Количественная и качественная характеристика гормонов фето-плацентарной системы

Показания к определению содержания ХГЧ в крови [2]:

ранняя диагностика беременности;

нарушение функции плаценты при патологически протекающей беременности;

дифдиагностика пузырного заноса и хорионэпителиомы, контроль за эффективностью их лечения;

Показания к определению содержания ПЛ в крови:

диагностика плацентарной недостаточности, гипоксии и гипотрофии плода;

Показания к определению содержания Прл в крови:

для комплексной оценки функционального состояния ФПК;

нарушение лактации в послеродовый период;

Показания к определению содержания эстрогенов в крови:

контроль за течением беременности с целью диагностики состояния ФПК;

Показания к определению содержания ПГ в крови:

диагностика фето-плацентарной недостаточности в динамике беременности и родов;

Показания к определению содержания Кр в крови:

нарушение функционирования системы гипоталамус-гипофиз-кора надпочечников;

диагностика болезней Аддисона и Иценко-Кушинга.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ЭКСПЕРИМЕНТА

С целью изучения функции и состояния ФПС нами определено содержание ряда гормонов в сыворотке крови у женщин (20-35лет) на разных сроках беременности. Работу проводили на базе ЦНИЛ Донецкого Медицинского университета им. М. Горького в отделе молекулярно-генетических исследований. Диагностика проводилась методами радиоиммунологического (РИА) и иммуноферментного (ИФА) анализа.

2.1 Принципы методов исследования

Для определения эстриола использовался метод конкурентного ИФА; плацентарного лактогена человека (ПЛ) - метод ИФА типа «сэндвич».

Принцип метода конкурентного ИФА. На твердой фазе сорбируют антитела к антигену, т.е. к эстриолу. Антиген-препарат метят ферментом (в данном случае эстриол меченый Horse RadishPeroxidase). При проведении анализа к твердой фазе добавляют испытуемую биологическую жидкость и меченый антиген. Последний конкурирует с антигеном в испытуемой пробе за иммобилизованные на твердой фазе антитела. В результате реакции ферментативная активность на твердой фазе оказывается обратно пропорциональной концентрации определяемого в пробе антигена.

Принцип метода «Сэндвич»-ИФА. «Сэндвич»-ИФА разработан для антигенов, на которых есть не менее двух неперекрывающихся эпитопов. Против обоих эпитопов получают в качестве реагентов специфичные антитела. Антитела к одному из эпитопов сорбируют на твердой фазе. Испытуемую пробу добавляют к твердой фазе, инкубируют, отмывают. После отмывки вносят конъюгат антител ко второму эпитопу с ферментом (Horse Radish Peroxidase). Ферментативная активность, остающаяся на твердой фазе, прямо пропорциональна содержанию антигена в пробе.

Эстрадиол и прогестерон определяли методом конкурентного РИА.

Принцип метода конкурентного РИА состоит в следующем. В аналитической пробирке, содержащей компоненты набора и образец сыворотки крови, во время инкубации устанавливается равновесие между [125I]-гормоном (эстрадиолом или прогестероном) и эндогенным гормоном анализируемого образца сыворотки крови с антителами, иммобилизованными на стенках пробирки. Количество связанного антителами [125I]-гормона находится в обратной зависимости от концентрации гормона в анализируемом образце. Разделение свободного и связанного антителами гормона осуществляют удалением инкубационной среды из пробирок с помощью водоструйного насоса.

2.2 Процедура определения эстрадиола и прогестерона

Аналитические пробирки поместить в штатив и каждую пару пробирок маркировать обозначением той величины, для измерения которой они предназначены: Т - для измерения общей активности меченого антигена в пробирке; В0 - В5 - для построения калибровочной кривой; Вкс - для пробирок с КС; Вx - для исследуемых образцов сыворотки крови пациентов.

Отобрать из каждого флакона с калибровочными пробами по 0,05 мл сыворотки и внести в пробирки В0 - В5. Из флакона с КС отобрать по 0,05 мл в пробирки Вкс. В пробирки Вх внести по 0,05 мл исследуемых образцов сыворотки крови пациентов.

Во все пробирки внести по 0,5 мл раствора меченого антигена.

Инкубировать все пробирки при температуре (20-25)°Св течение 1 ч при постоянном встряхивании (не менее 300 встряхиваний в минуту).

Из всех пробирок, кроме Т, полностью удалить содержимое с помощью водоструйного насоса.

Все пробирки поместить вгамма-счетчик и измерить связанную и общую активность меченого антигена в каждой пробирке в течение 1 мин.

Определение хорионического гонадотропина человека (ХГЧ) проводили методом РИА типа «сэндвич».

2.3 Принцип метода «Сэндвич»

В наборе используется два вида мышиных моноклональных антител к различным эпитопамв-субъединицы ХГЧ, что позволяет определять общий ХГЧ, т.е. его интактную молекулу и (в-субъединицу. Исследуемые образцы, контрольные и калибровочные пробы инкубируют в пробирках, покрытых одним видом моноклональных антител совместно с раствором других антител, меченных 125I. После окончания, инкубации удаляют жидкое содержимое, промывают пробирки и измеряют связанную активность 125 I. Концентрацию общего ХГЧ, прямо пропорциональную связанной активности, определяют методом интерполяции по калибровочной кривой.

2.4 Процедура определения ХГЧ

В покрытые антителами пробирки последовательно внести:

а) 50 мкл калибровочных, контрольных и анализируемых проб в соответствии с маркировкой;

б) 200 мкл меченых антител;

Перемешать.

В две дополнительные пробирки внести по 200 мкл меченых антител для определения общей активности 125I (Т).

Инкубировать 1 час при (18-25)°С и постоянном встряхивании.

Тщательно удалить содержимое пробирок (кроме проб Т).

Промыть пробирки 2 мл промывочного раствора.

Измерить связанную (В) и общую (Т) активность I в течение 1 мин на гамма-счетчике.

Расчёты и графические построения проводятся при помощи специальных программ на ПК. Результаты (определение содержания гормона) рассчитывают методом интерполяции по калибровочной кривой, полученной одновременно с анализом неизвестных проб.



3. ГОРМОНАЛЬНЫЕ АСПЕКТЫ РЕГУЛЯЦИИ НОРМАЛЬНОЙ БЕРЕМЕННОСТИ У ЧЕЛОВЕКА (РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ)

Гормональный аспект физиологической беременности несмотря на многолетние исследования, обогатившие науку важными фактами, не нашел еще достаточно разностороннего и полного освещения в литературе. Это естественно, так как сама проблема поистине неисчерпаема. Новые экспериментальные и теоретические данные, новая клиническая информация, новые сведения, добытые в области эндокринологии беременности, биохимической динамики метаболических процессов и их гормональной регуляции при нормальном и патологическом гестационном процессе - все это вносит соответствующие коррективы в наши представления о гормональном фоне беременности, одновременно выдвигая перспективные направления проблемы. Особую биологическую и клиническую значимость имеет изучение как взаимосвязей между отдельными гормонами, так и корреляций, складывающихся между гормональным шунтом регуляции метаболического гомеостаза в системе мать-плацента-плод и другими биологическими регуляторами гестационного процесса.

В данном исследовании сделана попытка проанализировать и обсудить лишь некоторые простейшие аспекты проблемы. Одним из них явилось изучение гормонального фона при физиологически протекающей беременности, а также роли ФПС в развитии и поддержании беременности.

Объектом исследования были 36 женщин в возрасте от 25 до 30 лет. Количественное содержание эстрадиола было определено у 8 пациенток, прогестерона - у 25, ХГЧ - у 11. В работе следили за показателями, которые характеризуют нормальное протекание беременности на разных сроках. Полученные данные сравнивали с показателями нормы содержания гормонов (см. таб.3.1 и 3.2) на определенных сроках беременности.



Таблица 3.1 - Содержание прогестерона и Е2 в сыворотке крови при физиологически протекающей беременности

Срок (неделя)	Пг, нмоль/л	Е2, нмоль/л
3-6	77,0-82,0	0,5-4,0
7-8	89,0-104,5	4,0-7,5
9-10	104,5-113,0	7,5-8,5
11-12	113,0-137,0	8,5-10,9
13-14	137,0-146,0	10,5-12,0
15-16	146,0-167,5	12,0-21,5
17-18	167,5-189,0	21,5-29,0
19-20	189,0-211,0	29,0-37,0
21-22	211,0-251,0	37,0-38,0
23-24	251,0-268,0	38,0-42,0
25-26	268,0-349,0	42,0-45,0
27-28	349,0-380,0	45,0-50,0
29-30	380,0-469,0	50,0-52,0
31-32	469,0-562,0	52,0-55,0
33-34	562,0-625,0	55,0-57,5
35-36	625,0-663,0	57,5-59,0
37-38	663,0-726,5	59,0-61,0
39-41	726,5-839,0	61,0-66,0

Содержание прогестерона в крови матери прогрессирующе растет, возрастая в 2 раза к 7-8 неделе, а затем постепенно повышается до 37-38 недель. Снижение уровня гормона указывает на наличие патологии беременности и требует заместительной терапии. Увеличение уровня гормона указывает на наличие почечной недостаточности (нарушение его выведения). Выработка прогестерона полностью прекращается лишь при далеко зашедших дегенеративных изменениях в плаценте, например, при замершей беременности. Содержание этого гормона в норме наблюдалось у 8 беременных, у 10 зарегистрировано повышенное и у - 14 пониженное (таб.3.3).



Таблица 3.2 - Содержание ХГЧ в норме в сыворотке крови при физиологически протекающей беременности

Срок беременности	Концентрация ХГЧ, МЕ/л
3 недели	0-100
4 недели	60-1000
5 недель	50-7000
7 недель	500-60000
9 недель	17000-200000
11 недель	34000-250000
13 недель	25000-210000
1 триместр	45000-200000
2 триместр	7000-100000
3 триместр	2000-60000

Таблица 3.3 - Содержание Е2, Пг и ХГЧ у обследованных женщин

Пациент	Срок	Е2, нмоль/л	ПГ, нмоль/л	ХГЧ, МЕ/л
1	2-3 недели	1,8
2	3-4 недели		51
3	3-4 недели			18682
4	3-4 недели		49	2009
5	4-5 недель		66	4785
6	4-5 недель	2,0	37	22696
7	4-5 недель		105
8	4-5 недель			82651
9	5 недель		87	15649
10	5 недель	4,0	110
11	5-6 недель		27	28297
12	5-6 недель	5,2	107	174009
13	5-6 недель		52
14	5-6 недель		107
15	6 недель		85
16	6-7 недель		65	96611
17	6-7 недель			101442
18	6-7 недель		53	21927
19	6-7 недель		78
20	7 недель	1,8	95
21	8-9 недель		112	296793
22	8-9 недель		123	217898
23	8-9 недель		111
24	9 недель	6,6	95
25	9 недель	6,4	39
26	9-10 недель		73
27	9-10 недель		96
28	12 недель		127
29	13 недели		138
30	13 недель		107
31	13-14 недель		148
32	14 недель		137
33	15-16 недель		246
34	30-31 неделя	55	400
35	33-34 недели	57	521
36	35 недель		643

При беременности содержание эстрогенов прогрессивно растет, причем происходит преимущественное образования Е3 по сравнению с Е2 и Е1. Недостаток синтеза Е3 вызывает угрозу прерывания в 1-ой половине беременности и угрозу преждевременных родов - во 2- ой. Содержание Е2 в крови матери в начале беременности соответствует его уровню у небеременных женщин в период овуляции. При физиологически протекающей беременности резкий подъем его уровня отмечается к 9-10-й неделе, затем - постепенно увеличивается до конца беременности с тремя пиками более высокой концентрации - в 23-24, 35-36 и 39-40 недель [9]. При определении Е2 содержание гормона в норме наблюдалось у 5ти пациенток, у 2х - повышенное и у 2х - пониженное (таб.3.3).

ХГЧ транспортируется преимущественно в кровь матери, где его уровень в 10-20 раз выше, чем в крови плода. Период полураспада - 27 часов, следовательно, при его определении получают истинную и сиюминутную характеристику состояния его секреции. В первые 4-6 недель беременности содержание ХГЧ в биологических жидкостях организма увеличивается в 2 раза каждые 2 дня, достигая максимума на 9-12 неделе. Во 2 триместре содержание ХГЧ стабилизируется на невысоком уровне, а затем несколько возрастает. Гиперсекреция ХГЧ возникает как вариант нормы при многоплодной и пролонгированной беременности. Повышение уровня ХГЧ является неблагоприятным симптомом токсикоза беременных, врожденных пороков развития плода. При определении понижения содержания в крови или экскреции ХГЧ у беременной на 20-30 % от недельной нормы необходимо повторить анализ. Если содержание ХГЧ окажется таким же или в пределах нормы при отсутствии иных признаков плацентарной недостаточности, то можно расценивать данный случай как вариант нормы. Прогрессирующее в динамике наблюдения снижение содержания ХГЧ в крови матери на 50 % и более указывает на формирование плацентарной недостаточности и требует дополнительного определения других гормонов плаценты и ФПК. При определении ХГЧ содержание гормона в норме наблюдалось у 1 беременных, у 12 - повышенное и у 0 - пониженное (таб. 3.3).



ВЫВОДЫ

Проведена диагностики эстрадиола, прогестерона и ХГЧ, обеспечивающих морфофункционального статуса органов и систем плода, а также специфическое развитие репродуктивной системы матери (матка, вагина, молочные железы).

У значительной части беременных имеет место или снижение уровня содержания гормонов, или и его повышение. Однако, для постановки достоверного диагноза необходимо более тщательное обследование, гормоно-диагностика, учет биохимических показателей.

Количественное определение гормонов (женских половых и плацентарных) важно для понимания механизмов протекания беременности и своевременного выявления патологических отклонений, с целью их коррекции.



ЛИТЕРАТУРА

1. Биологическая химия: Учебник/ Берёзов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Под ред.акад. С.С. Дебова. - 2-е изд., -М.: Медицина, 1990.- 528с.: ил.

2. Практическая гормонодиагностика в акушерстве и гинекологии: Руководство для врачей/ С.В. Зяблицев, Э.Б. Яковлева, С.Б. Арбузова, М.И. Николенко. - Донецк, 1998. - 74с.

3. Гормональные аспекты физиологической беременности/ Минкина А.И., Рымашевская Э.П., Кургунова Л.С., Польщикова Л.А. - Ростов-на-Дону. Изд-во Рост. ун-та. - 1987, 128с.

4. Эндокринная регуляция беременности у человека./Доклад Научн. группы ВОЗ. М.: Медицина.- 1972, 40с.

5. Гинекологическая эндокринология. / Сольский Л.П., Михедко В.П., Фердман Т.Д., Борин А.Л.. - Киев: «Здоров'я».- 1976, 240 с.

6. Иммунологическая гормонодиагностика в акушерстве и гинекологии: Обзор лабораторных анализов/ IMMUNOTECH. - 1997, 20 с.

7. Репродуктивная эндокринология. В 2-х томах. Пер. с англ./ Под ред. С.К. Йена, Р.Б. Джаффе.- М.: Медицина.- 1998, 704 с.

8. Основы эндокринологии: Учебник/ Розен В.Б.- 3-е изд., перераб. И доп. - М.: Изд-во МГУ, 1994. - 384 с.

9. Молекулярные механизмы гормональной регуляции обмена веществ./ Кучеренко И.К., Германюк Я.Л., Васильев А.Н. -Киев: Вища школа. Изд-во при Киев. Ун-ве, 1986. - 148с.

Размещено на Allbest.ru