Молекулярно-генетические методы для выявления генов устойчивости пшеницы

Размещено на http://www.allbest.ru/

Министерство образования и науки Российской Федерации

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования

Кубанский государственный университет

Кафедра генетики микробиологии и биотехнологии

Факультет биологический

Направление 020201 Биология

КУРСОВАЯ РАБОТА

Молекулярно-генетические методы для выявления генов устойчивости пшеницы

Работу выполнил

Попов Фёдор Михайлович

Научный руководитель

Карасева Эмма Викторовна

Краснодар 2012

Содержание

Введение

1. Аналитический обзор понятия генов устойчивости пшеницы

2. Методы выявления генов устойчивости пшеницы

Заключение

Библиографический список

Введение

В Северо-Кавказском регионе ведущее место в севооборотах хлебных злаков занимает озимая пшеница (3500-4500 тыс. га), что обеспечивает до 20% валового сбора зерна в России. Эта культура подвержена воздействию большого комплекса фитопатогенов, среди которых возбудители бурой (Puccinia triticina Rob.ex Desm. f.sp. tritici Erikss. et Henn.), желтой ржавчины (Puccinia striiformis West. f.sp. tritici Erikss. еt Henn.), стеблевой ржавчины (Puccinia graminis Pers. f.sp. tritici Erikss. еt Henn.) занимают преобладающее место.

Интенсификация растениеводства в современных условиях предусматривает создание генотипов сельскохозяйственных культур, характеризующихся не только высокой продуктивностью, но и устойчивостью к биотическим и абиотическим факторам окружающей среды. Однако в России в настоящее время насыщенность посевных площадей устойчивыми к болезням генотипами составляет от 7 до 11%, что примерно в 10 раз ниже мирового уровня. Для оздоровления и стабилизации фитосанитарного состояния агробиоценозов необходимо на должный уровень повысить селекцию устойчивых сортов, способных дать максимальный экономический эффект.

Для разработки научно обоснованной стратегии создания и размещения сортов требуется запас генетически разнообразных доноров устойчивости. Источниками новых доноров могут служить образцы с известными генами устойчивости, представленными в ‹‹Каталоге генных символов…›› (McIntosh et al., 2005, 2010). Традиционными методами идентификации этих генов являются анализ родословной, который позволяет выявить использованный в скрещиваниях источник устойчивости, фитопатологический тест с помощью изолятов, маркированных вирулентностью к идентифицируемому гену, и гибридологический анализ.

Принципиально новые возможности появились с начала 1990-ч годов с созданием ДНК-маркеров селекционно-ценных признаков. Первый молекулярный маркер был предложен G. Schachermayr с соавторами (1994) для идентификации гена устойчивости к бурой ржавчине. Потребности практической селекции определили усиленное развитие исследований по созданию новых маркеров, в связи с чем список предлагаемых генов ежегодно пополняется. Особую значимость ДНК-маркеры приобрели при идентификации

1) высокоэффективных генов устойчивости, определение которых затруднено из-за отсутствия в популяции патогена вирулентных изолятов;

2) генов устойчивости взрослых растений

3) малоэффективных генов, получивших широкое использование в стратегиях пирамидирования при создании сортов с неспецифической устойчивостью.

1. Аналитический обзор понятия генов устойчивости пшеницы

В начале XX века Н.И. Вавилов начал свою научную деятельность с изучения устойчивых к заболеваниям сортов культурных пшениц. Это была задача чрезвычайной важности, так как от фитопаразитов, в частности ржавчины и мучнистой росы, погибает около 30% урожаев пшеницы. Эти болезни вызываются грибами, их распространение в иные годы приводит к эпифитотиям (по аналогии с эпизоотиями и эпидемиями), когда погибает урожай целых регионов. Вавилов предлагал выявлять природные устойчивые сорта и скрещивать их с культурными, высокопродуктивными растениями. В поисках резистентных сортов Вавилов предпринял несколько экспедиций в Центральную Азию, и в этих экспедициях, как мы помним, сформулировал принципы очагов происхождения культурных растений и законы гомологических рядов. Там же, в очагах происхождения, нашлись и резистентные культурные, и дикие сорта. Далее последовала селекционная работа на опытных полях, и в результате удалось вывести целый ряд устойчивых к заболеваниям сортов культурных растений.

За сто лет целенаправленной генетической работы по выведению резистентных сортов культурных растений не изменилась постановка задачи и не снизилась ее актуальность. Зато стали совсем другими методы работы генетиков. Точные прочтения генетических карт выявили множество генов, ответственных за устойчивость к заболеваниям: сейчас известно около ста генов, участвующих в защите растения от ржавчинных грибов. Изучаются биохимические механизмы, ответственные за устойчивость, получена богатая информацию о самом процессе взаимодействия в системе «паразит-хозяин» у культурных растений.

Вся эта информация позволила различить два типа устойчивости растений к паразитам: вертикальную и горизонтальную. Вертикальная устойчивость основана на точечном механизме защиты, когда растение прицельно разрушает тот или иной белок гриба-паразита. Эта защита получила название «ген-на-ген» (gene-for-gene), то есть против одного гена паразита работает один защитный ген хозяина. Ясно, что этим способом растение конкретной линии или сорта может защититься от одного конкретного заболевания. Такая защита обычно чрезвычайно эффективна, но... недолговечна. Потому что стоит паразиту чуть-чуть изменить свой ген, как белок хозяина уже перестанет его узнавать, и средство защиты оказывается недейственным. Такая вот гонка в поисках «абсолютного оружия». Генетик в данном случае стоит на стороне культурных растений и вынужден всё время настраивать генетическую защиту: искать или конструировать новые гены, вести селекцию или внедрять сконструированные эффективные гены в геном растений. Всё это кропотливая, долгая и дорогостоящая работа.

Но есть другой тип устойчивости к заболеваниям -- горизонтальный. И сами растения пользуются именно этим способом, так как он более надежен и стабилен и работает против нескольких вредителей. Ведь, несмотря на тысячелетия своей вредоносной деятельности, ржавчинные грибы всё же не истребили культурные пшеницы. Стабильная защита обеспечивается множеством генов, хотя этот комплекс не означает стопроцентно здоровых урожаев. Определенная часть листьев всё же поражается грибом, какая-то часть растений всё же отмирает. Поэтому этот тип защиты называется еще количественным. На сегодняшний день известен ряд генов, принимающих участие в горизонтальной резистентности. Среди них гены хорошо известного семейства Lr (leaf rust -- листовая ржавчина), которые работают как у проростков, так и у взрослых растений. Количественную, или горизонтальную, устойчивость обеспечивают также гены Yr (yellow rust -- желтая ржавчина), Pm (powdery mildew -- мучнистая роса) и др. Механизм количественной защиты пока неясен. Актуальность его выяснения очевидна.

Выяснению механизма количественной защиты посвящены работы в последнем выпуске журнала Science. Одна из них, выполненная учеными из США и Израиля под руководством Даолин Фу (Daolin Fu) и Хорхе Дубковски (Jorge Dubcovsky) с кафедры ботаники Калифорнийского университета в Дэвисе, дает информацию о работе гена из семейства Yr. Другая, выполненная международной командой из Цюрихского университета (Швейцария), научно-промышленной исследовательской организации CSIRO Plant Industry (Канберра, Австралия) и Международного центра по разведению кукурузы и пшеницы (Мехико, Мексика), раскрывает механизм работы одного гена из семейства Lr.

Ген Lr34, ставший объектом внимания швейцарско-австралийско-мексиканской командой генетиков, экспрессируется и у зародышей, и у взрослых растений в листьях. Но в основном его экспрессия в листьях взрослых растений обеспечивает устойчивость от ржавчинных грибов. Генетики изучили нуклеотидную последовательность и структуру локуса, к которому принадлежит этот ген, и выдвинули вполне приемлемую гипотезу о его работе в клетке. Они предположили, что ген Lr34 кодирует белок, который транспортирует через мембрану различные молекулы. Похожий белок (PEN3) имеется и у знаменитого арабидопсиса. PEN3, так же как и LR34, выполняет функцию транспорта через мембрану и придает резистентность к возбудителю мучнистой росы. У арабидопсиса при заражении мучнистой росой PEN3 снижает транспорт растительных метаболитов.

Количественный локус Yr36, исследованный параллельно американо-израильской группой ботаников, регулирует в растительной клетке транспорт фосфолипидов через мембраны. Это означает, что данный локус выполняет сигнальные функции и важен для опознания вредоносных паразитов, контактирующих с клеткой. Ведь своевременное распознавание паразита приводит к быстрому иммунному ответу и улучшению защитных свойств сорта.

Почему паразиты не совершенствуют методы обмана генов горизонтальной защиты? Во-первых, горизонтальная защита может основываться на коллективной работе многих локусов, паразитам трудно обмануть сразу всех. Именно поэтому селекционеры используют новые сочетания этих генов для поддержания устойчивости. (Кстати, само по себе наличие гена Lr34 у растения может и не означать резистентности сорта к заболеванию.) Во-вторых, стабильная защита может быть нацелена на столь важный ген у паразита, что паразиту проще пожертвовать частью вирулентности, чем изменять этот ключевой ген. В-третьих, растение может использовать такие способы защиты, которые не снижают приспособленности и выживаемости паразита. Иными словами, эти способы лишь повышают сопротивляемость заболеванию и болезнь наносит растению меньший вред.

Ясно, что надежные и долговременные способы борьбы с фитозаболеваниями должны эксплуатировать эти последние сценарии, а не ставшие уже привычными средства «ген-на-ген». А для этого необходимо изучать механизмы горизонтальной устойчивости, благо, как показали последние исследования, средства для этого у современной науки имеются.

2. Методы выявления генов устойчивости пшеницы

Для начала следует рассказать о ДНК. Наш геном, как и геном любого живого организма, за исключением прионов, закодирован в нуклеиновой кислоте. Нуклеиновые кислоты представляют собой полимеры из нуклеотидов. В ДНК существует 4 вида мономеров, т.е. нуклеотидов, Аденин, Гуанин, Цитозин, Тимин. В их последовательности зашифрована вся информация о первичной структуре белка. Белки состоят из 22 аминокислот. Для того, чтобы закодировать 22 аминокислоты при помощи 4-х нуклеотидов, необходимо считывать их не единично, а по 3. 4 в третьей степени получается 64 варианта - вполне достаточно чтобы закодировать 22 аминокислоты. Таким образом, ДНК содержит информацию о первичной структуре белка. Молекула ДНК у эукариот двухцепочечная. Это достигается благодаря тому, что аденин комплементарен тимину, а гуанин - цитозину.

Полимеразная цепная реакция была открыта Кэрри Мюллисом в 1983 году. Она позволяет получить миллионы копий (амплифицировать) интересующего участка ДНК.

Для проведения ПЦР в простейшем случает требуются следующие компоненты:

*ДНК-матрица, содержащаятот участок ДНК, который требуется амплифицировать.

*Два праймера, комплементарные противоположным концам требуемого фрагмента ДНК.

*Термостабильная ДНК-полимераза - фермент, который катализирует реакцию полимеризации ДНК. Полимераза для использования в ПЦР должна сохранять активность при высокой температуре длительное время, поэтому используют ферменты, выделенные из термофилов - Thermus aquaticus (Taq-полимераза), Pirococcus furiosus (Pfu-полимераза), Pirococcus woesei (Pwo-полимераза) и другие.

*Дезоксирибонуклеотидфосфаты (dATP, dGTP, dCTP, dTTP).

*Ионы Mg²⁺, необходимые для работы полимеразы.

*Буферный раствор,обеспечивающий необходимые условия реакции - pH, ионную силу раствора. Содержит соли, бычий сывороточный альбумин.

Для того, чтобы прошла реакция, необходимо двухцепочечную ДНК разделить на 2 комплементарных нити. Это достигается путём нагрева рабочей смеси до 93-95 градусов. Далее необходимо присоединить праймеры к комплементарным участкам. Для этого нужно снизить температуру до такого уровня, при которм праймер сможет прикрепиться к комплементарному участку. Такая температура называется температурой отжига, её можно рассчитать по формуле:

t = (A+T) x 2 + (G+C)x4 - 5C

После того, как праймер прикрепился к нужному участку, ставится оптимальная температура для работы Taq-полимеразы. Она равна 72 градусам. Следующим шагом будет повторная денатурация ДНК при 93-95 градусах. Допустим, у нас была изначально всего одна ДНК, если мы проведем 35 вышеописанных циклов, мы получим: 1х2³⁴=17179869184 копии. селекция пшеница генный молекулярный

Для того, чтобы визуализировать результаты проведенной реакции, обычно используют электрофорез. Что такое электрофорез? Разделение чего-либо с помощью электрического тока. Электрофорез проводят в геле. Гель может быть агарозным, или акриламидным. Гель делают не на основе дистиллированной воды, а на основе раствора электролитов (солей и кислот), как правило, это трис-HCL, борная кислота и ЭДТА. Электролиты служат проводниками электрического тока. Так как молекулы ДНК заряжены отрицательно, они начинают двигаться в сторону катода. Но, гель представляет для молекул довольно мощную преграду, чем они крупнее по своему размеру, тем труднее им продираться через слой молекул геля. Таким образом, более мелкие молекулы (50 bp) за час электрофореза успевают пройти несколько сантиметров, а более крупные (1000 bp), проходят от силы пару сантиметров. Мы не можем наблюдать ДНК, если ничем её не окрасить. Чтобы её было видно, используют бромистый этидий или импрегнируют серебром. Бромистый этидий кроме того, что активно связывается с молекулами ДНК, ещё и светится в ультрафиолетовом свете.

Сателлитная ДНК

Микросателлиты - (или простые короткие (тандемные) повторы) -- варьирующие участки (локусы) в ядерной ДНК и ДНК органелл (митохондрий и пластид), состоящие из повторяющихся фрагментов длиной от 1 до 6 пар оснований. Используются как молекулярные маркеры в определении родства, принадлежности к конкретной популяции, для исследования гибридизации. Микросателлиты характеризуются высокой скоростью изменения последовательностей, обусловленной «проскальзыванием» при репликации ДНК и точечными мутациями. Представляют собой одну из разновидностей сателлитной ДНК. Микросателлитные последовательности небольшой длины, называемые короткими тандемными повторами (2-6 нуклеотидов, от. англ. STR -- short tandem repeats), используются при картировании геномов в работе с редкими видами.

Минисателлиты - поворяющиеся фрагменты ДНК длиной от 7 и более нуклеотидов. Являются одной из разновидностей сателлитной ДНК. Они встречаются более чем в 1000 местах генома человека. Используются в качестве ДНК-маркеров. Механизмами происхождения являются "проскальзывания" при репликации ДНК, точечные мутации и рекомбинация. Минисателлиты состоят из повторяющихся цепочек, преимущественно из вариантов гуанин-цитозин, длиной от 10 до 100 пар оснований.

Теоретически ПЦР открывает широкие возможности для идентификации тех или иных генов и видов. Все довольно просто. Ищем в геноме участок в котором находится ген, подбираем к этому участку специфическую и пару праймеров, которая комплементарна только искомому участку и вперед. Проводим ПЦР и точно знаем, есть ли искомый ген или нет. Проблема заключается в том, что для того чтобы найти искомый ген, узнать его последовательность, требуется очень много труда, времени, материалов, оборудования, а стало быть - денег.

Методы, использующие ПЦР, могут иметь различную степень специфичности. Некоторые методики не требуют знания последовательности ДНК, а так как сиквенс (считывание последовательности) интересующего участка довольно дорог и требует хорошего дорогостоящего оборудования, эти методы все еще часто применяются на практике.

К таким методам относится маркирование по полиморфизму длин продуктов амплификации.

• RAPD маркеры - маркеры получающиеся в результате случайной амплификации ДНК (Williams et al, 1990).

• ISSR маркеры - маркеры основанные на межмикросателитных последовательностях (Zietkiewicz et al, 1994).

• AFLP маркеры - маркеры полиморфизма длин амплифицированных фрагментов ДНК (Vos et al., 1995).

AFLP - Amplified Fragment Length Polymorphism

AFLP анализ - сложный метод анализа, состоящий из нескольких этапов. В анализе используется праймер с искусственно добавленной последовательностью.

1. Геномная ДНК рестрицируется двумя рестриктазами (EcoRI и MseI) с образованием фрагментов с выступающими 3' - концами.

2. Рестрицированная геномная ДНК легируется с адаптером, содержащим «липкие» концы для данных рестрикционных сайтов.

3. Далее проводятся две последовательные ПЦР: В первой ПЦР используются праймеры полностью комплементарные адаптерам EcoRI и MseI, в результате чего образуется большое количество продуктов амплификации между адаптерами EcoRI и MseI, которые невозможно дифференцировать с помощью электрофореза. Поэтому во второй ПЦР праймеры с адаптерами EcoRI и MseI содержат на 3' - конце дополнительные и некомплементарные адаптерам основания (от 1 до 3) для селективной амплификации.

4. Разделение фрагментов ДНК проводят в полиакриламидном геле с радиоктивной или с флуорисцентной меткой.

Получаемый фингенрпринт ДНК обычно высоко полиморфен и как правило хорошо воспроизводим.

Свойства:

· Полиморфизм AFLP выше, чем RAPD и ISSR.

· Этот метод позволяет определять генетические изменения, вызванные точечными мутациями в сайтах рестрикции или в участках отжига праймеров (присутствие или отсутствие продукта амплификации в спектре) и небольшими вставками и (или) делециями внутри рестрикционного фрагмента (изменение размера полосы в спектре).

· Молекулярно-генетические маркеры легко картируются на хромосомах.

ISSR - Inter Simple Sequence Repeat

При ISSR анализе также как и в RAPD используется один или несколько праймеров длиной 15-24 нуклеотида. Праймеры комплементарны повторяющимся участкам генома, таким как микросателлиты. Микросателлитная ДНК - ДНК из коротких тандемных повторов длиной от 1 до 6 пар оснований. Используются как молекулярные маркеры в определении родства, принадлежности к конкретной популяции, для исследования гибридизации. Микросателлиты характеризуются высокой скоростью изменения последовательностей, обусловленной «проскальзыванием» при репликации ДНК и точечными мутациями.

В данном случае праймеры состоят из тандемных коротких 2-4 нуклеотидных повторов и одного селективного нуклеотида на 3'- конце праймера. Таким образом, продукты ISSR - амплификации содержат на флангах инвертированную микросателлитную последовательность праймера.

Выявляемый полиморфизм с использованием праймеров ISSR более четко воспроизводим, чем в RAPD.

В геномах растений и животных количество микросателлитных повторов очень велико, что делает этот метод удобным для генетического анализа. Микросателлитные последовательности окружают многие гены и могут использоваться как якорные последовательности к этим генам.

Свойства:

· Доминантный тип наследования.

· Относительно высокая точность и улучшенная воспроизводимость по сравнению с RAPD в связи с большей длиной праймера и более ысокой температурой отжига.

· Однако локализация в геноме продуктов амплификации, так же как и функция, остаются неизвестными.

RAPD - Random Amplified Polymorphic DNA

RAPD анализ включает в себя проведение полимеразной цепной реакции с использованием одного декануклеотидного праймера с произвольной нуклеотидной последовательностью. Продукты RAPD анализа образуется в результате амплификации фрагмента геномной ДНК, фланкированного инвертированной последовательностью данного праймера.

Свойства:

*Высокая чувствительность к изменениям условий реакций.

*Достаточно низкая температура отжига (37С) - (увеличена вероятность образования продуктов амплификации с большим количеством неспаренных оснований).

*RAPD маркеры ведут себя как доминантные и их гетерозиготное состояние не отличается от гомозиготного, поэтому снижается точность оценки при популяционном анализе и при идентификации генетических ресурсов в сравнении с кодоминантными маркерами.

*Низкая воспроизводимость результатов ПЦР.

*Для повышения достоверности необходима большая выборка.

Но все же RAPD анализ может служить своеобразным экспресс - методом выявления генетического полиморфизма, что особенно актуально для малоизученных таксономических групп, а также как источник уникальных локус-специфичных маркеров.

Диагностические возможности RAPD-технологии успешно проиллюстрированы на многочисленных примерах описания генетического разнообразия микроорганизмов, высших растений, беспозвоночных и позвоночных животных.

Заключение

Создание устойчивых к болезням сортов пшеницы и обеспечение длительного сохранения их устойчивости остается актуальной задачей селекции. В связи с этим необходим непрерывный поиск доноров устойчивости взамен утративших эффективность. Требуется проводить дальнейшие анализы, чтобы выявить потенциал всех имеющихся генов, для расширения генетического разнообразия сортов.

Пирамидирование генов, а так же использование для создания сортов с длительной устойчивостью эффективных сочетаний генов, утративших эффективность, позволяют значительно повысить генетическое разнообразие сортов и стабилизировать популяции патогена. Успешному переносу этих генов в новые сорта способствуют молекулярные технологии, позволяющие значимо ускорить процесс селекции. В настоящее время маркер-вспомогательная селекция активно используется для переноса генов устойчивости и других хозяйственно-ценных признаков.

Библиографический список

1. Анпилогова Л.К., Шаповалова О.Ю., Левашова Г.И., Ваганова О.Ф., Соколов М.С. Теоретические и методологические принципы создания ржавчиноустойчивых сортов пшеницы. Агрохимия, 2002, №5, с.77-88.

2. Анпилогова Л.К., Волкова Г.В. Методы создания искусственных инфекционных фонов и оценки сортообразцов пшеницы на устойчивость к вредоносным болезням (фузариозу колоса, ржавчинам, мучнистой росе). РАСХН, ВНИИБЗР. Краснодар, 2000, 28с.

3. Гайнуллин Н.Р., Лапочкина И.Ф., Жемчужина А.И., Киселева М.И., Коломиец Т.М., Коваленко Е.Д. Использование фитопатологического и молекулярно-генетического методов для идентификации генов устойчивости к бурой ржавчине у образцов мягкой пшеницы с чужеродным генетическим материалом // Генетика. 2007. Т. 43. С. 1058-1064.

4. Гультяева Е.И., Канюка И.А., Алпатьева Н.В., Баранова О.А., Дмитриев А.П., Павлюшин В.А. Молекулярные подходы в идентификации генов устойчивости к бурой ржавчине у российских сортов пшеницы // Доклады РАСХН. 2009. № 5. С. 23-26.

5. Давоян, О.Р. Получение и изучение замещенных линий озимой мягкой пшеницы Аврора с хромосомами эгилопса зонтичного Aegilops umbellulta / И.В. Бебякина, О.Р. Давоян, А.Н. Зинченко // Материалы Научно-практической конференции Кубанского отделения ВОГиС, Краснодар, 2009.- С.66-67.

6. Давоян, О. Р. Изучение новых интрогрессивных линий озимой мягкой пшеницы / О. Р. Давоян, А.Н. Зинченко, И.В. Бебякина // Материалы III Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых. - Краснодар, 2009.-С.24-26.

7. Давоян, О.Р. Замещенные линии мягкой пшеницы с хромосомами Agropyron glaucum/ А.Н. Зинченко, О.Р.Давоян, И.В. Бебякина // Материалы III Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых.-Краснодар, 2009.- С.33-34.

8. Давоян, О.Р. Передача устойчивости к болезням от диких сородичей мягкой пшеницы с использованием синтетических форм / Р.О. Давоян, И.В. Бебякина, О.Р. Давоян, А.Н. Зинченко, Э.Р. Давоян// Тр. по прикл. бот. генет. и селекции, 2009.-166.- С.519-523.

9. Давоян, О. Р. Изучение устойчивости к листовой ржавчине интрогрессивных линий мягкой пшеницы с генетическим материалом Aegilops umbellulata /О.Р. Давоян, И.В. Бебякина, Р.О. Давоян, А.Н. Зинченко // Материалы IV Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых. - Краснодар, 2010.- С.661-662.

10. Давоян, О.Р. Идентификация хромосом Agropyron glaucum у замещенных линий сорта мягкой пшеницы Аврора / А.Н. Зинченко, Р.О. Давоян, И.В. Бебякина, О.Р. Давоян // Материалы IV Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых. - Краснодар, 2010.-С.665-667.

11. Давоян Р.О., Бебякина И.В., Кекало Н.Ю. Получение и изучение замещенных по геному линий мягкой пшеницы с хромосомами Ae.. umbellulata // Наука Кубани

12. Дженин С.В., Лапочкина И.Ф., Жемчужина А.И., Коваленко Е.Д. Доноры устойчивости яровой мягкой пшеницы к бурой ржавчине и мучнистой росе с генетическим материалом видов Aegilops speltoides L., Aegilops triuncialis L., Triticum kiharae Dorof. et Migusсh. //ДокладыРАСХН. 2009. N 5. С. 3-7.

13. Дорохов Д.Б., Клоке Э. Быстрая и экономичная технология RAPD анализа растительных геномов // Генетика. 1997.- Т. 33.- № 4.- С. 443-450.

14. Урбанович О.Ю., Малышев С.В., Долматович, Картель Н.А. Определение генов устойчивости к бурой ржавчине в сортах пшеницы (Triticum aestivum L.) с использованием молекулярных маркеров // Генетика. 2006. V. 42. С. 675-683.

15. Babar M., Mashhadi A.F., Mehvish A. et al. Identification of rust resistance genes Lr10 and Sr9a in Pakistani wheat germplasm using PCR based molecular markers African Journal of Biotechnology. 2010. Vol. 9(8), pp. 1144-1150

16. Greganova Z., Kraic J., Galova Z. Diagnostic of wheat leaf rust resistance genes by DNA markers and their application in mas // Czech J. Genet. Plant Breed. - 2003. - V.39. - P.127-129.

17. Davoyan, O.R. Synthetic forms: a basis for preservation and using of a gene pool of wild relatives of common wheat / R.O. Davoyan, I.V. Bebyakina, E.R. Davoyan, A.M. Kravchenko, O.R. Davoyan//Abstract book Intern. Conference Wheat Genetic resources and genomics, august 28- September 1, 2011, Novosibirsk, Russia, P 37.

18. Huerta-Espino J, Singh RP (1994) First report of virulence to wheat with leaf rust resistance gene Lr19 in Mexico. Plant Dis 78:640

19. Hung, H.Y., C. Emani, A. Fritz, M. Menz. 2006. Characterization of a gene from Triticum monococcum conferring resistance to leaf rust (Puccinia triticina ) in wheat. In 2006 Agronomy Abstracts. ASA, Madison, WI.

20. Hung, H.Y., C. Emani, A. Fritz, M. Menz. 2006. Detection and characterization of a leaf rust ( Puccinia Triticina ) resistant gene from Triticum monococcum in wheat using a PCR based marker. In Plant & Animal Genomes Abstracts. PAG, San Diego, CA.

21. Koebner RMD, Kirsch F, Thorpe C, Prins R (1998) AFLPs as a source of STS markers in alien introgression. In: Slinkard AE (ed) Proc 9th Int Wheat Genet Symp, vol 1. University Exten- sion Press, Saskatoon, Canada, pp 118-122

22. Koebner RMD, Powell W, Donini P (2001) The contribution of current and forthcoming DNA molecular marker technologies to wheat and barley genetics and breeding. Plant Breed Rev (in press)

23. Liu CJ, Chao S, Gale MD (1989) Wsp-1, a set of genes controlling water-soluble proteins in wheat and related species. Genet Res 54:173-181

24. Marais GF (1992a) Gamma-irradiation induced deletions in an alien chromosome segment of the wheat Indis and their use in gene mapping. Genome 35:225-229

25. Nelson R.R. Genetics of horizontal resistance to plant disease. Ann.Rev.Phytopathol., 1978, v.16, pp.359-378.

26. Singh R., Tiwari R., Datta D. Detection of Leaf Rust Resistance Genes Lr9 and Lr10 in Wheat (Triticum aestivum) by PCR Based STS Markers //Acta Phytopath et Ent. Hungarica. 2003. V. 38. P. 245-249.

27. Stepien L., Golka L., Chelkowski J. Leaf rust resistance genes of wheat: identification in cultivars and resistance sources // J. Appl. Genet.. 2003. V. 44. P. 139-149.

28. Van der Plank J.E. Horizontal (polygenic) and vertical (olygogenic) resistance against blight. American Potato, 1966, v.43, №2, pp.43-52.

29. Wioeniewska H., Stкpieс Ј., Kowalczyk K. Resistance of spring wheat cultivars and lines to leaf rust // J. Appl. Genet. 44(3), 2003, P. 361-368

30. Wilson J., Shaner G. Slow leaf-rusting resistance in triticale. Phytopathology, 1987, v.77, №3, pp.458-462.

Размещено на Allbest.ru