю дерновой альфегумусовой глеевой почвы

Объект исследования и подготовка образцов почв к микробиологическому исследованию. Определение общей численности сапротрофных и олиготрофных бактерий в 5 горизонтах почвенного профиля дерновой почвы путем прямого счета по методу Виноградского-Брида.

Рубрика Биология и естествознание
Вид курсовая работа
Язык русский
Дата добавления 23.01.2011
Размер файла 41,1 K

Отправить свою хорошую работу в базу знаний просто. Используйте форму, расположенную ниже

Студенты, аспиранты, молодые ученые, использующие базу знаний в своей учебе и работе, будут вам очень благодарны.

Оглавление

Введение

1 Материалы и методы эмпирического исследования

1.1 Объект исследования и подготовка образцов почв к микробиологическому исследованию

1.2 Определение общей численности бактерий в почве

1.3 Определение численности сапротрофов и олиготрофов

2 Результаты и обсуждение исследования

Заключение

Список использованных источников и литературы

Введение

Почва является основным депо разнообразных микроорганизмов на Земле [1;10]. Известно, что 60-90 % биомассы Земли представлено микроорганизмами, населяющими, главным образом почву [2], причем их численность в почве, по сравнению с другими природными средами, выше на несколько порядков [3].

Микроорганизмы распределяются по всему почвенному профилю вплоть до подстилающей породы [1;10]. Значительный практический и теоретический интерес представляет вопрос о том, как изменяется численность микроорганизмов по почвенному профилю, а также динамка численности микроорганизмов в нижнем почвенном горизонте в силу новизны самой проблемы. Особенно это касается недостаточно исследованных почв, имеющих в своем профиле оглеенные горизонты.

В анаэробных условиях при участии гетеротрофных бактерий, использующих органическое вещество, при постоянном или периодическом увлажнении идет один из интересных почвообразовательных процессов - глееобразование [2;8]. Этот процесс сопровождается восстановлением Fe(III) до Fe(II) и выносом Fe(II)-соединений в нижние горизонты почвенного профиля. Глееобразование практически всюду может происходить в результате антропогенной деятельности, если она приводит к переувлажнению почв.

В условиях застойно-промывного режима в результате глееобразования происходит максимальный вынос не только железа, но и других металлов - марганца, алюминия, кальция, магния [8;9]. Изучение особенностей микроорганизмов глеевых почв весьма актуально, так как при антропогенном воздействии на почвенный покров, в том числе при загрязнении почвы нефтью и нефтепродуктами, подобные почвы встречаются практически повсеместно. В Ярославской области почвы с различной степенью оглеения занимают около 18,3 %, что составляет 662,5 га земель [8].

Почвенные микроскопические грибы и бактерии являются практически единственными деструкторами органического вещества, поступающего в почву в виде растительного опада, мертвых животных, а также органических ксенобиотиков [4;9]. Важным микробиологическим показателем состояния почвы является соотношение численности бактерий двух физиологических групп, которые входят в функциональную структуру почвы: сапротрофов и олиготрофов [2;3]. Сапротрофы разлагают разнообразные органические соединения в значительной концентрации, попадающие в почву. Олиготрофы способны ассимилировать органические соединения в условиях их низкой концентрации, при этом они разлагают остаточные количества органических соединений, «рассеивающиеся» в почве при деятельности сапротрофов и автохтонных микроорганизмов, разлагающих почвенный гумус [1;3].

Целью работы было изучение динамики численности бактерий по почвенному профилю дерновой альфегумусовой глеевой почвы.

Для решения данной цели были поставлены следующие задачи:

1. Определить общую численность бактерий в 5 горизонтах почвенного профиля дерновой альфегумусовой глеевой почвы путем прямого счета по методу Виноградского-Брида.

2. Определить численность сапротрофных бактерий в каждом горизонте исследуемой почвы.

3. Определить численность олиготрофных бактерий в каждом горизонте исследуемой почвы.

4. Проанализировать полученные данные по общей численности, численности сапротрофов и численности олиготрофов.

1 Материалы и методы исследования

1.1 Объект исследования и подготовка образцов почвы

к микробиологическому исследованию

Объектом исследования служили пять образцов дерновой альфегумусовой глеевой почвы, отобранной в 5 км от поселка Дорожный Ярославского района Ярославской области. Охарактеризуем горизонты по мере увеличения глубины их залегания:

1. почвенный образец взят из темногумусового горизонта почвенного разреза. Глубина 7 - 12 см, цвет темно-серый, структура зернистая, наблюдается обилие мелких корней;

2. образец взят из горизонта темногумусового с признаками оглеения почвенного разреза. Глубина 12 - 16 см, цвет темно-серый, наблюдаются мелкие серые, рыжие и сизые пятна, в качестве включений представлены мелкие корни, механический состав определяется как среднесуглинистый;

3. образец взят из светлогумусового горизонта почвенного разреза. Глубина 16 - 23 см, цвет серый, наблюдаются рыжие и сизые пятна, механический состав определяется как среднесуглинистый, структура зернисто-комковатая, в качестве включений представлены мелкие корни;

4. образец взят из иллювиально-гумусово-железистого горизонта почвенного разреза. Глубина 25 - 45 см, преобладающий цвет светло-бурый с многочисленными охристыми, сизыми и голубыми затеками и пятнами; до глубины 45 см заметны затеки гумусового вещества; горизонт плотного сложения, сильно увлажнен; механический состав определяется как легкоглинистый;

5. образец взят из глеевого горизонта почвенного разреза. Глубина 45 - 70 см, цвет темно-серый, присутствуют кирпично-красные включения; горизонт более уплотнен, с глубины 70 см просачивается вода.

Подготовку почвенных образцов проводили согласно существующим рекомендациям [7].

1. Почву высыпали на сухое стекло, тщательно перемешивали и раскладывали ровным слоем. Пользуясь пинцетом, удаляли мелкие корешки и другие посторонние включения. Из разных мест рассыпанной почвы отбирали небольшие порции и взвешивали на технических весах по 1 г почвы из каждого горизонта.

2. Для разрушения почвенных агрегатов и десорбции клеток микроорганизмов с почвенных частиц, каждую навеску почвы вносили в отдельную колбу, содержащую 100 мл стерильного физиологического раствора (0,5% раствор хлорида натрия). Колбы встряхивали на качалке в течение 30 минут.

1.2 Определение общей численности бактерий в почве

Общее количество бактерий в почве учитывали прямым счетом на фиксированных окрашенных мазках (метод Виноградского-Брида) [6;7].

1. Пять предметных стекол обезжиривали и на каждом обводили карандашом по стеклу квадрат со стороной 15 мм.

2. Бактериальную суспензию объемом 0,1 мл из соответствующей колбы наносили на стекло и равномерно распределяли по площади квадрата.

3. Препараты подсушивали на воздухе, фиксировали в пламени спиртовки (проносили над пламенем 2 - 3 раза) и окрашивали 2 минуты фуксином. Краситель сливали, препарат промывали и высушивали между полосками фильтровальной бумаги.

4. Подсчитывали количество клеток, используя световой микроскоп марки «Биолам» с масляной иммерсионной системой при увеличении 10Ч1,0Ч100.

Для прямого счета микробных клеток вставляли в окуляр микроскопа сеточку Гаженко, 9 маленьких квадратиков которой составляют поле зрения. Просматривали 15 полей зрения.

Общую численность бактерий в 1 г почвы (Nобщ.) определяли по формуле:

S Ч Уni

N общ. = zЧ sЧv Ч100 [кл/г], где

S - общая площадь окрашенного на стекле препарата (225 мм2);

Уni - сумма подсчитанных под микроскопом микробных клеток;

z - количество просмотренных полей зрения (15);

s - площадь одного поля зрения (1089Ч10-6 мм2);

v - объем образца воды, затраченный на приготовление окрашенного препарата (0,1 мл);

100 - разведение первоначального образца почвы в 100 раз.

Опыт проводили в двухкратной повторности, чтобы рассчитать доверительный интервал.

1.3 Определение численности сапротрофов и олиготрофов

Определение количества клеток сапротрофов (Nсапр.) проводили высевом на жидкую питательную среду - мясо-пептонный бульон (МПБ) [6]. Для приготовления МПБ использовали стандартную питательную среду (ИЛО «Питательные среды»). Состав МПБ, г/л: панкреатический гидролизат кильки - 17,9; NaCl - 7,7 ± 0,3; вода дистиллированная - 1000 мл. Среду стерилизовали автоклавированием 20 мин при 1 атм. Численность определяли при помощи метода наиболее вероятного числа (НВЧ) с использованием таблиц Мак-Креди [7]. Готовили ряд предельных десятикратных разведений 1 г почвы. Для посевов использовали разведения от 10-1 до 10-7. Количество посевного материала везде составляло 1 мл, посев осуществляли в трехкратной повторности. Инкубацию проводили в термостате при 28 0С в течение 7 сут. После инкубации регистрировали рост бактерий, используя различные показатели: помутнение среды, образование пленки [6;7].

Для выделения олиготрофов использовали среду М2 следующего состава [11]: Na2HPO4 - 0,8 г; KH2PO4 - 0,5 г; NH4Cl - 0,5 г; MgSO4 - 0,2 г; CaCl2 - 0,1 г; FeSO4Ч7H2O -15 мг; дрожжевой экстракт - 0,1 г ; пептон - 0,2 г; агар - 15 г; глюкоза - 0,2 г; вода дистиллированная - 1000 мл. Среду стерилизовали автоклавированием 20 мин при 1 атм. Численность олиготрофов (Nолиг.) определяли методом высева по Коху [7]. Готовили ряд предельных десятикратных разведений 1 г почвы в дистиллированной воде: от 10-1 до 10-9. По 1 мл суспензии из каждого разведения вносили в три параллельные чашки Петри. Все чашки заливали расплавленной средой. Посевы инкубировали 14 сут., а затем подсчитывали количество колоний, выросших на каждой чашке и среднее число колоний, выросших из одного разведения. При этом определяли значимость различий двух повторных определений по критерию ч2, рассчитываемому по формуле [7]:

(ni - n)2

ч 2 = п ,

где пi - число колоний, выросших на первой и второй чашках, засеянных из одного разведения; п - их среднее значение.

Различие считается значимым при ч 2 не менее 3,841. Пересчет числа выросших колоний (п) на численность бактерий соответствующей группы (N) производили исходя из предположения, что одной колониеобразующей единицей (КОЕ) является отдельная микробная клетка. Для этого использовали формулу:

nЧr

Nолиг. = v [кл/г],

где п - среднее число колоний на чашках Петри, засеянных из одного разведения; r - величина разведения; v - объем образца, посеянного на чашку (мл).

Кроме того, рассчитывали отношение Nсапр. к Nобщ. для каждого горизонта.

2 Результаты и обсуждение исследования

Результаты начального этапа микробиологического исследования почвенных образцов представлены в приложении 2 и на рисунке 1.

Таблица 1

Общая численность бактерий в почвенном профиле

дерновой альфегумусовой глеевой почвы

Горизонты (расположены от верхнего к нижнему)

Численность бактерий, кл/г сухой почвы

1.

(5,35±0,05)Ч109

2.

(6,2±0,1)Ч109

3.

(4,8±0,15)Ч109

4.

(4,5±0,05)Ч109

5.

(3,65±0,1)Ч109

Рис. 1. Динамика общей численности бактерий в почвенном профиле дерновой альфегумусовой глеевой почвы. N - численность бактерий

(Ч 109 кл/г почвы).

Как видно из табл. 1 и рис. 1, максимальное значение общей численности бактерий (Nобщ.) - 6,2Ч109 кл/г - наблюдали во втором горизонте, по сравнению с остальными четырьмя горизонтами. Этот факт можно объяснить тем, что два верхних горизонта исследуемой почвы обладают хорошей проницаемостью для воды и поступающего с ней органического вещества. Третий горизонт почвенного профиля уже более уплотнен, поэтому органическое вещество, накапливаясь во втором горизонте, является фактором, стимулирующим развитие в нем почвенных микроорганизмов.

Данные табл. 1 показывают, что Nобщ. достоверно снижалась с увеличением глубины залегания почвенного горизонта: от второго к пятому, самому нижнему. Полученный результат согласуется с тем фактом, что содержание органического вещества, необходимого для развития почвенных микроорганизмов, также снижается с увеличением глубины залегания горизонта. При переходе от верхнего горизонта к нижележащим изменяются также окислительно-восстановительные условия, pH и др.

Порядок величин Nобщ. в каждом горизонте был одинаков - 109 кл/г. По-видимому, в верхних более рыхлых горизонтах, куда поступает достаточное количество кислорода с поверхности, создались оптимальные условия для развития аэробных микроорганизмов. В нижележащих горизонтах содержание кислорода минимально, и прежний порядок значения Nобщ. объясняется активным развитием анаэробов.

Численность сапротрофных бактерий (Nсапр.) уменьшалась от первого горизонта к третьему, причем резкое снижение численности - более чем в 6 раз - было отмечено при переходе от первого ко второму горизонту (рис. 2А). Nсапр. (таб.2) в четвертом горизонте - 4,5Ч104 кл/г - была незначительно выше, по сравнению с третьим - 2,0Ч104 кл/г, - тогда как в пятом она опять понижалось до значения, отмеченного в третьем горизонте (рис. 2А). Как показано на рис. 2Б, численность олиготрофных бактерий (Nолиг.) последовательно снижалась с увеличением глубины залегания почвенного горизонта от 9,5Ч107 в первом до 1,5Ч107 кл/г в пятом горизонте (таб.2).

Рис. 2. Численность сапротрофов (А) и олиготрофов (Б) в почвенном профиле дерновой альфегумусовой глеевой почвы. N - численность бактерий (кл/г почвы)

Таблица 2

Численность сапротрофных и олиготрофных бактерий в почвенном профиле дерновой альфегумусовой глеевой почвы

Горизонт

Сапротрофы

Олиготрофы

1

2,5Ч105

9,5Ч107

2

4,0Ч104

7,5Ч107

3

2,0Ч104

3,5Ч107

4

4,5Ч104

2,0Ч107

5

1,4Ч104

1,5Ч107

В общем, Nсапр. находилась на уровне 105 кл/г в первом, и 104 кл/г в остальных горизонтах (прил. 3). Nолиг. соответствовала 107 кл/г в каждом горизонте профиля. Таким образом, Nолиг. была меньше, чем Nсапр.: в первом горизонте в 100, а в остальных четырех - в 1000 раз. Выявленное значительное преобладание олиготрофов над сапротрофами свидетельствует о том, что в исследованной почве низкое содержание легкоразлагаемой органики [2], следовательно, данная почва не подвергалась антропогенному загрязнению. Бактерии функционируют в ней за счет органического вещества самой почвы. Сапротрофы, развивающиеся в условиях высокой концентрации органики [3;4], уже переработали ее большую часть. В настоящее время в исследованной почве доминируют олиготрофы, которым для существования необходимо низкое содержание органики в среде [2;4].

Интересным является факт, что для горизонтов с четвертого по пятый отмечаются признаки оглеения почвы - сизые и голубые пятна и затеки. В настоящее время известны три совокупные причины глеегенеза [5]: 1) высокая влажность; 2) наличие легкоразлагаемого органического вещества в избыточном количестве; 3) жизнедеятельность гетеротрофных микроорганизмов. Согласно нашим результатам, процесс глеегенеза идет в исследуемой почве при доминировании в микробоценозе олиготрофных бактерий, а, следовательно, в отсутствие избытка органического вещества.

Отношение Nсапр. к Nобщ. составило величины порядка 10-4 - 10-5 (табл.3), что свидетельствует о климаксном состоянии микробоценоза [3] и о доминировании бактерий, которые получают необходимые питательные вещества и энергию за счет использования трудноразлагаемых органических веществ почвы в течение длительного времени.

Таблица 3

Отношение общей численности к численности сапротрофных бактерий в почвенном профиле дерновой альфегумусовой глеевой почвы

Горизонты (расположены от верхнего к нижнему)

Nсапр.

Nобщ.

1.

0,5Ч10-4

2.

0,6Ч10-5

3.

0,4Ч10-5

4.

1,0Ч10-5

5.

0,4Ч10-5

Примечание: Nсапр. - численность сапротрофных бактерий (кл/г); Nобщ. - общая численность бактерий (кл/г).

Заключение

1. Общая численность бактерий снижается с глубиной залегания почвенного горизонта, максимальное значение - 6,2Ч109 кл/г - наблюдается во втором горизонте за счет того, что два верхних горизонта исследуемой почвы обладают хорошей проницаемостью для воды и поступающего с ней органического вещества.

2. Количество сапротрофных бактерий уменьшалось от первого горизонта к третьему - от 2,5Ч105 до 1,4Ч104 кл/г, - причем резкое снижение численности - более чем в 6 раз (от 2,5Ч105 до 4,0Ч104 кл/г) - было отмечено при переходе от первого ко второму горизонту.

3. Численность олиготрофных бактерий последовательно снижалась с увеличением глубины залегания почвенного горизонта от 9,5Ч107 в первом до 1,5Ч107 кл/г в пятом горизонтах.

4. Отношение численности олиготрофных бактерий к сапротрофным для первого горизонта составляет величину порядка 102, а в остальных четырех - 103, что свидетельствует о значительном преобладании олиготрофов над сапротрофами.

5. Отношение численности сапротрофных бактерий к общей численности бактерий составляет величины порядка 10-4 - 10-5, что свидетельствует о климаксном состоянии микробоценоза и о доминировании бактерий, жизнедеятельность которых связана с использованием трудноразлагаемых органических веществ почвы.

6. Согласно нашим результатам, процесс глеегенеза идет в исследуемой почве при доминировании в микробоценозе олиготрофных бактерий, а, следовательно, в отсутствие избытка органического вещества.

Список использованных источников и литературы

1. Бабьева И.П. Биология почв / И.П. Бабьева, Г.М. Зенова. - М.: МГУ, 1989. - 336 с.

2. Емцев В.Т. Микробиология / В.Т. Емцев, Е.Н. Мишустин. - М.: Дрофа, 2005. - 445 с.

3. Добровольская Т.Г. О показателях структуры микробных сообществ / Т.Г. Добровольская, И.Ю. Чернов, Д.Г. Звягинцев // Микробиология. - 1997. - Т.66. - №3. - С. 408-414.

4. Заварзин Г.А. Введение в природоведческую микробиологию / Г.А. Заварзин, Н.Т. Колотилова. - М.: Книжный дом «Университет», 2001. - 256 с.

5. Зайдельман, Ф.Р. Процесс глееобразования и его роль в формировании почв / Ф.Р. Зайдельман. - М.: МГУ, 1998. - 316 с.

6. Кузнецов С.И. Методы изучения водных микроорганизмов / С.И. Кузнецов, Г.А. Дубинина. - М.: Наука, 1989. - 288 с.

7. Практикум по микробиологии / Под ред. Н.С. Егорова. - М: МГУ, 1976. - 307 с.

8. Соединения железа, алюминия, кремния и марганца в почвах лесных экосистем таежной зоны / М. Мурашкина, Г. Копцик, и др. // Почвоведение. - 2004. - № 1. - С. 40- 49.

9. Умаров М.М. Экология и почвы / М.М. Умаров. Избранные лекции 1-7 школ, М.: Пущино, 1998, 15-21 с.

10. Экология микроорганизмов: учебник / А. И. Нетрусов, Е.А. Бонч - Осмоловская, и др. - М.: Издательский центр «Академия», 2004. - 272с.

11. Hottes A.K. Transcriptional profiling of Caulobacter crescentus during growth on complex and minimal media / A.K. Hottes, M. McEwen, D. Yang et al. // J. Bacteriol. - 2004. - V. 186. - №5. - P. 1448-1461.


Подобные документы

  • Слоистые каменные структуры (строматолиты) - результат жизнедеятельности бактерий как древнейшей группы организмов. Изучение бактерий, форма и строение бактерий, их размеры и распространение. Классификация бактерий по способу питания, размножение.

    презентация [661,9 K], добавлен 14.10.2011

  • Роль бактерий в природе. Clostridium Botulinum как спорообразующая палочка, продуцирующая ботулизм. Негативное влияние сапротрофных бактерий на пищевые продукты. Болезнетворные бактерии растений. Вклад Коха в развитие микробиологии и лечение туберкулеза.

    презентация [7,6 M], добавлен 07.01.2014

  • Анализ закономерностей динамики численности отдельных физиологических групп почвенных микроорганизмов в зависимости от антропогенной нагрузки на примере серой лесной почвы и чернозема выщелоченного. Определение соотношения аэробных и анаэробных бактерий.

    курсовая работа [452,1 K], добавлен 23.01.2011

  • Определение удельной скорости роста популяции бактерий. Решение дифференциального уравнения первого порядка. Нахождение общего и частного решения, постоянной С. Подставка известных чисел в уравнение. Расчет численности популяции бактерий через 4 часа.

    презентация [4,7 M], добавлен 23.03.2014

  • Питание бактерий. Способы поступления питательных веществ в клетку. Классификация бактерий по типам питания, источникам энергии и электронам. Пропионовокислое брожение, его основные участники, их характеристика, использование в народном хозяйстве.

    контрольная работа [28,8 K], добавлен 29.11.2010

  • Генетическая система бактерий. Полимеразная цепная реакция. Применение генетических методов в диагностике инфекционных заболеваний. Метод молекулярной гибридизации. Особенности генетики вирусов. Системы репарации бактерий. Взаимодействие вирусных геномов.

    презентация [2,6 M], добавлен 13.09.2015

  • Прокариоты - доядерные организмы, не обладающие типичным клеточным ядром и хромосомным аппаратом. История открытия и строение бактерий. Экологические функции бактерий. Бактерии как возбудители многих опасных заболеваний. Значение бактерий в природе.

    презентация [5,4 M], добавлен 04.09.2011

  • ДНК - материальная основа наследственности бактерий. Изменчивость бактерий (модификации, мутации, генетические рекомбинации). Генетика вирусов. Механизмы образования лекарственной устойчивости бактерий. Получение и использование вакцины и сыворотки.

    реферат [509,3 K], добавлен 28.01.2010

  • Окислительно-восстановительные реакции, идущие с образованием молекулы АТФ. Облигатные аэробы, облигатные анаэробы, факультативные анаэробы. Рост и размножение бактерий. Пигменты и ферменты бактерий. Основные принципы культивирования микроорганизмов.

    реферат [12,8 K], добавлен 11.03.2013

  • Места обитания бактерий. Строение бактерий. Размеры, форма бактерий. Строение бактериальной клетки. Процессы жизнедеятельности бактерии: питание, размножение, спорообразование. Значение бактерий в природе и жизни человека.

    реферат [29,9 K], добавлен 05.10.2006

Работы в архивах красиво оформлены согласно требованиям ВУЗов и содержат рисунки, диаграммы, формулы и т.д.
PPT, PPTX и PDF-файлы представлены только в архивах.
Рекомендуем скачать работу.