Общая характеристика березового гриба (чаги)

Фенолы, имеющие орто- диоксигруппы, окрашиваются в зеленый, а три рядовые оксигруппы в синий цвет.

Осадок № 5 с раствором железоаммониевых квасцов не изменяет свою окраску, что подтверждает наличие лишь одной фенольной группы.

При вычислении Rf кислот и сравнение с литературными данными было доказано наличие п-кумаровой кислоты (Таблица 2.11).

Таблица 2.11 - Хроматографический анализ фенолокислот в различных системах растворителей

№	Кислоты	Rf фенолокислот (литературные данные)	Кач. реакции фенолокислот
		Система 4	Система 5	УФ	ДзПНА	ЖАК
1	п-окибензойная	0.87	0.28	-	роз.	-
2	ванилиновая	0.89	0.40	-	фиолет.	-
3	протокатеховая	0.83	0.05	тем	сер-син	зел.
4	галловая	0.60	0.00	т.ф	св-кор	син.
5	п-кумаровая	0.93	0.30	син	син	-
Результаты исследуемого осадка №5
1	Осадок №5	0.93	0.30	син.	син.	-

Таким образом, осадок №5 идентифицирован как фенолокислота - п-кумаровая (Рисунок 2.12).

Данная кислота была выделена как индивидуальное вещество (Рисунок 2.10). Были определены физико-химические параметры (Т_плав=210-212°С, что соответствует литературным данным п-кумаровой кислоты).

Рисунок 2.12 - п-кумаровая кислота

ИК-спектр н см^-1 (таблетка КВr): 3395 см^-1 (валентные колебания ОН-группы); 2930 см^-1 (углеродный скелет ароматического кольца); 1700 см^-1 (валентные колебания С=О в карбонильной группе); 1650 см^-1 (парадизамещенные в бензойное кольцо); 1450 см^-1 (колебания ОН-группы в кислотах); 1390 см^-1 (колебания ОН-группы в фенолах); 1040 см^-1 (колебания СН-связи).

Физические характеристики подтверждают предположения о том, что осадок № 5 представлен в виде п-кумаровой кислоты (Рисунок А.1).

Таким образом, в гексановой фракции выделена и идентифицирована п-кумаровая кислота, содержание, которой от воздушно-сухого сырья составляет 0.02 %. Кроме того, идентифицироаны терпеновые соединения, а именно бетулиновая кислота, бетулин и лупеол.

Исследование надосадочной жидкости гексанового экстракта

Полученный гексановый экстракт упариваем, получаем раствор слабо-желтого цвета. Раствор сушим при нормальных условиях, получаем белый осадок с желтым маслообразным вкраплением, которое отмываем петролейным эфиром. Петролейный экстракт упариваем, получаем желтую маслообразную жидкость с массой 0.02г [25].

Хроматографирование полученной маслообразной жидкости в системе растворителей гексан - диэтиловый эфир - ледяная уксусная кислота (73:25:2), характерная для анализа липидов.

На хроматограмме наблюдаем наличие размытого, характерного для высших жирных кислот, пятна с Rf от 0.46 до 0.58, с голубым свечением. Из этого можно сделать вывод о наличии высших жирных кислот в маслообразной жидкости из гексанового экстракта.

После того как отделили белый осадок от желтой маслянистой жидкости, проводим хроматографический анализ осадка. Осадок растворяем в этиловом спирте, хроматографируем в системе растворителей: хлороформ - бензол - этилацетат (4:8:1). Полученную хроматограмму просматриваем в видимом и УФ-свете, проявляем ФМК.

При хроматографическом анализе осадка выделены пять пятен. Распределение пятен в различных системах растворителей показано в таблице 2.12.

Таблица 2.12 - Хроматографический анализ осадка гексанового экстракта

№ пятна	Rf пятна	Проявитель
		Видимый свет	УФ	Пары NH3	5% спирт. р-р AlCl3	5% водн. р-р Na2CO3	ФМК
1	0.00	жел	жел	жел	жел	жел	син
2	0.20	св-жел	св-жел	яр. жел	жел	св-жел	син
3	0.40	-	-	-	-	-	син
4	0.57	-	-	-	-	-	син
5	0.73	-	гол	-	гол	гол	син

Исходя из полученных данных можно предположить, что в осадке обнаружена фенолокислота, так как пятое пятно флюоресцирует голубым свечением, а при опрыскивании ФМК проявляется синим цветом. Два пятна можно отнести к терпеновым соединениям. Идентификацию проводили при «свидетелях» - бетулине и лупеоле, которые являются основными терпеноидами бересты березы. Третье и четвертое пятна оказались идентичны бетулину (Rf=0.40) и лупеолу (Rf=0.57) соответственно. Второе пятно представлено в виде флавоноида, а именно флавонолы. Для подтверждения проводили качественные реакции на флавоноиды, для этого использовали пары аммиака (NH₃), 5 % водный раствор соды (Na₂CO₃), 5 % спиртовый раствор хлорида алюминия (AlCl₃).

При проведении цветных реакций выявили соответствие второго пятна флавонолу, так как реакция на 5 % спиртовый раствор хлорида алюминия дает желтое окрашивание, 5 % водный раствор соды давал светло-желтое окрашивание, а пары аммиака - ярко-желтое окрашивание. Первое пятно не идентифицировано.

В результате хроматографического анализа надосадочной жидкости можно сделать вывод о том, что в надосадочной жидкости находятся фенолокислоты, терпеновые соединения (бетулин, лупеол) и флавоноиды (флавонолы).

2.3.2 Исследование толуольного экстракта

Экстракцию чаги проводим по схеме (Рисунок 2.8) в аппарате Сокслета (Рисунок 2.6) при температуре 111°С (Т_кип растворителя). Полученный экстракт упариваем до 10мл.

Полученный после экстракции раствор (экстракт) изучаем с помощью ТСХ. Для этого на пластинки «Silufol» наносим анализируемый экстракт. Путем предварительного подбора выявляем наиболее подходящие системы растворителей:

1. хлороформ - бензол - этилацетат(4:8:1);

2. бензол - хлороформ - муравьиная кислота - этанол - этиловый эфир (30:5:5:5:10);

Первая система часто применяется для терпеновых соединений, которая хорошо показала разделение фенолокислот и терпеновых соединений, а вторая система хорошо разделяет малополярные соединения.

Полученные хроматограммы высушиваем при комнатной температуре, просматриваем их в видимом и УФ-свете, проявляем ФМК, 5 % водным раствором соды, 5 % спиртовым раствором хлорида алюминия, парами аммиака (Таблица 2.13). Хроматографирование в первой системе дало наибольшее разделение веществ (6 пятен). В обеих системах наблюдаем флюоресценцию голубым цветом, пятна с Rf₁=0.84 и Rf₂=0.77, которые при опрыскивании ФМК окрашиваются в синий цвет, что предполагает наличие фенолокислот.

Пятна 2, 3 и 4 с Rf₁=0.22; Rf₂=0.47; Rf₃=0.63 соответственно, не флюоресцируют в УФ-свете, а с ФМК дают синее окрашивание, что дает основание отнести эти вещества к терпеноидам. Их идентификацию проводили при «свидетелях» - бетулиновой кислоте, бетулине и лупеоле, которые являются основными терпеноидами бересты березы. Пятна 2, 3 и 4 оказались идентичны бетулиновой кислоте (Rf=0.22), бетулину (Rf=0.47) и лупеолу (Rf=0.63) соответственно.

Таблица 2.13 - Хроматографический анализ толуольного экстракта

№ пят-на	Rf пят-на	Система 1	Rf пят-на	Система 2
		Вид. свет	УФ	ФМК		Вид. свет	УФ	NH3	5% вод. р-р Na2CO3	5% спирт. р-р AlCl3	ФМК
1	0.00	св. жел	жел	син	0.23	св. жел	тем	жел	жел	св. жел	син
2	0.22	-	-	син	0.30	св. жел	тем	жел	жел	жел-зел	син
3	0.47	-	-	син	0.40	св. жел	гол	-	-	-	-
4	0.63	-	-	син	0.77	-	гол	-	-	-	син
5	0.66	-	гол	-
6	0.84	-	гол	син

При просматривании хроматограммы в видимом и УФ-свете на старте видно желтое пятно, которое характерно для флавоноидов.

Во второй системе наблюдается частичное разделение флавоноидов с Rf= 0.23 и Rf = 0.30. Однако в данной хроматограмме можно наблюдать другие индивидуальные компоненты, такие как фенолокислоты, стеролы.

Наличие стеролов с Rf₁=0.66 и Rf₂=0.40, подтверждается качественными реакциями с серной кислотой (H₂SO₄), дающая характерное розовое окрашивание.

При опрыскивании хроматограммы 5 % водным раствором соды, 5 % спиртовым раствором хлорида алюминия и парами аммиака, наблюдали изменение окраски пятен, характреных для флавоноидов, а именно флавонов и флавонолов.

В результате хроматографического анализа толуольного экстракта в различных системах растворителей можно сделать вывод о том, что в толуольном экстракте обнаружены фенолокислота; терпеновые соединения (бетулиновая кислота, бетулин и лупеол); флавоноиды (флавоны и флавонолы); стеролы.

Исследование надосадочной жидкости толуольного экстракта

Полученный толуольный экстракт упариваем, получаем раствор слабо-желтого цвета. Раствор сушим при нормальных условиях, получаем бледно-желтый осадок с желтым маслообразным вкраплением, которое отмываем петролейным эфиром. Петролейный экстракт упариваем, получаем желтую маслообразную жидкость с массой 0.03г.

Проводим хроматографический анализ в системе растворителей гексан - диэтиловый эфир - ледяная уксусная кислота (73:25:2), характерная для анализа липидов [25]. На хроматограмме наблюдали наличие размытого, характерного для высших жирных кислот, пятен с голубым свечением из чего можно сделать вывод о наличии высших жирных кислот в толуольном экстракте.

2.3.3 Исследование этилацетатного экстракта

Этилацетатный экстракт получаем по схеме (Рисунок 2.8) при экстрагировании чаги этилацетатом при температуре 77 °С (Т_кип растворителя).

После предварительной экстракции полученный экстракт упариваем до 10 мл, охлаждаем. Экстракт сливаем и оставляем, который испарятся при нормальных условиях, в результате чего выпадает черный осадок с массой 0.22 г, выход составил 0.55 %.

Исследование надосадочной жидкости этилацетатного экстракта

Проводим хроматографирование этилацетатного экстракта с помощью тонкослойной хроматографии на пластинках «Silufol».

Для этого использовали различные системы растворителей:

1. хлороформ - бензол - этилацетат (4:8:1);

2. бензол - хлороформ - муравьиная кислота - этанол - этиловый эфир (30:5:5:5:10).

Полученные хроматограммы просушиваем при комнатной температуре, просматриваем их в видимом и УФ-свете, проявляем ФМК, 5 % водным раствором соды, 5 % спиртовым раствором хлорида алюминия, парами аммиака (Таблица 2.14).

Таблица 2.14 - Хроматографический анализ этилацетатного экстракта

№ пятна

Rf пятна

Система 1

Rf пятна

Система 2

Вид. свет

УФ

ФМК

Вид. свет

УФ

NH3

5%р-р Na2CO3

5% р-р AlCl3

ФМК

1

0.00

кор

жел

син

0.19

кор

жел

жел

жел

жел

син

2

0.36

-

-

син

0.30

кор

тем

тем

бл-жел

кор

-

3

0.46

-

-

син

0.37

-

тем.жел

тем

бл-жел

кор

-

4

0.54

-

гол

син

0.59

-

гол

-

-

-

син

Хроматографирование в системах 1 и 2 дало полное разделение веществ (4 пятна). В обеих системах наблюдали флюоресценцию голубого цвета, пятна с Rf₁=0.54 и Rf₂=0.59, которые при опрыскивании ФМК окрашиваются в синий цвет, что предполагает наличие фенолокислот. Пятна 2 и 3 в системе 1 с Rf =0.36 и Rf=0.46 не флюоресцируют в УФ-свете, а с ФМК дают синее окрашивание. Идентификацию проводили при «свидетелях» - бетулине и лупеоле, которые являются основными терпеноидами бересты березы. Пятна 2 и 3 оказались идентичны бетулину (Rf=0.36) и лупеолу (Rf=0.46).

При просматривании хроматограммы в видимом и УФ-свете на старте видно желтое пятно, предполагаем о наличии флавоноидов.

В системе 2 наблюдается частичное разделение флавоноидов с Rf=0.30 и Rf = 0.37. Однако в данной хроматограмме можно наблюдать и другие индивидуальные компоненты, такие как фенолокислоты, стеролы.

Наличие стеролов с Rf =0.37 подтверждается качественной реакцией с серной кислотой, дающая характерное розовое окрашивание.

При опрыскивании хроматограммы 5 % водным раствором соды, 5 % спиртовым раствором хлорида алюминия и парами аммиака, наблюдали изменение окраски третьего пятна, характерная для флавоноидов, а именно изофлавона.

В результате хроматографического анализа этилацетатного экстракта в различных системах растворителей были идентифицированы: фенолокислота; терпеновые соединения (бетулин и лупеол); флавоноиды (изофлавон); стеролы.

Исследование этилацетатного осадка

Этилацетатный осадок последовательно растворяем в различных растворителях с повышающимся градиентом полярности хлороформ, диэтиловый эфир, этиловый спирт. В хлороформе и диэтиловом эфире этилацетатный осадок полностью не растворяется, а раствор приобретает желтоватую окраску. В этиловом спирте этилацетатный осадок растворяется полностью.

В дальнейшем проводим хроматографирование полученных растворов этилацетатного осадка с помощью ТСХ на пластинках «Silufol».

Для этого использовали следующую систему растворителей:

1. бензол - хлороформ - муравьиная кислота - этанол - этиловый эфир (30:5:5:5:10).

Полученные хроматограммы высушиваем при комнатной температуре, просматриваем их в видимом и УФ - свете, проявляем фосфорномолибденой кислотой и специфическими проявителями.

Исследование этилацетатного осадка (смыв хлороформом)

При хроматографическом анализе этилацетатного осадка (смыв хлороформом) определяем 10 пятен. Распределение пятен в системе растворителей показано в таблице 2.15.

Таблица 2.15 - Хроматографический анализ этилацетатного осадка (смыв хлороформом)

Rf пятна	Проявители
	Вид. свет	УФ	ПарыNH3	5% вод. р-р Na2CO3	5% спирт. р-р AlCl3	ФМК	Пары I2	10% KOH в метаноле
0.00	кор	кор	кор	тем. кор	св. кор	-	кор	кор
0.09	св. жел	жел	св. кор	св. кор	-	-	яр. жел	оранж
0.22	св. жел	жел-зел	св. кор	св. кор	-	-	жел	оранж
0.28	жел	тем	яр. жел	жел-кор	св. жел	жел	яр. жел	яр. жел
0.38	жел	жел	тем	-	св. жел	-	св.кор	кор
0.50		св. жел	тем	-	-	-	св.кор	кор
0.66	-	-	-	-	-	син	-	-
0.78	-	гол	-	-	-	-	св.кор	гол
0.84	-	-	-	-	-	син	-	-
0.91	-	гол	-	-	-	син	св.кор	гол

Предполагаем, что в этилацетатном осадке (смыв хлороформом) содержится фенолокислота (10 пятно), так как десятое пятно флюоресцирует голубым цветом, а при опрыскивании ФМК проявляются синим цветом.

Пятна 9 и 7 можно отнести к терпеновым соединениям, так как терпеновые соединения не флюоресцируют в УФ-свете, а с ФМК дают синее окрашивание. Идентификацию проводим при «свидетелях» - бетулине и лупеоле, которые являются основными терпеноидами бересты березы. Пятна 9 и 7 оказались идентичны бетулину (Rf=0.66) и лупеолу (Rf=0.84) соответственно.

При просматривании хроматограммы в УФ - свете, было обнаружено четвертое пятно флуоресцирующее желтым свечением, предположительно - флавоноид. Для идентификации проводим качественные реакции на флавоноиды. Для этого используем следующие реактивы: пары аммиака, 5 % водный раствор соды, 5 % спиртовый раствор хлорида алюминия. Данные реактивы дали качественные реакции на флавоноиды, а именно флавонол [28].

Оставшиеся пятна 2, 3, 5, 6, 8 идентифицированы, как кумарины. Идентификация проводилась с помощью специфических проявителей, таких как: пары йода (I₂), 10 % гидроксид калия (KOH) в метаноле. При опрыскивании специфическими проявителями пятна меняли свою окраску, т.е. приобретали коричневые, оранжевые цвета [15]. Пятно 1 идентифицировано как полифенол.

В результате хроматографического анализа этилацетатного осадка (смыв хлороформом) в системе растворителей бензол - хлороформ - муравьиная кислота - этанол - этиловый эфир (30:5:5:5:10) были идентифицированы: фенолокислота; терпеновые соединения (бетулин и лупеол); флавоноиды (флавонолы); стеролы; кумарины; полифенолы.

Исследование этилацетатного осадка (смыв диэтиловым эфиром)

При хроматографическом анализе этилацетатного осадка (смыв диэтиловым эфиром) определяем 4 пятна. Распределение пятен в системе растворителей показано в таблице 2.16.

Предполагаем, что в этилацетатном осадке (смыв диэтиловым эфиром) содержится фенолокислота (4 пятно), так как четвертое пятно флюоресцирует голубым цветом, а при опрыскивании ФМК проявляются синим цветом.

При просматривании хроматограммы в УФ - свете, было обнаружено второе пятно темного цвета, предположительно - флавоноид. Для идентификации проводим качественные реакции на флавоноиды. Для этого используем следующие реактивы: пары аммиака, 5 % водный раствор соды, 5 % спиртовый раствор хлорида алюминия. При опрыскивании хроматограммы специфическими проявителями второе пятно меняло свою окраску, от желтого до темного цвета [28].

Оставшиеся пятна идентифицированы, как антрохиноны также с помощью специфических проявителей, таких как: пары I₂, 10 % KOH в метаноле. При опрыскивании специфическими проявителями пятна меняли свою окраску, приобретая более насыщенный цвет [15].

Таблица 2.16 - Хроматографический анализ этилацетатного осадка (смыв диэтиловым эфиром)

№ пятна	Rf пятна	Проявители
		Вид. свет	УФ	Пары NH3	5% вод. р-р Na2CO3	5% спирт. р-р AlCl3	ФМК	Пары I2	10% KOH в мет.
1	0.74	-	гол	роз	-	-	-	-	гол
2	0.81	жел	тем	яр. жел	жел	жел	-	кор	жел
3	0.84	-	жел	жел	-	-	-	-	тем
4	0.94	-	гол	-	-	-	-	-	син

В результате хроматографического анализа этилацетатного осадка (смыв этиловым эфиром) в системе растворителей бензол - хлороформ - муравьиная кислота - этанол - этиловый эфир (30:5:5:5:10) можно сделать вывод о том, что в этилацетатном осадке (смыв этиловым эфиром) обнаружены фенолокислота; флавоноиды (флавонолы); антрохиноны.

Исследование этилацетатного осадка (смыв этиловым спиртом)

При хроматографическом анализе этилацетатного осадка (смыв этиловым спиртом) определяем 5 пятнен. Распределение пятен в системе растворителей показано в таблице 2.17.

Предполагаем, что в этилацетатном осадке (смыв этиловым спиртом) содержится фенолокислота (5 пятно), так как пятое пятно флюоресцирует голубым свечением, а при опрыскивании ФМК проявляются синим цветом.

При просматривании хроматограммы в УФ - свете, было обнаружены пятна 2, 3, 4, флюоресцирующие светло-желтым и желтым свечением, предположительно - флавоноиды. Для идентификации проводим качественные реакции на флавоноиды. Для этого используем следующие реактивы: пары аммиака, 5 % водный раствор соды, 5 % спиртовый раствор хлорида алюминия. При опрыскивании хроматограммы специфическими проявителями пятна меняли свою окраску, пятна 2 и 3 с желтого до красного, что позволяет их отнести к халконам, а 4 пятно от светло-желтого до желтого, что относит его к флавонолам [28].

Пятно 1 идентифицированно как полифенол.

Таблица 2.17 - Хроматографический анализ этилацетатного осадка (смыв диэтиловым эфиром)

№ пятна	Rf пятна	Проявители
		Вид. свет	УФ	ПарыNH3	5% вод. р-р Na2CO3	5% спирт. р-р AlCl3	ФМК	Пары I2	10% KOH в мет.
1	0.00	кор	тем	тем	тем	тем	-	кор	кор
2	0.61	жел	жел	красн	красн	св. жел	-	-	-
3	0.68	жел	св. жел	красн	красн	св. жел	-	-	-
4	0.77	жел	жел	жел	жел	св. жел		кор	-
5	0.96	-	гол	-	-	-	син	кор	гол

В результате хроматографического анализа этилацетатного осадка (смыв этиловым спиртом) в системе растворителей бензол - хлороформ - муравьиная кислота - этанол - этиловый эфир (30:5:5:5:10) были идентифицированы: фенолокислота; флавоноиды (флавонолы, халконы); полифенол.

2.4 Стандартизация природного сырья чаги

На современном этапе наблюдается тенденция к увеличению спроса на

лекарственные средства, получаемые на основе растительных соединений, поэтому целесообразно использовать резервы природной флоры Республики. В этом отношении интерес представляет березовый гриб - чага, который издавна применялся в народной медицине как симптоматическое средство при лечении язвенных болезней, гастритах, злокачественных опухолях, как средство, регулирующее сердечно-сосудистую и дыхательную системы.

Фармакопейная статья на лекарственное сырье чагу в качестве лекарственного начала предлагает количественное определение хромогенного комплекса чаги. Вместе с тем, в составе чаги обнаружены терпеновые соединения. Нами доказано наличие таких терпеноидов как бетулин, бетулиновая кислота, лупеол. Приведенные выше тритерпеноиды обладают противоопухолевой, противовирусной, противовоспалительной активностями. Поэтому целесообразно для стандартизации природного сырья чаги взять показатель количественного содержания тритерпеноидов. Нами предложено гравиметрическое определение суммы тритерпеноидов в чаге.

При экстракции чаги гексаном с последующим упариванием досуха полученного экстракта выделяется сумма тритерпеноидов с примесью п- кумаровой кислоты с массовой долей 0.5 % от воздушно-сухого сырья. Отработан температурно-временный режим экстракции (Таблица 2.18) [33].

В 1, 2 и 3 опыте проводим экстракцию в аппарате Сокслета (Рисунок 2.6) в течение 15, 5 и 4 часов, выход составил 0.53 %, 0.60 % и 0.12 % соответственно.

В 4, 5 и 6 опыте взяли измельченное сырье массой 2 г, добавили 40 мл растворителя - гексана, и кипятили с обратным холодильником в течение 3, 2 и 1 часов, выход составил 0.50 %, 0.50 % и 0.25 % соответственно.

Таблица 2.18 - Показатели температурно-временного режима экстракции чаги гексаном

№ опыта	Время экстракции, ч	Масса сырья, г	Масса осадка, г	Выход, %
1	15	44.88	0.24	0.53
2	5	24.94	0.15	0.60
3	4	15.54	0.02	0.12
4	3	2	0.01	0.50
5	2	2	0.01	0.50
6	1	2	0.005	0.25

Таким образом можно сделать вывод о том, что для полного выделения тритерпеновой фракции с примесью п-кумаровой кислоты из чаги гексаном можно провести экстракцию сырья в течении 2 часов методом дегирирования (кипячение с обратным холодильником). По полученным результатам можно сказать, метод дегирирования подходит для выделения суммы тритерпеновых соединений с меньшим затрачиванием времени.

Проект экспертизы природного сырья березового гриба (чаги)

Fungus betulinus (Chaga)

Березовый гриб (чага)

Собирать чагу можно в любое время года. Однако чаще всего ее заготавливают поздней осенью, зимой или ранней весной, когда на деревьях нет листьев и чагу легче заметить. Заготавливают чагу только с живых или свежесрубленных, старых берез.

Внешние признаки: готовое сырье чаги состоит из кусков неопределенной формы с черным, сильно растрескивающимся наружным слоем. Ткань нароста очень плотная, твердая. Цвет темно-коричневый с мелкими желтыми прожилками, число которых увеличивается к внутренней части нароста. Размер кусков около 10 см в поперечнике, запах отсутствует, вкус горьковатый.

Числовые показатели: влажность 13 %, зольность 9 %, экстрактивные вещества 22 %.

Хранение: березовый гриб (чагу) хранят в хлопчатобумажных мешках, в закрытом сухом, хорошо проветриваемом помещении, оберегая от сырости. Срок хранения не более двух лет.

Количественное определение: содержание тритерпеновой фракции составляет не менее 0.5 %.

Около 2-3 г измельченного сырья (чаги) (точная навеска) растворяют в 40 мл гексана, помещают в колбу емкостью 50 мл. Затем колбу соединяют с обратным холодильником, нагревают до кипения и поддерживают слабое кипение жидкости в течение 2 часов.

Извлечение охлаждают и фильтруют через бумажный фильтр. Колбу дважды ополаскивают гексаном и фильтруют через тот же фильтр. Объединенные вытяжки упариваем до суха.

Определяем выход осадка Х, (%) по формуле (2.8).

, (2.8)

где m₁ - масса полученного сухого вещества, г;

m - масса навески сырья, г.

Процентный выход суммы тритерпеноидов с примесью п-кумаровой кислоты составил 0.5 % от воздушно-сухого сырья.

Проводят хроматографический анализ полученного осадка на пластинках «Silufol» в системе растворителей хлороформ - бензол - этилацетат (4:8:1), а в качестве проявителя используют ФМК.

Полученную хроматограмму просматривают в видимом и УФ-свете, проявляют ФМК. На хроматограмме проявляются четыре пятна, которые соответствуют фенолокислоте, бетулину, бетулиновой кислоте и лупеолу (Таблица 2.19).

Таблица 2.19 - Хроматографический анализ гексанового осадка полученного методом дегирирования

№ пятна	Rf пятна	Проявитель	Вещество
		Вид.свет	УФ-свет	ФМК
1	0.87	-	гол	син	фенолокислота
2	0.63	-	-	син	лупеол
3	0.50	-	-	син	бетулин
4	0.36	-	-	син	бетулиновая кислота

В результате хроматографического анализа гексанового осадка, полученного методом дегирирования, были идентифицированы следующие классы соединений: терпеновые соединения (бетулин, бетулиновая кислота и лупеол), фенолокислота.

Заключение

Данная работа посвящена изучению химического состава и биологической активности березового гриба (чаги), на основании этого предложен проект экспертизы природного сырья.

По результатам проделанной работы сделаны следующие выводы:

1) Проведен литературный анализ химического состава березового гриба (чаги) выявил следующие биологически активные классы соединений: органические кислоты (щавелевая, муравьиная, уксусная, масляная, ванилиновая, п-оксибензойная кислоты, обликвиновая, инонотовая, агарициновая, гуминоподобная чаговая кислота), аминокислоты, витамин В₁;

2) Определены фармакопейные показатели (влажность 12.9 %, зольность 8.6 %, экстрактивные вещества 21.9 %, хромогенный комплекс 39.0 %) заготовленного сырья, значение которых соответствуют требованиям Государственной фармакопеи. По полученным данным была проведена статистическая обработка;

3) Разработана схема последовательного извлечения веществ согласно их полярности, в результате выделена фракция тритерпеновых соединений. На основании проведенных испытаний был предложен проект экспертизы природного сырья методом дегирирования (кипячение с обратным холодильником), выход фракции составил 0.5 % от воздушно-сухого сырья;

4) В наработанных экстрактах были определены следующие классы соединений: терпеновые соединения (бетулин, бетулиновая кислота, лупеол), флавоноиды (флавоны, флавононы, изофлавоны, халконы), кумарины, антрохиноны;

5) Из гексанового экстракта были выделены и идентифицированы следующие вещества п-кумаровая кислота, бетулин, бетулиновая кислота и лупеол.

6) Биологическое испытание спиртового экстракта чаги показало выраженную умеренное бактериостатическое действие.

Список литературы

1.Гринкевич Н.И. Лекарственные растения. М.: Высшая школа, 1991. - 112 с.

2.Справочник по лекарственным растениям. М.: Металлургия, 1989. - 350 с.

3.Турова А.Д. Лекарственные растения СССР и их применение. М.: Медицина, 1967. - С. 56-59.

4.Муравьева Д.А. Фармакогназия. М.: Медицина, 1981. - С. 625-627.

5.Турова А.Д., Сапожникова Э.Н. Лекарственные растения СССР и их применение. М.: Медицина, 1983. - С. 59-64.

6.Задорожный А.М., Кошкин А.Г., Соколов С.Я. Справочник по лекарственным растениям. М.: Лесная промышленность, 1988. - С. 14, С. 62.

7.Курамысова И.И. Лекарственные растения (заготовка, хранение, переработка, применение). Алма-Ата: Кайнар, 1988. - 235 с.

8.Государственная фармакопея СССР // Под ред. А.Р. Ананьевой. - М.: Медицина, 1987. - 460 с.

9.Долгова А.А., Ладыгина Е.Я. Практикум по фармакогнозии (морфолого-анатомическое исследование лекарственного растительного сырья). - М.: Медицина, 1966. - 203 с.

10.Каукин А.В. Древо-целительство. М.: Сов. Спорт, 2000. - С. 175-180.

11.Артемова А. Береза исцеляющая и омолаживающая. М., Санкт-Петербург: Диля, 2001. - С. 29-32.

12.Балицкий К.П., Воронцова А.Л. Лекарственные растения в терапии злокачественных опухолей. Ростов: Просвещение, 1980. - С. 143-151.

13.Рычагов Г.П., Федотов А.А. О лечении больных язвенной болезнью бефунгином. //Современная Медицина. - 1973. - №12. - С. 5-9.

14.Химический анализ лекарственных растений: учебное пособие для фармацевтических вузов // Под ред. Н.И. Гринкевич, Л.И. Сафронич, - М.: Просвещение, 1983. - 176 с.

15.Куркин В.А. Современные аспекты химической классификации биологически активных соединений лекарственных растений // Фармация. - 2002. - №2. - С. 8.

16.Муравьева Д. А. Фармакогнозия. М.: Медицина, 1978. - С. 114-575.

17.Лякина М.Н. Изучение состава суммы терпеноидов настоек гомеопатических милефолиум, полученных из свежего и высушенного сырья // Химико-Фармацевтический журнал. - 2002. - №8. - С. 37.

18.Зорина А. Д., Фокина Г. А. Тритерпеноиды родов семейства Lamiaceae флоры России: обзор разнообразия; состав у Dracocephalum multicolor kom // Растительные ресурсы. - 2002, № 38. - С. 60.

19.Мугетдинов Н.М., Паршина Г. Н. Лекарственные растения. М.: Медицина, 1980. - С. 29.

20.Государственная Фармакопея СССР, М.: Медицина, 1968. - 305 с.

21Поляков В.В., Адекенов С.М. Биологически активные соединения рода Populus L и препараты на их основе. - Алматы.: ?ылым, 1999. - 176 с.

22.Краткая химическая энциклопедия // Под ред. И. А. Кнунянц. М.: Просвещение, 1967. С. 256.

23.Шиврина А.Н., Маслова Р.А. //Почвоведение. 1969. - № 11. С. 63-67.

24.Общая биохимия: учебное пособие для студентов хим. специальностей // Под ред. Ю.Б. Филипповича. - М.: Просвещение, 1975. - 410 с.

25.Машковский М.Д. Лекарственные средства // В 2 частях. - М.: Медицина, 1986. - часть 2. - с. 6.

26.Карагезян К.Г., Карапетян Э.Т. Вопросы медицинской химии. М.: Медицина, 1988. - С. 51.

27Пашинина Л.Т. Методические указания к практикуму по количественному и качественному анализу природных полифенолов и углеводов. Алма-Ата: Кайнар, 1979. - 46 с.

28.Bryant E.T. A note of the Digerentation between flavonoids glycosides and their aglycones .- J. Amer. Chem.. Soc., 1950, v39, p.480-491.

29.Сатимов Г.Б., Маматханов А.У. Технология получения суммарного флавоноидного препарата из Thermopsis alterniflora, его лекарственной формы и оценка их гиполипидемической активности // Химико-Фармацевтический журнал. - 2003. - №4. - С. 42.

31. Демьяненко А.В. Математические и компьютерные методы в химии: Петропавловск: СКГУ им. М. Козыбаева, 2006. - 81 с.

32. Деффель К. Статистика в аналитической химии. М.: Мир, 1994. - 268 с.

33. Лежнева М.Ю., Михеева Т.А., Малышкина Е.В. Лекарственное начало чаги - терпеновые соединения // В кн.: Терпеноиды: достижение и перспективы применения в области химии, технологии производства и медицины: Сборник трудов международной научно-практической конференции. - Караганда, 2008. - С. 398.

Размещено на Allbest.ru