Бешенство

Краткая история бешенства как заболевания человека и теплокровных животных. Этиология, патогенез и способы передачи инфекции бешенства. Инкубационный период и клинические симптомы заболевания. Методы диагностики, лечения и профилактики бешенства.

Рубрика Медицина
Вид реферат
Язык русский
Дата добавления 02.11.2012
Размер файла 47,9 K

Отправить свою хорошую работу в базу знаний просто. Используйте форму, расположенную ниже

Студенты, аспиранты, молодые ученые, использующие базу знаний в своей учебе и работе, будут вам очень благодарны.

Суспензионная среда

Выбор среды для приготовления суспензии может быть самым широким; предпочтительно пользоваться изотопическим соленым раствором. Следует отметить, что при применении стерильной дистиллированной воды интрацеребральное заражение иногда не удается. Приведем перечень сред для приготовления суспензии в порядке их доступности.

а) Физиологический солевой раствор с добавлением различных количеств животной сыворотки (10--50%). Это наиболее часто применяемая среда. Необходимо, однако, точно выяснить, не было ли Животное, у которого взята сыворотка, когда-либо вакцинировано прогни бешенства. Исходя из этих соображений, не следует брать сыворотку собак, кошек и рогатого скота. Нормальная баранья сыворотка обладает некоторыми «антивирусными» свойствами, отсутствующими у кроличьей сыворотки. Таким образом, лучше всего пользоваться кроличьей сывороткой, подвергнув ее предварительной инактивации в точение 30 минут (56°). Среду, содержащую сыворотку, можно стерилизовать только путем фильтрования через обычные бактериальные фильтры.

б) Другие среды:

1) снятое молоко;

2) альбумин бычьей сыворотки в буферном растворе;

3) физиологический раствор в дистиллированной воде.

Не рекомендуется широко пользоваться последней средой, хотя вирус бешенства не обладает столь высокой чувствительностью к инактивирующему действию солевого раствора, как вирусы восточного или западного энцефаломиелита лошадей.

Примечание. Если суспензия подлежит замораживанию и хранению, то в качестве суспензионной среды лучше всего пользоваться 50% раствором сыворотки в воде.

Стерильность

Если взятие ткани мозга во время аутопсии производилось с соблюдением всех правил асептики и если кусочки были присланы в лабораторию в стерильном сосуде, то нет необходимости добавлять к суспензии антибиотики. Для сохранения материала рекомендуется пользоваться 50% раствором глицерина, так как глицерин действует не только как консервант, но и как бактериостатический агент. Если же имеется какое-нибудь сомнение в том, что были соблюдены все требования антисептики, лучше добавить к суспензии некоторое количество стрептомицина и пенициллина так, чтобы получить конечную концентрацию антибиотиков 2 мг/мл и 500 ЕД/мл соответственно. После добавления антибиотиков к суспензии следует выждать 30 минут, прежде чем производить инокуляцию.

При приготовлении суспензии из ткани слюнных желез антибиотики рекомендуется добавлять во всех случаях. Независимо от того, добавляются ли антибиотики, суспензию ткани слюнных желез надо инкубировать для выявления бактериального загрязнения; в качестве среды для этой цели можно применять обычный бульон, тиогликолатпую среду и кровяной агар. При обнаружении бактериального роста надо попытаться идентифицировать микроорганизмы. Если результаты биологической пробы окажутся сомнительными, рекомендуется проверить вирулентность выделенного микроорганизма при интрацеребралыюм заражении мышей. Концентрация инфицированной ткани в суспензии

Эта концентрация может быть произвольной. Если суспензию предполагается хранить, то рекомендуется готовить ее в 20% концентрации (по весу). Умножив величину, соответствующую весу ткани в граммах, на 4, получим число миллилитров суспензионной среды. Если же хранить суспензию не предполагается и она предназначается непосредственно для иитрацеребрального заражения, то следует отдать предпочтение 10% суспензии, которую готовят либо из 20% суспензии путем добавления равного объема суспензионной среды, либо по следующему расчету: число, соответствующее весу ткани в граммах, умножают на 9 и получают необходимое количество среды в миллилитрах.

В отдельных редких случаях при попытках выделить некоторые штаммы уличного вируса бешенства приходится сталкиваться с явлением «самостерилизующейся нейроинфекции». В подобных случаях рекомендуется развести суспензию так, чтобы концентрация ее была менее 10%.

Центрифугирование и фильтрование

При наличии соответствующего оборудования рекомендуется

подвергнуть суспензию центрифугированию В течение 5 минут при 1000 об/мин для осаждения крупных частиц. Однако, если в лаборатории нет центрифуги, можно обойтись и без этой процедуры. Суспензию ткани слюнной железы (если ее не подвергали центрифугированию) необходимо профильтровать через один или два слоя стерильной марли, чтобы предупредить возможную гибель животного от травмы.

Заражение мышей

Выбор шприца

Рекомендуется пользоваться шприцем, позволяющим точно отмерить 0,03 мл (однократная мышиная доза). Наиболее пригодны для этого туберкулиновые шприцы на 0,25, 1,2 и 1 мл. Для интрацоребралыюй инокуляции необходимы иглы № 27 или 26 (0,40--0,45 мм) длиной 1 --1,5 см. Иглы большего диаметра могут привести к повреждению ткани мозга.

Наркоз

Настоятельно рекомендуется наркотизировать мышей перед инокуляцией. Лучше всего производить инокуляцию под эфирным наркозом. Для этой цели можно пользоваться сосудом с проволочным дном (рис. 35). Если такого приспособления в лаборатории нет, можно вызвать наркоз инъекцией пентабарбитала натрия. Рабочий стол, на котором производят инокуляцию, надо отодвинуть от стены так, чтобы помощник, наркотизирующий мышей, находился напротив сотрудника, производящего инокуляцию.

Методика инокуляции

Для инокуляции можно пользоваться различными методами. Автор данной главы предпочитает следующий (наиболее удобный для всех, работающих правой рукой).

Наркотизированную мышь укладывают на левый бок, задними конечностями в сторону лица, производящего инокуляцию. Большой палец левой руки поддерживает нижнюю челюсть животного, а указательный лежит позади черепа. Не следует сильно надавливать пальцами, чтобы не вызвать асфиксию и гибель животного. Взяв в правую руку шприц, придают ему горизонтальное положение, параллельно поверхности стола и перпендикулярно голове мыши, направляя иглу к себе. Быстрым движением прокалывают иглой череп животного в точке, находящейся в вершине воображаемого угла, образованного линиями, идущими от правого уха и правого глаза животного. Игла легко проникает через кость и погружается далее на 0,1--0,2 см в ткань мозга. При пользовании иглой длиной 1,5 см следует соблюдать осторожность, чтобы не провести ее слишком далеко и не попасть в область основания черепа. Продвинув пор-ПНЧ11, до 0,03, осторожно извлекают иглу. После заражения мышь надо отодвигать влево, чтобы случайно не задеть иглой палец.

Зараженную мышь следует тотчас поместить в предварительно заготовленную коробку с этикеткой, на которой указывается номер группы или делаются другие необходимые пометки. Если заражают большую группу животных, необходимо точно проконтролировать число ЖИВЫХ мышей по окончании эксперимента. При обнаружении погибших животных надо снова инокулировать и добавить в группу недостающее число мышей.

Ни в коем случае нельзя пользоваться одним и тем же шприцем при введении разных суспензий. Если в лаборатории нет необходимого числа стерильных шприцев, то между инокуляциями шприц следует кипятить; при этом надо помнить о необходимости остудить шприц перед наполнением.

Вырабатывая навык данной работы, необходимо всегда соблюдать ряд предосторожностей. Например, не рекомендуется быстро опорожнить шприц и сосуд с водой, так как при этом образуется аэрозоль, способный вызнать инфекцию через дыхательные пути кап у лица, производящего инокуляцию, так и у животных, о которыми он работает. Вирус может попасть на руки, и если их тщательно, но вымыть, то может произойти заражение последующих препаратов при их гомогенизации и приготовлении суспензии. Мышь, оставленная па столе после наркотизации, может попасть обратно в сосуд с эфиром, что приведет к его инфицированию. При дальнейшем пользовании этим же сосудом вирус может попасть на шерсть здоровых животных и в процессе последующей инокуляции «го можно занести в мозг этих животных. Рабочий стол необходимо тщательно мыть водой с мылом и дезинфицировать разведенной сулемой. Для большинства мышиных вирусов, в частности для вируса мышиного энцефаломиелита и некоторых других вирусов, такие широко применяемые антисептики, как крезол и фенол, не имеют никаких преимуществ перед обычной водой; фенол не обладает вироцидным действием в отношении вируса бешенства.

После того как инокуляция закончена, шприц и иглы необходимо промыть водой, соблюдая при этом определенные предосторожности: не следует делать слишком резких движений поршнем, а иглу нужно держать глубоко под водой. Шприц и иглы стерилизуют кипячением в течение 5 минут.

Наблюдение за мышами после заражения

Хотя вирус бешенства лишь в очень редких случаях вызывает у мышей клинические признаки раньше 5-го дня после интрацере-бральной инокуляции, тем не менее рекомендуется осматривать мышей ежедневно, начиная со следующего дня после заражения. Число нормальных, больных и погибших животных регистрируют на специальной карте, которая служит постоянным протоколом опыта.

Период наблюдения составляет не менее 21 дня после заражения. Лишь в редких случаях вирус бешенства можно обнаружить впервые позднее чем через 21 день после инокуляции. Необходимо обращать внимание на следующие симптомы: а) взъерошенная шерсть; б) тремор при поднятии животного на воздух за кончик хвоста; в) нарушение координации движений задних конечностей; г) паралич; д) прострация (терминальный симптом). Различные симптомы регистрируют на карте ежедневно с помощью буквенных символов.

Гибель животного в течение первых 24--48 часов после интрацеребрального заражения обычно обусловлена различными другими причинами (травма, бактериальное заражение, заражение другими вирусами). Для целей диагностики ежедневно, начиная с 5-ГО дня после заражения, забивают 1--2 животных и производят исследование на предмет обнаружения телец Негри или рабического антигена. С помощью метода иммунофлюоресценции. Часто, таким образом, удается поставить ранний диагноз, особенно в тех случаях, когда приходится иметь дело с некоторыми штаммами уличного вируса, которые убивают животное через 1--3 недели.

Примечание. Появление клинических симптомов у зараженной мыши нельзя считать характерным для бешенства. Хотя симптомы паралича на 5-й день (или позже) после введения суспензии могут служить основанием для подозрения на наличие заболевания бешенством, эти же симптомы наблюдаются и при многих других вирусных, бактериальных и протозойных инфекциях, поражающих центральную нервную систему. Бесспорное доказательство идентичности вируса получают при помощи реакции нейтрализации с антира-бической сывороткой.

Дальнейшие пассажи инфицированного материала

При необходимости можно приготовить суспензию из ткани мозга мыши, погибшей от инфекции после заражения первоначальным вирусом; эту суспензию можно хранить или использовать в реакции нейтрализации, или, наконец, ввести другой группе мышей.

Вскрытие трупов исследуемых мышей.

Труп мыши фиксируют на дощечке спиной кверху. Для этого необходимо всего две булавки -- одной прикалывают основание хвоста, другой -- кончик морды. Можно пользоваться и тремя булавками, чтобы фиксировать передние лапы и хвост.

После дезинфекции спиртом кожу головы и шеи отпрепаронывают с помощью ножниц и пинцета и откидывают кпереди; изогнутыми ножницами отделяют крышу черепа, обнажая мозг. С помощью тех же изогнутых ножниц извлекают мозг и переносят его па стерильную чашку Петри. Готовят тонкий срез мозга из области, находящейся кпереди от мозжечка, и переносят его на деревянный шпатель или на бумажную салфетку. Чистое предметное стекло слегка прижимают к поверхности разреза; при этом надавливать следует достаточно сильно, чтобы получить на стекле легкий отпечаток от поверхности среза. Один и тот же отпечаток можно использовать и для окрашивания на тельца Негри и для исследования с помощью флюоресцирующих антител.

Возможные осложнения при проведении биологической пробы

Бактериальное загрязнение инокулируемого материала

Если, несмотря на добавление антибиотиков, мыши погибают от инфекции, вызванной посторонними бактериями, и если первоначальная суспензия подлежит хранению, можно попытаться применить следующие методы, чтобы избежать заражения МЫШ6Й посторонними бактериями.

а) Фильтрование через бактериальные фильтры. Для этой цели следует использовать надосадочную жидкость, полученную после центрифугирования суспензии в течение 15 минут при 1500 об/мин. Поскольку вирус бешенства является довольно крупным, а его концентрация в препаратах, взятых в полевых условиях, не очень велика, при фильтровании неизбежна некоторая потеря вируса.

б) Метод разведения. Иногда суспензию можно разбавить, уменьшив концентрацию в ней бактерий настолько, что заражение ими окажется невозможным, причем вирус сохраняет свою активность. Это, однако, удается редко.

в) Длительное хранение. В некоторых случаях легче бороться с бактериальным загрязнением, если предварительно оставить суспензию на хранение при температуре замораживания или выдержать ее в глицерине.

г) Парентеральная инокуляция. Для парентеральной инокуляции следует брать сирийских хомячков -- животных, наиболее восприимчивых к парентеральной инфекции. Мыши сравнительно резистентны к парентеральному заражению вирусом бешенства.

Присутствие двух вирусов

Присутствие какого-либо другого вируса особенно нежелательно, если этот посторонний вирус обладает свойствами, близкими к свойствам вируса бешенства. В этом случае можно попытаться взять для заражения (интрацеребрального и парентерального) животных какого-либо другого вида; это возможно, учитывая широкий спектр инфекционного действия вируса бешенства.

«Самостерилизующиеся нейроинфекции», или феномен интерференции

В ряде случаев приходится разводить инокулум в 10, а иногда и в 100 раз либо из-за особых свойств данного конкретного штамма вируса бешенства, либо из-за наличия большого количества неактивных вирусных частиц, вступающих в интерференционные отношения с живым вирусом. Трудно дать точное определение случаев, когда следует прибегать к такому разбавлению. Мысль о возможности интерференции должна возникнуть в тех случаях, когда при работе с одним и тем же видом животных в определенном географическом районе попытки выделить вирус бешенства не удаются; при возникновении такого подозрения суспензию ткани надо разводить до концентрации менее 10%.

Размещено на Allbest.ru


Подобные документы

  • Первые симптомы бешенства, возникающего после укуса зараженного животного. Инкубационный период болезни. Источники вирусного заболевания. Изучение чувствительности вируса к ультрафиолетовым, прямым солнечным лучам и этанолу. Методы лечения бешенства.

    презентация [1,3 M], добавлен 18.09.2014

  • Изучение бешенства в XIX веке. Варианты вируса бешенства. Очистка и концентрация культурального вируса. Размножение вируса бешенства. Химическая структура и биологическая активность субвирусных компонентов. Инкубационный период и стадии заболевания.

    реферат [1,7 M], добавлен 23.12.2010

  • Проникновение в организм вируса бешенства. Источники вируса бешенства. Как происходит заражение от больного животного. Инкубационный период и первые симптомы. Основные периоды болезни. Предотвращение болезни путем введения вакцины против бешенства.

    презентация [1,5 M], добавлен 03.03.2016

  • Бешенство у собак. Первое клиническое описание бешенства у человека. Заражение животных и человека при укусе или ослюнении больным животным поврежденных кожных покровов. Клиническая картина бешенства. Профилактика и лечение заболевания у человека.

    презентация [4,4 M], добавлен 25.05.2013

  • Общие сведения о бешенстве. Эпизоотии городского и природного типов. Характерные признаки заболевания у животных. Эпизоотическая обстановка по Иркутской области. Организация мероприятий по профилактике бешенства. Инкубационный период и вакцинация.

    курсовая работа [29,2 K], добавлен 11.12.2010

  • Характеристика и способы передачи возбудителя бешенства. Механизм размножения и распространения вируса, инкубационный период. Признаки заболевания человека. Диагностика, лечение и профилактика болезни. Условные и безусловные курсы антирабических прививок.

    реферат [17,9 K], добавлен 28.03.2015

  • Историческая справка о болезни. Уровень заболеваемости и ареал распространения. Этиология, патогенез и эпидемиология заболевания. Общая клиническая картина. Симптоматика. Особенности диагностики бешенства. Вакцинация как основная профилактика болезни.

    лекция [25,4 K], добавлен 23.02.2009

Работы в архивах красиво оформлены согласно требованиям ВУЗов и содержат рисунки, диаграммы, формулы и т.д.
PPT, PPTX и PDF-файлы представлены только в архивах.
Рекомендуем скачать работу.