Создание линий Drosophila melanogaster для исследования функций гена семейства d4 в нервной системе



Глава 3. Результаты и обсуждение

3.1 Получение линий для визуализации нервной системы в организме D. melanogaster

Для исследования функций гена toothrin в нервной системе Drosophila melanogaster, необходимо было сделать эту ткань доступной для визуального анализа. Мы использовали технику двухкомпонентной системы GAL4/UAS. Данная система позволяет экспрессировать любой ген, находящийся под контролем элемента UAS, в любой клетке или ткани организма через подбор драйверов, тканеспецифически экспрессирующих белок GAL4 (Рис. 1.23). Если совместить в одном геноме GAL4-драйвер, экспрессирующийся в нервной системе, и респондер UAS-GFP, то зел?ный флуоресцентный белок GFP будет нарабатываться в нервных клетках, обеспечивая визуализацию нервной системы дрозофил любой стадии развития под флуоресцентном микроскопом.

Поскольку целью нашей работы было исследовать нервную систему мух, несущих нулевой аллель интересующего гена toothrin (tth), возникла необходимость совместить ген-респондер UAS-GFP и конструкцию, экспрессирующую белок GAL4 в нервной системе, в геноме мух tth-. В лаборатории эти три линии (драйвер, респондер и tth-мутанты) поддерживались отдельно. В качестве линии драйвера мы использовали линию, экспрессирующую белок GAL4 под промотором гена Elav brain (Elav-GAL4).

Линия с нулевой мутацией гена tth (tth{w+}), локализованного в Х-хромосоме, была получена в лаборатории 2 года назад и с течением времени могла стать гетерогенной. Чтобы получить изогенную по Х-хромосоме отводку этой линии, мы скрестили одного самца tth{w+}/Y с самками линии балансера по первой хромосоме Df(1)260-1, y1/FM4 по Схеме 1. Таким образом, все дрозофилы, которые были взяты для дальнейшего анализа, были потомками одного самца, и могли считаться изогенными.

Следующей задачей стало совмещение тр?х генетических компонентов (драйвер, респондер и мутация) в одном геноме.

Дрозофилы линии-драйвера несли драйвер Elav-GAL4 во второй хромосоме в балансированном виде, поскольку гомозиготные по Elav-GAL4 особи не выживают. Дрозофилы линии-респондера несли конструкцию UAS- GFP в третьей хромосоме. Мутация tth{w+} локализуется в первой (половой) Х- хромосоме. Получить совмещение тр?х компонентов в одном геноме (tth{w+}; Elav-GAL4/+; UAS-GFP/+) пут?м одного скрещивания невозможно. Поэтому для получения желаемой линии мы решили разбить нашу задачу на2 подзадачи:

1) синтезировать линию с мухами, гомозиготными по tth{w+} и несущую драйвер Elav-GAL4/+ - линию tth{w+}; Elav-GAL4/+.

2) синтезировать линию с мухами, гомозиготными по tth{w+} и несущую респондер UAS-GFP - линию tth{w+}; UAS-GFP.

Наконец, чтобы получить окончательный вариант с желаемым генотипом, нужно будет просто скрестить особей двух линий между собой. Такова была стратегия эксперимента, выбранная нами.

Трудность заключалась в том, что хромосома с драйверной конструкцией и хромосома с репортерной конструкцией не несли никаких маркерных мутаций. Поэтому в череде скрещиваний они могли легко «потеряться». Мухи с нулевым аллелем tth были маркированы копией гена white дикого типа (красные глаза), поскольку именно на последовательность этого гена была заменена последовательность гена tth в процессе направленного мутагенеза (И.Б. Мерцалов, неопубл.). Этих мух тоже можно было легко «потерять» в череде скрещиваний, так как последовательности трансгенных конструкций репортера и драйвера тоже несли копию этого гена, и различить их было бы невозможно. Кроме того всегда существовала угроза гомологичной рекомбинации в потомках, которая могла привести к выщеплению хромосомы с трансгенами и накоплению у них хромосомы дикого типа, не содержащей нужного аллеля. Это также мешало получению мух с заданным генотипом.

Выходом из положения стало использование хромосом-балансеров, содержащих множественные инверсии, запирающие кроссинговер, и несущие маркерные доминантные мутации, летальные в гомозиготном состоянии.

Балансерные хромосомы являются полноценным инструментом генетиков. Они позволяют не только сохранять летальные и стерильные мутации от потери их из популяции, но и поддерживать нужные комбинации мутаций в генетических скрещиваниях. Поэтому сначала нужно было заменить первые (половые) хромосомы мух линии драйвера и линии респондера на хромосому-балансер FM4, маркированную доминантной мутацией Bar (полосковидные глаза). Одновременно нужно было забалансировать хромосому II у мух линии-драйвера на хромосому-балансер SM5, маркированную доминантной мутацией Curly и хромосому III у мух линии-репортера на балансер TM6B, маркированный мутациями Tubby и Humeral. То есть получить 2 линии мух с генотипами:

1. FM4, B; Elav-GAL4/Cy

2. FM4, B; TM6B, Tb, Hu/UAS-GFP.

Для этого мы синтезировали две рабочих линии. Мухи первой линии несли балансер по первой хромосоме, совмещ?нной с балансером по второй хромосоме: FM4, B/Df(1)260-1, y1 ; SM5, Cy/ Bl1 (Схема 2). Мухи второй линии несли балансер по первой хромосоме и балансер по третьей хромосоме: FM4, B/Df(1)260-1, y1 ; TM6B, Tb, Hu/Sb (Схема 5). В итоговом скрещивании по Схеме 2 отбирали мух, имеющих фенотип: бобовидные глаза у самок, полосковидные у самцов (мутация Bar), а также загнутые крылья и толстые, укороченные щетинки (мутации Curly и Bristle1) (Рис. 3.1).

Рисунок 3.1. Фенотипическое проявление мутаций Bar, Curly и Bristle1 самки и самца (мухи с генотипом FM4, B/Df(1)260-1, y1 ; SM5, Cy/ Bl1, получены по Схеме 2).

В итоговом скрещивании по Схеме 5 отбирали мух с бобовидными глазами у самок и полосковидными у самцов (мутация Bar), укороченным телом, "волосатыми плечами" и короткими щетинками (мутации Tubby, Humeral и Stubble) (Рис. 3.2).



Рисунок 3.2. Фенотипическое проявление мутаций Bar, Tubby, Humeral и Stubble (мухи с генотипом FM4, B/Df(1)260-1, y1 ; TM6B, Tb, Hu/Sb, получены по Схеме 5).

а) сердцевидное короткое брюшко самки при мутации Tubby, б) справа укороченная куколка при мутации Tubby, слева куколка мухи дикого типа; в) проявление мутаций Stubble и Humeral у самки; г) проявление мутаций Stubble и Humeral у самца.

Далее мы использовали эти рабочие линии для балансирования хромосом мух драйвера и репортера. Балансирование хромосомы I и II у мух с драйверной конструкцией и хромосомы I и III у мух с репортерной конструкцией проводили по Схемам 4 и 7. В итоге были получены линии FM4, B; Elav- GAL4/Cy и FM4, B; TM6B, Tb, Hu/UAS-GFP.

Следующий этап подразумевал балансирование аутосом мух линии с нулевым аллелем гена toothrin. Балансирование второй хромосомы делали по Схеме 3, третьей - по Схеме 6. При этом использовали те же две синтезированные нами рабочие линии, что и в предыдущих сериях скрещиваний. В итоге были получены линии tth- ; SM5, Cy/Bl1 (Рис. 3.3) и tth- ; TM6B, Tb,Hu/Sb. Таким образом мы избавились от балансера по первой хромосоме FM4 и вывели мух, гомозиготных по нулевому аллелю tth, но с балансированными аутосомами.

Рисунок 3.3. Фенотипическое проявление мутаций Curly и Bristle1 (мухи с генотипом tth-; SM5, Cy/Bl1, получены по Схеме 3).

Далее, мы совместили драйверную (хромосома II) и репортерную (хромосома III) конструкции с нулевым аллелем гена toothrin (хромосома I) (Схемы 4 и 8 продолжение). Поскольку экспрессия конструкций не имеет фенотипического проявления, мы ориентировались по введ?нным ранее маркерным мутациям, для драйвера это особи, имеющие загнутые крылья (мутация Curly), для репортера короткое тело и "волосатые плечи" (мутации Tubby, Humeral). Генотипы мух созданных линий:



1. tth-; Elav-GAL4/Cy

2. tth-; TM6B, Tb, Hu/UAS-GFP

Таким образом, мы провели балансирование хромосом мух тр?х наших линий. А затем скомбинировали мутацию tth с драйвером и репортером (Рис. 3.4).

Рисунок 3.4. Схема финального совмещения мутации toothrin с драйвером и репортером

Такая комбинация генетических конструкций может поддерживаться в наших линиях в лабораторной коллекции сколь угодно долго. Это удобно, поскольку в любой момент в одно поколение можно будет получить экспериментальных мух, с работающей системой GAL4/UAS, как показано на рисунке 3.4.

Чтобы система GAL4/UAS заработала, и мы могли выявить нарушения нервной системы у мутантов, нужно совместить оба компонента системы в мутантном геноме, пут?м простого скрещивания мух полученных линий по Схеме 9 (Рис. 3.4). В результате нервную систему особей с генотипом tth-; Elav- GAL4/+; UAS-GFP/+ можно легко исследовать под флуоресцентным микроскопом по свечению белка GFP на любой стадии развития.

3.2 Исследование нервной системы у «нулевых» по гену tth эмбрионов D. melanogaster

Мы исследовали полученных особей с генотипом tth-; Elav-GAL4/+; UAS-GFP/+ на эмбриональной стадии развития. На рисунке 3.5 представлена нервная система эмбриона дрозофилы контрольной линии с активированной

экспрессией GFP в нервной системе. Эмбрион имеет нормальную копию гена toothrin и совмещ?нные в е? геноме конструкции драйвера и репортера: yw+; Elav-GAL4/+; UAS-GFP. Нервная система эмбриона имеет нормальную морфологию. Видны нормальные структуры мозга. Хорошо виден оптический зачаток, из которого впоследствии развиваются оптические доли мозга, ответственные за зрительные функции глаза, а также брюшная нервная цепочка. Периферические нейроны также имеют нормальную морфологию.

Рисунок 3.5 Конфокальные срезы эмбриона дрозофилы под флуоресцентным микроскопом, выявляющие: А - центральную нервную систему; Б - периферическую нервную систему. Свечение GFP визуализировали «вживую».

После получения необходимых линий, мы скрестили мух этих линий между собой (Рис. 3.4) и провели сбор суточных эмбрионов tth-; Elav-GAL4/+; UAS- GFP/+. Далее сделали фотографии нервной системы с помощью конфокального микроскопа. На них видно, что структуры мозга эмбриона имеют нарушения (Рис. 3.6, рис. 3.7). Оптический зачаток недоразвит, возможно, имеет однослойную структуру.

Рисунок 3.6. Конфокальные срезы мутантного эмбриона дрозофилы под флуоресцентным микроскопом, выявляющие: А - центральную нервную систему; Б - периферическую нервную систему.

Рисунок 3.7. Конфокальные срезы эмбрионов дрозофилы под флуоресцентным микроскопом, показывающие: А - головной мозг и оптический зачаток мух дикого типа; Б - головной мозг и оптический зачаток мутантных особей.



Периферическая нервная система дезорганизована (Рис 3.8). Видно недоразвитие отдельных групп нейронов второго сегмента (стрелка на рисунке 3.8 Б).

Рисунок3.8.Конфокальныесрезыэмбрионовдрозофилыподфлуоресцентным микроскопом, показывающие: А - периферическую систему мух дикого типа; Б - периферическую систему мутантных особей с нарушением. (Цифрами обозначены цепочки нейронов отдельных сегментов, красной стрелкой - недоразвитая группа нейронов).

Таким образом, мы получили предварительные данные, позволяющие охарактеризовать функцию гена toothrin. Эта функция связана с развитием нервной системы на эмбриональной стадии. Так как ген toothrin кодирует домен 2/3, характерный для белков семейства d4, то логично предположить, что этот именно домен отвечает за функционирование генов семейства d4 в нервной системе.

В заключение стоит отметить, что в недавних зарубежных исследованиях было показано, что белки семейства D4 могут входить в состав BAF- комплексов (SWI/SNF хроматин-ремоделлирующих комплексов позвоночных) и выступают в качестве регуляторов транскрипции (Lessard J. et al, 2007).

Было также показано, что d4-изоформа Cer-d4/Dpf3 участвует в развитии сердечной мышцы и скелетной мускулатуры. Дисфункция гена приводит к морфологическим нарушениям в сердце, а также дезорганизации миофибрилл сердечной мышцы и скелетной мускулатуры (Lange M. et al, 2008).

Ранее в нашей лаборатории были выполнены эксперименты по нокдауну 2-х генов-ортологов (drosophila-d4 и toothrin) дрозофилы с помощью РНК- интерференции, и были получены доминантно-негативные фенотипы исследованных особей, характерные при нарушениях функции генов, вовлеченных в Notch- и EGFR-сигнальные пути развития. Было обнаружено, что нокдаун по генам dd4 и tth по-разному влияет на проявление тестовой мутации с нарушениями, характерными для Notch-сигнального пути: недостаток экспрессии tth снижает проявление мутации, т.е. супрессирует ее, в то время как недостаток экспрессии dd4 усиливает проявление мутации (О.Б. Симонова, И.Б. Мерцалов, неопубл.). Эти факты, возможно, свидетельствуют о том, что гены dd4 и tth являются антагонистами и вовлечены в процессы, контролируемые Notch-сигнальным путем. Хорошо известно, что Notch-путь контролирует дифференцировку клеток по нейральному типу развития. Возможно, нарушения в нервной системе, выявленные в нашей работе, отражают нарушения этого сигнального пути.

Все эти данные свидетельствуют о несомненной важности изучаемой нами группы генов для функционирования определенных клеток, однако роль этих генов в индивидуальном развитии организма и отдельных его органов и тканей, в частности нервной ткани, до сих пор остается неясной. Однако, исходя из сравн?нных нами паттернов экспрессии белка GFP мух дикого типа и мутантных мух, можно сказать, что гены семейства d4 играют важную роль в формировании центральной и периферической нервной системы уже на эмбриональной стадии. Возможно, мутации этих генов приводят к серь?зным нарушениям или летальности. Таким образом, работы в данном направлении имеют большие перспективы, возможно дальнейшее изучение функций генов семейства d4 и конкретизация функций в нервной системе и во вс?м организме в целом.



Выводы

1. Создана гомозиготная по мутации toothrin линия, изогенная по Х- хромосоме.

2. Получена линия, удобная для визуализации нервной системы мутантов c «нулевой» функцией гена toothrin.

3. Исследована структура нервной системы у эмбрионов с «нулевой» функцией гена toothrin.

4. У эмбрионов с «нулевой» функцией гена tth выявлены нарушения развития головного мозга и оптического зачатка, а также нарушения организации периферической нервной системы.



Список использованной литературы

1. Албертс, Б., Брей, Д., Льюис, Дж., Рэфф, М., Роберте, К., Уотсон, Дж.Д. Молекулярная биология клетки: В 3-х т. 2-е изд. перераб. и доп.: Пер. с англ. Т.Н. Власик // Мир. - 1994. - Т. 1. - С. 1-521;

2. Жимул?в, И.Ф. Общая и молекулярная генетика: учебное пособие // Сибирское университетское издательство. - 2007. - С. 1-480;

3. Куликова, Д.А., Мерцалов, И.Б., Симонова, О.Б. Гены семейства d4 позвоночных животных: структурная организация и экспрессия // Онтогенез. - 2013. - Т. 44 (1). - С. 3-9;

4. Шаталкин, А.И. Регуляторные гены в развитии и проблема морфотипа в систематике насекомых / Чтения памяти Н.А. Холодковского // ЗИН РАН: СПб. - 2003. - T. 56 - С. 1-109;

5. Aasland, R., Gibson, T.G., Stewart, A.F. The PHD finger: implication for chromatin-mediated transcriptional regulation // Trends Biochem Sci. - 1995. - V. 20(2). - P. 56-59;

6. Aplin, A.C., Kaufman, T.C. Homeotic transformation of legs to mouthparts by proboscipedia expression in Drosophila imaginal discs // Mech Dev. - 1997. - V. 62. - P. 51-60;

7. Ashburner, M. Gene activity dependent on chromosome synapsis in the polytene chromosomes of Drosophila melanogaster // Nature. - 1967. - V. 214. - P. 1159-1160;

8. Babu, P., Bhat, S.L. Effect of zeste on white complementation. In Development and Neurobiology of Drosophila / Edited by Siddigi, P.Babu, L.M.Hall

// Plenum Press: New York. - 1980. - V.16. - P. 35-40;

9. Barinaga, M. A new finger on the protein destruction button // Science, 1999. - V. 286(5438). - P. 223, 225;

10. Barlow, P.N., Luisi, B., Milner, A., Elliott, M., Everett, R. Structure of the C3HC4 domain by 1H-nuclear magnetic resonance spectroscopy // J. Mol. Biol. - 1994. - V. 237(2). - P. 201-211;

11. Bate, M., Martinez Arias, A. The Development of Drosophila melanogaster // Cold Spring Harbor Laboratory Press. - 1993. - V.1. - P. 1-1558;

12. Bioukar, E.B., Deschatrette, J. Update on genetic and molecular investigations of diseases with general impairment of peroxisomal functions // Biochimie. - 1993. - V. 75(3-4). - P. 303-308;

13. Blair, S.S., Brower, D.L., Thomas, J.B., Zavortink, M. The role of apterous in the control of dorsoventral compartmentalization and PS integrin gene expression in the developing wing of Drosophila // Development. - 1994. - V. 120(7). - P. 1805-1815;

14. Bodmer, R. and Jan, Y. N. Morphological differentiation of the embryonic peripheral neurons in Drosophila // Roux Arch dev Biol. - 1987. - V. 196(2). - P. 69-77;

15. Bodmer, R, Carretto, R. and Jan, Y. N. Neurogenesis of the peripheral nervous system in Drosophila embryos: DNA replication patterns and cell lineages // Neuron. - 1989. - V. 3(1). - P. 21-32;

16. Borden, K.L.B. Ring Domains: Master Builders of Molecular Scaffolds?

// J. Mol. Biol. - 2000. - V. 295(5). - P. 1103-1112;

17. Borden, K.L.B., Freemont, P.S. The RING finger domain: a recent example of sequence-structure family // Curr Opin Struct Biol. - 1996. - V. 6(3). - P. 395-401;

18. Brand, A.H., Perrimon, N. Raf acts downstream of the EGF receptor to determine dorsoventral polarity during Drosophila oogenesis // Genes Dev. - 1994. - V. 8. - P. 629-639;

19. Brzovic, P.S., Meza, J., King, M.C., Klevit, R.E. The cancer- predisposing mutation C61G disrupts homodimer formation in the NH2-terminal BRCA1 RING finger domain // J Biol Chem. - 1998. - V. 273(14). - P. 7795-7799;

20. Buchman, V.L., Ninkina, N.N., Bogdanov, Yu.D., Bortvin, A.L., Akopian, H.N., Kiselev, S.L., Krylova, O.Yu., Anokhin, K.V., Georgiev, G.P. Differential splicing creates a diversity of transcripts from a neurospecific

developmentally regulated gene encoding a protein with new zinc-finger motifs // Nuc Acids Res. - 1992. - V. 20(21). - P. 5579-5585;

21. Butterworth, F.M., King, R.C. The developmental genetics of apterous mutants in Drosophila melanogaster // Genetics. - 1965. - V. 52(6). - P. 1153-74;

22. Chatterjee, P.K., Bruner, M., Flint, S.J., Harter, M.L. DNA-binding properties of an adenovirus 289R E1A protein // EMBO J. - 1988. - P. 835-841;

23. Chestkov, A.V., Baka, I.D., Kost, M.V, et al. The d4 Gene family in the Human Genome // Genomics. - 1996. - V. 36(1). - P. 174-177;

24. Cooper, G.M. The cell. A molecular approach // ASM Press: Washington. - 2000. P. 689;

25. Curtiss, J., Heilig, J.F. DeLIMiting development // BioEssays. - 1998. - V. 20. - P. 59-69;

26. Diakun, G.P., Fairall, L., Klug, A. EXAFS study of the zinc binding sites in the protein transcription factor TFIII A // Nature. - 1986. - P. 324, 698-699;

27. Diaz-Benjumea, F.J., Cohen, S.M. Interaction between dorsal and ventral cells in the imaginal disc directs wing development in Drosophila // Cell. - 1993. - V. 75(4). P. - 741-752;

28. Duffy, J.B. GAL4 system in Drosophila: a fly geneticist's Swiss army knife // Genesis. - 2002. - V. 34(1-2). - P. 1-15;

29. Falciani, F., Hausdorf, B., Schroder, R., Akam, M., Tautz, D., Denell, R., Brown, S. Class 3 Hox genes in insects and the origin of zen // Proc Natl Acad. Sci USA. - 1996. - V. 93(16). - P. 8479-8484;

30. Fattaey, A.R., Helin, K., Dembski, M.S., Dyson, N., Harlow, E., Vuocolo, G.A., Hanobik, M.G., Haskell, K.M., Oliff, A., Defeo-Jones, D., Jones,

R.E. Characterization of the retinoblastoma binding proteins RBP1 and RBP2 // Oncogene. - 1993. - V. 8(11). - P. 3149-3156;

31. Frankel, A.D., Berg, J.M., Pabo, C.O. Metal-dependent folding of a single zinc finger from transkription factor TFIII A // PNAS. - 1987. - V. 84(14). P.

-4841-4845;

32. Freemont, P.S. Structure The RING finger. A novel protein sequence motif related to the zinc finger // Ann NY Acad Sci. - 1993. - V. 684. - P. 174-192;

33. Freyd, G., Kim, S.K., Horvitz, R. Novel cysteine-rich motif and homeodomain in the product of the Caenorhabditis elegans cell lineage gene lin-11 // Nature. - 1990. - V. 344. - P. 876-878;

34. Gabig, T.G., Mantel, P.L., Rosli, R., Crean, C.D. Requiem: a novel zinc finger gene essential for apoptosis in myeloid cells // J Biol Chem. - 1994. - V. 269(47). - P. 29515-29519;

35. Gabig, T.G., Crean, C.D., Klenk, A. et al. Expression and chromosomal localization of the Requiem gene // Mamm Genome. - 1998. - V. 9(8). - P. 660-665;

36. Gaul, U., Schuh, R., Seidert, E., Jackle, H. Analysis of Kruppel protein distribution during early Drosophila development reveals posttranscriptional regulation // Cell. - 1987. - V. 50.- Р. 639-647;

37. Ghysen A, Dambly-Chaudiere C. Genesis of the Drosophila peripheral nervous system // Trends Genet. - 1989. - V. 5(8). - P. 251-255;

38. Ghysen, A. and O'Kane, C. Neural enhancer-like elements as specific cell markers in Drosophila // Development. -1989. - V. 105(1). - P. 35-52;

39. Giniger, E., Varnum, S.M., Ptashne, M. Specific DNA binding of GAL4, a positive regulatory protein of yeast // Cell. - 1985. - V. 40. - P. 767-774;

40. Green, P., Hartenstein, A. Y. and Hartenstein V. The embryonic development of the Drosophila visual system // Cell Tissue Res. - 1993. - V. 273(3).

- P. 583-598;

41. Grimwade, D., Solomon, E. Characterisation of the PML/RAR alpha rearrangement associated with t(15;17) acute promyelocytic leukaemia // Curr. Top Microbiol. Immunol. - 1997. - V. 220. - P. 81-112;

42. Hartenstein, V. Development of Drosophila larval sensory organs in spatiotemporal pattern of sensory neurones, peripheral axonal pathways and sensilla differentiation // Development. - 1988. - V. 102(4). - P. 869-886;

43. Hartenstein, V. and Campos-Ortega, J. A. Early neurogenesis in wild- type Drosophila melanogaster // Roux Arch dev Biol. - 1984. - V. 193(5). - P. 308- 325;

44. Hartenstein V. and Posakony, J. W. Development of adult sensilla on the wing and notum of Drosophila melanogaster // Development. - 1989. - V. 107(2). - P. 389-405;

45. Hartenstein, V., Rudloff, E. and Campos-Ortega, J. A. The pattern of proliferation of the neuroblasts in the wild-type embryo of Drosophila melanogaster

// Roux Arch dev Biol. - 1987. - V. 196(8). - P. 473-485;

46. Hertweck, H. Anatomie und Variabilitat des Nerven systems und der Sinnesorgane von Drosophila melanogaster (Meigen) // Z. wiss. Zool. - 1931 - V. 139. - P. 560-663;

47. Hofbauer, A. and Campos-Ortega, J. A. Proliferation pattern and early differentiation of the optic lobes in Drosophila melanogaster // Roux Arch dev Biol.

- 1990. - V. 198(5). - P. 264-274;

48. Jagla, K., Bellard, M., Frasch, M. A cluster of Drosophila homeobox genes involved in mesoderm differentiation // BioEssays. - 2001. - V. 23(2). - P. 125-133;

49. Jensen, D.E., Proctor, M., Marquis, S.T., Gardner, H.P., Ha, S.I., Chodosh, L.A., Ishov, A.M., Tommerup, N., Vissing, H., Sekido, Y., Minna, J., Borodovsky, A., Schultz, D.C., Wilkinson, K.D., Maul, G.G. et al. BAP1: a novel ubiquitin hydrolase wich binds to the BRCA1 RING finger and enhances BRCA1- mediated cell growth suppression // Oncogene. - 1998. - V. 16(9). - P. 1097-1112;

50. Joazeiro, C.A.P., Wing, S.S., Han-kuei, H., Leverson, J.D., Hunter, T., Yun-Cai, L. The Tyrosine Kinase Negative Regulator c-Cbl as a RING-Type, E2- Dependent Ubiquitin-Protein Ligase // Science, 1999. - V. 286(5438). - P. 309-312;

51. Jones, R.S., Gelbart, W.M. The Drosophila Polycomb-group gene Enhancer of zeste contains a region with sequence similarity to trithorax // Mol Cell Biol. - 1993. - V. 13(10). - P. 6357-6366;

52. Kakidani, H., Ptashne, M. GAL4 activates gene expression in mammalian cells // Cell. - 1988. -V. 52. - P. 161-167;

53. Kanno, M., Hasegawa, M., Ishida, A., Isono, K., Taniguchi, M. Protein mel-18, a Polycomb group-related mammalian gene, encodes a transcriptional negative regulator with tumor suppressive activity // EMBO J. - 1995. - V. 14(22). - P. 5672-5678;

54. Karlsson, O., Thor, S., Norberg, T., Ohlsson, H. Edlund, T. Insulin gene enhancer binding protein Isl-1 is member of a novel class of proteins conteining both a homeo-and a cys-his domain // Nature. - 1990. - V. 344(6269). P. 879-882;

55. Kastner, P., Perez, A., Lutz, Y., Rochette-Egly, C., Gaub, M.P., Durand, B., Lanotte, M., Berger, R., Chambon, P. Structure, localization and transcriptional properties of two classes of retinoic acid receptor alpha fusion proteins in acute promyelocytic leukemia (APL): structural similarities with a new family of oncoproteins // EMBO J. - 1992. - V. 11(2). - P. 629-642;

56. Kennison, J.A. Transcriptional activation of Drosophila homeotic genes from distant regulatory elements // Trends Genet. - 1993. - V. 9(3). - P. 75-79;

57. Lange, M., Kaynak, B., Forster, U.B., Tonjes, M., Fischer, J.J., Grimm, C., Schlesinger, J., Just, S., Dunkel, I., Krueger, T., Mebus, S., Lehrach, H., Lurz, R., Gobom, J., Rottbauer, W., Abdelilah -Seyfried, S., Sperling S. Regulation of muscle development by DPF3, a novel histone acetylation and methylation reader of the BAF chromatin remodeling complex // Genes Dev. - 2008. - V. 22 (17). - P. 2370-2384;

58. Laughon, A., Driscoll, R., Wills, N., Gesteland, R.F. Identification of two proteins encoded by the Saccharomyces cerevisiae GAL4 gene // Mol Cell Biol.

- 1984. - V. 4(2). - P. 268-275;

59. Laughon, A., Gesteland, R.F. Primary structure of the Saccharomyces cerevisiae GAL4 gene // Mol Cell Biol. - 1984. - V. 4. - P. 260-267;

60. Leu, T.M., Schatz, D.G. rag-1 and rag-2 are components of a high- molecular-weight complex, and association of rag-2 with this complex is rag-1 dependent // Mol Cell Biol. - 1995. - V. 15(10). - P. 5657-5670;

61. Lessard, J., Wu, J. An essential switch in subunit composition of a chromatin remodeling complex during neural development // Neuron.- 2007. - V. 55.

- P. 201-215;

62. Lovering, R., Hanson, I.M., Borden, K.L.B., Martin, S., O'Reilly, N., Evan, G., Rahman, D., Pappin, D.J.C., Trowsdale, J., Freemont, P.S. Identification and preliminary characterization of a protein motif related to the zinc finger // Proc Natl Acad. Sci: USA. - 1993. - V. 90(6). - P. 2112-2116;

63. Ma, J., Przibilla, E., Hu, J., Bogorad, L., Ptashne, M. Yeast activators stimulate plant gene expression // Nature. - 1988. - V. 334. - P. 631-633;

64. Ma, J., Ptashne, M. Deletion analysis of GAL4 defines two transcriptional activating segments // Cell. - 1987b. - V. 48. - P. 847-853;

65. Meric, C., Gouilloud, E., Spar, P.E. Mutation in Rous sarcoma virus nucleocapsid protein p12 (NC): deletions of Cys-His boxes // J. Virol. - 1988. - V. 62(9). - P. 3328-3333;

66. Mertsalov, I.B., Kulikova, D.A., Alimova-Kost, M.V., Ninkina, N.N., Korochkin, L.I., Buchman, V.L. Structure and expression of two members of the d4 gene family in mouse // Mammalian Genome. - 2000. - V. 11(1). - P. 72-74;

67. Meza, J.E., Brzovik, P.S., King, M.C., Klevit, R.E. Mapping the functional domains of BRCA1. Interaction of the RING finger domains of BRCA1 and BARD1 // J Biol Chem. - 1999. - V. 274(9). - P. 5659-5665;

68. Miller, J., McLachlan, A.D., Klug, A. Repetitive zinc-binding domains in the proteins transcription factor TFIII A from Xenopus oocytes // EMBO J. - 1985. - V. 4(6) - P. 1609-1614;

69. Nabirochkina, E.N., Simonova, O.B., Mertsalov, I.B., Kulikova, D.A., Ladigina, N.G., Korochkin, L.I., Buchman, V.L. Expression pattern of dd4, a sole member of the d4 family of transcription factors in Drosophila melanogaster. // Mech Dev. - 2002. - V. 114. - P. 119-123;

70. Ninkina, N.N., Mertsalov, I.B., Kulikova, D.A., Alimova-Kost, M.V., Simonova, O.B., Korochkin, L.I., Kiselev, S.L., Buchman, V.L. Cerd4, third member

of the d4 gene family: expression and organization of genomic locus // Mamm Genome. - 2001. - V. 12(11). - P. 862-866;

71. Oshima, Y. Regulatory circuits for gene expression: the metabolism of galactose and phosphate // NY: Cold Spring Harbor Laboratory Press. - 1982. - V. 29(1). - P. 14-28;

72. Paro, R. Imprinting a determined state into the chromatin of Drosophila

// Trends Genet. - 1990. - V. 6(12). - P. 416-421;

73. Paro, R. Mechanisms of heritable gene repression during development of

Drosophila // Curr Opin Cell Biol. - 1993 - V. 5(6). - P. 999-1005;

74. Prokop, A. and Technau, G. M. The origin of postembryonic neuroblasts in the ventral nerve cord of Drosophila melanogaster // Development. - 1991. - V. 111(1). - P. 79-88;

75. Reddy, B.A., Etkin, L.D. A unique bipartite cysteine-histidine motif defines a subfamily of potential zinc-finger proteins // Nucleic Acids Res. - 1991. - V. 19(22). - P. 6330;

76. Reddy, B.A., Etkin, L.D., Freemont, P.S. A novel zinc finger coiled-coil domain in a family of nuclear proteins // Trends Biochem Sci. - 1992. - V. 17(9). - P. 344-345;

77. Sanchez-Garcia, I., Osada, H., Forster, A., Rabbitts, T.H. The cysteine- rich LIM domains inhibit DNA binding by the associated homeodomain in Isl-1 // EMBO J. - 1993. - V. 12(11). - P. 4243-4250;

78. Saurin, A.J., Borden, K.L., Boddy, M.N., Freemont, P.S. Does this have a familiar RING? // Trends Biochem Sci. - 1996. - V. 21(6). P. 208-214;

79. Schindler, U., Beckmann, H., Cashmore, A.R. HAT3.1, a novel Arabidopsis homeodomain protein containing a conserved cysteine-rich region // Plant, J. - 1993. - V. 4(1). - P. 137-150;

80. Scully, R., Ganesan S., Brown, M., De Caprio, J.A., Cannistra, S.A., Feunteun, J., Schnitt, S., Livingston, D.M. Location of BRCA1 in human breast and ovarian cancer cells // Science. - 1996. - V. 272(5258). - P. 123-126;

81. Shawlot, W., Behringer, R.R. Requirement for Lim1 in head-organizer function // Nature. - 1995. - V. 374(6521). - P. 425-430;

82. Simonova, O.B., Kulikova, D.A., Mertsalov, I.B., Umnova, O.N., Bashkirov, V.N., Bukhman, V.L., Korochkin, L.I. Overexpression of a novel gene toothrin in Drosophila // Genetika. - 2005. - V. 41(2). - P. 196-202;

83. Stauberg, M., Prell, A., Schmidt-Ott, U. A single Hox3 gene with composite bicoid and zerknullt expression characteristics in non-Cyclorrhaphan flies

// Proc Natl Acad Sci USA. - 2002. - V. 99(1). - P. 274-279;

84. Steller, H., Fischbach, K. F. and Rubin, G. M. Disconnected: a locus required for neuronal pathway formation in the visual system of Drosophila // Cell. - 1987. - V. 50(7). - P. 1139-1153;

85. Taira, M., Jamrich, M., Good, P.J., Dawid, I.B. The LIM domain- containing homeo box gene Xlim-1 is expressed specifically in the organizer region of Xenopus gastrula embryos // Genes Dev. - 1992. - V. 6(3). - P. 356-366;

86. Takahashi, M., Inaguma, Y., Hiai, H., Hirose, F. Developmentally regulated expression of a human 'Finger'-containing gene encoded by the 5' half of the ret transforming gene // Mol Cell Biol. - 1988. - V. 8(4). - P. 1853-1856;

87. Thompson, K.A., Wang, B., Argraves, W.S., Giancotti, F.G., Schranck, D.P., Ruoslahti, E. BR140, a novel zinc-finger protein with homology to the TAF250 subunit of TFIID // Biochem Biophys Res Commun. - 1994. - V. 198(3). - P. 1143- 1152;

88. Tso, J.Y., Van den Berg, D.J., Korn, L.J. Structure of the gene for Xenopus transcription factor TFIII A // NAR. - 1986. - V. 44. - P. 2187-2200;

89. Truman, J. W. and Bate, M. Spatial and temporal patterns of neurogenesis in the central nervous system of Drosophila melanogaster // Dev Biol. - 1988. - V. 125(1). - P. 145-157;

90. Vincent, A., Kejzlarova-Lepesant, J., Segalat, L., Yanicostas, C., Lepesant, J.A. Sry h-1, a new Drosophila melanogaster multifingered protein gene showing maternal and zygotic expression // Mol Cell Biol. - 1988. - V. 8(10). - P. 4459-4468;

91. Webster, N., Jin, J.R., Green, S., Hollis, M., Chambon, P. The yeast UASG is a transcriptional enhancer in human HeLa cells in the presence of the GAL4 trans-activator // Cell. - 1988. - V. 52. - P. 169-178;

92. Wolpert, L., Beddington, R., Brockes, J., Jessell, T., Lawrence, P., Meyerowitz, E.M. Principles of development // Current Biology Ltd: London. - 1998. - P. 1-484.

Размещено на Allbest.ru