Получение белка пищевого и кормового назначения при помощи высших базидиомицетов

Размещено на http://www.allbest.ru/

ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ

ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕДЖЕНИЕ ВЫСШЕГО ОБРАЗОВАНИЯ

«НАЦИОНАЛЬНЫЙ ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ

МОРДОВСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ

ИМЕНИ Н.П. ОГАРЕВА»

Факультет биотехнологии и биологии

Кафедра биотехнологии, биоинженерии и биохимии

РЕФЕРАТ

по дисциплине: История биоинженерии и биотехнологии

на тему: Получение белка пищевого и кормового назначения при помощи высших базидиомицетов

Выполнила: студентка 202 группы

специальности Биоинженерия и биоинформатика

Русяева Валентина

Проверил: к.б.н., доцент Мокшин Е. В.,

к.б.н., доцент Пестов Н. А.

Саранск 2018

Введение

грибной культивирование белок микроорганизм

Белкия вляются необходимыми элементами питания животных и человека. На данный момент существует дефицит и самого белка, и его источников. Во-первых, это связано с постоянным ростом численности населения. Традиционные источники белка (животноводство и растениеводство) уже не в состоянии обеспечить все человечество необходимым количеством пищи. Во-вторых, в развитых странах около половины белка затрачивается на нужды животноводства, которое определенно еще долго будет непосредственно главным источником белка для потребления человеком.

Таким образом, нахождение оптимальных альтернативных источников белка как пищевого, так и кормового назначения сейчас является актуальной задачей.

Альтернативным источником получения белка может служить микробиологический синтез с использованием различных организмов, например, дрожжей, некоторых водорослей, высших базидиальных грибов и т.п. Технологии такого производства зародились относительно недавно и обладают рядом преимуществ: независимость от времени года, высокий уровень автоматизации процесса, возможность использования самых различных видов сырья, в т. ч. отходов сельского хозяйства и промышленности и т.д. В данной работе подробно рассмотрено получение белка с помощью высших базидиальных грибов.

1. История получения белка с помощью микроорганизмов

Первоначально при развитии технологии микробиологического производства предпочтение отдавалось дрожжам и бактериям. Первым предложил использовать пивные дрожжи как источник белка в питании Дельбрюк в 90-е годы XIX века. Первые заводы по выращиванию пищевых дрожжей на мелассе были открыть в Германии в первую мировую войну. После первой мировой войны приступили к производству кормовых дрожжей.

В 1935 г. в СССР был пущен первый опытный завод по производству кормовых дрожжей на основе использования соломы, кукурузных кочерыжек и древесных опилок, предварительно гидролизованных серной кислотой. Позднее стали использовать стебли хлопчатника, багасса (отход сахарного тростника, после измельчения и отделения от него сока). Во время второй мировой войны во многих странах, в том числе в Германии и СССР развернулось широкое производство пищевых дрожжей.

Разведение высших базидиомицетов с целью получения плодовых тел для употребления в пищу началось намного раньше, например, в России выращиванием шампиньонов начали заниматься еще в середине XVIII века, а во Франции с середины XVII.

Исследования высших базидиомицетов в культуре были начаты в 80-е годыXIX века, но вопрос о возможности использования мицелиальной культуры этих грибов, в т. ч. для получения белка, возник только в 50-егоды XX. Работы Хумфельда по выращиванию в глубинной культуре шампиньонов стали началом для дальнейших исследований по культивированию макромицетов и появились методы, широко используемым в современной микробиологической промышленности.

2. Получение белка с помощью базидиомицетов

2.1 Перспективы

Было показано, что недостаток бактерий и дрожжей, как продуцентов белка, заключается в высоком содержании нуклеиновых кислот (до 16% и 12% соответственно). У человека избыток солей мочевой кислоты может способствовать развитию ряда заболеваний выделительной системы. Кроме того, потребление дрожжей выше 30 г в сутки часто приводит к различным по степени тяжести проявлениям желудочно-кишечных расстройств, аллергическим реакциям, поражениям кожи, болям в суставах и т.д.Снижать содержание нуклеиновых кислот в биомассе, употребляемой на корм животным, нет необходимости, так как мочевая кислота, образующаяся при разрушении азотистых оснований, превращаются в организме животных в алантоин, который легко выделяется с мочой. В это же время у высших базидиомицетов содержание нуклеиновых кислот колеблется в пределах 0,9% - 2%.

Основная часть кормового белка в промышленном масштабе производится на очищенных жидких парафинах, природном газе, а также спиртах и кислотах. Но возрастает дефицит этого сырья, и растут цены. В том числе, это обстоятельство стимулирует поиск новых видов сырья для микробиологического синтеза и новых высокоактивных продуцентов белка.

Перспективным видом сырья является различная вторичная растительная биомасса: разнообразные целлюлозосодержащие и лигнин содержащие отходы пищевой, деревообрабатывающей, гидролизной промышленности, сельскохозяйственного производства и т.п., которые до сих пор не нашли крупномасштабного использования, но при этом являются доступным и дешевым. К настоящему времени в мировой литературе уже имеется много сообщений о разработке технологических приемов получения белковых продуктов на основе вторичного растительного сырья. Особенно интенсивно проводились и проводятся исследования по культивированию на лигноцеллюлозных отходах дереворазрушающих базидиомицетов, которые обладают высокой целлюлозной и лигнолитической активностью.

Съедобные базидиальные грибы занимают особое место среди потенциальных продуцентов белка. Плодовые тела грибов естественной среды издавна широко используются в пищевом рационе человека и обладают приятным для него запахом из-за синтеза ароматических метаболитов.

Съедобность является категорией, включающей понятия вкусовой, физиологической и эстетической приемлемости (Cochran, 1978).По литературным данным приблизительно 2000 видов из 30 родов базидиомицетов являются съедобными. Из них всего лишь 20 видов выращивают в коммерческих целях и 5 - 6 культивируют в промышленном масштабе. Основными являются Agaricusbisporus(шампиньон), Lentinusedodes(шиитаке), Pleurotusostreatus(вешенка).

2.2 Химический состав

Особенностью химического состава плодовых тел грибов является высокое содержание азотистых веществ, основная масса которых приходится на долю белков. В сухом веществе грибов:

· чистого белка от 20 до 30%,

· жиров от 1,5 до 10%,

· углеводов 17-60%,

· нуклеиновых кислот 0,9-2%.

Ряд авторов отмечают, что некоторые виды базидиомицетов по питательной ценности могут стоять в одном ряду с мясом, молоком, маслом и значительно превосходят бобовые культуры, другие же могут быть сравнены с овощами.

Из минеральных компонентов в грибах:

· калия от 33 до 65%,

· фосфора от 6 до 28%,

· магния от 0,1 до 2,5%,

· кальций присутствует в незначительных количествах.

В грибах также обнаружены следующие микроэлементы: марганец, цинк, литий, ванадий, рубидий, медь, железо, кобальт, молибден, мышьяк и серебро.

Содержание витаминов в плодовых телах съедобных базидиомицетов в расчете на сухой вес составляет:

· тиамин - от 1,0 до 130 мг/кг,

· ниацин - от 341 до 800 мг/кг,

· рибофлавин - от 3,6 до 210 мг/100 г,

· аскорбиновая кислота -- от 48 до 450 мг/ 100 г,

· цианокобаламин от 0,007 до 0,100 мг/кг.

Также важной характеристикой являются перевариваемость и усвояемость. Перевариваемость плодовых тел белого гриба и шампиньона в опытах invitro составляла 67-85% и 64-71% соответственно. Питательная ценность белка шампиньона в опытах по кормлению крыс определена в 57%, а в исследованиях на людях - 72-83%. Перевариваемость сырого белка гриба в опытах invitro составляла около 61%, а шампиньона - 58%. Усвояемость биомассы базидиомицетов в значительной степени зависит от наличия хитина, содержание которого может составлять 60%. Образование и накопление этого структурного компонента характерны для каждого вида грибов, но зависят и от условий культивирования, возраста культуры. В то же время известно, что полисахариды грибов обладают иммунологической специфичностью, что может оказать неблагоприятное воздействие на организм человека.

В качестве показателя питательности мицелия, чаще всего используется анализ незаменимых аминокислот. В литературе имеются ограниченные данные по аминокислотному составу белка культурального мицелия высших базидиомицетов, получаемого при глубинном выращивании. Незаменимые аминокислоты у различных видов составляют от 10 до 50% от суммы аминокислот и примерно 70-75% из них связаны в белках. При исследовании аминокислотного состава белков в культуральном мицелии Pleurotusostreatus, Panustigrinus и Flammulinavelotipes обнаружено 15 аминокислот, в том числе, все незаменимые, кроме серосодержащих. В составе связанных аминокислот исследовавшихся грибов доминирующими оказались глицин, аспарагиновая и глутаминовая аминокислоты, что в целом характерно и для плодовых тел многих видов высших грибов. Показано, что более сбалансированной по аминокислотному составу является биомасса Pleurotusostreatus. Культуральный мицелий изучавшегося штамма был богаче валином, лизином, изолейцином по сравнению с плодовыми телами этого вида, что ставит культуральный мицелий Pleurotusostreatus в один ряд с грибами высокого качества.

Исследование аминокислотного состава белков - продуктов ТФФ -- свидетельствует о том, что они лимитированы по серосодержащим аминокислотам, а количество других аминокислот (валин, треонин, изолейцин, фенилаланин) превышает требуемый уровень, что дало основание рекомендовать культуры Tyromyceslacteus и Coriolusversicolor для обогащения протеином растительных субстратов (соломы и др.). Наличие полного набора незаменимых аминокислот наблюдалось и Ахмедовой при культивировании Pleurotusjstreatus на различных лигноцеллюлозных отходах методом ТФФ. Анализируя данные по аминокислотному составу мицелия дереворазрушающих базидиомицетов, следует отметить, что все не заменимые аминокислоты входят в состав белка, но уровень содержания в нем отдельных аминокислот может изменяться в зависимости от состава питательной среды и возраста культурального мицелия.

Содержание липидов в мицелии грибов является одним из важных показателей его биологической ценности. Липидная фракция биомассы базидиомицетов состоит из восков, углеводов, эфиров, стеринов, триглицеридов, жирных кислот, стеринов моно- и диглицеридов, т.е. компонентов, входящих в состав растительных масел. Определение липидов в биомассе базидиальных грибов Tyromyceslacteus, Coriolusversicolor, Panustigrinus, Coriolushirsutus, полученной ТФФ, показало, что их количество составляет 1,5 - 3,3%. В общей фракции липидов идентифицировано 17-20 жирных кислот, среди которых доминируют пальмитиновая, олеиновая и линоленовая. Липиды, синтезируемые макромицетами, характеризуются преимущественным содержанием ненасыщенных жирных кислот, при этом концентрация преобладающих - олеиновой и линоленовой жирных кислот достигает 34-36%, а в некоторых случаях - 47,5%. Изучение жирных кислот в условиях искусственных культур на средах с лигноцеллюлозами показывает, что как их количественный, так и качественный состав значительно изменяется в процессе роста. Липиды являются наиболее лабильным компонентом биомассы базидиомицетов.

2.3 Культивирование

Многочисленные исследования показали, что хорошими продуцентами белка при глубинном культивировании являются грибы родов Agaricus, Russula, Coprinus, Pleurotus и др.

В настоящее время в исследованиях преобладают два основных направления - получение белка путем глубинного культивирования на питательных средах и обогащение их белком методом твердофазной ферментации (ТФФ).

2.3.1 Глубинное культивирование

Механическое перемешивание и непрерывная аэрация создают благоприятные условия для доступа питательных веществ и кислорода ко всем клеткам мицелия, обеспечивая одинаково благоприятные условия для роста и накопления продуктов метаболизма. Глубинное выращивание проводится строго в определенных условиях, соответствующих физиологическим потребностям гриба, с соблюдением стерильности на всех этапах ферментационного процесса. Глубинный процесс более экономичен, так как при этом сокращается срок ферментации и увеличивается количество получаемого продукта. Однако глубинный метод требует специального дорогостоящего оборудования с высокой регулировкой ферментационного процесса, с подачей большого количества стерильного воздуха. Непрерывное культивирование в 3--4 раза ускоряет адаптацию по сравнению со стационарной культурой и способствует селекции более активных рас.

Для выращивания грибов, являющихся аэробами, в глубинных слоях жидкой культуры требуется дополнительная аэрация. Скорость перехода кислорода в раствор увеличивается с увеличением поверхностей раздела между газовой и жидкой фазами, а также с повышением парциального давления O2 в газовой фазе. Для увеличения поверхностей раздела прибегают к таким способам, как культивирование в тонком слое, перемешивание жидкости путем встряхивания, вращение сосудов вокруг их продольной оси, механическое перемешивание, пропускание воздуха через жидкость под давлением с помощью газораспределителя. В лабораторных условиях обычно используют выращивание со встряхиванием; на поступательной или вращательной качалке; в сосудах разной емкости с отбойниками; с барботажем через среду воздуха без дополнительного перемешивания среды; в ферментерах небольшой емкости (1--10 л) с продуванием воздуха и механическим перемешиванием. В промышленных условиях выращивание производят в ферментерах или системе ферментеров, достигающих в объеме от нескольких тысяч до нескольких десятков тысяч литров.

1) Получение посевной культуры. Одним из существенных условий успешного проведения процесса выращивания мицелия является правильная подготовка посевного материала -- инокулюма. До посева на жидкую среду мицелий сохраняют на твердых питательных средах различного состава. Хранить культуру гриба лучше в холодильнике. Вегетативный мицелий съедобных грибов, как правило, не дает спороношений, что диктует необходимость засева ферментационной среды механически измельченным мицелием.

При культивировании на качалках или в ферментерах небольшой емкости посевной мицелий выращивают обычно на жидкой среде в колбах. В случае глубинного выращивания инокулюма измельченным мицелием засевают колбы или пробирки с жидкой средой и выращивают на круговых качалках до образования заметной биомассы. Затем полученную культуру пересевают пипеткой в сосуды для проведения ферментации или же переливают в ферментер. Чтобы избежать образования длинных мицелиальных тяжей, посевную культуру можно выращивать на качалках в колбах с бусами.

В промышленных условиях инокулюм выращивают в ферментерах-инокуляторах, содержащих несколько десятков литров питательной среды.

2) Контроль параметров роста. Во время ферментации ведется контроль за основными параметрами -- накоплением биомассы, накоплением в мицелии белка или интересующих исследователя метаболитов, расходом питательных компонентов, изменением pH среды, аэрацией, скоростью перемешивания, температурой и др. Для контроля за накоплением и химическим составом биомассы, за потреблением из питательной среды отдельных компонентов проводят через определенные промежутки времени или по фазам роста гриба отбор проб. Например, оптимальная температура для роста мицелия у многих видов отмечается в пределах 25--28° С.

Одной из сложных и не решенных до конца задач является придание мицелиальной массе товарного вида -- получение сухого мицелия, частичное обезвоживание с последующим консервированием, получение обезвоженного прессованного мицелия и т. д. Способ обработки мицелиальной массы зависит главным образом от назначения получаемого продукта. Для получения грибного порошка, используемого в качестве приправы, применяют лиофильную и другие виды сушки. Для обезвоживания используют центрифугирование и т. д. При этом одной из важных задач является сохранение у конечного продукта аромата и вкуса съедобного гриба.

3) Грибной аромат. Пищевое использование культурального мицелия в значительной степени зависит от наличия грибного аромата как в свежем, так и в консервированном продукте. Поэтому с первых же шагов по глубинному культивированию мицелия съедобных грибов для пищевых целей большое внимание уделялось сохранению и усилению грибного аромата.

Еще в 1954 г Д. Зюсом был получен патент на усиление грибного запаха. Для этой цели он предлагал выращивать мицелий на оптимальной среде с добавлением лецитиновой эмульсии или любых других съедобных жиров. Для усиления запаха влажный выросший мицелий, отделенный от питательной среды, предлагалось также смешивать с поваренной солью, добавляемой в количестве не менее 2% по массе. По мнению Д. Зюса и Н. Йонкерса, поваренную соль можно заменить любыми другими пищевыми солями или другими средствами, нарушающими рост и метаболизм грибного мицелия. На усиление запаха, по мнению ряда исследователей, оказывают влияние процессы автолиза, дикариотичное состояние мицелия, добавление в питательную среду некоторых стимуляторов.

Усилению запаха и одновременно увеличению продукции мицелия способствует использование в качестве питательной среды овощных экстрактов, являющихся отходами, обогащенными углеводами. Обнаружены заметные количественные различия в образовании ароматических веществ у разных штаммов и подчеркивается целесообразность дальнейших поисков продуцентов грибного аромата.

4) Непрерывное культивирование. Основные известные работы по глубинному культивированию мицелия съедобных грибов выполнены с использованием метода периодического глубинного культивирования. Этот метод, несмотря на значительные преимущества по сравнению с поверхностным культивированием, имеет ряд недостатков, связанных с быстрым потреблением питательных веществ и накоплением продуктов метаболизма, что значительно тормозит дальнейший рост мицелия. В настоящее время разрабатывается непрерывный способ культивирования некоторых мицелиальных грибов. Непрерывное культивирование является новым этапом в культивировании микроорганизмов, но пока что оно более детально разработано для дрожжей и бактерий.

Преимущества непрерывного культивирования заключаются, прежде всего, в возможности постоянной поддержки высокой скорости роста, редко возникающей потребности в возобновлении процесса, возможности автоматического поддержания заданных оптимальных условий, стандартности получаемого продукта, экономичности обслуживания процесса и т. д. Фактор времени в непрерывной культуре в известной мере исключается. Для организмов создаются неизменные условия среды.

В том случае, когда целью является получение большого количества биомассы, обычно используют простейшую, одноступенчатую систему непрерывного культивирования, при которой культуру выращивают на каком-то одном определенном субстрате, обеспечивающем максимальный выход биомассы. Если желаемый продукт образуется в результате двух или более метаболических превращений, используют многоступенчатую систему непрерывного культивирования. Полунепрерывные системы основаны на принципе повторного и последовательного периодического культивирования, производимого в одном или нескольких культиваторах, соединенных в батареи. Теоретической основой для промышленных процессов непрерывного культивирования является управление поведением популяции.

Изучение влияния внешних факторов на синтетическую и другие виды активности микроорганизмов стало возможным благодаря появлению хемостатического метода культивирования. По этому методу выращивание производится при воздействии на культуру одного фактора и оптимизации всех остальных.

Снижение концентрации лимитирующего фактора на 50% пропорционально уменьшает плотность популяции. Удвоение концентрации остальных питательных веществ не должно влиять на плотность популяции. И. Л. Работнова отмечает, что при лимитации роста различными элементами питания происходят большие изменения в составе клеток как в зависимости от скорости роста, так и в зависимости от лимитирующего фактора. Выявление принципиальных закономерностей этих изменений открывает широкие перспективы для управления составом биомассы. При непрерывном методе выращивания культура длительно находится в состоянии «физиологической молодости».

Развитие в последнее десятилетие новых методов культивирования микроорганизмов в жидкой среде обусловило общий прогресс в этой области и поставило целый ряд новых проблем в технологическом (аппаратурном) решении процессов выращивания мицелиальных грибов. Использование этих новых методов при выращивании мицелия съедобных грибов позволит решить задачу значительного ускорения роста мицелия и дальнейшего совершенствования его питательных свойств.

2.3.2. Твердофазное культивирование

Для массового выращивания культур микроорганизмов используется метод твердофазного культивирования. Целью данного метода может быть выделение самих микроорганизмов, либо продуктов метаболизма, либо микробного измененного питательного субстрата, который применяется в производстве пищевых продуктов.

Аэрируемая масса субстрата при твердофазном культивировании может быть гомогенной, либо состоять из частиц твердого субстрата. Для твердофазного культивирования наиболее используемыми являются следующие компоненты: измельченные древесные опилки или стружки, пшеничные отруби, зерно, солома, а также добавляют различные отходы овощей, фруктов, отходов с/х проиизводства.

Твердофазное культивирование имеет ряд преимуществ по сравнению с культивированием в жидкой фазе:

· Требуют меньше затрат на оборудование и эксплуатацию;

· Состав субстрата облегчает отделение и выделение продукта;

· Из-за низкого содержания воды в субстрате, понижается степень заражения культуры-продуцента посторонней микрофлорой;

· Значительно меньший сброс сточных вод в окружающую среду.

Однако твердофазное культивирование вызывает и ряд определенных проблем:

· Отсутствие перемешивания;

· Рост микроорганизмов происходит по принципу колонизации: по мере развития происходит заполнение всего объема от точек внесения микроорганизма в субстрат. При этом возможна такая ситуация в которой отдельные зоны субстрата перенаселены клетками, в то время как большая часть субстрата остается совершенно незатронутой.

Для твердофазного культивирования используют специально созданные биореакторы - аналоги отъемно-доливного культивирования. Отъемно-доливное культивирование заключается в периодическом отъеме части субстрата и добавлением свежей питательной среды, обогащенной новыми еще неисчерпанными компонентами, необходимыми для развития культуры. Однако и такой метод культивирования не решает проблемы связанные с контролем эффективности аэрации различных участков субстрата, уровня влажности и контроля температуры. Все эти проблемы связаны с неоднородностью субстрата и трудностью его перемешивания.

В настоящее время разрабатываются ферментеры в которых субстрат имеет вид гранул, а остальные питательные компоненты подаются в ферментер в виде питательного раствора. Посевной материал, стерильная вода подаются через специально предназначенные отверстия в ферментере. Также предусмотрен отвод тепла, образующийся в результате развития культуры. Данная конструкция твердофазного ферментера предусматривает:

· стерильные условия в течение всего процесса культивирования;

· удаление тепла, без обезвоживания субстрата;

· предотвращает загрязнение посторонней микрофлорой;

· предотвращение возникновений усилий сдвига в ферментере, то есть исключение движения субстрата;

· регулирование температуры субстрата.

Однако и такой тип ферментеров имеет недостатки и самым главным из них является высокая себестоимость данного оборудования.

3. Применение

В настоящее время мицелий съедобных грибов в виде сухого грибного порошка (ГП) используют во многих странах как ценную пищевую добавку к супам и соусам, а также вводят его в овощные и мясные концентраты. Так как мицелий представляет собой нити, состоящие из фрагментов различной величины, его очень удобно добавлять в сыры, консервированные овощи и хлебные изделия, а в последние годы также в колбасы и мясные полуфабрикаты.

В нашей стране был разработан ряд препаратов для использования в пищевой промышленности. Это пантигрин на основе мицелия PanustigrinusИБК-131 и даедалин, где продуцентом является DaedaleaconfragosaГ-115, у которого 1 кг препарата содержит столько же белка, сколько 1 кг мяса. В самые последние годы ГП Pleurotusostreatus рекомендован в виде добавок к крупяным и овощным изделиям.

Помимо получения белка пищевого и кормового назначения одним из приоритетных направлений развития современных микологии и биотехнологии является использование высших базидиальных грибов для получения биологически активных соединений, в том числе -- лекарственных (белков, липидов, полисахаридов, органических кислот, ферментов и витаминов).

Заключение

По всей работе можно сделать вывод о том, что использование высших базидиальных грибов для получения белка кормового и пищевого назначения является, несомненно, актуальной и быстро развивающейся отраслью биотехнологии.

Таким образом, данные исследований позволяют рассматривать биомассу грибов, получаемую на различных средах и с помощью различных методов, как перспективный источник белка. Однако требуется тщательный подбор оптимальных условий культивирования и подробное изучение проблемы всестороннего медико-биологического обоснования практического применения этого продукта микробиологического синтеза для внедрения в широкомасштабное производство и повсеместное использование.

Список использованной литературы

1. Ревин В. В., Д. А. Кадималиев, Н. А. Атыкян Введение в биотехнологию: от пробирки до биореактора/ Учебное пособие, Саранск, издательство Мордовского университета - 2006, 255 с.

2. Чхенкели В.А., Чхенкели Г.Д. Медико-биологические аспекты исследования белковых кормовых продуктов, полученных на основе биоконверсии лигноцеллюлозных отходов базидиомицетами /Сибирский медицинский журнал (Иркутск)УДК 611 018. 1:616-006

3. Бухало А.С., Дудка И.А. Высшие съедобные базидиомицеты в чистой культуре / К.: Наукова думка - 1988, 144 c.

4. Бухало А.С. Биологические особенности лекарственных макромицетов в культуре/ Сборник научных трудов в двух томах. - 2011, Т. 1., 212 с.

5. Шадринцева А. И. Разработка технологии получения плодовых тел Grifolafrondosa (Fr)S.F. на лигноцеллюлозных субстратах Алтайского края Алтайский государственный технический университет им. И. И. Ползунова, Бакалаврская работа - 2016, 60 с.

Размещено на Allbest.ru