Морфологические изменения селезенки в динамике алкогольной интоксикации и общего переохлаждения организма

Хотя другие авторы утверждают о постоянной депрессии гуморального иммунитета, а именно выработки иммуноглобулинов класса М, отвечающих за острый иммунный ответ, а также и уменьшении фагоцитарной активности, что, вероятно связано с повышением уровня в плазме крови катехоламинов и кортизола (Chen W.H., Sun L.T., Tsai C.L., Song Y.L., Chang C.F., 2002).

В целом, по мнению большинства исследователей, холодовое воздействие оказывает иммуностимулирующее действие, вызывая повышение в крови уровня лейкоцитов, в частности гранулоцитов, а также увеличение количества натуральных киллеров и их активности и уровня циркулирующего в крови интерлейкина-6 (Brenner I.K.M., Castellani J.W., Gabaree C., Young A.J. et al., 1999).

Многие исследователи доказали железо-зависимую клеточную гибель в различных органах при холодовом воздействии. Однако только единичные авторы указывают на источник ионов железа в клетках и возможное способствование их освобождению цитохрома Р450. Такое исследование провели в лаборатории медицинского университета в штате Висконсин: при экспозиции клеточной культуры эпителиальных клеток почечных канальцев человека при температуре 4°С было зафиксировано появление меченых блеомицином ионов железа. Для установления источника ионов железа эти клетки подвергли фракционированию при температуре 4°С в течение 4 часов. Блеомицин-меченые ионы содержались в большом количестве в микросомах и в цитозоле. Так как эти микросомы были богаты ферментами цитохрома Р450, то органеллы подвергали воздействию ингибиторов этих ферментов (циметидин и пиперонил бутоксид) также в условиях холода, что привело к снижению выброса ионов железа. Таким образом, было установлено, что применение циметидина и дефероксамина значительно снижает уровень клеточного повреждения ультраструктурных изменений при холодовом воздействии, подтверждая роль цитохрома Р450 как источника ионов железа в индуцированной гипотермией гибели клеток. Данное исследование проводилось этими же авторами и на культуре эпителиоцитов почечных канальцев крыс. Данные результаты ничем не отличались от полученных ранее фактов (Huang H., Salahudeen A.K., 2002).

Функциональные сдвиги адаптивной системы организма на воздействие холода изучены достаточно хорошо [Al-Damluje S., Press L.H., 1987; Tringali G., Farrace S., Ragazzoni E. et al., 2000; Hochol A., Nowak K.W., Belloni A.S. et al, 2000]. Уже через 5 - 10 минут от начала действия контактного охлаждения льдом обнаруживается значительная стимуляция процессов нейросекреции в паравентрикулярном и супраоптическом ядрах гипоталамуса с дальнейшим накоплением секрета в нейрогипофизе [Булдакова А.Н., 1967; Горизонтов П.Д., 1973]. Затем происходит повышение секреции кортикостерона [DeVries A.C., Gerber J.M., Richardson H.M. et al., 1997].

В надпочечниках при экспозиции крыс при температуре -10 С и - 18С увеличивается кровенаполнение всех морфофункциональных зон с параллельным снижением содержания липидных включений в клубочковой, пучковой и сетчатой зонах. Причем при холодовом воздействии -10 С в секреторных клетках средних отделов пучковой зоны наблюдается выход везикулярных крист из митохондрий в цитоплазму эндокриноцитов.

Под воздействием температуры - 18 С отмечается появление деструктивных форм митохондрий в единичных адренокортикоцитах пучковой зоны, а также почкование функционирующих митохондрий. Ядра адренокортикоцитов, преимущественно пучковой и сетчатой зон, увеличиваются в размерах.

Признаки, отражающие усиление активности различных зон при воздействии температуры - 10 С появляются только через два часа холодового воздействия, причем с постепенным увеличением параметров в течение всего периода гипотермии. А при воздействии температуры - 18 С морфологические признаки усиления активности различных отделов обеих желез появляются через 1 час от начала экспозиции.

Обнаруживается повышенная минералокортикоидная активность надпочечников, которая, вероятно, связана с развивающейся в динамике гипотермии гипотонией [Mitsuki I., 1960: Буков Е.А., Егоров Ю.Н., Ласси Н.И., 1961].

В адаптивную реакцию организма при общем переохлаждении вовлекаются не только надпочечники, но и другие органы эндокринной системы, в основном, щитовидная железа. При этом активируется гипоталамо-гипофизарно-тиреоидная система, что подтверждается в экспериментах на крысах, однако у человека такой активации не наблюдается, но увеличивается выброс трийодтиронина (Leppaluoto J, Paakkonen T, Korhonen I, Hassi J., 2005).

Повышение уровня основного метаболизма при воздействии холодового стрессора напрямую связано с гормонами щитовидной железы: трийодтиронином и тироксином (облигатный термогенез). Кроме того, существует мнение о том, что высокий уровень Т3 способствует дифференцировке адипоцитов белой жировой ткани в бурую, клетки которой содержат большое количество митохондрий и отвечающую за недрожательный термогенез (Laurberg P., Andersen S., Karmisholt J., 2005). Наличие рецепторов к тиреоидным гормонам, UCP1 (uncoupling protein) и деиодиназ в клетках бурой жировой ткани подтверждают и другие авторы (Leppaluoto J. et al., 2005).

Известно, что параллельно нарастанию уровня тиреоидных гормонов увеличивается степень оксидантного стресса. P. Venditti et al. (2004) (Venditti P., De Rosa R, Portero-Otin M., Pamplona R., Di Meo S., 2006) исследовали влияние тиреоидных гормонов на развитие оксидантного стресса в печени крыс и пришли к выводу, что Т3 играет ключевую роль в метаболических изменениях и оксидантном повреждении печени при холодовом воздействии за счет изменения уровня ненасыщенных жирных кислот и содержания гемопротеина. Кроме того, он оказывает непосредственной влияние на увеличение уровня в цитоплазме гепатоцитов митохондриальных белков (М1, М3, М10). Причем М1 обладает наибольшей оксидантной способностью, вызывая перекисное повреждение клеточных структур, вызывает повышение продукции перекиси водорода и снижает активность антиоксидантной системы (Venditti P., De Rosa R., Caldarone G., Di Meo S., 2004; Venditti P., Pamplona R., Portero-Otin M., De Rosa R., Di Meo S., 2006).

1.3 Совместное действие алкоголя и холода на организм

А.Д. Тяпкина проводила исследование действия на крыс холода и алкоголя.

В качестве фактора охлаждения была выбрана вода температуры 15°С(II группа), т.к. переохлаждение в водной среде по сравнению с воздушной (той же температуры) наступает в несколько раз быстрее

Животным III группы за 20 мин. до охлаждения вводили через желудочный зонд 30%-ный раствор этилового спирта (1мл/100г).

Для крыс II группы была характерна двигательная активность в виде плавательных движений. Время до появления признаков "холодового наркоза" составляло в среднем 17 мин. Большая часть животных III группы была малоподвижна, но признаки "холодового наркоза" регистрировались в среднем через 23 мин. Изменения ректальной температуры у животных II группы составили в среднем 14°С, у животных III группы - 11°С.

Исследование фагоцитарной активности показало её достоверное снижение в третьей группе по сравнению со второй и контролем.

При охлаждении животных адгезионная способность лейкоцитов достоверно снижалась (56%), преимущественно за счёт клеток с большой силой сцепления. Сочетание охлаждения с введением алкоголя приводило к возвращению числа адгезировавших клеток к уровню контрольных животных.

При охлаждении животных до признаков "холодового наркоза" миграционные реакции нейтрофилов не отличались от контроля. Сочетание охлаждения с дачей алкоголя приводило к повышению хемокинетической активности. У животных I и II групп хемотаксическое действие не вызвало изменения площади миграции. У III группы животных хемотаксическое действие вызывало достоверный прирост площади миграции с 4,7 ± 0,29 мм² до 5,6 ± 0,25 мм². Следовательно, охлаждение организма не влияет на миграционную активность лейкоцитов, а активизирующий эффект, вызванный приёмом умеренных доз алкоголя до начала охлаждения, связан, скорее всего, с гуморальными сдвигами, опосредуемыми этиловым спиртом.

При оценке механических свойств лейкоцитов использовали время восстановления деформированной клетки до сферической формы. Полученные данные говорят о том, что после переохлаждения организма время восстановления увеличилось с 2,5 ± 0,44 мин. до 2,8 ± 0,38 мин. (р < 0,05). У животных III группы время "релаксации" было значительно ниже по сравнению с контролем и II группой (2,2 ± 0,29 мин., р < 0,01).

Осмотическая стойкость лейкоцитов при переохлаждении организма снизилась на 13,7% (контроль - 48,8 ± 5,17; переохлаждение - 35,1 ± 5,13, р < 0,01). При сочетании охлаждения с дачей алкоголя осмотическая стойкость повысилась на 3,4% (52,2 ± 3,82%, р < 0,01).

Проведённое исследование показало, что при острой гипотермии происходят неоднозначные изменения физиологических реакций лейкоцитов, проявляющиеся в снижении адгезионных свойств при увеличении поглотительной способности и стабильности миграционных реакций нейтрофилов. Сочетание охлаждения с дачей алкоголя в большинстве случаев вызывает повышение функциональной активности лейкоцитов крови.

1.4. Изменения в ткани селезенки в результате сходных экспериментов по воздействию стрессорных раздражителей на организм

Действие стрессорного раздражителя достаточной силы приводит к значительному увеличению объема лимфоидных фолликулов селезёнки [Кириллов, Смородченко, 1999]. Такие изменения могут происходить за счёт расширения тимусзависимой и краевой зон, а в последствии, в результате увеличения площади герминативных центров, в которых возрастает количество митозов. При этом сокращается относительный объём красной пульпы [Красовская, Копылов, 1984], стираются границы между красной и белой пульпой, расширяются кровеносные сосуды [Вихрук, Ткачук, 1991].

Исследуя изменения в селезёнке при внутривенном введении опиатов А.В.Орловская и соавт. обнаружили, что в 80% случаев происходит набухание эндотелия стенок вен трабекул, в 66% случаев - отёк эндотелия стенок фолликулярных артерий, в 81% - плазматическое пропитывание стенок фолликулярных артерий, в 65% - кровоизлияния, в 100% - полнокровие синусов красной пульпы, в 94% - склероз адвентиции стенок фолликулярных артерий, в 76% - миелоз и в 83% - фиброз [А.В. Орловская].

В условиях хронического воздействия малых доз радиации у полёвок выявляются склеротические изменения сосудов, утолщение трабекулярного аппарата и капсулы селезёнки, отмечается огрубление стромы [Маслова, 1978; Маслова и др., 1994]. Также наблюдалось как увеличение, так и уменьшение вплоть до полной редукции - при длительном воздействии, лимфоидных фолликулов [Пономарева, Меркушев, 1978; Маслова и др.,1994].

Длительное воздействие малых доз химических веществ различной природы может проявляться как увеличением (с образованием обширных конгломератов лимфоидных фолликулов) [Пономарева, Меркушева, 1978; Константиновский и др., 1982], так и гипоплазией лимфоидной ткани селезёнки [Пономарева, Меркушев, 1978; Аверихин, Гичев, Королев, 1987].

Показано, что при воздействии различных токсических неорганических и органических соединений у грызунов в условиях развития достаточного по силе иммунного ответа увеличивается активность В-лимфоцитов [Schielen e. a.,1995; Ben-Hur e. a., 1999], проявляющаяся расширением герминативных центров (до 50,9% площади, занимаемой фолликулами) и истончением мантийного слоя в результате усиленной миграции В-лимфоцитов. Одновременно происходит уменьшение количества Т-лимфоцитов, проявляющееся истончением маргинальной зоны и периартериальных лимфоидных муфт [Ben-Hur e. a., 1999].

В результате изучения литературы по вопросу изменений в структуре селезенки под воздействием стрессорных факторов было обнаружено, что неизученной является область о различии воздействия алкоголя и переохлаждения на ткань селезёнки. Поэтому мы решили заняться этим вопросом, чтобы попытаться облегчить дифференциальную диагностику причины смерти от отравления алкоголем и общего переохлаждения организма.

Глава 2. Материал и методы

Для проведения эксперимента использовали 210 беспородных половозрелых белых крыс-самцов массой 250-300 г., полученные из вивария НИИ Фармакологии ТНЦ СО РАМН. Животных содержали в клетках с опилками, по 5 особей, в лаборатории кафедры судебной медицины с курсом токсикологической химии СибГМУ при температуре +20 - +22 градуса по Цельсию, с равными периодами светлого (8.00 - 20.00) и темного (20.00 - 8.00) времени суток при свободном доступе к воде и пище, одинаковой для всех крыс.

Эксперимент проводили согласно плану в осенне-зимний период с ноября 2005 по февраль 2006 года. За сутки до эксперимента животных лишали пищи. Время начала воздействия в каждой серии эксперимента - 9.00 часов. Животных подвергали экспозиции холода в клетках по 2-3 особи на открытом воздухе при температуре -10 С и -18 С, другой группе однократно интрагастрально вводили 96% этанол в дозе 2, 4 и 8 мл на кг массы тела. Крыс выводили из эксперимента в течение 8 часов с интервалом 1 час путем декапитации под эфирным наркозом (табл. 1)

Таблица 1

Схема эксперимента

Группа	1час	2часа	3часа	4часа	5часов	6часов	7часов	8часов
Холод-10 °С	5	5	5	5	5	5	5	5
Холод-18 °С	5	5	5	5	5	5	5	5
Контроль	5
Алкоголь 2мл/кг веса	5	5	5	5	5	5	5	5
Алкоголь 4мл/кг веса	5	5	5	5	5	5	5	5
Алкоголь 8мл/кг веса	5	5	5	5	5	5	5	5

При вскрытии органы выделяли единым органокомплексом, с последующим взвешиванием каждого органа и визуальной оценкой их состояния (наличие признаков переохлаждения).

Для гистологического исследования селезенку извлекали, отпрепаровывали от окружающей ткани и высекали центральную часть. Для световой микроскопии одну часть фиксировали в нейтральном 10 % формалине в течение суток, сутки промывали в проточной воде, обезвоживали в спиртах восходящей концентрации (60%, 70%, 80% и 90%) и проводили заливку в парафин. Срезы толщиной 5 мкм, полученные на ротационном микротоме, депарафинировали в толуоле (3 порции по 15 минут) и абсолютном спирте (4 порции по 1-3 минуты), окрашивали гематоксилином и эозином по следующей схеме:

1. Окраска гематоксилином 15 минут.

2. Промывка в проточной воде - 10 минут.

3. Ополаскивание дистиллированной водой.

4. Окраска 1% эозином - 1-2 минуты.

5. Ополаскивание дистиллированной водой.

6. Обезвоживание, просветление, заключение в канадский бальзам.

Исследовали препараты на светооптическом уровне с помощью микроскопа «МИКРОМЕД-5».

Критериями функциональной активности селезёнки являются:

1. оценка белой пульпы (размер фолликулов, реактивного центра)

2. соотношение белой и красной пульпы

3. доля сосудов

4. доля трабекул

Морфометрическое исследование проводили с использованием программы Adobe PhotoShop 10.0 for Windows. Изображение поля зрения светового микроскопа вводили в компьютер с помощью фотокамеры. На полученных фотографиях в программе Adobe PhotoShop 10.0 пользуясь опцией «лассо», позволяющей измерять площадь неправильных фигур, обводили контуры сосудов, трабекул, красной и белой пульпы. Рассчитывали долю измеренных площадей от площади поля зрения, принимали её за среднюю долю вещества в органе.

Статистическая обработка результатов была проведена с использованием пакета SPSS 11.5 for Windows с применением непараметрического теста Манна-Уитни и корреляционного анализа по Кэндаллу. Статистически значимыми результаты считались при p<0,05.

селезенка алкогольная интоксикация переохлаждение

Глава 3. Результаты исследований

Характеристика контрольной группы

При изучении микропрепаратов срезов селезенки в контрольной группе животных наблюдалось нормальное строение селезенки. Красная пульпа представляет собой сеть из ретикулярных фибробластических клеток и ретикулярных волокон, между которым расположено большое количество макрофагов, зернистых и незернистых лейкоцитов, гигантские клетки типа мегакариоцитов, нормальные и распадающиеся эритроциты, а также кровеносные сосуды типа венозных синусов (рис. 1).

Рис. 1. Селезенка здоровой крысы. 1 - белая пульпа, 2 - сосуд, 3 - соединительная ткань, 4 - красная пульпа

Толща красной пульпы пронизана большим количеством расширенных синусоидных капилляров и соединительнотканными прослойками бледно-розового цвета, состоящими из волокон, располагающихся в одном направлении (трабекулы).

Белая пульпа селезёнки имеет вид беловато-сероватых вкраплений вытянутой или эллипсоидной формы - скоплений лимфоидной ткани. Их центральные части заполнены ретикулярными клетками разной степени зрелости, макрофагами, плазматическими клетками, лимфобластами, большими и средними лимфоцитами, а периферические -- малыми лимфоцитами, за которыми следует слой макрофагов.

С краю от периартериальных зон располагаются лимфатические узелки (лимфоидные фолликулы). Окраска этих образований на гистологических препаратах неоднородна.

Центральная часть узелка выглядит более светлой, в микроокружении расположены дендритные клетки.

Периферическая зона узелка (мантийная зона) содержит мелкие лимфоциты, зажатые между циркулярными ретикулярными волокнами. Мантийная зона на препаратах интенсивно окрашена, выглядит более темной по сравнению с герминативным центром.

На границе между белой и красной пульпой располагается маргинальная (краевая) зона лимфатического узелка. Для этой зоны характерно наличие макрофагов. В маргинальной зоне в отличие от других зон белой пульпы обнаруживаются эритроциты, которые выходят через перфорированную стенку краевого синуса, лежащего на границе маргинальной и мантийной зоны.

На всех срезах были посчитаны объемные доли белой и красной пульпы, сосудов и трабекул. Результаты измерений в контрольной группе представлены в таблице 1.

Таблица 1

Объёмные доли белой и красной пульпы, сосудов и трабекул (%) в ткани селезёнки крыс контрольной группы

Количество случаев	Белая пульпа M±m	Сосуды M±m	Трабекулы M±m	Красная пульпа M±m
5	22,68±1,92	0,68±0,17	1,34±0,53	75,30±1,95

Здесь и далее М - средняя арифметическая, m - стандартная ошибка средней арифметической.

Характеристика изменений селезенки при действии низкой температуры - 10єС

Как показали результаты морфологического исследования, тканевые соотношения в селезенке в динамике переохлаждения меняются неоднократно и разнонаправлено (табл. 2). Так, объем белой пульпы через 3, 5 и 7 часов воздействия снижается по сравнению с контрольной группой.

Объемная доля сосудов достоверно не отличается от контроля на протяжении всего исследуемого воздействия.

Через час после воздействии холода -10єС обнаружено снижение объемной доли трабекул в селезенке относительно контроля, в остальные часы различий не выявлено.

Через 3, 5 и 7 часов воздействия обнаруживается увеличение объемной доли красной пульпы по сравнению с контрольной группой (табл. 2).

Таблица 2

Объёмные доли белой и красной пульпы, сосудов и трабекул (%) в ткани селезёнки крыс после воздействия холода -10єС, почасовое наблюдение

Время, часы	n	Белая пульпа M±m	Сосуды M±m	Трабекулы M±m	Красная пульпа M±m
контроль	5	22,68±1,92	0,68±0,17	1,34±0,53	75,30±1,95
1	5	20,66±0,84	0,96±0,43	0,16±0,10*	78,22±1,11
2	5	16,88±5,56*	0,32±0,09	0,82±0,30	81,98±5,52*
3	5	14,74±0,31	0,78±0,08	1,80±0,22	82,68±0,55
4	5	22,26±2,72*	0,44±0,05	1,58±1,13	75,72±2,56*
5	5	15,36±1,58	0,44±0,08	1,60±0,32	82,60±1,35
6	5	18,44±1,65	0,62±0,12	0,92±0,07	80,02±1,74
7	5	8,60±0,50*	0,44±0,07	0,98±0,14	89,98±0,47*
8	5	18,22±3,09	0,64±0,14	1,08±0,30	80,06±2,96

* - различия статистически значимы по сравнению с контрольной группой (p<0,05)

Судя по данным корреляционного анализа, от длительности воздействия зависят объёмная доля белой (r= -0,26; p= 0,02) и красной пульпы (r= 0,27; p= 0,01).

Характеристика изменений селезенки при действии низкой температуры - 18єС

При воздействии холода -18єС через 1, 2 и 4 часа воздействия обнаруживается снижение объемной доли белой пульпы по сравнению с контрольной группой, в остальные часы отличий нет.

Объемная доля сосудов достоверно не отличается от контроля на протяжении всего исследуемого воздействия.

При воздействии холода -18єС никаких отличий объемной доли трабекул от контроля не выявлено.

Через 1, 2 и 4 часа воздействия обнаруживается увеличение объемной доли красной пульпы по сравнению с контрольной группой, в остальные часы отличий нет (табл. 3).

Таблица 3

Объёмные доли белой и красной пульпы, сосудов и трабекул (%) в ткани селезёнки крыс после воздействия холода -18єС, почасовое наблюдение

Время, часы	n	Белая пульпа M±m	Сосуды M±m	Трабекулы M±m	Красная пульпа M±m
контроль	5	22,68±1,92	0,68±0,17	1,34±0,53	75,30±1,95
1	5	14,62±2,07*	0,38±0,10	1,42±0,27	83,58±2,00*
2	5	12,66±1,10*	0,44±0,11	0,32±0,12	86,58±1,19*
3	5	20,46±3,88	1,06±0,40	1,26±0,43	77,22±4,05
4	5	13,92±0,53*	0,62±0,08	0,56±0,10	84,90±0,57*
5	5	22,38±2,89	0,58±0,07	1,64±1,54	75,40±3,62
6	5	21,32±2,79	0,52±0,12	1,14±0,72	77,02±3,32
7	5	14,26±5,98	0,54±0,27	1,62±0,6	83,58±5,66
8	5	22,02±2,16	1,10±0,21	0,76±0,17	76,12±2,21

* - различия статистически значимы по сравнению с контрольной группой (p<0,05)

Судя по данным корреляционного анализа, зависимости изменений в селезенке от длительности воздействия нет.

Характеристика изменений селезенки при алкогольной интоксикации, вызванной интрагастральным введением этанола в дозе 2 мл/кг

При воздействии алкоголя в дозе 2 мл на кг веса через 2 часа наблюдалось снижение, а через 4 -увеличение объемной доли белой пульпы по отношению к контролю, в остальные часы показатель не отличался от контроля достоверно. Для красной пульпы характерны противоположные изменения (табл. 4)

Также при этом воздействии через 2 часа наблюдалось уменьшение объемной доли сосудов относительно контроля, в остальные часы статистически значимых отличий не обнаружено.

Обнаружено значительное уменьшение объемной доли трабекул относительно контроля через 4 и 7 часов, в остальные часы различий не выявлено.

Таблица 4

Объёмные доли белой и красной пульпы, сосудов и трабекул (%) в ткани селезёнки крыс после алкоголизации в дозе 2 мл/кг, почасовое наблюдение

Время, часы	n	Белая пульпа M±m	Сосуды M±m	Трабекулы M±m	Красная пульпа M±m
контроль	5	22,68±1,92	0,68±0,17	1,34±0,53	75,30±1,95
1	5	18,70±3,18	0,44±0,24	0,98±0,51	79,88±3,02
2	5	15,28±1,90*	0,26±0,05*	0,46±0,09	84,00±1,88*
3	5	19,86±2,79	0,64±0,18	0,38±0,17	79,12±2,75
4	5	33,06±3,00*	0,68±0,33	0,08±0,05*	66,18±3,14*
5	5	22,56±1,65	0,42±0,15	0,46±0,19	76,56±1,74
6	5	20,80±2,15	0,70±0,18	0,36±0,15	78,14±2,11
7	5	21,58±2,46	0,52±0,21	0,22±0,09*	77,68±2,54
8	5	25,90±2,45	0,62±0,11	0,92±0,32	72,56±2,57

* - различия статистически значимы по сравнению с контрольной группой (p<0,05)

Судя по данным корреляционного анализа, от длительности воздействия зависят изменения в белой пульпе (r= 0,26; p= 0,03), сосудах (r= 0,25; p= 0,04) и красной пульпе (r= -0,23; p= 0,04).

Характеристика изменений селезенки при алкогольной интоксикации, вызванной интрагастральным введением этанола в дозе 4 мл/кг

При алкоголизации этанолом в дозе 4 мл на кг веса наблюдалось снижение объемной доли белой пульпы относительно контроля через 5 и 7 часов воздействия, в остальные часы изменений не обнаружено (табл. 5).

Достоверных отличий объемной доли сосудов относительно контроля не выявлено в динамике всего периода воздействия.

При изучении объемной доли трабекул значимых различий с контролем обнаружено не было.

Также для этого воздействия характерно увеличение объема красной пульпы относительно контроля через 5 и 7 часов воздействия, в остальные часы изменений не обнаружено.

Таблица 5

Объёмные доли белой и красной пульпы, сосудов и трабекул (%) в ткани селезёнки крыс после алкоголизации в дозе 4 мл/кг, почасовое наблюдение

Время, часы	n	Белая пульпа M±m	Сосуды M±m	Трабекулы M±m	Красная пульпа M±m
контроль	5	22,68±1,92	0,68±0,17	1,34±0,53	75,30±1,95
1	5	23,04±5,40	0,68±0,18	0,78±0,15	75,50±5,58
2	5	17,66±4,81	0,70±0,34	2,30±1,08	79,34±4,51
3	5	22,90±2,00	0,34±0,09	0,96±0,43	75,80±2,30
4	5	20,10±1,34	0,42±0,09	0,44±0,31	79,04±1,15
5	5	11,98±1,42*	0,38±0,12	0,34±0,12	87,30±1,30*
6	5	21,32±2,29	0,98±0,34	0,32±0,25	77,38±2,32
7	5	15,98±1,73*	0,40±0,07	0,64±0,09	82,98±1,75*
8	5	23,82±2,88	0,48±0,13	0,30±0,10	75,40±3,09

* - различия статистически значимы по сравнению с контрольной группой (p<0,05)

Судя по данным корреляционного анализа, зависимости изменений в селезенке от длительности воздействия нет.

Характеристика изменений селезенки при алкогольной интоксикации, вызванной интрагастральным введением этанола в дозе 8 мл/кг

При воздействии алкоголя в дозе 8 мл на кг веса наблюдалось снижение объемной доли белой пульпы относительно контроля через 6 часов после воздействия, в остальные часы значения параметра не отличались от контроля (табл. 6).

Через 6 часов воздействия алкоголя наблюдалось снижение объемной доли сосудов относительно исходных, в остальные часы отличий не выявлено.

При изучении объемной доли трабекул значимых различий с контролем обнаружено не было.

При воздействии алкоголя в дозе 8 мл на кг веса наблюдалось увеличение объемной доли красной пульпы относительно контроля через 6 часов после воздействия, в остальные часы изменений не обнаружено.

Таблица 6

Объёмные доли белой и красной пульпы, сосудов и трабекул (%) в ткани селезёнки крыс после алкоголизации в дозе 8 мл/кг, почасовое наблюдение

Время, часы	n	Белая пульпа M±m	Сосуды M±m	Трабекулы M±m	Красная пульпа M±m
контроль	5	22,68±1,92	0,68±0,17	1,34±0,53	75,30±1,95
1	5	20,20±1,63	0,32±0,07	2,12±1,04	77,36±1,34
2	5	19,40±0,42	0,83±0,25	0,83±0,57	78,93±0,74
3	5	16,84±4,09	0,42±0,14	1,78±1,06	80,96±4,93
4	5	22,20±0,82	0,50±0,14	0,84±0,62	76,46±1,00
5	5	17,68±1,63	0,36±0,11	1,12±0,33	80,42±4,90
6	5	10,68±2,00*	0,24±0,07*	1,34±0,37	87,74±2,20*
7	5	20,58±2,50	0,34±0,08	1,34±0,49	77,74±2,33
8	5	16,96±3,25	0,46±0,18	1,30±0,45	81,30±3,15

* - различия статистически значимы по сравнению с контрольной группой (p<0,05)

Корелляции изменений структуры селезенки с длительностью воздействия не выявлено.

Сравнительная характеристика изменений селезенки при алкогольной интоксикации и общем переохлаждении организма

Размещено на http://www.allbest.ru

Размещено на http://www.allbest.ru

Рис.1. Объемная доля белой пульпы в паренхиме селезенки при различных воздействиях, почасовая динамика

Как видно из графика, представленного на рисунке 1, объемная доля белой пульпы при различных воздействиях с течением времени меняется неодинаково. В первый час она остается на уровне контроля при всех воздействиях, но имеет тенденцию к снижению, кроме охлаждения при -18єС, при котором снижается на 30%. В течение второго часа воздействия она продолжает снижаться действии -18єС, а также при алкоголизации в дозе 2 мл/кг, при остальных воздействиях имеет тенденцию к снижению. К третьему часу под действием холода -10єС объем белой пульпы снижается почти на 40%, тогда как при остальных воздействиях возвращается к контрольному уровню. Через 4 часа под действием алкоголя в дозе 2 мл/кг объем белой пульпы достигает своего максимума при данных воздействиях и увеличивается почти в 1,5 раза, относительно контроля. К этому времени данный показатель также снижается от холода -18єС. На 5 час при действии холода -10єС и 96% этанола в количестве 4 мл/кг доля белой пульпы снижается, при алкоголизации в количестве 8 мл/кг имеет тенденцию к снижению, а затем снова возвращается к уровню контроля и лишь при действии 96% этанола в дозе 8 мл/кг - снижается. К седьмому часу происходит резкое увеличение объемной доли белой пульпы под действием алкоголя в количестве 8 мл/кг до нормы и резкое снижение до минимума при данном исследовании под действием холода -10єС - на 60% от контрольного значения, снижение при действии алкоголя в количестве 4 мл/кг. И к восьмому часу при всех воздействиях объемная доля белой пульпы возвращается к уровню контроля.

Через 4 часа воздействия объемная доля белой пульпы достоверно больше при алкоголизации в количестве 2 мл/кг, чем при охлаждении при -18єС.

Размещено на http://www.allbest.ru

Размещено на http://www.allbest.ru

Рис.2. Объемная доля сосудов в паренхиме селезенки при различных воздействиях, почасовая динамика

Как видно из графика, представленного на рисунке 2, объемная доля сосудов при различных воздействиях с течением времени меняется по-разному. В первый час она имеет тенденцию к снижению относительно контроля при воздействиях холода -10єС, алкоголя в количестве 2 и 8 мл/кг, при алкоголизации в дозе 4 мл/кг она остается на уровне контроля, а при охлаждении в -18єС имеет тенденцию к увеличению. В течение второго часа воздействия объемная доля сосудов снижается при алкоголизации в количестве 2 мл/кг, при охлаждении в -10єС имеет тенденцию к снижению, при введении алкоголя в количестве 8 мл/кг она имеет тенденцию к увеличению, при холоде -18°С и алкоголизации в количестве 4 мл/кг остается в норме. К третьему часу под действием холода -10єС и -18єС объем сосудов имеет тенденцию к увеличению, при алкоголизации в количестве 2 мл/кг возвращается к норме, в то время, как при остальных воздействиях имеет тенденцию к снижению. Через 4 часа при действии холода объем сосудов имеет тенденцию к снижению. На 5 час при всех воздействиях показатель остается в пределах нормы. Через 6 часов под действием алкоголя в количестве 4 мл/кг объемная доля сосудов имеет тенденцию к увеличению, 40% от контроля, при алкоголизации в количестве 8мл/кг достигает минимума при данном исследовании. К седьмому часу при действии алкоголя в количестве 4 мл/кг появляется тенденция к снижению, при 8 мл/кг - возвращается к норме. И к восьмому часу при всех воздействиях доля сосудов находится в пределах нормы, но под действием холода -18єС имеет тенденцию к увеличению.

Через час воздействия при охлаждении в -10єС объемная доля сосудов повышена относительно алкоголизации в количестве 8 мл/кг, а через 3 часа воздействия она повышена при -18єС, относительно алкоголизации в количестве 4 мл/кг.

Размещено на http://www.allbest.ru

Размещено на http://www.allbest.ru

Рис.3. Объемная доля трабекул в паренхиме селезенки при различных воздействиях, почасовая динамика

При анализе графика, представленного на рисунке 3, можно описать следующие явления. Объемная доля трабекул при различных воздействиях с течением времени меняется неодинаково. В первый час она снижается относительно контроля при всех воздействиях, кроме алкоголизации в дозе 8 мл/кг и холоде -18єС, при котором она остается почти на уровне контроля. Больше всего объемная доля трабекул снижается при действии холода -10єС - на 85%. В течение второго часа воздействия она продолжает снижаться при действии алкоголя в дозе 2 мл/кг, снижается при действии холода -18єС и алкоголя в дозе 8 мл/кг, и увеличивается под действием холода -10єС и алкоголя в дозе 4 мл/кг, достигая в последнем случае максимума в этом исследовании. К третьему часу под действием холода и алкоголя в дозе 8 мл/кг объем трабекул увеличивается, тогда, как при остальных воздействиях он снижается. Через 4 часа при всех видах воздействия объем трабекул снижается и под действием алкоголя в дозе 2 мл/кг достигает минимума в данном исследовании, приближаясь к нулю. На 5 час при всех воздействиях, кроме алкоголя в дозе 4 мл/кг, доля трабекул увеличивается, а затем снижается кроме алкоголизации в дозе 8 мл/кг. К седьмому часу происходит увеличение объемной доли трабекул под действием холода алкоголя в дозе 4 мл/кг, снижение под действием алкоголя в дозе 2 мл/кг, под действием алкоголя в дозе 8 мл/кг показатель остается на том же уровне. И к восьмому часу воздействии холода -18єС и алкоголя в дозе 4 и 8 мл/кг доля трабекул снижается и увеличивается при действии алкоголя в дозе 2 мл/кг и холода -10єС.

Через час воздействия объемная доля трабекул при воздействии холода -10°С достоверно понижена относительно алкоголизации в количестве 8 мл/кг, через 2 часа при охлаждении в -18°С достоверно понижена относительно алкоголизации в количестве 4 мл/кг.

Размещено на http://www.allbest.ru

Размещено на http://www.allbest.ru

Рис.4. Объемная доля красной пульпы в паренхиме селезенки при различных воздействиях, почасовая динамика

Как видно из графика, представленного на рисунке 4, объемная доля красной пульпы при различных воздействиях с течением времени меняется неодинаково. В первый час она увеличивается относительно контроля при всех воздействиях, кроме алкоголизации в дозе 4 мл/кг, при которой она остается на уровне контроля. Больше всего объемная доля красной пульпы увеличивается при действии холода -18єС. В течение второго часа воздействия она продолжает увеличиваться при всех видах воздействия, в том числе и при алкоголизации в дозе 4 мл/кг. К третьему часу под действием холода -10єС и алкоголя в дозе 8 мл/кг объем красной пульпы продолжает увеличиваться, тогда как при остальных воздействиях он уменьшается. Через 4 часа под действием алкоголя в дозе 2 мл/кг объем красной пульпы достигает своего минимума при данных воздействиях и уменьшается почти на 15%, относительно контроля. К этому времени данный показатель также снижается под действием холода -10єС и алкоголизации 8 мл/кг и увеличивается при оставшихся воздействиях. На 5 час при всех воздействиях, кроме холода -18єС, доля красной пульпы увеличивается, а затем снова снижается от холода -10єС и алкоголизации в дозе 4 мл/кг и увеличивается при остальных воздействиях. К седьмому часу происходит снижение объемной доли красной пульпы под действием алкоголя в дозе 8 мл/кг и резкое увеличение до максимума при данном исследовании под действием холода -10єС, увеличение при алкоголизации в дозе 4 мл/кг и холоде -18єС, а под действием алкоголя в дозе 2 мл/кг остается на том же уровне. И к восьмому часу при всех воздействиях, кроме алкоголя в дозе 8 мл/кг, доля красной пульпы снижается.

Через 4 часа воздействия объемная доля красной пульпы достоверно снижена при алкоголизации в количестве 2 мл/кг, относительно охлаждения при -18єС.

Выводы

1. Выявлены следующие особенности в морфофункциональном состоянии селезенки при действии холода: при охлаждении -10°С наблюдается снижение объемной доли белой пульпы через 3, 5 и 7 часов воздействия, снижение объемной доли трабекул в первый час воздействия и увеличение объемной доли красной пульпы через 3, 5 и 7 часов после воздействия; при охлаждении -18°С происходит снижение объемной доли белой пульпы через 1, 2 и 4 часа воздействия и увеличение красной пульпы в эти же часы.

2. Выявлены следующие особенности в морфофункциональном состоянии селезенки при интрагастральном введении 96% этанола: при алкоголизации в количестве 2 мл/кг веса происходит снижение объемной доли белой пульпы через 2 часа воздействия и увеличение через 4, для красной пульпы характерны противоположные изменения, через 2 часа характерно снижение объемной доли сосудов, снижение объемной доли трабекул - через 4 и 7 часов; при алкоголизации в количестве 4 мл/кг веса происходит снижение объемной доли белой пульпы через 5 и 7 часов, красная увеличивается в эти часы; при алкоголизации в количестве 8 мл/кг веса происходит снижение объемной доли белой пульпы через 6 часов, уменьшение доли сосудов через 6 часов и увеличение объемной доли красной пульпы в это же время.

3. В воздействии алкоголизации и переохлаждения на селезенку выявлены следующие различия: объемная доля белой пульпы достоверно больше при алкоголизации, чем при охлаждении через 4 часа воздействия; объемная доля трабекул при воздействии холода достоверно понижена относительно алкоголизации через час воздействия, и достоверно понижена при охлаждении относительно алкоголизации через 2 часа; объемная доля сосудов повышена при охлаждении относительно алкоголизации через 1 и 3 часа воздействия; объемная доля красной пульпы достоверно снижена при алкоголизации, относительно переохлаждения через 4 часа воздействия.

4. Зависимость изменений селезенки от длительности воздействия характерна для общего переохлаждения организма при температуре -10єС и алкогольной интоксикации, вызванной интрагастральным введением алкоголя в дозе 2 мл/кг. При остальных видах стрессоров изменения селезенки от длительности воздействия не зависят.

5. Действие более низкой температуры приводит к нивелированию хронологической зависимости изменений в ткани селезенки.

6. Действие более высоких доз алкоголя приводит к нивелированию хронологической зависимости изменений в ткани селезенки.

Список литературы

1. Алкогольное поражение печени / Ю.П. Сиволап, В.А. Савченков, Е.В. Волчкова, Т.Н. Лопаткина // Медицина критических состояний. - 2005. - № 2. - С. 22-28.

2. Билибин, Д.П. Патофизиология алкогольной болезни и наркоманий / Д.П. Билибин, В.Е. Дворников. - М.: Университет дружбы народов, 1990. - 104 с.

3. Буеверов, А.О. Алкогольная болезнь печени / А. О. Буеверов // Нарколог. - 2005. - № 1. - С. 23-28.

4. Буков, Е.А. О патогенезе расстройств кровообращения при глубоком охлаждении / Е.А. Буков, Ю.Н. Егоров, Н.И. Ласси// 3-я Всесоюз.конф.патофизиологов.- Ташкент. - 1961. - С.15 - 20.

5. Булдакова, А.Н. Действие различных температур на нейросекреторные процессы гипоталамуса у белых крыс / А.Н. Булдакова // Пробл. гипоталамической нейросекреции. - Киев, 1967. - Вып.1. - С.139.

6. Воздействие ацетальдегида на белки организма / Угрюмов А.И., Беляева Н.Ю., Тихонова Г.Н. и соавт. // Архив патологии. - 1986. - т. 68, вып. 10. - С. 14-21.

7. Возможности гистологического исследования селезенки для диагностики отравлений алкоголем и наркотиками / А.В. Орловская, И.Н. Богомолова, Н.В. Чернов // Судебно-медицинская экспертиза. - 2004. - Т. 47, N 4. - С. 21-24.

8. Горизонтов, П.Д. Патологическая физиология экстремальных состояний / П.Д. Горизонтов, Н.Н. Сиротинин. - М, 1973. - 383 с.

9. Калинин, А.В. Алкогольная болезнь печени / А.В. Калинин // Фарматека. - 2005. - № 1. - С. 48-54.

10. Косенко, Е.А. Углеводный обмен, печень и алкоголь / Е.А. Косенко, Ю.Г. Каминский. - Пущино, 1988. - 148 с.

11. Махов, В.М. Алкогольная болезнь печени и поджелудочной железы / В.М. Махов // Практикующий врач. - 2004. - №1. - С. 17-22.

12. Немцов, А.В. Алкогольная история России: Новейший период / А.В. Немцов. - М., 2009. - 320 с.

13. Нужный, В.П. Оксидативный стресс при алкогольной интоксикации / В.П. Нужный // Вопр. наркологии. - 1995. - № 3. - С. 65-74.

14. Островский, Ю.М. Биологический компонент в генезисе алкоголизма / Ю.М. Островский, В.И. Сатановская, М.Н. Садовник - Минск: Наука и техника, 1986. - 95 с.

15. Полунина, Т.Е. Алкогольные поражения печени / Т.Е. Полунина // Мир фармации и медицины. - 2006. - № 15. - С. 19.

16. Проблема алкогольной кардиомиопатии / О. Драпкина, Я. Ашихмин, В. Ивашкин // Врач. - 2005. - № 8. - С. 48-50.

17. Реакция структур селезенки на введение соматотропного гормона / Н.А. Кириллов, А.Т. Смородченко, А.А. Петрова др. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 1999. - Т. 127, № 2. - С. 171-173.

18. Стресспротективное действие этанола / В. П.Нужный, Е. Б. Тезиков, А. Е. Успенский // Вопр. наркологии. - 1995. - № 2. - С. 51-59.

19. Успенский, А.Е. Итоги науки и техники. Сер. Токсикол. Токсикологическая характеристика этанола / А. Е. Успенский // ВИНИТИ.- М., 1984. - Т. 13.

20. Al-Damluje, S. Effect of cathecholamines on secretion of adrenocorticotropic hormone (ACTH) in man/ S.Al-Damluje, L.H. Press // J.Clin. Pathol. - 1987. - Vol. 40. - №9. - P. 1098 - 1107.

21. Brenner, I.K.M. Immune changes in humans during cold exposure: effects of prior heating and exercise/ I.K.M. Brenner, J.W. Castellani, C. Gabaree, A.J. Young, J. Zamecnik et al./J Appl Physiol - 1999. - Vol.87. - P. - 699 - 710.

22. Chen, W.H. Cold-stress induced the modulation of catecholamines, cortisol, immunoglobulin M, and leukocyte phagocytosis in tilapia/ W.H. Chen, L.T. Sun, C.L. Tsai, Y.L. Song, C.F. Chang / Gen Comp Endocrinol. - 2002. - Vol.126. - №1. - P. - 90 - 100.

23. Circulating Interleukin-1-Beta Levels after Acute and Prolonged Exposure to Low Temperatures: Human and Rat Studies / G. Tringali, S. Farrace, E. Ragazzoni et al. // J. Neuroimmunomodulation - 2000. - Vol. 7. - № 4. - Р. 177 - 181.

24. DeVries, A.C. Stress affects corticosteroid and immunoglobulin concentrations in male house mice (Mus musculus) and prairie voles (Microtus ochrogaster) / A.C. DeVries, J.M. Gerber, H.M. Richardson et al. // Comp. Biochem. Physiol. A. Physiol. - 1997. - Vol.118. - № 3. - P. 655 - 663.

25. Hochol, A. Effects of leptin on the response of rat pituitary-adrenocortical axis to ether and cold stresses/ A. Hochol, K.W. Nowak, A.S. Belloni et al. // Endocr. Res. - 2000. - Vol.26. - № 2. - P. 129 - 140.

26. Huang, H. Cold induces catalytic iron release of cytochrome P-450 origin: a critical step in cold storage-induced renal injury/ H. Huang, A.K. Salahudeen / Am J Transplant. - 2002. - Vol.2. - №7. - P. - 631 - 639.

27. Ivanov, K.P. Physiological blocking of the mechanisms of cold death: theoretical and experimental considerations/K. P. Ivanov // Therm. Biol. - 2000. - Vol.25. - №6. - P. 467 - 479.

28. Laurberg, P. Cold adaptation and thyroid hormone metabolism / P. Laurberg, S. Andersen, J. Karmisholt // Horm Metab Res. - 2005. - Vol.37. - №9. - P. - 545 - 549.

29. Leppaluoto, J. Pituitary and autonomic responses to cold exposures in man/ T. Paakkonen, I. Korhonen, J. Hassi // Acta Physiol Scand. - 2005. - Vol.184. - №4. - P. - 255 - 264.

30. Liber, C.S. Alcohol and live // Gastroenterology. - 1994. -Vol. 106. - P. 1085-1092.

31. Mitsuki, I. Effect of acute hypothermia upon the noradrenaline and adrenaline content of the adrenal gland in the cat / I. Mitsuki // Tohoku. J. Exp. Med. - 1960. - Vol.73. - P. 70.

32. Sherlock, S., Dooley J. Diseases of the liver and biliary system, 10th. Ed. -Black well: Science, 1997. - 714 p.

33. Takeuchi, K. Roles of endogenous prostaglandis and nitric oxide in gastroduodenal ulcerogenic responses induced in rats by hypothermic stress/ K. Takeuchi, K. Suzuki, H. Araki, H. Mizoguchi, S. Sugamoto, M. Umdeda // J.Physiol.Paris. - 1999. - Vol.93. - №5. - P. 423 - 431.

34. Tnimov, M.Kh. Reactivity of mononuclear phagocytes in the lungs and liver of rats exposed to low temperatures/ M.Kh. Tnimov, A.V. Semeniuk, G.I. Nepomniashchikh, N.P. Voronina, L.N. Shishkina/Biull Eksp Biol Med. - 1985. - Vol. 100. - №9. - P. - 365 - 367.

35. Venditti, P. Effect of experimental and cold exposure induced hyperthyroidism on H₂O₂ production and susceptibility to oxidative stress of rat liver mitochondria/ P. Venditti, R. Pamplona, M. Portero-Otin, R. De Rosa, S. Di Meo // Arch Biochem Biophys. - 2006. - Vol.447. - №1. - P. - 11 - 22.

36. Venditti, P. Functional and biochemical characteristics of mitochondrial fractions from rat liver in cold-induced oxidative stress/ P. Venditti, R. De Rosa, G. Caldarone, S. Di Meo //Cell Mol Life Sci. - 2004. - Vol.61. - №24. - P. - 3104 - 3116.

37. Zieger, M.A. Endothelial cell preservation at 10 degrees C minimizes catalytic iron, oxidative stress, and cold-induced injury/ M.A. Zieger, M.P. Gupta// Cell Transplant. - 2006. - Vol.15. - №6. - P. - 499 - 510.

Размещено на Allbest.ru