Роль карбоксипептидазы N и ангиотензинпревращающего фермента в гемостазе у онкологических больных в раннем послеоперационном периоде

Содержимое пробирок тщательно перемешивали, избегая образования пены, инкубировали при комнатной температуре (+ 18 - 25С) в течение 30 минут, после чего измеряли величину оптической плотности калибровочной и опытных проб против контрольной пробы при длине волны 540 нм.

Концентрацию общего белка рассчитывали, как отношение оптической плотности опытной пробы к оптической плотности калибровочной пробы умноженная на концентрацию общего белка в калибровочном растворе (60 г/л).

2.3 Статистическая обработка результатов исследования

Достоверность отличий между средними определяли с использованием t-критерия Стьюдента [16, 29, 40]. Корреляционный анализ проводили с помощью программы «Статистика» (версия 6.0).

3.1 Исследование активности карбоксипептидазы N в сыворотке крови онкологических больных в раннем послеоперационном периоде

Результаты исследования показали увеличение активности КПN в сыворотке крови онкологических больных торакального и абдоминального отделения в ранний послеоперационный период по сравнению с пациентами урологического отделения (рис. 1).

Рис. 1. Активность КПN у онкологических больных в ранний послеоперационный период (нмоль продукта, образовавшегося за 1 мин инкубации на 1 мг белка, Mm, n=1218; достоверность отличий: ** - р < 0,01, *** - р < 0,001 относительно урологической группы).

КПN локализован в плазме крови, обнаружен в стенках кровеносных сосудов. Легкие, желудочно-кишечный тракт имеют обширную капиллярную систему, после операции происходит повреждение этой системы, и вероятно, выход фермента в кровяное русло, что в итоге приводит к увеличению его активности [60].

При проведении корреляционного анализа (табл. 3), была выявлена отрицательная взаимосвязь между активностью КПN и ХЗФ у больных абдоминального отделения. В процессе свертывания крови калликреин расщепляет высокомолекулярный кининоген до активного кинина, который повышает чувствительность фактора XI к действию фактора XIIа [48]. Известно, что КПN участвует в деградации брадикинина [74], вероятно, увеличение активности этого фермента у данной группы больных может способствовать уменьшению свертывания крови по внутреннему пути. Кроме того, фактор Хагемана может включаться в фибринолиз, снижая время лизиса фибринового сгустка.

Обнаружена положительная корреляционная взаимосвязь между активностью КПN и уровнем фибриногена у пациентов урологического отделения. Фибриноген относится к острофазным белкам, концентрация которого резко возрастает в послеоперационный период, что усиливает тромбообразование на данном этапе [8]. Этот белок определяет вязкость плазмы крови, повышает агрегацию тромбоцитов и эритроцитов. Под действием тромбина из фибриногена образуются фибрин-мономеры, из которых впоследствии образуются фибриновый сгусток. Чрезмерное увеличение фибриногена может приводить к повышенному тромбообразованию. КПN, участвуя в инактивации брадикинина, вероятно, сдерживает активацию свертывания крови по внутреннему пути, тем самым способствуя поддержанию фибриногена на нормальном уровне у данной группы больных.

Таблица 3 Корреляционные взаимосвязи параметров гемостаза и карбоксипептидазы N

Достоверность корреляционных взаимосвязей: *- р < 0,05.

Обнаружена также положительная корреляция между активностью КПN и ХЗФ у больных урологического отделения. Известно, что в почечной ткани вырабатывается большое количество активаторов плазминогена. После оперативных вмешательств, особенно по поводу удаления опухолей, в кровь выделяется большое количество компонентов фибринолиза [44]. Вероятно, в данных условиях активность КПN может быть снижена, чтобы сдерживать антикоагуляционные процессы.

3.2 Исследование активности ангиотензинпревращающего фермента в сыворотке крови онкологических больных в раннем послеоперационном периоде

Результаты исследования показали достоверное увеличение активности АПФ в сыворотке крови онкологических больных урологического отделения по сравнению с пациентами абдоминального и торакального отделения (рис.2).

Рис. 2. Активность АПФ у онкологических больных в ранний послеоперационный период (нмоль продукта, образовавшегося за 1 мин инкубации на 1 мг белка, Mm, n=1218; достоверность отличий * - р < 0,05, ** - р < 0,01 относительно урологической группы).

АПФ - мембранно-связанный фермент, локализованный преимущественно в тканях почек. Этот фермент является компонентом ренин - ангиотензиновой системы [4, 48]. При повреждении почек, в том числе и хирургического вмешательства, происходит высвобождение АПФ в кровоток, что приводит к увеличению активности фермента.

При проведении корреляционного анализа (табл. 4) была обнаружена отрицательная корреляционная взаимосвязь между активностью АПФ и уровнем РФМК у пациентов абдоминального отделения. У больных, страдающих онкологическим заболеванием, антитромбогенная активность стенок сосудов в процессе роста опухоли снижается, а в раннем послеоперационном периоде обнаруживается повышенная склонность к внутрисосудистому свертыванию крови и тромбообразованию [8, 11, 19, 34, 35]. Известно так же, что в эндотелии содержится большое количество активатора плазминогена. Эндотелиальная дисфункция способствует уменьшению этого процесса, что вызывает сдвиг в системе антикоагуляция-коагуляция с преобладанием последней [73]. Участие АПФ в регуляции сосудистого тонуса реализуется через синтез ангиотензина-II, оказывающего мощное вазоконстрикторное действие. Другой механизм, более сопряженный с собственно эндотелиальной дисфункцией, связан со способностью АПФ ускорять деградацию брадикинина. Ангиотензин II является вазопрессором, стимулятором образования свободных радикалов, в частности, супероксидных анионов, которые инактивируют NO, промотируют образование пероксинитрита и снижают эффективность NO-опосредуемой сосудистой дилатации. Т.о., ангиотензин II, способствует развитию эндотелиальной дисфункции, в результате чего усиливается выработка вазоконстрикторов и прокоагулянтов [48]. В результате активируется система свертывания, компонентом которой является РФМК. В то время как брадикинин стимулирует синтез NO в эндотелии, участвуя в дилатации сосудов и усиливая скорость местного кровотока. Вероятно,

Таблица 4 Корреляционные взаимосвязи параметров гемостаза и ангиотензинпревращающего фермента

Достоверность корреляционных взаимосвязей: *- р < 0,05, ** - р < 0,01. Снижение активности АПФ является компенсаторным механизмом в условиях имеющейся гиперкоагуляции.

Выявлена положительная корреляционная взаимосвязь между активностью АПФ и уровнем ПТИ у больных торакального отделения.

Исследования показали, что у больных злокачественными новообразования легких имеет место активация система гемостаза, осуществляемая преимущественно по внешнему механизму процесса свертывания крови, которая оценивается протромбиновым тестом [44]. Внешний путь начинается с повреждения сосудов и тканей, в результате чего в кровь высвобождается тканевый тромбопластин, которым богата легочная ткань. Этот фактор активирует фактор VII в присутствии ионов Са²⁺. Комплекс, состоящий из фактора III, фактора VIIа, ионов Са²⁺ на поверхности тромбоцитов приводит к активации фактора Х [44]. Известно, что в кровь АПФ попадает из легких. При оперативных вмешательствах, вероятно, инкреция АПФ усиливается, что в свою очередь приводит к генерализованному образованию ангиотензина II, участвующего в агрегации тромбоцитов, на поверхности которых идет процесс внешнего пути свертывания крови. Кроме того, в результате хирургического вмешательства происходит не только высвобождение факторов свертывания крови, но и повреждение эндотелия сосудов, что в свою очередь приводит к изменению активности АПФ, так как он участвует в синтезе коллагена и может таким образом усиливать фиброз [22, 68], активируя тем самым свертывающую систему, компонентом которой является протромбин.

Выводы

1. Обнаружено увеличение активности карбоксипептидазы N у торакальной и абдоминальной групп по сравнению с урологической группой онкологических больных в раннем послеоперационном периоде.

2. Обнаружено увеличение активности ангиотензинпревращающего фермента у урологической группы пациентов по сравнению с абдоминальной и торакальной группами онкологических больных в раннем послеоперационном периоде.

3. Выявлены корреляционные взаимосвязи между активностью карбоксипептидазы N и ангиотензинпревращающего фермента и показателями гемостаза в раннем послеоперационном периоде.

4. Изучаемые ферменты принимают участие в процессах гемостаза у онкологических больных в раннем послеоперационном периоде.

Список литературы

1. Азарян А.В. Пептидгидролазы нервной системы и их биологические функции // Ереван: Анастан, 1989.

2. Акоев И. Г., Биофизика познает рак. -- М.: Наука, 1988. --160 с, 17 ил. -- (Серия «От молекулы до организма»).

3. Албертс Б., Брей Д., Льюис Дж., Рэфф М., Роберте К., Уотсон Дж. Молекулярная биология клетки: В 3-х т. 2-е изд., перераб. и доп. Т. 3. Пер. с англ. - М.: Мир, 1994. - 504 с.

4. Альтшулер Б.Ю., Ройтман А.П., Долгов В.В. Методические аспекты определения ангиотензинпревращающего фермента // Клиническая лабораторная диагностика. - 2000. - №12. - С. 10- 14.

5. Антонова Л.В., Годенова Н.В., Земнюкова Н.А., Дудкина Н.Е. Опыт использования ортофенантролинового теста в диагностике синдрома ДВС в крови у пациенток с онкологическими заболеваниями репродуктивной сферы. // Медицина в Кузбассе. - 2004. - №11. - С. 26- 27.

6. Бакшеев Н.С., Ильяшенко Н.А.,Миляновский А.И. в кн. Злокачественные новообразования женских половых органов. - М., 1987. -С. 85- 187.

7. Баркаган З.С. Введение в клиническую гемостазиологию. - М.: Ньюдиамед, 1998. - 290 с.

8. Баркаган З. С. Патогенез и терапия нарушений гемостаза у онкологических больных // Терапевтический архив. - 1997. - №7. - С. 65- 67.

9. Баркаган З. С. Антитромботическая профилактика и терапия в онкологии. // Materia Medica. - 1997. - № 1 (13). - С. 5-14.

10. Баркаган З. С., Момот А.П. Диагностика и контролируемая терапия нарушений гемостаза. - М.: Ньюдиамед, 2001. - 298 с.

11. Баркаган Л.З. Нарушение гемостаза у детей. - М., 1993.

12. Биохимия: Учеб. Для вузов / В.П. Комов., В.Н. Шведова. - М.: Дрофа, 2004. - 640с.

13. Веремеенко К.Н., Голобородько О.П. Претромботическое состояние. Тромбоз и его профилактика. // Вопр. мед. химии . - 1986. - № 32. - С. 17- 25.

14. Вернигора А.Н., Генгин М.Т. Протеолитические ферменты: субклеточная локализация, свойства и участие в обмене нейропептидов // Биохимия. - 1996,т.6, №5. - С. 771- 785.

15. Гешелин С.А., Вовчук С.В., Близнюк Б.Ф.Нарушения гемостаза и их профилактика в онкологии. // Вопр. Онкологии. - 1986. - № 30. - С. 9- 18.

16. Гланц С. Медико-биологическая статистика: Пер. с англ. - М, Практика, 1998. - 459с.

17. Городецкий В.М. Неоплазмы и свертывание крови // Гематол. и трансфузиол. - 1994. - № 3. - С.25- 28.

18. Гринштейн Дж., Виниц M., Химия аминокислот и пептидов, пер. с англ., т. 12, M., 1967. - 350 с.

19. Давыдов М. И. Активация гемокоагуляции у больных в критических состояниях // Современная онкология. - 2000. - Т. 2, № 4. - С. 54- 58.

20. Долгов В.В., Сварин П.В. Лабоараторная диагностика нарушений гемостаза. - М. Изд. Триада, 2005. - 270 с.

21. Дэвени Т., Гергей Я. Аминокислоты, пептиды и белки, пер. с англ.- M.: 1976. - 380 с.

22. Елисеева Ю.Е. Ангиотензинпревращающий фермент, его физиологическая роль. // Вопросы медицинской химии. - 2001. - № 1. - С. 53- 60.

23. Ешкайт X. Аминокислоты, пептиды, белки, пер. с нем. - M.: 1985. - 460 с.

24. Золотокрылина Е.С. // Теоретические и клинические проблемы современной реаниматологии: Материалы международного симпозиума, посвящ. 90-летию со дня рожд. акад. В. А.Неговского. - М., 1999. - С. 32- 33.

25. Иванов Е.П. Диагностика нарушений гемостаза. Минск, 1983. - 278 с.

26. Калишевская Т. М., Коломина С. М., Кудряшов Б.А. Свертывающая и противосвертывающая системы крови и их значение при развитии злокачественных новообразований. - М., 1992. - 315 с.

27. Киричук В.Ф., Алипов В. В. Возможности диагностики активации системы гемостаза у больных в критических состояниях по уровню фибринопептида А и D-димера. // Кремлевская медицина. Клинический вестник. - 2005. - № 2. - С. 73- 76.

28. Кудряшов Б.А. Биологические проблемы регуляции жидкого состояния крови и ее свертывания. - М., 1975.

29. Лакин Г.Ф. Биометрия. - М.: Высш. шк., 1990. - 352с

30. Ленинджер А., Основы биохимии, пер. с англ., т. 1 3, M., 1985.

31. Локшина Л.А. Значение внутрисосудистого свертывания крови в формировании полиорганной недостаточности у хирургических больных в критических состояниях. // Новости анестезиологии и реаниматологии. - 2006. - № 1. - С. 15- 21.

32. Маджуга А. В., Сомонова О.В., Елизарова А. Л., Свиридова С.П., Мазурина, О.Г., Кашия Ш.Р. Нарушения системы гемостаза у онкологических больных с массивной интраоперационной кровопотерей // Анестезиология и реаниматология. - 2001. - № 5. - С. 50- 52.

33. Макацария А. Д., Бицадзе В. О., Баймурадова С. М., Акиньшина С. М.. Тромбофилия и здоровье женщины. // Сибирский медицинский журнал. - 2006. - №5(21). - С. 6- 8.

34. Мальков О.А. Гемостатические нарушения при колоректальном раке (вопросы патогенеза, диагностики, профилактики и лечения): Автореф. дис. …. канд. мед. наук. - Омск, 2000.

35. Мальков О.А., Долгих В.Т., Лукач В.Н. Комплексная профилактика тромботических осложнений у больных колоректальным раком на этапах хирургического лечения // Анастезиология и реаниматология . - 2001. - № 5. - С. 52 - 54.

36. Марри Р., Греннер Д., Мейес П., Родуэлл В. Биохимия человека: В 2-х томах. Т.2. Пер. с англ.: - М.: Мир, 1993. - 384с.

37. Ноздрачев Ю. И. Турбидиметрический анализ полимеризации фибрина в плазме крови. // Вестн. интенсив. тер. - 1995. - № 1. - С. 17- 22.

38. Оболенская Н.Е. Некоторые особенности образования нейропептидов // Успехи совр. биол. - 1989. - Т. 108, № 3(5). - С. 337- 341.

39. Патологическая физиология и биохимия: Учебное пособие для вузов / - М.: Издательство «экзамен», 205. - 480с.

40. Рокитский П.Ф. Биологическая статистика. - Минск, Высшая. Школа, 1963.

41. Серебров А.И. в кн. Рак матки, Медгиз, 1957. - 210- 233 с.

42. Система гемостаза [Электронный ресурс]. - Режим доступа: http//www.cmd-online.ru/help/articles/detail.php?ID=111739

43. Синдром Диссименированного внутрисосудистого свертывания [Электронный ресурс]. - Режим доступа: http://studentport.su/referast/ptint.php.

44. Скипетров В.П. и др. коагуляционно - литическая система тканей и тромбогеморрагический синдром в хирургии. - Саранск: тип. «Крас. Окт.», 1999. - 232 с.

45. Фермилен Ж. и Ферстраге М. Гемостаз, пер. с франц., М., 1984.

46. Филлипович Ю.Б. Основы биохимии: Учеб. для хим. и биол. спец. пед. ун-тов и ин-тов. - 4-е изд., перераб. и доп. - М.: изд-во «Агар», 1999. - 512с.

47. Шиффман Ф.Д. Патофизиология крови: Пер. с англ. - М., СПб., 2000. - С. 191-253.

48. Яровая Г. А. Калликреин-кининовая система: новые факты и концепции (обзор) // Вопросы медицинской химии. - 2001, том 47. - № 1. - с. 20-42.

49. Bokish V.A., Muller-Eberhard H.J. Anaphylotoxin inactivator in human plasma: Its isolation and characterisation as a carboxypeptidase // J. Clin. Invest. - 1970. - № 49. - P. 2427- 2436.

50. Bui Т.Н., Wramsby H. Micromanipulative assisted fertilization till clinical research. Hum Reprod. - 1996. - №11(5). - Р. 921- 924.

51. Chretien M., Seidah N.G. Precursor polyproteins in endocrine and neuroendocrine systems // Int. J. Peptide Protein Res. - 1984. - № 23. - P. 335- 341.

52. Ciavarella D., Reed R. L. et. al. // Br. J. Haematol. - 1987. - Vol. 67. - № 3. - Р. 365- 368.

53. Erdos E., Schulz W., Gafford J., Defendini R. Neutral metal endopeptidase in human male genital tract:comparison to angiotensin-1 converting enzyme. // Lab. Invest. - 1985. - V.52. - Р .4374- 47.

54. Erdos E.G. Handbook of Experimental Pharmacology. // Biochem. Pharmacol. - 1979. - № 25. - Р. 438-487.

55. Erdos E.G., Sloane E.M., Wohler I.M. Carboxypeptidase in blood and other fluids // Biochem. Pharmacol. - 1964. - №13. - P. 893- 905.

56. Fricker L.D., Plummer T.H.Jr., Snyder S.H. Enkephalin convertase: potent, selective and irreversible inhibitors // Biochem. Biophys. Res. Commun. - 1983. - 11, N 3. - P. 994- 1000.

57. Hendriks D., Sande M., Scharpe S. Colorimetric assay for carboxypeptidase N in serum // Clin. Chim. Acta. - 1986 . - 157, N 1. - P. 103- 108.

58. Hendriks D., Soons J., Scharpe S., Wevers R., van Sande M., Holmquist B. Identification of the carboxypeptidase responsible for the post-synthetic modification of creatine kinase in human serum // Clin. Chim. Acta. - 1988. - 172, N 2- 3. - P. 253- 260.

59. Hurst P.L., Lovell-Smith C.J. Optimized assay for serum angiotensin-converting enzyme activity // Clin. Chem.- 1981. - 27. - P. 2048- 2052.

60. Ito Y., Misutani S., Kurauchi O., Kasugai M., Narita O., Tomoda Y. Purification and properties of microsomal carboxypeptidase N (kininase I) in human placenta // Enzyme. - 1989. - №42. - P. 8- 14.

61. Khanna A.S., Waisman D.M. Metabolism and intracellular processing of protein hormones // Hormon. Act. - 1988. - № 1. - P. 117- 132.

62. Lee P.V., Takahashi T.N. An improved colorimetric determination of amino acid with the use of ninhydrin // Analyt. Biochem. - 1966. - 14, № 1. - P. 71- 77.

63. Levin Y., Skidgel R., Erdos E. Isolation and characterization of the subunits of human plasma carboxypeptidase N (kininase I) // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.- 1982. - 79. - P. 4618- 4622.

64. Marino P.L. Интенсивная терапия: Пер. с англ. - М., 1998.

65. Masuda S., Hattori A., Matsbmoto H., Miyazawa S., Natori Y., Mizutani S., Tsujimoto M. In volvemtnt of the V receptor in vasopressinstimulated translocation of placental leucine aminopeptidase /oxytocinase in renal cells // Eur J.Biochem. - 2003. - Vol. 270, № 9. - Р. 1988- 1994.

66. Plummer T.H., Ryan T.J. A potent mercapto bi-product analogue for human carboxypeptidase N // Biochem. Biophys. Res. Commun. - 1981. - № 98. - P. 448- 454.

67. Ramchandran R., Kasturi S., Douglas J.G., Sen I. Am. J. Physiol. - Heart and Circulatory Physiology. - 1996. - №40. - Р. 744- 751.

68. Skidgel R.A., Erdos E.G. Cellular carboxypeptidases // Immunol. Rev. - 1998. - V. 161, № 2. - P. 129-141

69. Skidgel R.A., Johnson A.R., Erdos E.G. Hydrolisys of opioid hexapeptides by carboxypeptidase N. Presence of carboxypeptidase in cell membranes // Biochem. Pharmacol. - 1984. - 33, № 21. - P. 3471- 3478.

70. Skidgel R.A., Tan F. Structural features of two kininase I-type enzymes revealed by molecular cloning // Agents Actions Suppl. - 1992. - 38, N 1. - P. 359-367.

71. Steiner D.F. The biosynthesis of biologically active peptides: a perspective // Peptide Biosynthesis and Processing (Fricker L.D., ed.).- CRC Press, Boca Raton, Florida, 1991. - P. 1-16.

72. Sugimura K., Tian X-L. Hoffmann S., Ganten D., Bader M. Biochem. Biophys. Res. Commun. - 1998. - 247. - Р. 466-472.

73. The Kallikrein - Kinin System in Health and Disease. Munich: Limbach - Verlag Braunschweig. - 1989. - p. 374.

74. Uehara M., Kishikawa H., Isomi S., Kisanuki K., Ohkubo Y., Miyamura N., Miyata T., Yano T. and Shiciri M. Diabetologia. - 1994. - 37. - Р. 300-307.

75. Van Sande M., Hendriks D., Soons J., Scharpe S., Wevers R., Holmquist B. Post synthetic modificati-on of CK-MM by kininase I // Adv. Exp. Med. Biol. - 1989. - 247A. - P. 319- 324.

76. Wevers R.A., Boegheim J.P., Hommes O.R., Van Landeghem A.A., Mul-Steinbusch M.W., Van der Stappen J.W., Soon J.B. A study on post-synthetic modification in alpha-alpha enolase brought about by a human serum prtotein // Clin. Chem. Acta. - 1984. - 139. - P. 127-135.

Размещено на Allbest.ru