Диагностика хламидиоза свиней

Определение, этиология и эпизоотологические данные хламидиоза свиней - контагиозной инфекционной болезни, характеризующейся ринитом, бронхопневмонией, гастроэнтеритом, полиартритами, кератоконьюнктивитом. Клинические признаки. Лабораторная диагностика.

Рубрика Сельское, лесное хозяйство и землепользование
Вид курсовая работа
Язык русский
Дата добавления 16.01.2012
Размер файла 62,1 K

Отправить свою хорошую работу в базу знаний просто. Используйте форму, расположенную ниже

Студенты, аспиранты, молодые ученые, использующие базу знаний в своей учебе и работе, будут вам очень благодарны.

Пробы исследуемых жидкостей, в объеме 10 см3 центрифугируют при 3000 об/мин в течение 10-15 мин. При необходимости объем проб доводят до требуемого путем добавления физиологического раствора. Супернатант осторожно сливают, оставив над осадком примерно 0,2 см3 жидкости. Если осадок практически не виден, то в эту же пробирку вносят еще 10 см3 материала и повторяют центрифугирование. Осадок суспендируют в оставшейся надосадочной жидкости (или физиологическом растворе) и 100 мкл его используют для выделения ДНК.

Пробы паренхиматозных органов, плодовых оболочек, размером 3х3х3 мм3 помещают в пробирки типа "эппендорф", тщательно растирают отдельными стеклянными палочками, добавляют по 1 см3 физиологического -раствора и тщательно перемешивают. Смесь отстаивают при температуре 20-25°С в течение 20 мин, после чего 100 мкл верхней фазы используют для выделения ДНК.

Сперму в объеме 0,5 см3 разводят равным объемом физиологического раствора, осаждают на микроцентрифуге при 10000-12000 об/мин в течение 8-10 мин, осадок ресуспендированный в 100 мкл физиологического раствора используют для выделения ДНК.

Соскоб слизистых оболочек разводят в 0,5-1,0 см3 физиологического раствора, осаждают на микроцентрифуге при 11000-12000 об/мин в течение 8-10 мин. Надосадочную жидкость отбрасывают, а осадок ресуспендируют в 100 мкл физиологического раствора и используют для выделения ДНК. Если слизь очень густая (не всасывается в отверстие наконечника пипетки), то пробу обрабатывают 1-2 см3 раствора 0,1М меркаптоэтанола, добавив его в "эппендорф". Размешивают на вортексе, выдерживают при комнатной температуре 3-5 мин и центрифугируют в вышеуказанном режиме. Осадок в 100 мкл физиологического раствора используют для выделения.

Проведение ПЦР-анализа. ПЦР-анализ проводят в три этапа в трех отдельных помещениях (зонах), для работы, в которых дополнительно требуются следующие материалы и оборудование:

Для выделения ДНК из испытуемого материала - ЗОНА 1:

- настольный бокс с бактерицидной лампой;

- термостат для, пробирок типа "эппендорф" на 25-100 °С;

- микроцентрифуга до 12000-16000 об/мин;

- центрифуга/вортекс "Микроспин";

- отдельный набор автоматических пипеток переменого объема от 0,001 см3 до 1 см3;

- одноразовые наконечники с аэрозольным барьером;

- одноразовые полипропиленовые пробирки на 1,5 см3 типа "эппендорф";

- штативы для пробирок, наконечников;

- отдельный халат и одноразовые резиновые перчатки;

- холодильник на 2-8 °С с морозильной камерой.

Для проведения амплификации (ПЦР) - ЗОНА 2;

- амплификатор;

- ПЦР-бокс или отдельный стол с УФ-лампой;

- отдельный халат и одноразовые перчатки;

- отдельный набор автоматических пипеток переменного объема от 0,001 см3 до 1см3;

- одноразовые наконечники в штативах;

- одноразовые микропробирки для ПЦР на 0,5 см3;

- штативы для микропробирок на 0,5 см3;,

- холодильник на 2- 8 °С, морозильник на минус 20 °С для выделенных ДНК;

- термостат для микропробирок с воском на 95 °С.

Для электрофоретического анализа продуктов ПЦР - ЗОНА 3:

- камера для горизонтального электрофореза;

- источник постоянного тока на 150-200 В;

- ультрафиолетовый трансиллюминатор для просмотра гелей;

- фотоаппарат для фотографирования гелей и, фотопленка;

- бачок для проявления пленки, проявитель, фиксаж;

- аквадистиллятор;

- отдельный халат и одноразовые резиновые перчатки;

- отдельная автоматическая пипетка 10-40 мкл и наконечники в штативе;

- мерный цилиндр на 1л;

- колба коническая из термостойкого стекла для плавления агарозы;

- электроплитка или микроволновая печь для плавления агарозы.

Порядок работы.

ЭТАП 1. Выделение ДНК из исследуемого материала.

Выделение ДНК из 100 мкл подготовленного материала проводят с помощью набора №1. Предварительно готовят отмывочный раствор №2, смешав в отдельном флаконе 20 см3 концентрата из набора, 80 см3 дистиллированной воды и 100 см3 96% этилового спирта. Смесь хорошо перемешивают и хранят при температуре 20-22 °С под плотна закрытой крышкой.

Проверяют состояние сорбента - при отстаивании он должен занимать приблизительно половину объема суспензии. После этого приступают к выделению ДНК.

В ряд полипропиленовых пробирок объемом 1,5 см3 вносят по 100 мкл предварительно подготовленных исследуемых проб, а также по 100 мкл контрольных проб 1-го этапа анализа ("контролей выделения"): отрицательные пробы - элюи-рующий буфер и физиологический раствор (последний вносят в случае подготовки пробы с его использованием), положительная проба - ДНК Chlamydia (из набора №4), разведенная 1:10 элюирующим буфером. Добавляют по 300 мкл лизирующего раствора (в каждую пробу отдельным наконечником с аэрозольным барьером) и тщательно пипетируют 5-10 раз до полного лизиса пробы, стараясь при этом не вспенивать раствор. Прогревают пробирку 5 мин при 65 °С, тщательно перемешивают на вортексе до полного растворения материала. Добавляют 20 мкл ресуспендированного на вортексе сорбента (в каждую пробирку отдельным наконечником), хорошо перемешивают. содержимое пробирки на вортексе и оставляют в штативе на 2 мин для осаждения сорбента, еще раз перемешивают и отстаивают 5-7 мин. Осаждают сорбент на "Микроспине" в течение 30 сек и отбирают супернатант из каждой пробирки отдельным наконечником (удобно использовать вакуумный отсос с колбой-ловушкой для отбираемой жидкости). Добавляют по 200 мкл отмывочного раствора №1, перемешивают на вортексе до полного ресуспендирования (если сорбент плохо разбивается, тогда его разбивают при помощи наконечника пипетки), осаждают на "Микроспине" в течение 30 с и отбирают супернатант. Добавляют по 800 мкл отмывочного раствора №2, перемешивают на вортексе до полного ресуепендирования сорбента, осаждают на микроцентрифуге при 10000 об/мин в течение 30 с, отбирают супернатант. Повторяют процедуру отмывки раствором №2, тщательно отбирают супернатант и высушивают осадок сорбента при открытых крышках пробирок в термостате при 65 °С, в течение 5-7 мин. Добавляют 50 мкл элюирующего буфера, ресуспендируют, помещают в термостат при 65 °С на 5 мин, встряхивая на вортексе через каждую минуту. Осаждают на микроцентрифуге при 10000 об/мин в течение минуты. Проба готова к постановке ПЦР, супернатант содержит очищенную ДНК.

Подготовить положительный контрольный образец для ПЦР, для чего развести К+ ДНК в 100 раз в буфере для элюции ДНК и вместе с ДНК-пробами перенести в комнату для постановки ПЦР.

ЭТАП 2. Постановка ПЦР (амплификация ДНК).

Пробирку с воском ставят в термостат при 95 °С до полного расплавления. Готовят "нижнюю" реакционную смесь, используя стерильные наконечники (полистирол выдерживает автоклавирование при 120 °С):

- для амплификации ДНК Chlamydia: к 0,25 см3 праймеров "Chia" добавляют 0,25 см3 нуклеотидов, смешивают на вортексе;

Раскапывают в микропробирки для ПЦР по 5 мкл "нижней" смеси, наслаивают сверху по 10 мкл расплавленного воска так, чтобы он полностью накрыл жидкость, закрывают крышки, на верхней части которых наносят пометки "Chia", Если воск покрыл жидкость неровно или образовались пузыри, прогревают -пробирки в амплификаторе 5 мин при 95 °С и охлаждают. В таком виде, пробирки хранятся в морозильнике -несколько месяцев, можно приготовить сразу 50-100 штук.

Готовят "верхнюю" смесь: к 0,5 см3 5-кратного реакционного буфера добавляют 0,45 см3 деионизованной воды и 0,05 см3 Taq-полимеразы, хорошо перемешивают на вортексе. Смесь хранится при 2-8 °С в течение месяца (не замораживать!). Выставляют ряд пробирок с "нижними" смесями ("Chia") в штатив по числу испытуемых проб, включая контрольные из 1-го этапа анализа ("контроли выделения"), и добавляют пробирки для "контролей ПЦР" (деионизованная вода и ДНК Chlamydia, разведенные деионизованной водой 1:10), нумеруют их. Раскапывают на поверхность застывшего воска по 10 мкл "верхней" смеси, при этом она не должна проваливаться под воск и смешиваться с "нижней" смесью. Сверху раскапывают по 1 капле масла. Под масло вносят по 10 мкл проб -испытуемых и контрольных и 10 мкл К+ ДНК, подготовленной для постановки ПЦР, т.е. разведенной 1:100 буфером для элюции. Для отрицательного контроля амплификации вместо ДНК-пробы добавляют 10 мкл деионизованной воды (из набора №2). .Набирают на амплификаторе нужную программу:

Амплификаторы с регулированием температуры по матрице (скорость нагрева-охлаждения - не менее 1° С/сек:)

"MiniCycler", "РТС-100" (MJ Re-search)

Амплификаторы с активным регулированием (по раствору в пробирке):

"GeneAmp PSR System 2400" (Рег-kin Elmer); "Omn-E” (Hibaid); "Терцик" (ДНК-технология)

95С- пауза

95 С - 2мин 1 цикл

95 С-45с

62С-45с} 40циклов

72 С - 45 с

10 С -12-14 час (хранение)

95 С - пауза

95С - 2мин 1 цикл

95 С-10 с

62 С-10 с} 40циклов

72С-10 с

10 С -12-14 час (хранение)

Через 1-2 мин после запуска программы, (когда температура в ячейке амплификатора достигнет 95 °С), ставят программу на паузу, помещают пробирки в ячейки, закрывают крышку прибора, убирают паузу и ждут окончания реакции (примерно 2,5 часа на амплификаторе с регулированием температур по матрице и 1 час 40 мин на амплификаторе с активным регулированием). После окончания реакции (в тот же день или после хранения утром следующего дня) собирают пробирки в отдельный пакет и отправляют в комнату для анализа продуктов ПЦР, который проводится разделением фрагментов ДНК в агарозном геле.

Длина амплифицированного специфического фрагмента ДНК:

Chlamydia - ЗОО п.н.

ЭТАП 3. Электрофоретический анализ продуктов ПЦР.

Работа с амплифицированными ДНК должна проводиться в отдельной комнате лаборантом или сотрудником лаборатории, не производящим манипуляций в пре-ПЦР помещении ("Правила проведения работ в диагностических лабораториях, использующий метод полимеразнрй цепной реакции).

В мерный цилиндр наливают 25 см3 концентрированного буфера, доводят дистиллированной водой до 500 см3, закрывают цилиндр парафинированной пленкой ("PARAFILM") и перемешивают. Агарозу из одной пробирки набора пересыпают в стеклянную колбу из термостойкого стекла объемом 250 см3, наливают 100 см3 готового буфера и плавят на кипящей водяной бане до полного растворения агарозы, после этого кипятят агарозу еще 20 мин и немного остужают, вращая колбу. Заливают агарозный гель в форму (толщина 5-6 мм), помещают гребенки на расстоянии не менее 3 см друг от друга.

После полного застывания геля (30 мин при комнатной температуре) осторожно вынимают гребенки, не повредив лунки. Помещают полосу готового геля в электрофорезную камеру так, чтобы лунки были обращены в сторону отрицательного электрода (ДНК из лунок будет двигаться к положительному электроду). Наливают приготовленного буфера столько, чтобы он покрыл гель на 4-5 мм. Выставляют пробирки с продуктами амплификации последовательно в штатив. Из-под слоя масла отбирают 15 мкл амплификата и вносят на дно лунки Можно пользоваться одним наконечником, промывая его (пипетируя 1 -2 раза) буфером из камеры после внесения каждой пробы.

Подключают камеру к источнику тока, соблюдая полярность. Если нет нарушения контактов, то при прохождении тока от электродов должны подниматься пузырьки. Электрофорез проводят в градиенте напряжения 10 В/см до того момента, как краситель (ксиленцианол) пройдет примерно половину длины геля. Выключают источник тока, переносят гель на трансиллюминатор, расположив полосы горизонтально лунками вверх и совместив уровень лунок (одна под другой) для удобства учета. Просматривают расположение полос ДНК под ультрафиолетовым излучением. (Глаза и лицо должны быть защищены специальной маской или стеклянной пластиной).

Электрофореграмму фотографируют с оранжевым светофильтром в проходящем ультрафиолете на чувствительную пленку типа "Микрат 300" или поляроидную пленку. Документирование результатов можно проводить с помощью других систем: Insta Doc I, Insta Doc II (фотографирующие), Gel Doc 1000 или Шатер ДВ (компьютерные).

Учет и интерпретация результатов. В дорожке соответствующей положительному контрольному образцу должна быть яркая специфическая светящаяся оранжевая полоса на уровне 300 п.н. Положительными считаются образцы, которые содержат специфическую светящеюся полосу большей или меньшей интенсивности на уровне 300 п.н.

В дорожке, соответствующей отрицательному контрольному образцу не должно быть каких-либо полос. Отрицательными считаются образцы, которые не содержат специфической полосы 300 п.н.

Кроме полосы 300 п.н. в дорожках могут наблюдаться нечеткие размытые пятна праймер-димеров, которые располагаются ниже уровня 100 н.п. (в нижней части дорожки).

При работе с материалом, содержащим много клеток, в ПЦР участвует большое количество неспецифической геномной ДНК. При этом в дорожках геля появляются характерные шмеры, равномерно располагающиеся от лунки до самого низа дорожки или концентрирующиеся около лунки. На фоне такого шмера в положительном образце видна специфическая полоса, а в отрицательном образце полоса отсутствует.

Результаты анализа не учитываются, если:

- в дорожке какой-либо пробы отсутствуют обе полосы. Необходимо повторить исследование этой пробы с самого начала. Возможная причина - ошибка на первом этапе работы, приведшая к недостаточной сорбции ДНК или плохой очистке от ингибиторов реакции.

- в дорожке любого отрицательного контроля выявляется специфическая полоса. Возможно, произошла контаминация реактивов и проб положительной ДНК или продуктами амплификации положительной ДНК в процессе работы. Для проверки реактивов необходимо поставить не менее трех отрицательных контролей на этапе выделения ДНК и столько же на этапе постановки ПЦР для выявления источника контаминации. Если результат повторяется, необходимо сменить реактивы.

- в дорожках появляются неспецифические полосы на разных уровнях. Возможные причины: неправильное проведение "горячего старта" или неверный температурный режим в ячейках амплификатора.

Идентификация хламидий

Идентифицируют хламидии и их антигены методами световой и люминисцентной микроскопии (РИФ), в РДСК, РНСК, РНГА, ИФА или с помощью ПЦР.

Диагноз на хламидиоз считают установленным в одном из следующих случаев:

1. При выделении возбудителя из исследуемого материала и его идентификации;

2. При получении нарастания титра антител в парных пробах сыворотки крови больных или переболевших животных в РДСК, РНСК, РНГА, ИФА в два и более раз;

3. При выявлении ДНК хламидий в ПЦР.

При диагностике хламидиоза предусмотрены следующие сроки исследований:

- выявление специфических антител - от 1 до 5 дней;

- световая микроскопия - от 30 минут до 2 часов;

- люминесцентная микроскопия - до 3 часов;

- выделение и идентификация хламидий - от 7 до 40 дней;

- выявление ДНК хламидий - от 4 часов до 2 суток.

7. Дифференциальная диагностика

Хламидиоз свиней следует дифференцировать от бруцеллеза, лептоспироза, болезни Ауески, гемофилезного полисерозита и плевропневмонии, сальмонеллеза, листериоза, болезни Тешена, энтеровирусного гастроэнтерита, болезни СМЭДИ, классической чумы, парвовирусной инфекции, микотоксикозов, стрептококкоза, пастереллеза, стафилакоккоза.

Лептоспироз довольно часто протекает сверхостро и остро, что не характерно для хламидиоза. У поросят наблюдается рецидивирующая лихорадка, прогрессирующее исхудание, анемия, желтушность. Летальность достигает 50-70%. Для лептоспирозных абортов, помимо мумификации плодов характерны также наличие большого количества слабых нежизнеспособных поросят в опоросах, высокая смертность новорожденных, частые послеродовые осложнения у свиноматок. При вскрытии под кожей в большинстве случаев обнаруживают желтушное окрашивание тканей и множественные кровоизлияния. Обширные геморрагии также видны на серозных и слизистых оболочках. Особенно характерны изменения в почках: они увеличены, бугрстые, на разрезе и под капсулой множественные кровоизлияноия. В гистосрезах из почек и печени при специальных методах окраски обнаруживают лептоспир. Обработка свиноматок ударными дозами стрептомицина при лептоспирозе дает положительный эффект, в то время как при хламидиозе она является совершенно безрезультатной, так как эти микрорганизмы к стрептомицину не чувствительны. Следует иметь в виду, что лептоспироз нередко протекает одновременно с хламидиозом как смешанная инфекция, поэтому при появлении у свиноматок абортов и мертворождений параллельно проводят лабораторные исследования, направленные на исключение обоих заболеваний.

Болезнь Ауески можно легко отличить от хламидиоза путем постановки биопробы: специально обработанный сузпензией из внутренних органов и мозга подкожно заражают кроликов, собак, кошек. При наличии в материале вируса развивается типичная картина болезни Ауески, для которой особенно характерным является сильный зуд, возникающий в месте инъекции материала. Животные погибают через 4-8 часов после появления клинических признаков. Биопроба, поставленная таким способом, при хламидиозе отрицательна. При вскрытии обращают внимание на выраженный отёк легких, цвет которых при болезни Ауески обычно темно-красный. В верхушечных и диафрагмальных долях обнаруживают очаги серозно-катарального воспаления, которые уплотнены, пропитаны серозным экссудатом, окрашены в серый или серовато-коричневый цвет. Имеет место интралобулярной тип интерстициальной пневмонии с вовлечением в процесс перибронхиальной и околососудистой соединительной ткани. Менее типичны милиарные и субмилиарные некробиотические фокусы, разбросанные по всей паренхиме легких.

Гемофилезный полисерозит и гемофилезную плевропневмонию свиней отличить от хламидиоза трудно. Во всех случаях плевропневмонии свиней при патологоанатомическом исследовании легких обнаруживается фиброзный плеврит. В диафрагмальных и верхушечных долях находятся большие некротические зоны, окруженные разрастающейся соединительной тканью. При гистологическом исследовании в легких выявляется хроническая плевропневмония с разграниченными и изолированными некротическими зонами. Иногда наблюдается тромбоз. У некоторых поросят возможно развитие фибринозного перикардита. Обязательно проводить бактериологическое исследование с использованием баккормилки.

Бруцеллез. При этом заболевании аборты у свиней наблюдаются, как в первой, так и во второй половине супоросности. Для абортов характерно гиперимия кожных покровов с точечными кровоизлияниями и значительное увеличение селезенки у абортированных плодов. При бруцеллезе наряду с артритами и бурситами под кожей и в мышщах туловища формируются абсцессы, чего никогда не бывает при хламидиозе. Бруцеллезные орхиты и эпидидимиты склонны к гнойному развитию, что также не характерно для хламидиоза. Надежный дифференциальный диагноз обоих заболеваний возможен только на основе бактериологических, серологических исследований и постановки биопробы.

Сальмонеллез отличается от хламидиоза тем, что у свиноматок аборты не бывают массовыми и чаще носят спорадический характер. Основной клинический признак у подсвинков при сальмонеллезе - постоянный понос с выделением водянистых с гнилостным запахом испражнений. При хламидиозе гастроэнтерит скоро проходящий с доброкачественным течением, бывает в основном у поросят-сосунов, тогда как сальмонеллез поражает преимущественно подсвинков в возрасте 2-4 месяца. Окончательное подтверждение или исключение сальмонеллеза возможно только на основании бактериологических исследований.

Листериоз. При листериозе отмечаются признаки поражения центральной нервной системы в виде парезов, параличей манежных движений, судорог, возбуждения, сменяющегося угнетением. При хламидиозе подобные признаки возможны, но они наблюдаются только в отдельных случаях. При вскрытии трупов животных, погибших от листериоза, обычно не отмечают серозно-фибринозных воспалительных процессов в брюшной и грудной полостях, характерных для хламидиоза. В головном мозгу при данном заболевании наблюдается гнойный энцефаломиелит. Точный диагноз на листериоз ставят на основании бактериологических, серологических исследований и биопробы, в процессе проведения которой различными способами заражают белых мышей, морских свинок, кроликов. После гибели лабораторных животных обнаруживают множественные некротические очажки во внутренних органах, из которых можно выделить чистую культуру возбудителя.

Болезнь Тешена характеризуется признаками поражения центральной нервной системы: повышенной чувствительностью кожи и слизистых оболочек, судорожными сокращениями мышц, возбуждением, шаткой походкой, парезами конечностей, переходящими в параличи. Признаки поражения нервной системы при хламидиозе не имеют такой выраженности и остроты, расстройства относительно быстро нормализуются, свиньи не погибают. Кроме того, болезнь Тешена поражает в основном поросят 2-10 месячного возраста, поросята-сосуны от 3-недельного до 2-месячного возраста почти не болеют, тогда как при хламидиозе в первую очередь поражаются новорожденные животные.

Вирусный трансмиссивный гастроэнтерит характеризуется диареей, жаждой, рвотой, иногда признаками поражения центральной нервной системы. Погибает около 10% заболевших поросят, остальные медленно выздоравливают. В большинстве случаев данное заболевание не регистрируется у поросят до трехнедельного возраста, тогда как хламидиозный энтерит появляется у новорожденных с первых дней жизни. При подозрении на энтеровирусную инфекцию проводят вирусологические исследования, предусматривающие выделение энтеровирусов из патологического материала с помощью первичных культур клеток почек свиней, тестикул поросят, перививаемой клеточной линии СПЭВ.

Эпидемическая диарея поросят клинически похожа на вирусный трансмиссивный гастроэнтерит, за исключением медленного распространения и невысокой смертности новорожденных поросят. Дифференцируют от хламидиоза на основании проведенных лабораторных исследований.

Синдром «голубой глаз» свиней проявляется кератоконъюнктивитами с голубой окраской роговицы, нарушением нервной системы, снижением репродуктивности, высокой гибелью поросят. Дифференцируют от хламидиоза на основании гистологических, вирусологических исследований.

Грипп свиней характеризуется поражением органов дыхания. Ведущий патоморфологический синдром инфекции является развитие множественных очагов некроза бронхиального эпителия, что не наблюдается при хламидиозе.

Классическая чума свиней при острой форме которой наблюдается рвота, запоры, сменяющими диареей, судорги и парезы конечностей, кровоизлияния в коже, гнойный конъюнктивит и высокая летальность (до 80-100%). При атипичной форме чумы, вызванной слабо вирулентными штаммами вируса, в первую очередь поражаются супоросные свиноматки и новорожденные поросята. Происходят аборты, плоды мумифицированы, снижается воспроизводство, уменьшается количество поросят в пометах. В таких случаях чуму исключают только лабораторными методами и постановкой специальной биопробы на поросятах. Принимают во внимание характерную для чумы лейкопению.

Парвовирусная инфекция характеризуется ранней эмбриональной смертностью и рассасыванием эмбрионов, наступающих в том случае, если свиноматки заражаются до 30-го дня супоросности. При этомнаблюдают необычно большое количество свинок-первоопоросок и племенных, неоднократно приходящих в охоту через 21-23 дня после осеменения. Если заражение произошло после 30-го дня супоросности, плоды могут родиться мертвыми или мумифицированными. При хламидиозе абортированные или мертворожденные плоды обычно не имеют признаков мумификации, отличаются определенной степенью отечностью. В связи с возможной длительной персистенцией парвовируса в организме свиней без индукции видимой патологии клинические признаки при парвовирусной инфекции не выражены, чем она отличается от других болезней. Окончательно парвовирусная инфекция может быть подтвержден специальными методами.

Респираторно-репродуктивный синдром свиней заболевают главным образом свиноматки у которых наблюдаются аборты на 100-120 день, наличие мертворожденных поросят, преждевременными опоросами или задержкой опороса, респираторными нарушениями у поросят и хряков, появлением окрашивания кожи ушей и других органов. Дифференцируют от хламидиоза на основании гистологических, вирусологических исследований.

Болезнь СМЭДИ характеризуется рождением мертвых или нежизнеспособных поросят, мумификацией плодов, гибелью, рассасыванием эмбрионов и бесплодием самок. При хламидиозе обычно не наблюдаются раннее поражение эмбрионов, их гибель и рассасывание, абортированные плоды, как правило, не мумифицированы, а рыхлые за счет отека кожи и подкожной клетчатки.

При проведении вирусологических исследований необходимо обращать внимание на то, что кроме вирусов типа СМЭДИ изредка могут встречаться и другие слабо изученные вирусы. В частности по сообщению P. Shanks (1970) при вирусологическом обследовании, проводимом в течении нескольких лет, от большинства родившихся поросят, из абортированных и мумифицированных плодов свиней был выделен вирус FS 59e/63. У 70% свиней выявили антитела к данному вирусу, который по мнению авторов, может быть специфическим возбудителем венерических заболеваний у свиней и приводить к абортам.

Микотоксикозы свиней отмечаются у свиноматок следующими клиническими признаками: угнетенное состояние, отсутствие аппетита, жажда, рвота, болезненность в области живота, усиление перистальтика, понос, затрудненное дыхание, появление некрозов на коже и в ротовой полости, снижение молокоотдачи или ее прекращение. Под действием токсина свиноматки могут рождать уродливых поросят, у некоторых свиноматок возможны аборты. У погибших животных отмечаются язвенно-некротический стоматит, атрофию яичников, печень окрашивается в цвет желчи, геморрагический энтерит иногда с отторжением слизистой. Макроскопически в паренхиматозных органах плодов видны характерные полосчатые или неправильной формы крупные и мелкие кровоизлияния. При гистологическом исследовании находят характерные дистрофические изменения в паренхиматозных органах и особенно эозинофилию, активизацию эндотелия капилляров, а также множественные кровоизлияния. При хламидиозе данные признаки не характерны. Микотоксикозы исключают путем тщательного анализа рационов с обязательным проведением микологических исследований кормов.

Стрептококкоз. У поросят появляется лихорадка, паралич, отеки, болезненность в суставах. При вскрытии обнаруживают фибринозный периартрит, множество абсцессов в суставах, под кожей , во внутренних органах с густым слизисто-гнойным экссудатом. Количество синовиальной жидкости увеличено. Диагноз подтверждается выделением стрептококка из абсцессов. При вскрытии свиноматок при стрептококкозе диагностируется метрит со скоплением жидкости в яйцеводах, а также негнойный полиартрит. Единственное заметное изменение у абортированных плодов - увеличение почек, при микроскопическом которых были видны геморрагии. Хламидиозный аборт отличается от стрептококкового отсутствием непосредственного поражения эндометриума по гнойному типу, макроскопически нормальной величиной почек у абортированных плодов, отсутствием у свиноматок полиартритов.

Рожа свиней появляется у подсвинков примерно с трехмесячного возраста, поражая при этом все конечности. При хламидиозе чаще поражаются крупные суставы, в основном у поросят-сосунов.

Стафилококкоз протекает в виде экссудативного эпидермита, характеризуется появлением желто-коричневых корочек на эритрематозном фоне вентральной поверхности тела и голове. При злокачественном течении в начале болезни отмечают лихорадку, диффузный дерматит, затем появляется экссудация на всей поверхности тела. Спустя 4-8 дней животные могут погибнуть. При доброкачественном течении появляется сыпь, затем обрауются оспинки диаметром 1-3 мм. красного цвета, заполненные серозным или серозно-гнойным секретом. Хламидиозный дерматит отличается мягким доброкачественным течением, обычно при этом отсутствует экссудация, в зоне очагов не наблюдается покраснение кожи.

Пастереллез характеризуется при вскрытии многочисленные кровоизлияния на слизистых оболочках, в коже. Легкие в состоянии отека. В грудной и брюшной полости - геморрагический экссудат с примесью фибрина, лимфатические узлы увеличены за счет отека. Дифференцируют от хламидиоза на основании бактериологических, серологических исследований и проведение биопробы.

Авитаминозы, особенно связанные с недостатком в кормах витамина А, сопровождается расстройствами деятельности нервной системы, отсутствием аппетита, гастроэнтеритами, нарастающей потерей зрения вплоть до слепоты. У свиноматок возможно аборты, рождение мертвых и нежизнеспособных поросят, зачастую с аномалиями развития глаз. При хламидиозе обычно отсутствуют изменения со стороны органов зрения, у свиноматок не наблюдаются расстройства нервной системы. Авитаминозы подтверждают после тщательного анализа используемых кормов, проведения бактериологических и вирусологических исследований для исключения хламидиоза.

Эмбриональную смертность могут вызвать также факторы, связанные с нарушением кормления и содержания. При этом следует обращать внимание на две основные группы, неблагоприятно воздействующие на животный организм: стресс, возникающий в результате страха, комплектования больших групп животных на недостаточной площади, нарушение параметров микроклимата одиночного содержания; кормление - недостаток кормов или низкое содержание в них белка и витаминов; наличие в них вредных веществ, таких как фитоэстрогены в легуминозе (белок гороха), лектины, гемагглютинины, сапонины, кислые фосфотазы, фенол, сульфаты, полихлорированный бифенил.

Приложение
хламидиоз свинья инфекционная болезнь
Окраска по методу Романовского -- Гимза.
Маточный раствор краски Романовского -- Гимза разбавляют фосфатно-буферным раствором (рН 7,2), для получения которого готовят: раствор А -- 9,5 г двузамещенного Na2 HРО4 растворяют в 1 л дистиллированной воды; раствор Б -- 9,2 г однозамещенного NaН2РО4 растворяют в 1 л дистиллированной воды.
Для приготовления буферного раствора с рН 7,2 смешивают 72 мл раствора А с 28 мл раствора Б и добавляют 900 мл дистиллированной воды. На каждый миллилитр буферного раствора вносят 2--4 капли маточного раствора краски. Фиксированные мазки окрашивают в специальных кюветах вертикально при комнатной температуре в течение 20--24 ч, промывают дистиллированной водой и дифференцируют около 10 с подкисленным эталоном (3--5 капель ледяной уксусной кислоты на 15--20 мл спирта), вновь промывают, высушивают и исследуют в световом микроскопе.
Элементарные тельца хламидий красно-фиолетовые, промежуточной формы - сине-фиолетового цвета.
Для выявления хламидий, расположенных внутри клеток, используют модифицированный метод Романовского -- Гимза. Фиксированные мазки покрывают маточным раствором красителя на 10 мин. Краску не сливают, добавляют 3--5 капель дистиллированной воды (рН 7,0) и окрашивают при комнатной температуре 16-- 18 ч. После промывки дистиллированной водой дифференцируют этанолом 45--60 с, вновь промывают дистиллированной водой и повторно дифференцируют этанолом 30 с. Промывают дистиллированной водой, высушивают на воздухе.
Элементарные тельца хламидий, расположенные в цитоплазме клеток, красно-фиолетового цвета, тельца-включения -- сине-фиолетовые.
Окраска по модифицированному методу Гименеж (Набли Б., Таризо М., 1967). Мазки готовят из стенок желточных мешков куриных эмбрионов, в которых культивировали хламидий, затем фиксируют над пламенем. Препараты окрашивают 0,25%-ным водным раствором основного фуксина в течение 5 мин, промывают водой, окрашивают 0,8%-ным водным раствором малахитового зеленого 30 с и промывают водой. Затем обесцвечивают 0,5%-ным раствором лимонной кислоты в течение 2 мин, промывают и повторно окрашивают малахитовым зеленым 30 с. Обесцвечивают 1%-ным раствором хлорангид-рида в течение 1 мин, промывают водой, высушивают. Элементарные тельца и тельца-включения хламидий - красного цвета, фон зеленый.
Окраска по модифицированному методу Стемпа. Препараты фиксируют над пламенем и окрашивают карболовым фуксином Циля, разведенным дистиллированной водой 1:5 (рH - 7,4) в течение 15 минут. Маточный раствор готовят по прописи: 1 г основного фуксина растворяют в 10 мл этилового спирта, 5 г карболовой кислоты (фенола) - в 100 мл дистиллированной воды. Оба раствора смешивают, фильтруют через 4--5 слоев фильтровальной бумаги. Хранится продолжительное время. Перед употреблением нужное количество разводят 1:5.
Препараты промывают дистиллированной водой, дифференцируют 0,5%-ным раствором уксусной кислоты или 0,05%-ным раствором серной кислоты в течение 1 мин (модификация Гаффарова X. 3.), промывают водой, окрашивают 1%-ным раствором малахитовой зелени 30 с, снова промывают водой, высушивают фильтровальной бумагой.
Элементарные тельца хламидий красные на сине-зеленом фоне. Инициальные тельца в одних случаях окрашиваются в красный, в других - в зеленоватый цвет. Метод рекомендуется для исследования патологическом материала, в частности плаценты.
Окраска по Маккиавелло. Готовят три раствора: раствор А - 250 мг фуксина основного растворяют в 100 мл бидистиллированной воды (хранится 10 дней при температуре 4°С); раствор В - 10 г лимонной кислоты растворяют в 100 мл бидистиллированной воды; раствор С - 1 г метиленовой сини растворяют в 100 мл бидистиллированной воды.
Техника окраски: мазки фиксируют над пламенем; раствор А фильтруют через фильтровальную бумагу и наносят на мазок, покрытый фильтровальной бумагой, на 5--10 мин; промывают дистиллированной водой; дифференцируют в растворе В, состоящем из 5 мл раствора В и 100 мл бидистиллированной воды, в течение 20--30 с; промывают водопроводной водой; докрашивают раствором С в течение 30 с; промывают водой, высушивают на воздухе. Хламидий окрашиваются в ярко-красный цвет, клетки патологического материала -- в светло-синий, ядра клеток -- в темно-синий цвет.
Окраска по Маккиавелло в модификации Здродовского. Готовят три раствора: раствор А (сохраняется в холодильнике в течение нескольких дней) - основной фуксин - 1 г, карболовая кислота - 5 г, этиловый спирт - 10 мл, дистиллированная вода - 100 мл; раствор Б - 0,5%-ный водный раствор метиленовой сини; раствор В - 0,5%-ный раствор лимонной или 0,15%-ный раствор уксусной кислоты.
Техника окраски. Препараты быстро фиксируют над пламенем и покрывают на 5 мин свежеприготовленной смесью: раствор А - 10-25 капель, бидистиллированной воды или фосфатный буфер (рН 7,4) - 10 мл; промывают дистиллированной водой; около 3 с дифференцируют в растворе В; промывают продолжительно дистиллированной водой; быстро окрашивают (10 с) раствором Б; промывают проточной водой, высушивают, исследуют с использованием иммерсионных систем. Хламидий рубиново-красного цвета на светло-голубом фоне. Метод дает хорошие результаты только при окрашивании свежих препаратов.
Окраска акридиновым оранжевым для люминесцентной микроскопии. Готовят жидкость Корнуа - шесть объемов 96-100%-ного этилового спирта, три объема хлороформа, один объем ледяной уксусной кислоты. Фосфатно-цитратный буфер (рН 3,8): лимонная кислота - 10 г, Nа2НРО4-7Н2О - 15 г, дистиллированная вода - 1 л. При наличии Nа2НРО4- 12Н2О проводят перерасчет:
2НРО42О НЬ 268,157
2НР0412Н20 НЬ 358,157
15 г - 268,157 Х = 15 358,157/268,157 = 20,034
х - 358,157
Маточный раствор акридинового оранжевого: акридиновый оранжевый -- 0,1 г, фосфатно-цитратный буфер -- 100 мл (может храниться в холодильнике). Рабочий раствор акридинового оранжевого готовят в концентрации 1: 10 тыс. -- 1: 30 тыс. на основе указанного буфера.
Размещено на Allbest.ru

Подобные документы

  • Возбудитель классической чумы свиней. Процесс развития заболевания. Клинические признаки и патологоанатомические изменения. Дифференциальная диагностика болезни и ее лечение. Иммунизация свиней против КЧС. Мероприятия по профилактике и ликвидации болезни.

    курсовая работа [44,3 K], добавлен 24.05.2012

  • Сущность аскаридоза свиней, его этиология, патогенез, клинические признаки, патологические изменения, диагностика, профилактика и методика лечения. Общая характеристика дегельминтизации свиней. Анализ особенностей иммунизации свиней антигеном из аскарид.

    реферат [48,7 K], добавлен 24.12.2010

  • Эпизоотологические особенности хламидиоза крупного рогатого скота в Республике Беларусь. Клинические признаки и патологоанатомические изменения. Мероприятия по его предупреждению и ликвидации. Эффективность вакцин, применяемых при профилактике хламидиоза.

    автореферат [35,8 K], добавлен 20.04.2012

  • Характеристика жизнедеятельности микроорганизма – возбудителя рожи свиней: морфология, культуральные, биохимические, токсигенные свойства, антигенное строение и устойчивость. Лабораторная и биологическая диагностика заболевания. Профилактика рожи свиней.

    курсовая работа [40,8 K], добавлен 11.01.2011

  • Возбудитель и патогенез высококонтагиозной вирусной болезни свиней, характеризующейся развитием энцефалита или энцефаломиелита. Лабораторная диагностика болезни Тешена. Специфическая профилактика и меры борьбы. Инактивированная эмульгированная вакцина.

    презентация [454,3 K], добавлен 29.11.2015

  • Определение и история открытия заболевания. Этиология вируса африканской чумы свиней. Эпизоотология, клинические признаки и патогенез. Основные методы выделения вируса и выявления антигенов. Патологоанатомические изменения, дифференциальная диагностика.

    курсовая работа [10,1 M], добавлен 20.11.2013

  • Определение африканской чумы свиней, характеризующейся лихорадкой, цианозом кожи, обширными гемморагиями. История развития болезни. Первое появление и диагностика заболевания на территории Украины. Вероятные источники инфекции. Последствия очага АЧС.

    презентация [348,9 K], добавлен 10.08.2013

  • Определение парвовирусной болезни свиней. Историческая справка, степень опасности и ущерб. Возбудители болезни, эпизоотология, патогенез, течение и клиническое проявление. Патологоанатомические признаки, диагностика, профилактика и лечение, меры борьбы.

    реферат [14,9 K], добавлен 24.09.2009

  • Возбудитель ньюкаслской болезни птиц. Эпизоотологические данные, патогенез, клинические признаки и патологоанатомические изменения. Диагностика, методы лечения ньюкаслской болезни и инфекционного бронхита кур. Иммунитет и специфическая профилактика.

    курсовая работа [62,3 K], добавлен 24.05.2012

  • Историческая справка, распространение, степень опасности гриппа свиней. Клиническое проявление болезни. Патологоанатомические признаки гриппа свиней. Особенности дифференциальной диагностики болезни. Основа профилактики, средства лечения гриппа свиней.

    реферат [18,7 K], добавлен 24.09.2009

Работы в архивах красиво оформлены согласно требованиям ВУЗов и содержат рисунки, диаграммы, формулы и т.д.
PPT, PPTX и PDF-файлы представлены только в архивах.
Рекомендуем скачать работу.