Лабораторная диагностика носительства пневмококковой инфекции

Третий этап исследования. На скошенном кровяном агаре пневмококки образовали нежный тонкий полупрозрачный налёт. На сывороточном бульоне пневмококки вызывали помутнение и легкий осадок. В мазках с плотных питательных сред пневмококки имели различный вид. Наряду с диплококками удлиненной формы с заостренными наружными концами, напоминающими пламя свечи, встретились клетки правильной овальной и круглой формы.

В бульонной культуре пневмококки часто располагаются цепочками. На основании морфологических и культуральных свойств пневмококки трудно отличить от зеленящих стрептококков, поэтому для их дифференцировки я выполнила набор специальных тестов:

*растворимость в желчи (дезоксихолатная проба);

*способность разлагать инулин;

*чувствительность к оптохину;

*реакция агглютинации со специфическими антипневмококковыми сыворотками;

*способность разлагать глюкозу, мальтозу, сахарозу, лактозу, маннит, сорбит и салицин.

Дезоксихолатная проба. Устойчивость к желчи также можно проверять посевом в 10% желчный бульон. В среду вносят исследуемый материал, при этом бульон мутнеет. После 24 часовой инкубации при 37 °С на наличие пневмококков укажет просветление бульона в результате лизиса бактерий.

Также можно использовать диски, пропитанные 20% раствором желчи. Диски помешают на выросшую культуру в чашке и инкубируют 1-2 часа при 37 °С. При наличии пневмококков колонии лизируются вокруг диска на расстоянии 1 -2 мм.

Проба на инулин. Культуру пневмококка засевают на среду с инулином. Для этого к 100 мл прогретой при 56 °С в течение 30 мин бычьей сыворотки прибавляют 200 мл стерильной дистиллированной воды, 18 мл лакмусовой настойки и 3 г инулина, стерилизуют текучим паром 30 минут. Посевы инкубируют при 37 °С 24 часа. Пневмококк разлагает инулин, в результате чего среда краснеет. Зеленящий стрептококк не вызывает покраснения среды.

Проба с оптохином. Испытуемую культуру пневмококка засевают на сывороточный бульон с оптохином в разведении 1:100000 или 1:200000. Пневмококк на такой среде не растёт. Также можно определить чувствительность к оптохину и посевом на 10% кровяной агар, содержащий оптохин в разведении 1:50000. Контролем является посев культуры на кровяной агар. Пневмококки не растут на среде с оптохином, на контрольной среде наблюдается рост пневмококков. Можно использовать диски, пропитанные 6 мкг оптохина, которые накладывают после посева на поверхность среды. У пневмококков вокруг диска образуется зона задержки роста не менее 18 мм диаметром.

Проба на вирулентность. Суточную культуру пневмококка, выращенную на сывороточном бульоне разводят 1% стерильной пептонной водой (рН - 7,6) или слабощелочным бульоном до 1:10. Разведённую культуру вводят внутрибрюшинно белым мышам весом 16-20 гр в объёме 0,5 мл и наблюдают в течение 72 часов. Из органов погибшей мыши делают высевы на питательные среды и микроскопируют мазки-отпечатки. К высоковирулентным культурам относят пневмококки, вызывающие гибель мышей после введения культуры в разведении 1:10. Авирулентные культуры не вызывают гибели мышей.

Выводы

1. Распространённость бактерионосительства S.pneumoniae в городе Ханты-Мансийск с 2007 по 2014 гг.

2. Выбрав в качестве исследования бактериологический метод, я пришла к выводу, что он наиболее информативный метод диагностики, он имеет такие преимущества, как невысокая стоимость, хорошая чувствительность и высокую достоверность результатов. Но не стоит пренебрегать и другими методами диагностики, например, иммунохроматографический тест представляется одним из наиболее перспективных.

Список литературы

1. Баранов А.А., Намазова Л.С., Таточенко В.К. «Пневмококковая инфекция и связанные с ней заболевания серьёзная проблема современного здравоохранения» // Педиатрическая фармакология. -2008.-Т.5,№1 -С.2-7.

2. Баранов А.А., Таточенко В.К., Намазова Л.С. Нужно ли защищать детей от пневмококковой инфекции? // Вопр. современ. педиатрии.-2008.-Т.7, №1.-С.13-16.

3. Брико Н.И., Ещина A.C., Ряпис JI.A. Лабораторная диагностика стрептококковых инфекций: пособие для врачей и научных работников.-М.: Экоплан, 1998. 15с.

4. Белошицкий Г.В. Эпидемиологическая характеристика пневмококковых менингитов: Автореф. дис.... канд. мед. наук. - М., 2005. - 24 с.

5. Белошицкий Г.В., Королева И.С., Кошкина Н.И. Пневмококковые менингиты в Российской Федерации // Эпидемиология и вакцинопрофилактика 2009- №21 -с. 6-10.

6. Геппе Н.А., Малахов А.Б. Пневмококковая инфекция респираторной системы в детском возрасте. Практическое руководство для врачей.--М.: Медицина, 2005.-120с.

7. Гланц С. Медико-биологическая статистика.-М.:Практика, 1999.-459 с.

8. Гольдштейн А.В. Вакцинопрофилактика пневмококковой инфекции // Вакцинация.-2004.-№2 (32).-С.10-11.

9. Гучев И.А., Клочков О.И. Антибиотикопрофилактика вспышек внебольничной пневмонии в гомогенной популяции// Качественная клиническая практика.- 2003.-№1.-С.24-29.

10. Иващук В.В. Особенности стрептококковых инфекций верхних дыхательных путей у детей: дис.канд. мед. наук / Иващук Владимир Владимирович.-Владивосток, 2003.-23 с.

11. Кречикова О.И., Козлов Р.С., Богданович Т.М. Выделение, идентификация и определение чувствительности к антибиотикам Streptococcus pneumoniae (методические рекомендации)//Клин. микробиол. и антимикроб. химиотер.- 2000.-Т.2,№2.- С. 88-98.

12. Козлов Р.С. Пневмококки: прошлое, настоящее и будущее. Смоленск:Смоленская государственная медицинская академия,2005-128 с.

13. Козлов Р.С. с соавт. Антибиотикорезистентность Streptococcus pneumoniae в России в 1999-2005 гг: результаты многоцентровых проспективных исследований ПеГАС-I и ПеГАС-II. // КМАХ, 2006, том 8, №1.

14. Конъюгированная пневмококковая вакцина для иммунизации детей - рекомендации ВОЗ. // Педиатрическая фармакология 2007, т.4 - №5 - с.1 -3.

15. Козлов Р.С., Чагарян А.Н., Козлова Л.В., Муравьев А.А. Серологическая характеристика и чувствительность к антибиотикам пневмококков, выделенных у детей в возрасте до 5 лет в отдельных регионах Российской Федерации. Клин микробиол и антимикроб химиотер 2011; 2: 177-187.

16. Маянский Н.А., Алябьева Н.М., Катосова Л.К., Гречуха Т.А., Пинелис В.Г., Намазова-Баранова Л.С. Вопросы диагностики в педиатрии, 2010, №6, с.6-10

17. Мельникова А.А., Королева И.С., Белошицкий Г.В. Актуальные проблемы пневмококковой инфекции. // Ремедиум 2009. - август-сентярь - с. 18 - 20

18. Макинтош Д. Д. Международный опыт применения 7-валентной конъюгированной пневмококковой вакцины // Педиатрическая фармакология 2009 - т.6 - №2 - с. 8 - 10

19. Миронов О.К., Платонов А.Е., Козлов Р.С. Идентификация и серотипирование российских штаммов Streptococcus pneumoniae с применением методик, основанных на ПЦР. Клин микробиол и антимикроб химиотер 2011; 4: 304-313.

20. Маянский Н.А., Алябьева Н.М., Катосова Л.К., Гречуха Т.А. Определение капсульных серотипов пневмококка методом мультиплексной ПЦР. Вопр диагн педиатр 2010; 6: 6-10.

21. Очкасов А.В. Рациональная антибактериальная терапия тяжелых форм острых средних гнойных отитов у детей: Автореф. дис. … канд. мед. наук. М 2006.

22. Рекомендации расширенного заседания Совета экспертов на тему «Бремя пневмококковых заболеваний в России», ВСП, 2009,Т.8, №2

23. Сидоренко С.В., Лобзин Ю.В., Харит С.М., Королева И.С., Таточенко В.К. Пневмококковая инфекция и современные возможности ее профилактики - эпидемиологический обзор ситуации в мире и в России.// Вопросы современной терапии 2010, т.9 - №1 - с. 54 - 61

24. Таточенко В.К. Клинические проявления пневмококковой инфекции в разных возрастных группах. Бюллетень "Вакцинация" 2009; 2: 3-7.

25. Учайкин В.Ф., Шамшева О.В., Пневмококковая инфекция. Руководство по клинической вакцинологии, Москва, 2006.

26. Черкес Ф.К., Богоявленская Л.Б., Бельская Н.А. Микробиология.-М:Альянс,2012.-512с.,ил.

27. Чучалин А.Г. Предисловие//Пневмония. Под ред. Чучалина А.Г., Синопальникова А.И., Черняховский Н.Е.- М.:Экономика и информация,2002, с.7-8.

28. Эпидемиология и вакцинопрофилактика инфекции, вызываемой Streptococcus pneumoniae: методические рекомендации 3.3.1.0027-11. М: Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека 2011.

Приложение

Таблица №1. Биохимические свойства пневмококков

Таблица № 2.Количество случаев обнаружения пневмококка в г. Ханты-Мансийск с 2007 по 2014 гг.

Таблица № 3. Дифференцированная антибактериальная терапия инвазивной пневмококковой инфекции с учетом вероятности резистентных S.pneumoniae.

Размещено на Allbest.ru