Возбудитель колибактрериоза

Размещено на http://www.allbest.ru/

Министерство сельского хозяйства РФ

ФГБОУ ВПО «Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия имени П.А. Столыпина»

Возбудитель колибактериоза

Выполнил: студент 2 курса 1б группы

факультета ветеринарной медицины

Шаталин А.Ю.

Ульяновск 2013

Введение

Одной из причин нереализованных возможностей работы молочных комплексов и ферм является массовые заболевания и гибель новорожденных животных от колибактериоза. Колибациллез, колиинфекция, колисепсис, колиэнтерит -- острая инфекционная болезнь молодняка с/х животных (в т. ч. Птиц) и пушных зверей, вызываемая кишечной палочкой патогенных серологических вариантов и проявляющаяся, главным образом, диареей. Заразный характер установил Обих в 1865 г.; в 1886 г. описан впервые Эшерихом, в честь которого микробы были названы Escherichia coli; Кауфман в 1947 г. разработал их серологическую классификацию. В нашей стране изучением колибактериоза сельскохозяйственных животных занимались Р. А. Цион, Я. Е. Коряков, М. А. Сидоров, П. И. Притулин, Ю. А. Кабанков и др.[1]

Возбудитель колибактериоза

Возбудитель болезни -- патогенные серологические варианты кишечной палочки Escherichia coli, относящиеся к роду Escherichia. Кишечная палочка широко распространена в природе, является постоянным обитателем толстого отдела кишечника здоровых животных. Колибактериоз вызывают только энтеропатогенные штаммы кишечной палочки, относящиеся к определенным О-серогруппам, обладающие инвазивными и токсигенными свойствами. Болезнь возникает при строго определенных условиях, вызывающих резкое снижение естественной резистентности новорожденного молодняка и проникновение возбудителя в тонкий отдел кишечника и другие органы.[2,3]

Морфология

Е. coli представляет собой палочку шириной 0,5--0,7 мкм, длиной 2--4 мкм; грамотрицательная; некоторые штаммы имеют жгутики и формируют капсулу. Спор не образует, является факультативным анаэробом. Хорошо растет на обычных питательных средах в аэробных и анаэробных условиях при рН 7,2--7,4, температуре 33--37°С. Элективными являются среды Эндо, Левина. При культивировании в МПБ вызывает интенсивное помутнение и осадок на дне пробирки. На МПА через 18--24 ч формирует круглые, бледно-серые колонии с влажной блестящей поверхностью. На среде Эндо образует плоские, сочные, малиново-красные колонии с металлическим блеском, ровными краями и гладкой поверхностью. На среде Левина растет в виде округлых, черных или темно-фиолетовых колоний.[3]

Культуральные свойства

Е. coli представляет собой палочку шириной 0,5--0,7 мкм, длиной 2--4 мкм; грамотрицательная; некоторые штаммы имеют жгутики и формируют капсулу. Спор не образует, является факультативным анаэробом. Хорошо растет на обычных питательных средах в аэробных и анаэробных условиях при рН 7,2--7,4, температуре 33--37°С (рис1). Элективными являются среды Эндо, Левина.

Рисунок 1

При культивировании в МПБ вызывает интенсивное помутнение и осадок на дне пробирки. На МПА через 18--24 ч формирует круглые, бледно-серые колонии с влажной блестящей поверхностью. На среде Эндо образует плоские, сочные, малиново-красные колонии с металлическим блеском, ровными краями и гладкой поверхностью. На среде Левина растет в виде округлых, черных или темно-фиолетовых колоний.[8]

Биохимические свойства

Кишечная палочка свертывает молоко, образует индол, дает положительную реакцию с метилротом и отрицательную реакцию Фогес--Проскауэра. Не разжижает желатину, не выделяет сероводород. Разлагает лактозу с образованием кислоты и газа, ферментирует глюкозу, маннит, дульцит, сахарозу, арабинозу. Не изменяет адонит и инозит. Родовая дифференциация представителей семейства Enterobacteriaceae представлена в таблице 1.

колибактериоз биохимический болезнь животное

Таблица 1

Дифференциальные признаки бактерий рода Yersinia enterocolitica.

Энтеропатогенные штаммы кишечной палочки образуют, экзо- и эндотоксины. Экзотоксин обладает нейротропным и некротизирующими свойствами, эндотоксин вызывает дегенеративные изменения в кишечнике.

Эшерихии имеют сложную антигенную структуру и различаются между собой по О-(соматическому) антигену, К- {капсульному) адгезивному антигену, Н-(жгутиковому) антигену, а также по ресничному и ил-антигену. В настоящее время идентифицировано по О-антигену свыше 170 серогрупп кишечной палочки, по К-антигену--103, по Н-антигену -- 55. Более токсичными считают штаммы кишечной палочки, содержащие К-антиген.

Строгой взаимосвязи между серогрупповой принадлежностью эшерихий и восприимчивым видом животных не выявлено. Однако установлена некоторая способность эшерихий определенных О-серогрупп более часто вызывать заболевания у молодняка определенных видов животных. Штаммы эшерихии, принадлежащие к серогруппам 0111 и 0126, вызывают отечную форму колибактериоза. Эшерихии этих двух серогрупп продуцируют гемолизин и колицин, которые подавляют другие энтеробактерии. Среди животных одного и того же неблагополучного хозяйства могут одновременно циркулировать возбудители, относящиеся к нескольким серологическим группам.

Энтеропатогенные штаммы кишечной палочки, выделяемые от больных и погибших животных, патогенны для белых мышей при внутривенном и внутрибрюшинном введении (рис.2).[6,9]

Течение и клинические признаки болезни.

У телят болезнь начинается внезапно. Инкубационный период длится от нескольких часов до 2--3 сут. Течение болезни -- сверхострое, острое и подострое.

Сверхострое течение наблюдают у молодняка первых дней. У больных отмечают быстрое нарастание признаков сепсиса и гибель в 1--2-е сут жизни. Остро протекает болезнь у телят 3--7-дневного возраста. Характерными признаками является профузный понос, сильное обезвоживание организма; бывают парезы, судороги. Гибель наступает на 3--4-й день болезни. Подострое течение регистрируют у телят 6--10-дневного возраста. Болезнь сопровождается изнуряющим поносом, обезвоживанием организма, сильным истощением. Часто болезнь осложняется поражением суставов и легких. Гибель наступает на 7--10-й день у 60% больных.

Различают 3 формы болезни -- энтеритную, септическую и энтеротоксемическую.

При энтеритной форме отмечают угнетение, снижение аппетита, прогрессирующий понос. Кал жидкий, но не водянистый, беловатого цвета, содержит сгустки непереваренного молока, пузырьки газа. Температура, как правило, не повышена. Со временем выделение кала становится непроизвольным, наступает сильное обезвоживание организма, быстрое истощение, гибель на 2--3-й день болезни.

При септической форме наблюдается внекишечная локализация возбудителя. На передний план выступают септические явления -- высокая температура тела, сильное угнетение, учащение пульса и дыхания, сухость носового зеркальца. Больные животные больше лежат, отказываются от корма. Иногда бывает поражение центральной нервной системы, геморрагические отеки, полинефрит. Диарея отсутствует. Гибель наступает на 12--24-й ч болезни.

При энтеротоксемической форме одновременно наблюдают поражение желудочно-кишечного тракта и токсикоз, обусловленный бактерийными токсинами, проникающими в кровь из кишечника. У больных отмечают сильное угнетение, рвоту, отказ от корма, профузный понос и гибель в течение 2--3 сут.

У поросят различают две формы болезни -- септическую и энтеритную, которые клинически проявляются так же, как и у телят. Поросята гибнут (до 60%) в течение 1--2 сут на фоне обезвоживания и истощения организма от профузного поноса. При септической форме наблюдают бактеремию, понос бывает не всегда; очень высокая (до 90%) летальность. У поросят-отъемышей болезнь проявляется в энтеритной форме и в форме колиэнтеротоксемии (отечная болезнь). При колиэнтеротоксемии ведущими являются признаки поражения центральной нервной системы -- возбуждение, судороги, парезы, параличи. Бывает также кратковременное повышение температуры тела до 40,5--41°С, рвота, каловые массы твердые, покрыты слизью, иногда бывает понос. Со временем образуются отеки в подкожной и субсерозной ткани, четко видны в области век, гортани, застойная гиперемия с синюшным оттенком кожи пятачка, ушей, конечностей, живота. Отмечают конъюнктивиты, гиперемию слизистой оболочки ротовой полости. Продолжительность болезни до трех суток. Большинство поросят погибает через несколько часов после появления клинических признаков болезни. Оставшиеся в живых выздоравливают очень медленно.

У ягнят выделяют две формы болезни -- септическую и энтеритную, проявляющиеся, как и у телят. У жеребят к указанным выше формам может присоединяться поражение суставов. У щенят отмечают вялость, диарею, нередко наблюдают признаки поражения центральной нервной системы -- возбуждение, судороги, параличи, парезы. Бывает пневмония, отек легких.

Колиэнтериты у человека вызывают энтеропатогенные, энтеротоксигенные и энтероинвазивные эшерихии. У детей раннего возраста, особенно часто у тех, что большую часть времени находятся в коллективах, острые колиэнтериты сопровождаются лихорадкой, болями в животе, рвотой, профузным поносом, обезвоживанием организма, судорогами. Иногда клинически протекают, как дизентерия. Источником возбудителя инфекции являются больные дети, а также взрослые люди-бактерионосители, выделяющие возбудитель с фекалиями. Заражение происходит оральным путем. У взрослых людей патогенная кишечная палочка может вызывать пищевые токсикоинфекции при употреблении в пищу продуктов, значительно обсемененных этими микробами.

Патогенез определяется патогенными и токсигенными свойствами возбудителя, а также путями заражения и степенью резистентности организма. При энтеральном заражении экзо- и эндотоксины, размножающиеся в тонком отделе кишечника, вызывают воспалительно-дистрофические изменения и повышение проницаемости эпителия слизистой оболочки. Токсины вызывают общий токсикоз, нарушение обмена веществ. Поносы приводят к быстрому обезвоживанию организма, истощению и гибели животного. В случае экстраэптерального заражения патогенные эшерихии через миндалины проникают в кровь, вызывая септицемию, токсикоз.

Патологоанатомические изменения. При энтеритной форме на вскрытии устанавливают истощение, признаки острого катарального или катарально-геморрагического воспаления тонкого, иногда и толстого кишечника, острое серозное воспаление мезентериальных лимфоузлов. При подостром течении находят очаговую пневмонию, воспалительные явления в печени. При септической форме отмечают явления геморрагического диатеза с кровоизлияниями на серозных оболочках и в различных органах. Бывает гиперемия и отек легких, головного мозга и его оболочек. При энтеротоксемической форме наблюдают отеки в различных органах и тканях; отеки век и конъюнктивы, студенистые отеки подкожной клетчатки у основания ушных раковин, вокруг глаз, в области носа, лба, трахеи, паха, суставов.[11,4,2]

Иммунитет

У новорожденных телят, поросят, ягнят формируют колостральный пассивный иммунитет посредством вакцинации беременных маток.

Продолжительность пассивного иммунитета--10--12 дней, его напряженность зависит от титра молозивных антител. Вакцинируют ягнят за 20 дней, поросят -- за 10--20 дней до отъема. Для вакцинации применяют поливалентную гидроокисьалюминиевую формолтиомерсаловую вакцину против колибактериоза (эшерихоза) поросят, телят и ягнят; поливалентную вакцину против сальмонеллеза и колибактериоза пушных зверей; протективный антиген для пероральной иммунизации новорожденных телят против колибактериоза; бактериофаг против колибактериоза молодняка. Для пассивной иммунизации при колибактериозе используют поливалентную гипериммунную сыворотку.[3]

Устойчивость

Кишечная палочка довольно устойчива во внешней среде--в фекалиях сохраняется до 30 дней, в воде и почве -- несколько месяцев. При нагревании до 60°С погибает через 15 мин, до 75°С -- через 30 с, до 100°С -- мгновенно. Быстро инактивируется под действием дезинфицирующих веществ в обычных концентрациях.[8]

Патогенез

Источником возбудителя инфекции являются больные и переболевшие телята (поросята, ягнята), а также матери--носители патогенных типов кишечной палочки. Возбудитель выделяется из организма в основном с калом, иногда с мочой. Факторами передачи могут быть посуда, предметы ухода, воздух, одежда и обувь обслуживающего персонала, инфицированные выделениями больных, а также мухи, вши, мыши, крысы, кошки, различные виды птиц (механические переносчики возбудителя). Заражение происходит главным образом перорально, при выпаивании инфицированного молока, воды, сосании загрязненного вымени, облизывании инфицированных выделениями больных предметов (кормушки, стены клеток и др.), особенно до первого получения молозива.

При заражении через желудочно-кишечный тракт развивается энтеритная форма болезни; через слизистые оболочки носа, лимфоглоточное кольцо, пупочный канал -- септическая форма болезни. Вначале заболевают слабые животные, а затем, по мере усиления вирулентности в результате пассажей и количественного увеличения возбудителя при массовых поносах, заражается и крепкий, хорошо развитый молодняк.[6,7]

Факторы патогенности

В возникновении колибактериоза исключительно большое значение имеют такие предрасполагающие факторы, как неполноценное кормление и неправильное содержание матерей, нарушение гигиены кормления и выращивания новорожденных животных. Определяющим является пониженная резистентность новорожденных, обусловленная своеобразным физиологическим и иммунобиологическим состоянием -- отсутствием в крови собственных гаммаглобулинов и возможностью формирования пассивного иммунитета лишь при своевременной даче (не позднее 2 ч после рождения) молозива, пониженная барьерная функция печени, способность слизистой оболочки тонкого отдела кишечника адсорбировать и транспортировать в кровь все белковые вещества (в т.ч. и микроорганизмы) в нативном состоянии.

Характерной особенностью болезни является массовость заболевания (50--75%), высокая летальность (60--90%).

Колибактериоз протекает в виде энзоотии, однако в крупных хозяйствах может приобретать эпизоотический стационарный характер за счет систематического поступления восприимчивого поголовья и поддержания на высоком уровне концентрации возбудителя в помещениях. В мелких хозяйствах и на изолированных фермах регистрируется только в период массовых отелов и опоросов (окотов), в специализированных хозяйствах -- постоянно на определенной технологической линии (в профилактории, цехе опоросов и др.).[9]

Дифференциальный диагноз

Колибактериоз поросят следует отличать от трансмиссивного гастроэнтерита, энтеровирусного гастроэнтерита, анаэробной дизентерии (этеротоксемии), сальмонеллеза; у телят -- от анаэробной дизентерии (энтеротоксемии), диплококковой, ротавирусной и коронавирусной инфекции, а также диареи незаразного происхождения; у ягнят -- от анаэробной дизентерии (энтеротоксемии).

Трансмиссивный гастроэнтерит свиней обладает более выраженной контагиозностью, протекает почти со 100%-ной летальностью у новорожденных поросят. Могут болеть свиноматки, у которых часто развивается агалактия. Энтеровирусный гастроэнтерит регистрируют у свиней всех возрастных групп за исключением поросят-сосунов до 2--3-недельного возраста. Отмечается менее острое течение, незначительная летальность (около 10%). При анаэробной дизентерии (энтеротоксемии) поросят, телят, ягнят отмечают кровавый понос, сверхострое течение, заболевание и гибель больных в течение 2--4 ч, реже -- 3--6 дн, геморрагическое воспаление кишечника. При бактериологическом исследовании выделяют клостридиум перфрингенс. Сальмонеллезом чаще поражаются поросята-отъемыши и более старшие животные. Заболевание поросят-сосунов протекает при температуре 40--42°С. В посевах на дифференциально-диагностических средах выделяют паратифозных бактерий. Диплококковая инфекция клинически может напоминать септичсскую форму колибактериоза, однако болезнь протекает при более высокой температуре (до 42°С); отмечают опухание суставов, сильное увеличение селезенки, в патологическом материале обнаруживают диплококки. Часто регистрируют двухфазные проявления болезни -- в 1--2 сут отмечается первая волна, затем через 2--3 дня после клинического выздоровления -- вторая волна. Решающее значение для диагностики имеет вирусологическое исследование. Коронавирусная инфекция характеризуется профузной диареей с примесью слизи и крови. Болеют телята всех возрастов. В гистосрезах обнаруживают поражение эпителиальных клеток верхушек ворсинок. Диагностируют на основании вирусологических исследований. Диареи незаразного происхождения возникают при неправильном и несвоевременном скармливании молозива. Бактериологические и вирусологические исследования отрицательны. [2,4,6]

Лабораторная диагностика

Лабораторная диагностика предусматривает выделение чистой культуры эшерихий из патологического материала, серологическое типирование и определение патогенности выделенного штамма. В лабораторию лучше направлять патологический материал от специально убитого больного животного, не подвергавшегося лечению антибиотиками, а от павших -- не позднее 2 ч после гибели. Кровь при септицемии берут в стерильные пробирки в период лихорадки (для выделения гемокультуры). Серологические исследования проводят с парными сыворотками для выявления нарастания титра антител в РА и РНГА. Фекальные пробы отбирают из прямой кишки от 3--4 больных животных, которых не лечили антибиотиками. Для посмертной диагностики отбирают сердце с перевязанными сосудами, трубчатую кость, кусочки головного мозга, печени с желчным, пузырем, почки, пораженный отрезок тонкого отдела кишечника, перевязанный двумя лигатурами, брыжеечные лимфоузлы, соответствующие пораженным участкам кишечника.[11]

Микроскопическое исследование

Микроскопическое исследование. Из органов готовят мазки-отпечатки, окрашивают по Граму и ангисыворотками на термостабильныс (ТС) и термолабильные (TJ1) энтеротоксины, а также антисывороткой для исследования непрямым методом РИФ. Фекальную пробу разводят 1:100 физиологическим раствором, готовят мазки, окрашивают по- Граму, а также для исследования непрямым методом в РИФ. Для РИФ мазки обрабатывают антисывороткой, а затем флюоресцирующей сывороткой. В РИФ используют также комплексную и типовые специфические флюоресцирующие сыворотки и их глобулины.

Окрашенные по Граму мазки просматривают под малым и большим увеличением для обнаружения грамотрицательных палочек, располагающихся одиночно, очень редко -- в виде нити. Иногда эшерихии могут интенсивно окрашиваться по концам (биполярно). С помощью РИФ в мазках выявляют яркое специфическое свечение контуров эшерихий.

Бактериологическое исследование при септической форме болезни предусматривает посевы из крови сердца и всех органов, при энтеритной форме --из слизистой тонкого отдела кишечника, измененных лимфоузлов брыжейки и фекалий в пробирки с МПБ, МПГ1Б (исключение анаэробов), на косой МПА, в чашки Петри со средами Эндо и Левина. Перед посевом из тонкого отдела кишечника удаляют содержимое, слизистую оболочку скарифицируют конусом пастеровской пипетки и скарификат растирают шпателем , по поверхности среды Эндо и Левина. Из фекалий делают взвесь 1:100 в физиологическом растворе и после отстаивания в течение 10--15 мин высевают одну каплю дробно в чашки на агар Левина и Эндо. Посевы инкубируют при 37°С в течение 18--24 ч, после чего их просматривают, готовят мазки. При наличии роста в жидких питательных средах и микроскопического обнаружения грамотрицательных палочек проводят высевы на дифференциальные среды Эндо и Левина. В посевах на плотных питательных средах отбирают не менее чем из двух органов по две типичные колонии -- S формы и из каждой делают отсевы в две пробирки с косым МПА. Полученные через 24 ч чистые культуры эшерихий используют для приготовления мазков, исследования культурально-биохимических свойств, заражения белых мышей, а также для приготовления бактерийных антигенов и серологического типирования.

В посевах из каждой пробы фекалий отсевают и серологически типируют не менее 10 колоний. Культурально-биохимические исследования и патогенность изучают у типированных культур. В случае если выделенные из фекалий эшерихии не типируются имеющимися колисыворотками, проводят изучение биологических свойств нетипированных культур с обязательной проверкой каждой из них на патогенность для белых мышей.

При подозрении на отечную болезнь культуры, полученные в посевах брыжеечных лимфатических узлов и тонкого отдела кишечника, кроме того, пересевают на кровяной агар в чашки Петри для определения гемолитических свойств.

Для культурально-биохимического исследования выделенных эшерихий смывы суточных агаровых культур доводят до 1 млрд./мл по стандарту мутности и высевают в среды с лактозой, глюкозой, маннитом, саха­розой, дульцитом, адонитом и инозитом, а также в среду Кларка, бульон с мочевиной, среды Козера и Симмонса, на агар с глюкозой и сернокислым железом, МПБ (на образование сероводорода и индола), 3%-ный полужидкий агар (на подвижность).

Для проверки интенсивности кислотообразования (реакция с метилротом) и постановки пробы на ацетилметилкарбинол (реакция Фогеса--Проскауэра) проводят посев испытуемых культур в среду Кларка и выращивают их в течение 48 ч при 37°С. Для приготовления среды Кларка растворяют 5 г пептона, 5 г глюкозы и 5 г двуосновного фосфата калия в 80 мл дистиллированной воды при подогревании на водяной бане, фильтруют через фильтровальную бумагу, охлаждают до 20°С, доводят до объема 1 л дистиллированной водой, разливают в про­бирки по 5 мл, стерилизуют при 0,5 ат 15 мин дробно 3 дн подряд по 20 мин.

Постановку реакции с метилротом осуществляют следующим образом. К 5 мл испытуемой культуры эшерихий, выращенных в среде Кларка, добавляют 5 капель раствора метилрота (0,01 г метилрота растворяют в 30 мл 96° этилового спирта, добавляют 20 мл дистиллированной воды), тщательно перемешивают. Реакцию учитывают по изменению окраски среды. Положительной считают реакцию при розовой окраске (рН ниже 5), отрица­тельной-- при желтой (рН выше 5), сомнительной -- при желто-оранжевой окраске (рН около 5).

Реакцию Фогеса--Проскауэра ставят посредством добавления к 1 мл 48-часовой культуры эшерихий, выращенных на среде Кларка, 0,2 мл 40%-ного водного раствора едкого калия и 0,5 мл 6%-ного спиртового раствора альфа-нафтола. После смешивания реакцию учитывают по окраске среды. Положительной считают реакцию при розовой окраске среды (наличие ацетилметилкарбипола), отрицательной--при желтой (отсутствие ацетилме- тилкарбинола), сомнительной -- при желто-оранжевой окраске.

Первичную дифференциацию выделенных культур энтеробактерий проводят по ферментативным свойствам, видовую дифференциацию эшерихий -- по биохимическим свойствам.

Определение серогрупповой принадлежности выделенных культур эшерихий проводят с помощью набора типовых специфических агглютинирующих сывороток, выпускаемых, биофабрикой, в соответствии с наставлением. Вначале ставят РА на стекле с 4 групповыми поливалентными сыворотками, затем с моновалентными типовыми сыворотками, входящими в состав групповой, и при положительной; реакции уточняют серотип антигена в пробирочной РА с реагировавшими сыворотками.

Для приготовления антигена исследуемую культуру эшерихий, выращенную в течение 18--20 ч на МПА при* 37°С, смывают физиологическим раствором, доводят до концентрации 3--4 млрд./мл, прогревают в водяной бане при 100°С в течение 1 ч или автоклавируют при 120°С в течение 2 ч. Взвесь охлаждают и центрифугируют 20 мин при 5000 об/мин. Надосадочную жидкость удаляют, осадок используют в качестве антигена в пластинчатой и пробирочной РА.

Групповые О-колисыворотки перед употреблением разводят 1:5 физиологическим раствором. При отсутствии групповых сывороток их готовят на месте. Для этого в стерильные пробирки вносят по 1 мл 5--6 монорецепторных О-сывороток, соответствующих серотипам эшерихий, наиболее часто встречающимся в данной местности. Затем добавляют физиологический раствор до 10 мл, перемешивают, получая комплексную сыворотку в рабочем разведении 1:10, сохраняющую активность при 4°С в течение 4 мес. Таким же образом готовят смеси из других монорецепторных сывороток.

Постановка пластинчатой РА. На чистое предметное стекло наносят по одной капле каждой групповой поливалентной сыворотки, поочередно добавляют к ним бактериологической петлей испытуемый антиген, перемешивают петлей и в течение последующих 3 мин учитывают РА. Контролями пластинчатой РА служат антиген+физиологический раствор и сыворотка+физиологический раствор. Антиген, дающий реакцию со всеми групповыми О-сыворотками или самоагглютинацию в контроле, признается непригодным. Антигены, реагирующие с одной из групповых поливалентных О-сывороток, проверяют в пластинчатой РА с входящими в ее состав моновалентными сыворотками, разведенными 1:10. При положительной реакции с 1--3 сыворотками серотип антигена уточняют в пробирочной РА с каждой сывороткой, давшей положительную реакцию на стекле.

Постановка пробирочной РА. Пробирочную РА ставят только с теми антигенами, которые дали положительную пластинчатую РА с моновалентными О-сыворотками. Для постановки пробирочной РА типовые сыворотки, реагировавшие в пластинчатой РА, разводят в объеме по 0,5 мл двукратно начиная с 1:25 до титра, указанного на этикетке. Затем в каждое разведение сыворотки вносят по 0,5 мл испытуемого антигена, имеющего концентрацию 500 млн. микробных тел в 1 мл. Пробирки встряхивают и выдерживают 16--18 ч при 37°С, а затем 6--8 ч при комнатной температуре. Контролями РА служат антиген Ч-физиологический раствор, сыворотка в разведении 1:25 без антигена. Учет реакции ведут при помощи лупы или агглютиноскопа. Реакцию считают положительной при просветлении жидкости и образовании на дне пробирки осадка бактерий в форме раскрытого зонтика, который при встряхивании распадается на мелкие хлопья или комочки. Реакцию считают отрицательной, если на дне пробирки образуется осадок в виде диска или пуговки, разбивающийся при встряхивании в гомогенную взвесь. Исследуемую культуру относят к той серогруппе, с сывороткой которой она вступает в реакцию до ее титра или не ниже половины титра[10,11]

Биопроба

Для заражения используют 3 белые мыши массой 14--18 г, которым в брюшную полость вводят 500 млн. микробных тел, содержащихся в суспензии, приготовленной посредством смешивания в равных объемах не менее 4 типированных агаровых культур эшерихий, выделенных из двух внутренних органов поросят или фекалий. Метилированные культуры (не менее 4), выделенные из фекалий, проверяют на патогенность каждую в отдельности. Выделенную культуру считают патогенной в случае гибели одной и более мышей в первые 2 сут после заражения и выделения из ее трупа исходной культуры. Культуры эшерихий, обладающие патогенностью для белых мышей, серологической типизации не подвергают.

Согласно методическим указаниям по бактериологической диагностике колибактериоза (эшерихиоза) животных положительный диагноз считают установленным при получении одного из следующих показателей: на колибактериоз -- при выделении культур эшерихий из селезенки, костного или головного мозга без определения их серологической принадлежности и патогенности, при выделении не менее чем из двух исследованных органов культур эшерихий, патогенных для белых мышей или принадлежащих к О-серогрупам, признанным патогенными для животных, то есть типируемых агглютинирующими О-колисыворотками, входящими в диагностический набор; на колиэнтеротоксемию -- при выделении гемолитических эшерихий и наличии характерных патологических изменений без определения патогенности и серологической принадлежности выделенной культуры, при выделении (3-гемолитических эшерихий, вызывающих гибель не менее 2 зараженных белых мышей или принадлежащих к О-серогруппам, признанным патогенными для животных (при отсутствии характерных патологоанатомических изменений); на колиэнтерит при выделении из фекалий энтеропатогенных серотипов эшерихий, вирулентных для белых мышей, положительной РИД между энтеротоксином нативных фекалий и антитоксическими сыворотками против ТС и ТЛ эитеротоксинов эшерихий, положительной РИФ в мазках из фекалий, мазках-отпечатках из органов больных и убитых телят, обработанных антисывороткой, а затем флюоресцирующей сывороткой, при условии специфического свечения более 50% микробных тел.

Серологическая диагностика включает обнаружение прироста диагностических титров О-агглютининов при испытании от больных животных сывороток крови в РА при септической форме, в РИГА (с эритроцитами, сенсибилизированными энтеротоксинами) -- при энтеритной форме болезни. Диагностическим титром О-агглютининов при септической форме болезни считают положительную РА на 3-- 4 креста в разведении сывороток 1:100 для поросят, 1:60-- для телят, 1:40 -- для ягнят. Для колиэнтеритной формы болезни диагностическим в РНГА считают титр 1:100.

Для диагностики энтеритной формы болезни применяют также РИД. Ставят ее в чашках Петри по Оухтерлони с антитоксическими сыворотками против ТС- и ТЛ-энтеротоксинов эшерихий и ценгрифугатом нативных фекалий от больных животных.[11]

Серологическая диагностика

Серологическая диагностика включает обнаружение прироста диагностических титров О-агглютининов при испытании от больных животных сывороток крови в РА при септической форме, в РИГА (с эритроцитами, сенсибилизированными энтеротоксинами) -- при энтеритной форме болезни. Диагностическим титром О-агглютининов при септической форме болезни считают положительную РА на 3-- 4 креста в разведении сывороток 1:100 для поросят, 1:60-- , для телят, 1:40 -- для ягнят. Для колиэнтеритной формы болезни диагностическим в РНГА считают титр 1:100.

Для диагностики энтеритной формы болезни применяют также РИД. Ставят ее в чашках Петри по Оухтерлони с антитоксическими сыворотками против ТС- и ТЛ-энтеро- токсинов эшерихий и ценгрифугатом нативных фекалий от больных животных.[5]

Лечение

Лечение необходимо начинать как можно раньше. Больных изолируют, назначают диету, исключают дачу молока, заменяя его солевыми растворами, ацидофильно-бульонной культурой (АБК), пропионово-ацидофильной бульонной культурой (ПАБК), отварами из льняного семени, овсяным киселем. У 1--2-дневных телят пропускают 2--3 кормления молозивом (8--12 ч), телятам старшего возраста (3--4 дн) его не дают сутки. После перерыва молозиво (молоко) следует вводить в рацион постепенно, начиная с половинной суточной дозы, давая его 3--4 раза в сутки совместно с физиологическим раствором; доводят до нормы не ранее третьего дня.

Для специфического лечения применяют поливалентную гипериммунную сыворотку против колибактериоза (эшерихоза) сельскохозяйственных животных: телятам до 5 дн -- 30--45 мл, старше 5 дн -- 50--60 мл; ягнятам соответствен­но 15--20 и 20--30 мл; поросятам--15--20 и 25--35 мл. Препарат вводят внутримышечно.

Применяют также бактериофаг против паратифа и колибактериоза телят и поросят. Препарат дают через рот трижды через каждые 2 ч в дозе 30--50 мл на один прием в зависимости от массы и возраста. В тяжелых случаях заболевания количество фага может быть увеличено до 100 мл. Рекомендуется за 10--15 мин до применения колифага дать больному 25--30 мл 3--5%-ного раствора соды, нейтрализующего соляную кислоту, которая разрушает колифаг. После проведенного курса лечения делают перерыв на 1--2 дня и при необходимости лечение колифагом повторяют.

Для нормализации белкового обмена у телят целесообразно использовать сыворотку крови коров своего стада, а также сывороточные и молозивные иммунные глобулины, стимулирующие защиту организма новорожденных животных от возбудителя инфекции. Сыворотку крови можно применять внутрь и парентерально. В тяжелых случаях препарат вводят по 15--20 мл/кг массы, при легком течении болезни -- 5--10 мл/кг. Одновременно вводят 200-- 400 мл изотонического раствора глюкозы.

Иммунные глобулины рекомендуется применять с профилактической целью с первой порцией молозива и повторно через 12 ч. При поносах стандартный 10%-ный раствор иммунных глобулинов применяют парентерально по 1 мл/кг. В зависимости от тяжести болезни препарат вводят 2--б раз -- в первый день 2 раза, в последующие дни по 1 разу. Дозу препарата можно увеличивать в 1,5--2 раза.

Применяют антибиотики (после предварительного определения чувствительности к ним выделенных эшерихий), а также сочетания различных антибиотиков, сульфаниламидных и нитрофурановых препаратов. Особое внимание необходимо уделять правильному выбору дозы препаратов и методов их дачи. Левомицетин дают на первый прием по 20 мг/кг, а затем через каждые 8--12 ч телятам по 15 мг, поросятам и ягнятам -- по 20 мг/кг; биомицин, террамицин, тетрациклин применяют 2--3 раза в день по 10--20 мг/кг. Указанные антибиотики применяют с молозивом или водой. Мономицин, неомицин сульфат, полимиксин также дают внутрь в дозе по 10--30 тыс. ЕД/кг. С антибиотиками неомициновой группы целесообразно одновременно вводить внутримышечно дибиомицин и окситетрациклин соответственно по 20 тыс. ЕД и 10 тыс. ЕД/кг. При сочетанном применении хороший лечебный эффект получают при использовании с молоком или водой полимиксина в дозе 7-- 8 тыс. ЕД/кг или мицерина в дозе 5--7 тыс. ЕД/кг с син­томицином, который дают больным на первый прием по 40 мг, а затем через каждые 4--6 ч по 30 мг/кг. Положительные результаты отмечают при применении мицерина, полимиксина с одновременным внутримышечным введением хлортетрациклина или окситетрациклина в дозе 5--10 мг/кг массы животного.

Сульфаниламидные (фталазол, сульфазол, сульцимид, сульфадимезин и др.) и нитрофурановые (фуразолидон, фуразидин) препараты лучше использовать в сочетании с диетой и средствами заместительной и восстановительной терапии (натуральный желудочный сок, сыворотка крови, сывороточные и молозивные глобулины).

Для устранения токсикоза и регуляции водносолевого обмена применяют растворы солевых смесей по Шарабрину, Волоскову, Колесову, а также физиологический раствор, раствор Рингера, Рингера--Локка и др. Их вводят ягнятам и поросятам подкожно по 300--500 мл в разные места, телятам -- по 500--1000 мл в область правой голодной ямки (при тяжелом течении болезни вводят внутривенно или в брюшную полость до 1 л с 5% глюкозы). Рекомендуется раз в сутки применять масляный раствор витамина А (внутримышечно по 100--200 тыс. ИЕ), ви­тамин Д (внутримышечно или подкожно по 1,5--2 тыс. ИЕ), аскорбиновую кислоту (200--500 мг).[2,3,6,8]

Мероприятия по профилактике и ликвидации колибактериоза

Мероприятия по профилактике и ликвидации колибактериоза телят. Для профилактики колибактериоза телят необходимо строго соблюдать предусмотренные технологией правила содержания, кормления и эксплуатации живот­ных и рекомендованные ветеринарно-саннтарные меры.

Стельных коров за 1,5--2 мес до отела запускают, выделяют в отдельные группы и обеспечивают полноценным кормлением. За 10--12 дн до отела их чистят, загрязненные участки тела обмывают водой, нижние части конечностей дезинфицируют 0,5%-ным раствором формальдегида и размещают в родильном отделении.

В родильном отделении коров ставят в свободные стойла, которые предварительно подвергают тщательной механической очистке и дезинфекции. Перед отелом у коровы обмывают заднюю часть туловища, наружные половые органы теплым раствором марганцовокислого каля (1:1000) и перемещают ее в родильный бокс. Растелившуюся корову через 30--40 мин поят теплой подсоленной водой или болтушкой из отрубей, а через 1 --1,5 ч доят. Перед доением вымя обмывают теплой водой, первые струи молозива сдаивают в отдельную посуду и уничтожают. Через 2--3 ч после отела корову переводят в тщательно очищенное и продезинфицированное стойло родильного отделения, где и содержат 10--15 дней.

Теленка принимают на сухую чистую подстилку или мешковину, обрабатывают пуповину 5%-ной настойкой йода, дают облизать корове, а затем переводят в одну из секций профилактория, где размещают на 8--10 дн в предварительно очищенную и продезинфицированную индивидуаль­ную клетку с сухой и чистой подстилкой.

Профилактическую дезинфекцию помещений родильного отделения, профилактория и клеток проводят 2%-ным раствором формальдегида; 4%-ным горячим (70°С) раствором едкого натра; осветленным раствором хлорной извести, содержащим 3% активного хлора; 2%-ным раствором перекиси водорода с добавлением 0,1% молочной кислоты из расчета 1 л дезраствора на 1 м2 поверхности при экспо­зиции 3 ч. Остатки дезраствора смывают водой.

При аэрозольной дезинфекции профилактория обеспечивают тщательную герметизацию свободных от телят секций, температуру воздуха поддерживают не ниже 15°С, относительную влажность--не менее 60%. Формалин (30-- 40%-ный раствор формальдегида) распыляют из расчета 20 мл на 1 м3 помещения при экспозиции 24 ч. После окончания дезинфекции помещение проветривают или остатки формальдегида нейтрализуют 28%-ным раствором аммиака из расчета 10 мл на 1 м3 помещения.

Другие животноводческие помещения дезинфицируют одним из следующих дезрастворов: 4%-ным горячим (70°С) раствором едкого натра, 3%-ным раствором препаратов парасода или фоспара, раствором гипохлора, содержащим 3% активного хлора. Растворы препаратов наносят однократно из расчета 0,5 л на 1 м2 поверхности при экспозиции 1 ч.

В течение первых двух часов новорожденным телятам скармливают молозиво, чем обеспечивается насыщение их организма отсутствующими в крови иммуноглобулинами. В первый день молозиво выпаивают в количестве по 500-- 800 мл на один прием с промежутками не более 5--6 ч, в последующие дни -- 3 раза в сутки по 40 мл на кг массы теленка на один прием. С 3 дня между кормлениями дают кипяченую, остуженную (25--30°С) воду. Посуду, применяемую для кормления телят, перед употреблением каждый раз ополаскивают водой, дезинфицируют 0,1%-ным раствором гипохлорита натрия (кальция) или 0,5%-ным раствором дезмола, промывают под струей горячей (60--65°С) воды. Резиновые соски ополаскивают теплой водой, кипятят 1--2 мин в 1%-ном растворе питьевой соды. Хранят молочную посуду и соски в закрытом шкафу.

Выполнение указанного режима подготовки и проведения родов, получения и содержания, кормления новорожденных телят надежно предупреждает колибактериоз.

В случае установления колибактериоза прекращают прием телят в секцию профилактория, в котором возникло заболевание, и осуществляют меры по предупреждению распространения инфекции в другие секции.

Проводят комплексное лечение больных телят. Выздоровевших телят переводят в телятник, размещают изолированными группами по 8--10 голов в клетке, организуют полноценное кормление. Всем рождающимся телятам в первые 2--4 ч жизни выпаивают по 80--100 мл поливалентной гипериммунной сыворотки против колибактериоза (эшерихоза) молодняка сельскохозяйственных животных. С профилактической целыо рекомендуется применять также бактериофаг всему молодняку, начиная с 1 дн рождения до 4-месячного возраста за 2 ч до кормления, 3--5 дн подряд через рот в дозе 30--50 мл на прием; колипротектан ВИЭВ -- перорально в дозе 10--15 мл за 30 мин до выпойки, по не позднее 30 мин после рождения, а затем по 10 мл 5 раз с молозивом в течение 2 дн. Хорошие результаты получают при применении иммуноглобулинов, сыворотки кро­ви животных этого хозяйства (внутримышечно или подкожно по 0,7 мл на кг массы теленка 1 раз в сутки), АБК, ПАБК, а также ацидофильного молока, сухого ацидофилина в соответствии с действующими наставлениями по их применению.

После вывода телят из неблагополучной по колибактериозу секции, проводят тщательную санацию помещения (тщательная механическая очистка, дезинфекция с кон­тролем качества и др.).

Для дезинфекции применяют осветленный раствор хлорной извести, содержащий 3% активного хлора, 4%-ный горячий (70°С) раствор едкого натра. Расход дезсредств-- 1 л на 1 м2 поверхности при экспозиции 3 ч.

Мероприятия по профилактике и ликвидации колибактериоза поросят. Супоросных свиноматок за 10--15 дн до опороса чистят, загрязненные участки тела обмывают теплой водой, нижние части конечностей дезинфицируют 0,5%- ным раствором формальдегида, размещают в предварительно очищенные и продезинфицированные индивидуальные клетки свинарника-маточника. При подготовке помещений свинарников-маточников особое внимание обращают на очистку и мойку наиболее загрязненных объектов (полы, щелевые решетки, нижние части стен, кормушки и др.). Их вначале очищают, затем однократно орошают горячим (70°С) 2%-ным раствором едкого натра и демпа из расчета 0,5 л на 1 м2 площади, а через 20--25 мин, не допуская высыхания, проводят мойку всего помещения струей воды под давлением. Дезинфекцию осуществляют орошением или аэрозольно, используя дезсредства и методы, рекомендованные выше для родильных отделений коровников, из расчета 0,5 л на 1 м2 при экспозиции 1 ч. За 5 дн до опороса рацион свиноматок постепенно уменьшают с таким расче­том, чтобы за день до опороса суточный рацион составил половину нормы. При появлении признаков опороса заднюю часть туловища свиноматок обмывают дезраствором (0,5%-ный раствор хлорамина, раствор фурацилина 1:400, раствор марганцовокислого калия 1:1000). У родившегося поросенка пупочный канатик зажимают на расстоянии 5-- 6 см от кожи брюшной стенки, затем обрывают его перекручиванием, культю орошают 5%-ной настойкой йода. Рот, ноздри и уши поросенка насухо вытирают чистым полотенцем и помещают (до кормления) в продезинфицированный ящик (клетку). После опороса загрязненные участки тела свиноматки обмывают водой, соски и кожу молочных желез протирают салфеткой, смоченной дезраствором, заменяют подстилку, а затем подсаживают поросят для кормления. После опороса маток поят свежей водой, а че­рез 4--6 ч дают 500--700 г болтушки из концентрированных кормов. Со второго дня начинают увеличивать рацион, доводя его до полной нормы к 4-му дню.

Все молочные продукты, поступающие для кормления поросят, кипятят или пастеризуют непосредственно в хозяйстве, независимо от обработки их на молочных заводах.

В случае возникновения колибактериоза больных поросят-сосунов вместе со свиноматками или больных поросят-отъемышей изолируют и лечат. При большой заболеваемости больных лечат на месте. Организуют меры для предупреждения распространения возбудителя в другие благополучные секции. Запрещают перегруппировку поросят внутри фермы (цеха). Выздоровевших поросят при переводе на доращивание или откорм формируют в отдельные группы.

В благополучных по колибактериозу секциях (цехах) всех супоросных свиноматок, а также поросят старше 10- дневного возраста вакцинируют.

Проводят тщательную санацию помещения неблагопо­лучной секции после ее освобождения от поросят.

Перед дезинфекцией наиболее загрязненные объекты орошают однократно горячим (не ниже 70°С) 2%-ным раствором едкого натра и демпа из расчета 0,5 л на 1 м3 площади; двукратно с интервалом 30 мин горячим 5%-ным: раствором кальцинированной соды. Через 25--30 мин проводят мойку всего помещения струей воды под давлением.

Дезинфекцию осуществляют методом орошения или аэрозольно. Используют 2%-ный раствор формальдегида; 4%-ный горячий (70°С) раствор едкого натра; осветленный раствор хлорной извести, содержащий 3% активного хло­ра; 2%-ный раствор перекиси водорода с добавлением 0,1%-ной молочной кислоты при расходовании 0,5 л на 1 м2 и экспозиции 1 ч. Аэрозольную дезинфекцию проводят так же, как профилактическую дезинфекцию родильного отделения и профилактория телят.

Мероприятия по профилактике и ликвидации колибактериоза ягнят и промысловых животных. Осуществляют комплексные ветеринарно-санитарные и зоотехнические мероприятия, предусматривающие тщательную санацию мест содержания животных, предупреждение инфицирования молодняка через предметы внешней среды, при контакте с больными. Проводят вакцинацию всех маток, а также молодняка старшего возраста.

Мероприятия по профилактике и ликвидации колибактериоза молодняка в промышленном животноводстве. В условиях интенсивного разведения животных проводят ве­теринарно-санитарные меры, связанные с поцеховой системой содержания беременных маток и определенных воз­растных групп молодняка.

Телят и ягнят, контактировавших с больными, считают подозреваемыми в заражении и содержат в отдельной группе. С профилактической целью им внутримышечно вводят поливалентную гипериммунную сыворотку против колибактериоза (эшерихоза) молодняка сельскохозяйственных животных.

Всех больных поросят-сосунов со свиноматками или больных поросят-отъемышей изолируют и лечат.

При заболевании в секции большого количества поросят их лечат на месте, принимая меры по предупреждению распространения возбудителя инфекции в благополучные секции.

Поросят, достигших отъемного возраста и выздоровевших, переводят на доращивание и откорм, формируя из них отдельные группы. Телят, ягнят и поросят в секциях, где не регистрировались случаи колибактериоза, перед отъемом вакцинируют поливалентной гидроокисьалюминиевой формолтиомерсаловой вакциной против колибактериоза (эшерихоза) двукратно с интервалом 10--15 дн. Этой же вакциной прививают двукратно беременных животных в дозах: крупный рогатый скот-- 10--15 и 15--20 мл, свиноматок-- 4--5 и 5--6 мл, овцематок -- 3--4 и 4--5 мл. Строго следят за соблюдением нормативных зоогигиенических параметров содержания и кормления животных.

Для дезинфекции ферм крупного рогатого скота приме­няют: 4%-ный горячий (70°С) раствор едкого натра; 3%- ный раствор препаратов парасода илифоспара; раствор гипохлора, содержащий 3% активного хлора. Растворы препаратов наносят однократно из расчета 0,5 мл на 1 м2 поверхности при экспозиции 1 ч. Для дезинфекции клеток и помещения профилактория телят кроме указанных дезсредств используют осветленный раствор хлорной извести, содержащий 3% активного хлора; 2%-ный раствор формальдегида (0,5 л на 1 м2 поверхности при экспозиции 1 ч); 2%-ный раствор перекиси водорода с добавлением 0,1% молочной кислоты. При аэрозольной дезинфекции используют 30--40%-ный раствор формальдегида из расчета 20мл на 1 м3 помещения при экспозиции 24 ч, температуре воздуха не ниже 15°С, относительной влажности -- не менее 60%.

Для дезинфекции помещений в промышленных свиноводческих комплексах применяют 4%-ный горячий раствор едкого натра, 2%-ный раствор хлорамина или гипохлора„ содержащий 3% активного хлора при расходовании растворов из расчета 0,5 л на 1 м2 помещения при экспозиции 1 ч. Перед дезинфекцией проводят тщательную механическую очистку помещений и орошение наиболее загрязненных поверхностей горячим (не ниже 70°С) 2%-ным раствором едкого натра или демпа из расчета 0,5 л на 1 м2 однократно, горячим 5%-ным раствором кальцинированной соды двукратно с интервалом 30 мин.[4,10]

Список литературы

1. Гусев М.В. Микробиология: Учебник для вузов. - 4-е изд., - М.: Академия, 2007. - 464 с.

2. Емцев В.Т. Микробиология: Учебник для вузов / Емцев В.Т Мишустин Е.Н. - 5-е изд.; перераб. и доп. - М.Дрофа.2005. - 448 с.

3. Колычев Н.М. Ветеринарная микробиология: Учебник для вузов, - 3-е изд., перераб. и дп. - М.:Колос, 2003; М.: Колос, 2003. - 432 с.

4. Колычев Н.М., Госманов Р.Г., Ветеринарная микробиология и иммунология: учебник для вузов - 3-е издание. - М.: Колос, 2005. - 432 с.

5. Медицинская микробиология./ Под ред. Покровского В.И.. - М., ГЭОТАР, 1998.

6. Микробиология: Учебник дл вузов / О.Д.Сидоренко, Е.Г.Борисенко, А.А.Ванькова, Л.И.Войнова. - М.: Инфа_М, 2005. - 287 с.

7. Современная микробиология: Прокариоты: В 2-х т.: Пер. с англ. Т.1 / Под ред. Й.Ленгелера, Г.Древиса, Г.Шлегеля. - М.:Мир, 2005. - 656 с.

8. Современная микробиология: Прокариоты: В 2-х т.: Пер. с англ. Т.2 / Под ред. Й.Ленгелера, Г.Древиса, Г.Шлегеля. - М.:Мир, 2005. - 496 с.

9. Степаненко П.П. Микробиология молока и молочных продуктов: Учебник дя вузов. - М., 2006. - 415 с.

10. Экология микроорганизмов: учебник для вузов / Под ред. А.И.Нетрусова. - М.: Академия, 2007. - 272 с.

11. Электронный дидактический комплекс по ветеринарной микробиологии и иммунологии / В.Н. Кисленко, Н.М. Колычев, В.И. Плешакова, Е.С. Воронин, Р.Г. Госманов. - Гриф МСХ РФ, 2004. - 419с.

Размещено на Allbest.ru