Таким образом, результаты наших экспериментов показывают, что при увеличении концентрации 1,1-ДМГ повышается гемолиз эритроцитов в растворах NaCl. При этом гемолиз выше в 0,5 г/100 мл растворе NaCl, чем 0,9 г/100 мл. Это можно объяснить тем, что раствор хлорида натрия 0,5 г/100 мл является гипотоническим, где гемолизу подвергаются эритроциты, обладающие низкой осмотической резистентностью, тогда как 0,9 г/100 мл - изотонический раствор, осмотическое давление которого равно осмотическому давлению крови и в таком растворе гемолиз практически отсутствует. Как показали наши эксперименты, 1,1-ДМГ повышает гемолиз и в изотонической среде. По-видимому, это связано с интенсификацией перекисного окисления липидов мембран, т. к. имеются данные, что под влиянием гидразинов увеличивается концентрация супероксидных радикалов, которые способны усиливать процессы ПОЛ [31]. Следовательно, перекисное окисление липидов является причиной интенсификации гемолитических процессов при действии 1,1-ДМГ как в изотонической, так и в гипотонической среде. Перекисная резистентность эритроцитов тесно связана с активностью каталазы - антиоксидантного фермента, функцией которого является преобразование токсичной для клетки перекиси водорода до воды и молекулярного кислорода. Наши эксперименты показали четкую зависимость между этими показателями. При низких концентрациях 1,1-ДМГ повышается активность каталазы, следовательно, концентрация перекиси водорода в среде снижается, что и приводит к снижению уровня гемолиза эритроцитов. С повышением концентрации 1,1-ДМГ снижение способности каталазы утилизировать субстрат приводит к увеличению количества H2O2 в среде, следствием которого является усиление процесса гемолиза. С увеличением активности каталазы при действии низких концентраций 1,1-ДМГ, вероятно, связано и снижение уровня гемолиза в экспериментах по определению проницаемости эритроцитарных мембран. Можно полагать, что повышение активности антиоксидантных ферментов приводит к подавлению перекисных процессов в мембране и снижению проницаемости мембраны для мочевины. При увеличении концентрации токсиканта выше 65 мМ резко увеличивается гемолиз эритроцитов, что, по-видимому, обусловлено изменением проницаемости мембран. Результаты по определению активности каталазы тоже показали, что при концентрациях 1,1-ДМГ 65 мМ и выше активность фермента резко снижается. При этих же концентрациях токсиканта было зарегистрировано резкое снижение осмотической резистентности эритроцитов в растворе 0,5 г/100 мл хлорида натрия.

Таким образом, результаты наших исследований показали, что при действии высоких концентраций токсиканта антиоксидантная система не способна защитить клеточную мембрану от повреждающего действия 1,1-ДМГ. Следовательно, при концентрации 1,1-ДМГ 65 мМ и выше происходят изменения физико-химического состояния мембран эритроцитов, в основе которых лежит интенсификация процессов перекисного окисления мембранных фосфолипидов, что и является причиной изменения проницаемости клеточных мембран и увеличения выхода гемоглобина из клетки.

Влияние ацетата свинца на состояние мембран эритроцитов в условиях in vitro.

Результаты экспериментов по определению влияния различных концентраций ацетата свинца на осмотическую резистентность эритроцитов в 0,5 г/100мл и 0,9 г/100мл растворах NaCl представлены на рисунке 9. Как видно из рисунка, в контроле в гипотоническом растворе NaCl (0,5 г/100мл) гемолиз составляет 4,17 (р0.005). При концентрации ацетата свинца 0,1 мМ количество гемолизированных эритроцитов составляет 4,52 %. С повышением концентрации токсиканта до 2,5 мМ наблюдается постепенное увеличение гемолиза до 8,52 %.

По оси абсцисс: концентрация ацетата свинца, мМ; по оси ординат: величина гемолиза в %.

Рисунок 9 - Влияние ацетата свинца на осмотическую резистентность эритроцитов в условиях in vitro.

Дальнейшее увеличение количества ацетата свинца в среде инкубации приводит к резкому повышению гемолиза, который составляет 88,87 % при концентрации токсиканта 3,8 мМ. При более высоких концентрациях токсиканта степень гемолиза повышается постепенно и незначительно, достигая значения 92,17 % при концентрации 6,3 мМ.

В физиологическом растворе NaCl (0,9 г/100мл) гемолиз без добавления токсиканта составляет 2,87 % (р0.005). Из рисунка видно, что концентрации ацетата свинца 0,1-1,9 мМ не оказывают влияния на степень гемолиза эритроцитов, и количество гемолизированных клеток остается на уровне контроля. Повышение концентрации токсиканта приводит к постепенному увеличению выхода гемоглобина из эритроцитов до 6,81% в 2,5 мМ растворе. Увеличение концентрации ацетата свинца до 3,8 мМ приводит к резкому повышению гемолиза до 82,8 %, а при более высоких концентрациях токсиканта количество гемолизированных эритроцитов увеличивается постепенно, составляя 90 % при концентрации свинца 6,3 мМ.

Сравнение результатов осмотической резистентности эритроцитов в 0,5 г/100мл и 0,9 г/100мл растворах NaCl выявило, что при всех исследованных концентрациях Pb2+ гемолиз эритроцитов выше в гипотоническом растворе, хотя кривая осмотического гемолиза в этих двух растворах имеет одинаковый вид. Резкое увеличение гемолиза в обоих растворах наблюдается при концентрации ацетата свинца равной 2,5 мМ. При концентрациях токсиканта 3,8 мМ и выше уровень гемолиза эритроцитов достигает максимального значения. В физиологическом растворе NaCl (0,9 г/100мл) гемолиз без добавления токсиканта составляет 2,87 % (р0.005). Из рисунка видно, что концентрации ацетата свинца 0,1-1,9 мМ не оказывают влияния на степень гемолиза эритроцитов, и количество гемолизированных клеток остается на уровне контроля.

В следующей серии экспериментов было исследовано действие ацетата свинца на проницаемость эритроцитарных мембран (рис.10). Как видно из рисунка контрольная величина гемолиза составляет 40% (р0.005). В растворе с содержанием ацетата свинца в концентрации 0,1-0,2мМ количество гемолизированных эритроцитов остается на уровне контроля, а при повышении концентрации токсиканта наблюдается плавное снижение гемолиза эритроцитов, которое составляет 37,17% в 1,9 мМ растворе. Дальнейшее увеличение концентрации токсиканта приводит к резкому снижению гемолиза до 19,29 % в 2,5 мМ растворе, а затем к резкому повышению количества гемолизированных клеток до 90,97 % в 3,8 мМ растворе.

При более высоких концентрациях свинца отмечается незначительное повышение степени гемолиза, которое составляет 94,16 % при концентрации токсиканта 6,3 мМ.

По оси абсцисс: концентрация ацетата свинца, мМ; по оси ординат: величина гемолиза в %.

Рисунок 10 - Влияние ацетата свинца на проницаемость эритроцитарных мембран в условиях in vitro

Результаты опытов по изучению эффектов ацетата свинца на перекисную резистентность эритроцитов представлены на рисунке 11. В контроле уровень гемолиза составляет 21,43 %. Как видно из рисунка, наличие в среде инкубации токсиканта в концентрации до 0,2 мМ не оказывает влияния на резистентность эритроцитов и количество гемолизированных клеток остается на уровне контроля. С повышением концентрации свинца до 1,9 мМ наблюдается плавное увеличение степени гемолиза до 29 %, после чего увеличение количества токсиканта приводит к более крутому подъему уровня гемолиза эритроцитов, который составляет 72 % в 3,8 мМ растворе. При дальнейшем повышении концентрации исследуемого вещества количество гемолизированных клеток продолжает увеличиваться, но с более плавным приростом, достигая значения 79 % в 6,3 мМ растворе свинца.

По оси абсцисс: концентрация ацетата свинца, мМ; по оси ординат: величина гемолиза в %.

Рисунок 11 - Влияние ацетата свинца на перекисный гемолиз эритроцитов в условиях in vitro

В следующей серии экспериментов, результаты которой представлены на рисунке 12, было исследовано влияние ацетата свинца на активность каталазы эритроцитов. Как видно из рисунка, в контроле активность каталазы составляет 53,33 %, которая сохраняется и при содержании в среде токсиканта в концентрации 0,1 мМ. Увеличение концентрации токсиканта приводит к резкому снижению активности фермента до 49 % в 0,2 мМ, а при концентрации свинца 1,9 мМ количество утилизированной перекиси водорода составляет 41 %. При дальнейшем повышении количества ацетата свинца отмечается повышение активности каталазы, которая в 2,5 мМ и 3,8 мМ растворах составляет 46 % и 49 % и остается на уровне ниже контрольного, и только при концентрации 6,3 мМ повышается до контрольной величины.

По оси абсцисс: концентрация ацетата свинца, мМ; по оси ординат: активность каталазы в %.

Рисунок 12 - Влияние ацетата свинца на активность каталазы эритроцитов в условиях in vitro

Влияние хлорида ртути на состояние мембран эритроцитов в условиях in vitro.

На рисунке 13 представлены результаты экспериментов по определению влияния различных концентраций хлорида ртути на осмотическую резистентность эритроцитов в растворе NaCl 0,4 г/100мл. В контроле уровень гемолиза составил 50 %. При наличии в среде хлорида ртути в концентрациях 0,1-0,35 мМ наблюдалось доза-зависимое снижение гемолиза до 16 %. дальнейшее повышение концентрации токсиканта до 1,4 мМ приводило к повышению гемолиза до 48 %, однако, степень гемолиза оставалась ниже контрольной величины.

Из рисунка видно, что при более высоких концентрациях хлорида ртути наблюдалось дальнейшее увеличение степени гемолиза, которая достигла максимального уровня 98 % при концентрации токсиканта 6,9 мМ.

По оси абсцисс: концентрация хлорида ртути, мМ; по оси ординат: величина гемолиза в %.

Рисунок 13 - Влияние хлорида ртути на осмотическую резистентность эритроцитов в условиях in vitro

В следующей серии экспериментов было исследовано действие хлорида ртути на проницаемость эритроцитарных мембран (рис.14). Как видно из рисунка контрольная величина гемолиза составляет 85 %. Хлорид ртути в концентрациях до 0,1 мМ не вызывал каких-либо изменений в степени гемолиза. При увеличении концентрации токсиканта до 0,3 мМ наблюдалось снижение гемолиза до 32 %, который сохранялся на том же уровне и при концентрации 0,7 мМ. С дальнейшим увеличением количества ртути в среде отмечалось повышение степени гемолиза, которая составила 60, 95 и 98 % при концентрации 1,4; 3,5 и 6,9 мМ, соответственно.

Результаты опытов по изучению эффектов хлорида ртути на перекисную резистентность эритроцитов представлены на рисунке 15. Контрольный уровень гемолиза составил 33 %. При повышении концентрации токсиканта до 0,7 мМ степень гемолиза увеличивалась незначительно, а при концентрациях 0,7-1,4 мм повышалась с 36 до 47 %. Дальнейшее увеличение концентрации токсиканта вызывало небольшой рост количества гемолизированных эритроцитов, которое составило 49 % при концентрации ртути 3,5 мМ.

По оси абсцисс: концентрация хлорида ртути, мМ; по оси ординат: величина гемолиза в %.

Рисунок 14 - Влияние хлорида ртути на проницаемость эритроцитарных мембран в условиях in vitro



По оси абсцисс: концентрация хлорида ртути, мМ; по оси ординат: величина гемолиза в %.

Рисунок 15 - Влияние хлорида ртути на перекисный гемолиз эритроцитов в условиях in vitro

В следующей серии экспериментов, было исследовано влияние хлорида ртути на активность каталазы эритроцитов (рисунок 16). Активность каталазы в контроле составила 44 % (р0.005). Наличие в среде хлорида ртути в концентрациях до 0,23 мМ не вызывали каких-либо изменений в активности каталазы. При повышении концентрации токсиканта от 0,23 до 1,4 мМ наблюдалось увеличение активности фермента.

Из рисунка видно, дальнейшее повышение концентрации ртути в среде вызывало снижение активности каталазы, которая составила 40 и 39 % при концентрациях токсиканта 3,5 и 6,9 мМ, соответственно.



По оси абсцисс: концентрация хлорида ртути, мМ; по оси ординат: активность каталазы в %.

Рисунок 16 - Влияние хлорида ртути на активность каталазы эритроцитов в условиях in vitro

Таким образом, в результате наших исследований было показано, что низкие концентрации хлорида ртути (0,3-0,7 мМ) вызывают снижение осмотического гемолиза эритроцитов человека. При этих же концентрациях токсиканта уменьшается и проницаемость эритроцитарных мембран. Дальнейшее повышение концентрации ионов ртути приводит к увеличению проницаемости мембран эритроцитов и как следствие повышается и осмотический гемолиз. При низких концентрациях токсиканта (0,3-1,4 мМ) наблюдается увеличение активности каталазы с чем, вероятно, связано снижение проницаемости и осмотического гемолиза эритроцитов.

Известно, что ртуть относится к металлам, действие которых приводит к снижению активности основных антиоксидантов клетки, особенно тиол-содержащих антиоксидантов и ферментов.

Кроме того, эти токсичные металлы могут вызывать увеличение образования реактивных форм кислорода, таких как гидроксильный и супероксидный радикал и перекись водорода. По-видимому, поэтому и при действии низких концентраций хлорида ртути наблюдается увеличение перекисного гемолиза эритроцитов.

Изучение совместного действия 1,1-диметилгидразина и ионов Pb2+ и Hg2+на состояние мембран эритроцитов в условиях in vitro.

Известно, что помимо самостоятельного влияния на различные функции организма многие чужеродные для человека вещества при комбинированном воздействии оказывают влияние друг на друга, усиливая или ослабляя токсическое действие [284,285]. Поэтому в следующей серии экспериментов были исследованы изолированное действие на эритроциты человека 1,1-ДМГ и в сочетании с Pb2+ и Hg2+. Были подобраны по 2 концентрации токсикантов, действие которых вызывает одинаковый гемолиз.

На рисунке 17 представлены результаты исследования изолированного и сочетанного действия 1,1-ДМГ и Pb2+ на осмотический гемолиз эритроцитов человека.

По оси абсцисс: концентрация ацетата свинца и 1,1-ДМГ, мМ; по оси ординат: величина гемолиза, %.

Рисунок 17 - Изолированное и совместное влияние 1,1-ДМГ и Pb2+ на осмотическую резистентность эритроцитов в условиях in vitro

Видно, что при концентрациях 3,4 мМ для ионов свинца и 100,0 мМ для 1,1-ДМГ уровень гемолиза составляет 60±2% (р0.005). Для того, чтобы проверить эффект совместного действия исследованных соединений на осмотический гемолиз эритроцитов уменьшили концентрации ацетата свинца и 1,1-ДМГ в 2 раза, т.е. были использованы 1,7 и 50,0 мМ растворы токсикантов, соответственно. Результаты исследования показали, что при сочетанном действии этих соединений наблюдается резкое увеличение выхода гемоглобина из эритроцитов и гемолиз повышается до 74±2% (р0.005). Таким образом, полученные данные выявили, что комбинированное действие Pb2+ и 1,1-диметилгидразина приводит к еще большему повышению гемолиза эритроцитов по сравнению с их изолированным действием.

Результаты влияния совместного действия Pb2+ и 1,1-ДМГ на проницаемость мембран эритроцитов человека приведены на рисунке 18.

По оси абсцисс: концентрация ацетата свинца и 1,1-ДМГ, мМ; по оси ординат: величина гемолиза, %.

Рисунок 18 - Изолированное и совместное влияние 1,1-ДМГ и Pb2+ на проницаемость эритроцитарных мембран в условиях in vitro

И в этом эксперименте нами были подобраны концентрации токсикантов, при изолированном действии которых гемолиз составляет 60±2% (р0.005). Из рисунка видно, что уровень гемолиза, равный 60% вызывают 3,2 мМ ацетата свинца и 118 мМ 1,1-ДМГ. Для выяснения эффекта их совместного действия также уменьшили в 2 раза концентрации исследованных токсикантов. Из рисунка видно, что гемолиз эритроцитов увеличился (71±2,5%, р0.005) по сравнению с изолированными действиями этих токсикантов.

Следовательно, при комбинированном действии 1,1-ДМГ и Pb2+ увеличивают проницаемость эритроцитарных мембран и тем самым увеличивают выход гемоглобина из эритроцитов.

Таким образом, результаты исследований показали, что эффект совместного действия 1,1-ДМГ и ацетата свинца выше по сравнению с их изолированным действием. Следует отметить, что эффекты исследованных токсикантов не суммируются, так как гемолиз при их совместном действии значительно превосходил (на 12-15%) значения, полученные при изолированном действии токсикантов.

В следующей серии экспериментов были проведены исследования по изучению изолированного и совместного действия 1,1-ДМГ и хлорида ртути. Из рисунка 19 видно, что гемолиз при действиях 2 мМ Hg2+ или 100 мМ 1,1-диметилгидразина составляет 60±2,0% (р0.001). Совместное действие половины концентраций исследованных токсических соединений приводит к увеличению гемолиза до 79±2,8% (р0.05).



По оси абсцисс: концентрация хлорида ртути и 1,1-ДМГ, мМ; по оси ординат: величина гемолиза, %.

Рисунок 19 - Изолированное и совместное влияние 1,1-ДМГ и Hg2+ на осмотическую резистентность эритроцитов в условиях in vitro

Следовательно, при сочетанном действии 1,1-ДМГ и Hg2+ на осмотическую резистентность эритроцитов тоже наблюдается увеличение гемолиза эритроцитов по сравнению с изолированным действием исследованных токсикантов.

Для того, чтобы проверить какое влияние оказывают 1,1-ДМГ и хлорид ртути при совместном действии на проницаемость эритроцитарных мембран были проведены следующие исследования. Как видно из рисунка 20, гемолиз равный 60±2,2% (р0.005) вызывают концентрации 1,4 и 118 мМ растворов Hg2+ и 1,1-ДМГ, соответственно. Уменьшение в 2 раза этих концентрации для совместного эффекта исследованных токсикантов приводит к увеличению гемолиза до 73±2,5% (р0.05).



По оси абсцисс: концентрация хлорида ртути и 1,1-ДМГ, мМ; по оси ординат: величина гемолиза, %.

Рисунок 20 - Изолированное и совместное влияние 1,1-ДМГ и Hg 2+ на проницаемость эритроцитарных мембран в условиях in vitro.

Таким образом, результаты исследований по сравнению комбинированного действия 1,1-ДМГ и ионов тяжелых металлов с их изолированным влиянием показали, что при совместном действии эффект исследованных токсикантов значительно превосходил значения, полученные при их изолированном действии. Необходимо отметить, что 1,1-диметилгидразин при сочетанном с ацетатом свинца и хлоридом ртути действии вызывает более выраженные нарушения мембран эритроцитов, что проявляется в большем по сравнению с изолированным действием уровне гемолиза эритроцитов. Сопоставление данных по проницаемости эритроцитарных мембран и осмотической резистентности эритроцитов, позволяет заключить, что наблюдается корреляция: чем больше проницаемость при совместном действии токсикантов, тем выше уровень гемолиза эритроцитов.

3.2 Влияние витаминов С, Е и селенита натрия на состояние мембран эритроцитов в условиях in vitro

Влияние витамина С на состояние мембран эритроцитов в условиях in vitro.

Для изучения влияния витамина С на состояние клеточных мембран нами были проведены исследования действия возрастающих концентраций аскорбиновой кислоты на осмотическую и перекисную резистентность эритроцитов, проницаемость эритроцитарных мембран, активность каталазы эритроцитов человека в условиях in vitro.

На рисунке 21 представлены результаты экспериментов по определению влияния различных концентраций витамина С на осмотическую резистентность эритроцитов в растворе NaCl 0,45 г/100мл.

По оси абсцисс: концентрация витамина С, мМ; по оси ординат: величина гемолиза в %.

Рисунок 21 - Влияние витамина С на осмотическую резистентность эритроцитов в условиях in vitro

В контроле гемолиз составляет 22,6% (р0.05). При концентрации витамина С 2,7 мМ количество гемолизированных эритроцитов снижается и составляет 19,8%. С увеличением количества аскорбиновой кислоты в среде происходит дальнейшее снижение степени гемолиза до 2% при концентрации витамина 53,2 мМ. В растворах с более высоким содержанием витамина С степень гемолиза сохраняется на таком же низком уровне.

В следующей серии экспериментов было исследовано действие витамина С на проницаемость эритроцитарных мембран (рис.22). Как видно из рисунка контрольная величина гемолиза составляет 25% (р0.05). В растворе с содержанием витамина С в концентрации 2,7 мМ количество гемолизированных эритроцитов снижается и составляет 20,8 %. С увеличением количества витамина в среде наблюдается дальнейшее снижение степени гемолиза до 1,4 % в растворе с концентрацией аскорбиновой кислоты 53,2 мМ. При более высоких концентрациях исследуемого вещества степень выхода гемоглобина из эритроцитов сохраняется на таком же низком уровне.

По оси абсцисс: концентрация витамина С, мМ; по оси ординат: величина гемолиза в %.

Рисунок 22 - Влияние витамина С на проницаемость эритроцитарных мембран в условиях in vitro

Результаты опытов по изучению эффектов витамина С на перекисную резистентность эритроцитов представлены на рисунке 23.

По оси абсцисс: концентрация витамина С, мМ; по оси ординат: величина гемолиза в %.

Рисунок 23 - Влияние витамина С на перекисный гемолиз эритроцитов в условиях in vitro

В контроле уровень гемолиза составляет 51,1% (р0.01). Наличие в среде инкубации аскорбиновой кислоты в концентрации 2,7 мМ вызывает резкое снижение гемолиза до 2,3 %. При дальнейшем повышении концентрации исследуемого вещества количество гемолизированных клеток остается на этом уровне.

В следующей серии экспериментов, результаты которой представлены на рисунке 24, было исследовано влияние витамина С на активность каталазы эритроцитов. В контроле активность каталазы составляет 34,3% (р0.01). При содержании в среде инкубации витамина в концентрации 2,7 мМ количество утилизированной перекиси водорода снижается и составляет 33,4% (р0.05). С повышением количества витамина наблюдается снижение активности каталазы до 16 % в среде с концентрацией аскорбиновой кислоты 106,5 мМ.

По оси абсцисс: концентрация витамина С, мМ; по оси ординат: активность каталазы в %.

Рисунок 24 - Влияние витамина С на активность каталазы эритроцитов в условиях in vitro

Таким образом, результаты наших экспериментов показали, что витамин С повышает резистентность эритроцитов. Вероятно, это связано с антиоксидантными свойствами этого соединения. Известно, что аскорбиновая кислота активизирует антиоксидантный фермент супероксиддисмутазу (СОД), которая снижает концентрацию супероксидных радикалов. Вероятно, что это приводит к ингибированию двухстадийной реакции Хабера-Вейса, в результате которой образуются гидроксильные радикалы, и, следовательно, к торможению процессов перекисного окисления липидов.

Подтверждением этому могут служить результаты наших экспериментов по определению перекисного гемолиза. Сама по себе перекись водорода малоактивна по отношению к молекулярным компонентам клетки. Повреждающий эффект этого вещества реализуется через образование гидроксильных радикалов, для чего необходимо присутствие ионов восстановленного железа и супероксидных радикалов. К тому же супероксидные радикалы способствуют восстановлению железа [286]. Следовательно, при активизации СОД повреждающее действие перекиси водорода снижается, что выражается в подавлении гемолиза.

Однако, при воздействии витамина С наблюдалось снижение активности каталазы, ключевого антиоксидантного фермента, функцией которого является удаление перекиси водорода. В результате реакции, катализируемой СОД, помимо снижения количества супероксидных радикалов, происходит образование перекиси водорода. Очевидно, что повышение активности СОД и снижение активности каталазы могло привести к чрезмерному накоплению перекиси водорода. Вероятно, этого не происходит вследствие утилизации перекиси водорода ферментом глутатионпероксидазой, т. к. есть данные, что витамин С способствует восстановлению глутатиона.

Влияние витамина Е на состояние мембран эритроцитов в условиях in vitro.

Для изучения влияния витамина Е на состояние клеточных мембран нами были проведены исследования действия возрастающих концентраций ?-токоферола на осмотическую и перекисную резистентность эритроцитов, проницаемость эритроцитарных мембран, активность каталазы эритроцитов человека в условиях in vitro.

На рисунке 25 представлены результаты экспериментов по определению влияния различных концентраций витамина Е на осмотическую резистентность эритроцитов в 0,45 г/100мл растворе NaCl.

По оси абсцисс: концентрация витамина Е, мг/мл; по оси ординат: величина гемолиза в %.

Рисунок 25 - Влияние витамина Е на осмотическую резистентность эритроцитов в условиях in vitro

Как видно из рисунка в контроле гемолиз составляет 28,83%, который сохраняется и при концентрации витамина Е равной 3,125 мг/мл. С увеличением количества ?-токоферола в среде происходит постепенное снижение степени гемолиза, которая составляет 24,27 (р0.01); 22 (р0.005); 20,85% (р0.01) при концентрациях витамина 9,4; 15,6; 21,92 мг/мл, соответственно. При дальнейшем увеличении концентрации витамина Е отмечаются незначительные изменения в количестве гемолизированных эритроцитов.

В следующей серии экспериментов было исследовано действие витамина Е на проницаемость эритроцитарных мембран (рис.26). Как видно из рисунка контрольная величина гемолиза составляет 30%. В растворе с содержанием витамина Е в концентрации 3,125 мг/мл количество гемолизированных эритроцитов снижается до уровня 27,1%, который сохраняется и при концентрации ?-токоферола 9,4 мг/мл. С увеличением количества витамина в среде наблюдается снижение степени гемолиза до 23,49 % в растворе с концентрацией витамина Е 15,6 мг/мл. При дальнейшем повышении концентрации исследуемого вещества степень выхода гемоглобина из эритроцитов практически не изменяется.

По оси абсцисс: концентрация витамина Е, мг/мл; по оси ординат: величина гемолиза в %.

Рисунок 26 - Влияние витамина Е на проницаемость эритроцитарных мембран в условиях in vitro

Результаты опытов по изучению эффектов витамина Е на перекисную резистентность эритроцитов представлены на рисунке 27.

Как видно из рисунка контрольный уровень гемолиза составляет 56,13 %. Наличие в среде инкубации ?-токоферола в концентрации 3,125 мг/мл вызывает незначительное снижение гемолиза до 55,62 %. При повышении концентрации витамина количество гемолизированных клеток снижается, составляя 48; 39,3; 34,68; 31,11 % при концентрациях ?-токоферола 9,4; 15,6; 21,9; 31,3 мг/мл, соответственно.

По оси абсцисс: концентрация витамина Е, мг/мл; по оси ординат: величина гемолиза в %.

Рисунок 27 - Влияние витамина Е на перекисный гемолиз эритроцитов в условиях in vitro

В следующей серии экспериментов, результаты которой представлены на рисунке 28, было исследовано влияние витамина Е на активность каталазы эритроцитов. Как видно из рисунка в контроле активность фермента составляет 35,53 %. ?-токоферол в концентрации 3,125 мг/мл не оказывает влияния на активность каталазы и количество утилизированной перекиси водорода сохраняется на уровне контроля. С повышением количества витамина в среде инкубации наблюдается снижение активности каталазы до 34,59 и 33,67 % при концентрации ?-токоферола 9,4 и 15,6 мг/мл, соответственно. При дальнейшем повышении количества витамина Е в среде инкубации активность каталазы подвергается незначительным изменениям.

Полученные данные по влиянию витамина Е на резистентность мембран эритроцитов показали, что под действием ?-токоферола снижается осмотический и перекисный гемолиз эритроцитов. Следует отметить, что существенный эффект витамина Е проявляется в защите мембран от перекисного гемолиза.

По оси абсцисс: концентрация витамина Е, мг/мл; по оси ординат: активность каталазы в %.

Рисунок 28 - Влияние витамина Е на активность каталазы эритроцитов в условиях in vitro

Влияние селенита натрия на состояние мембран эритроцитов в условиях in vitro.

На рисунке 29 представлены результаты экспериментов по определению влияния различных концентраций селенита натрия на осмотическую резистентность эритроцитов в 0,45 г/100мл растворе NaCl. Как видно из рисунка в контроле гемолиз составляет 30,29% (р0.01). При концентрации селенита натрия 47 мкг/мл количество гемолизированных эритроцитов незначительно снижается и отмечается на уровне 29,7 %. С увеличением количества селенита натрия в среде наблюдается более выраженное снижение степени гемолиза, которая составляет 22% (р0.005) при концентрации вещества 125 мкг/мл.

По оси абсцисс: концентрация селенита натрия, мкг/мл; по оси ординат: величина гемолиза в %.

Рисунок 29 - Влияние селенита натрия на осмотическую резистентность эритроцитов в условиях in vitro

В следующей серии экспериментов было исследовано действие селенита натрия на проницаемость эритроцитарных мембран (рис.30). Как видно из рисунка контрольная величина гемолиза составляет 31,48%. В растворе с содержанием селенита натрия в концентрации 47 мкг/мл количество гемолизированных эритроцитов повышается и составляет 35,93 %. Степень гемолиза сохраняется на этом же уровне при увеличении количества селенита натрия в среде до 62,5 мкг/мл. При дальнейшем увеличении концентрации селенита натрия в среде наблюдается резкое снижение количества гемолизированных эритроцитов, которое составляет 23,37 % при концентрации Na2SeO3 94 мкг/мл и 18,76 % при концентрации 125 мкг/мл.

Результаты опытов по изучению эффектов селенита натрия на перекисную резистентность эритроцитов представлены на рисунке 31. В контроле уровень гемолиза составляет 21,91% (р0.01). Наличие в среде инкубации Na2SeO3 в концентрации 47 мкг/мл вызывает значительное повышение гемолиза до 60,35 %. При повышении концентрации исследуемого вещества степень гемолиза относительно снижается, но остается выше контрольной величины, составляя 54,26 и 39,48 % при концентрации Na2SeO3 62,5 и 93,8 мкг/мл, соответственно. Дальнейшее увеличение количества селенита натрия вызывает дальнейшее снижение количества гемолизированных клеток до 18,26 % при концентрации Na2SeO3 125 мкг/мл.

По оси абсцисс: концентрация селенита натрия, мкг/мл; по оси ординат: величина гемолиза в %.

Рисунок 30 - Влияние селенита натрия на проницаемость эритроцитарных мембран в условиях in vitro



По оси абсцисс: концентрация селенита натрия, мкг/мл; по оси ординат: величина гемолиза в %.

Рисунок 31 - Влияние селенита натрия на перекисный гемолиз эритроцитов в условиях in vitro

В следующей серии экспериментов было исследовано влияние селенита натрия на активность каталазы эритроцитов (рисунок 32). В контроле активность каталазы составляет 31,61% (р0.01). При содержании в среде инкубации Na2SeO3 в концентрации 47 мкг/мл количество утилизированной перекиси водорода снижается и составляет 30,71%. С повышением количества исследуемого вещества до 62,5 мкг/мл наблюдается незначительное снижение активности каталазы до 30,3%, которая сохраняется на этом же уровне и при концентрации селенита натрия 94 мкг/мл. Дальнейшее повышение концентрации Na2SeO3 до 125 мкг/мл вызывает снижение активности каталазы до 28,4 %.



По оси абсцисс: концентрация селенита натрия, мкг/мл; по оси ординат: активность каталазы в %.

Рисунок 32 - Влияние селенита натрия на активность каталазы эритроцитов в условиях in vitro

Таким образом, результаты исследований по влиянию селенита натрия на состояние мембран эритроцитов показали, что Na2SeO3 снижает осмотическую резистентность и проницаемость эритроцитарных мембран при свех исследованных концентрациях препарата. Следует отметить, что при концентрациях селенита натрия до 47 мкг/мл наблюдается значительное увеличение перекисного гемолиза эритроцитов (на 38±2,5%). Вероятно, это связано с тем, что перекись водорода является окислителем умеренной силы и обладает цитотоксическим свойством, и поэтому при низких концентрациях Na2SeO3 не защищает эритроциты от повреждающего действия Н2О2. При дальнейшем увеличении концентрации селенит натрия уменьшает перекисный гемолиз эритроцитов. На основании полученных результатов, можно заключить, что селенит натрия при концентрациях выше 47 мкг/мл проявляет протекторный эффект и защищает эритроцитарную мембрану от действия перекиси водорода, повышает осмотическую резистентность и снижает проницаемость мембран эритроцитов.

3.3 Исследование влияния витаминов С, Е и селенита натрия на резистентность мембран эритроцитов при действии 1,1-диметилгидразина в условиях in vitro

В предыдущих сериях экспериментов было показано, что в условиях in vitro витамины Е, С и селенит натрия повышают резистентность мембран эритроцитов человека, а 1,1-ДМГ при изолированном действии оказывает повреждающее действие на мембрану эритроцитов и вызывает выход гемоглобина из клетки. Было предположено, что причиной изменения проницаемости клеточных мембран являются изменения физико-химического состояния мембран эритроцитов, в основе которых лежит интенсификация процессов перекисного окисления мембранных фосфолипидов. В связи с этим были проведены исследования по влиянию витаминов С и Е и селенита натрия на состояние биологических мембран при действии 1,1-диметилгидразина в условиях in vitro. В предварительных исследованиях были подобраны эффективные концентрации витаминов С и Е и селенита натрия (20мМ, 20 мг/мл и 100 мкг/мл, соответственно) и 1,1-диметилгидразина (65 мМ).

Определение осмотической резистентности эритроцитов проводили в 0,45мг/100 мл растворе NaCl (рисунок 33).

Из рисунка видно, что в контроле гемолиз составляет 28,83±0,56% (р0,001), добавление к эритроцитам 1,1-ДМГ приводит к резкому увеличению гемолиза (79,04±1,28%). При совместном действии 1,1-диметилгидразина с витаминами Е или С, или селенитом натрия уровень гемолиза снижается на 22,01; 39,39 и 9,86% соответственно по сравнению с изолированным действием токсиканта. Добавление к эритроцитам с 1,1-ДМГ смеси витаминов и селенита натрия приводит к уменьшению уровня гемолиза на 50,4% по сравнению с действием только 1,1-ДМГ. Анализ результатов показывает, что наибольшим протекторным действием обладает витамин С, затем Е, и в меньшей степени защитные свойства проявляет селенит натрия. При совместном действии смесь биологически активных соединений предотвращают повреждающий эффект 1,1-ДМГ.

По оси абсцисс: гемолиз, %. К - контроль, 1 - 1,1ДМГ, 2 - витамин Е+1,1-ДМГ, 3 - витамин С+1,1-ДМГ, 4 - Se+1,1-ДМГ, 5 - Е+С+Se+1,1-ДМГ (NaCl - 0,45мг/100 мл).

Рисунок 33 - Изолированное влияние 1,1-диметилгидразина и в сочетании c витаминами С, Е и селенитом натрия на осмотическую резистентность эритроцитов в условиях in vitro

На рисунке 34 приведены данные по влиянию биологически активных соединений и 1,1-диметилгидразина на проницаемость эритроцитарных мембран при соотношении мочевины и NaCl - 60/40.

Результаты исследований показали, что увеличение гемолиза при действии 1,1-ДМГ (до 82,04±2,28%) снижается при дополнительном введении витамина Е или С, или селенита натрия и составляет 67,03±1,98%, 49,65±1,28% и 71,18±2,06% соответственно. Добавление 1,1-диметилгидразина в сочетании с витаминами Е, С и селенитом натрия вызывает дальнейшее снижение проницаемости эритроцитарных мембран и, следовательно, уменьшение гемолиза эритроцитов по сравнению с отдельным действием исследованных биологически активных веществ.

Сопоставление полученных данных по осмотической резистентности эритроцитов и проницаемости эритроцитарных мембран выявили, что с уменьшением проницаемости в присутствии протекторных соединений снижается уровень гемолиза эритроцитов.

По оси абсцисс: гемолиз, %. К - контроль, 1 - 1,1ДМГ, 2 - витамин Е+1,1-ДМГ, 3 - витамин С+1,1-ДМГ, 4 - Se+1,1-ДМГ, 5 - Е+С+Se+1,1-ДМГ

Рисунок 34 - Изолированное влияние 1,1-диметилгидразина и в сочетании c витаминами С, Е и селенитом натрия на проницаемость эритроцитарных мембран в условиях in vitro

3.4 Роль препарата «Селевит» в повышении резистентности мембран эритроцитов при действии 1,1-диметилгидразина в условиях in vivo

В предыдущих сериях экспериментов в условиях in vitro нами было показано, что витамин Е и С и селенит натрия повышали резистентность мембран эритроцитов и защищали эритроциты от повреждающего действия 1,1-ДМГ. Поэтому в серии экспериментов в условиях in vivo исследовали влияние 1,1-ДМГ на мембраны эритроцитов при изолированном воздействии и в сочетании с препаратом «Селевит». Разработанный в Казахской академии питания новый биопрепарат «Селевит» представляет собой водный раствор -каротина, селена и витаминов Е и С. В экспериментах определяли суточную динамику изменения состояния мембран эритроцитов кроликов-самцов после однократного введения препаратов. Животные были разделены на 3 группы. 1 группа - контрольная, животным второй и третьей группы вводили 1,1-ДМГ и 1,1-ДМГ совместно с препаратом «Селевит», соответственно. Первый забор крови производили непосредственно перед введением препаратов. Затем кровь отбирали через 3, 6, 12 и 24 часа после введения препаратов.

Влияние 1,1-диметилгидразина и препарата «Селевит» на осмотическую резистентность эритроцитов в условиях in vivo.

Результаты исследований изолированного и сочетанного с биопрепаратом «Селевит» влияния 1,1-диметилгидразина на осмотическую резистентность эритроцитов представлены на рисунках 35-38.

На рисунках приведены данные осмотической резистентности эритроцитов в гипотонических растворах NaCl (0,35-0,5г/100 мл) при однократном воздействии 1,1-ДМГ и в сочетании с селевитом. Как видно из рисунка 35, через 3 и 6 часов после начала эксперимента гемолиз эритроцитов в контрольной и в первой опытной группах незначительно увеличивается. Причем эритроциты животных опытной группы подвергаются гемолизу в большей степени. Гемолиз эритроцитов животных второй опытной группы через 3 и 6 часов снижается.

По оси абсцисс: время в часах; по оси ординат: величина гемолиза в %. (раствор NaCl - 0,35 г/100 мл).

Рисунок 35 - Изолированное влияние 1,1-диметилгидразина и в сочетании с препаратом «Селевит» на осмотическую резистентность эритроцитов в условиях in vivo

Из рисунка 35 видно, что в растворе NaCl 0,35 г/100 мл резистентность эритроцитов животных, после 6 часов по сравнению с эритроцитами контрольных животных практически не изменяется, тогда как в присутствии селевита наблюдается тенденция к снижению гемолиза эритроцитов. Эффект введения 1,1-ДМГ и совместно с биопрепаратом на гемолиз эритроцитов можно заметить после 12 и 24 часов. Следует отметить, что снижается гемолиз эритроцитов и контрольных, и опытных животных на 1±0,02, 2±0,03 и 3±0,03% соответственно.

Результаты исследования осмотической резистентности эритроцитов в 0,4 г/100 мл растворе NaCl показали, что через 3 часа снижается гемолиз эритроцитов контрольной и в меньшей степени гемолиз эритроцитов опытных групп животных (на 2-3%) (рисунок 36).

По оси абсцисс: время в часах; по оси ординат: величина гемолиза в % (раствор NaCl - 0,4 г/100 мл).

Рисунок 36 - Изолированное влияние 1,1-диметилгидразина и в сочетании с препаратом «Селевит» на осмотическую резистентность эритроцитов в условиях in vivo

Различия в уровне гемолиза контрольных и опытных животных можно наблюдать через 6-24 часа. Через 6 часов гемолиз эритроцитов контрольных практически не изменился, а гемолиз эритроцитов после введения 1,1-ДМГ даже повысился до 99,68±1,12%, тогда как присутствие селевита уменьшило уровень гемолиза до 92,82±1,07%. Дальнейшее снижение гемолиза эритроцитов 3-ей группы наблюдается через 12 и 24 часа после введения препаратов (85,82±1,17% и 92,02±1,27% соответственно). Из рисунка видно, что через 24 часа резистентность эритроцитов контрольных и 2-ой опытной группы практически не отличаются. Сравнение осмотической резистентности эритроцитов контрольной и опытных групп животных в разные периоды после начала эксперимента выявило, что через 12 часов гемолиз эритроцитов всех групп животных снижается и к 24 часам наблюдается повышение гемолиза. Аналогичные результаты были получены при определении осмотического гемолиза эритроцитов контрольной и опытных групп животных в 0,45 г/100 мл растворе NaCl (рисунок 37). Следует отметить, что гемолиз эритроцитов контрольной группы животных через 3 часа после начала эксперимента снижается (до 72,64±1,26; р0,005), через 6 часов уровень гемолиза повышается (до 83,43±2,12; р0,005).

По оси абсцисс: время в часах; по оси ординат: величина гемолиза в %. (раствор NaCl - 0,45 г/100 мл)

Рисунок 37 - Изолированное влияние 1,1-диметилгидразина и в сочетании с препаратом «Селевит» на осмотическую резистентность эритроцитов в условиях in vivo

Гемолиз эритроцитов животных после введения 1,1-ДМГ через 6 и 24 часа выше по сравнению с осмотическим гемолизом эритроцитов животных, получивших дополнительно селевит, тогда как через 12 часов при низком уровне гемолиза эритроцитов и контрольной и опытных групп животных резистентность эритроцитов 1-ой опытной группы выше (гемолиз контрольной составляет 51,13±1,22; 1-ой группы - 65,05±2,04; и 2-ой - 45,03±1,12).

Определение осмотической резистентности эритроцитов в 0,5 г/100 мл растворе NaCl выявило (рисунок 38), что показатели осмотического гемолиза эритроцитов 1-ой опытной группы через 3 и 24 часа после введения 1,1-ДМГ выше значений гемолиза эритроцитов 2-ой опытной группы (на 16,21 и 36,89% соответственно). При этой концентрации раствора NaCl (0,5г/100 мл) показатели гемолиза эритроцитов контрольных животных в каждом интервале времени после начала экспериментов значительно ниже по сравнению с уровнем гемолиза эритроцитов опытных групп животных.



По оси абсцисс: время в часах; по оси ординат: величина гемолиза в % (раствор NaCl - 0,5 г/100 мл)

Рисунок 38 - Изолированное влияние 1,1-диметилгидразина и в сочетании с препаратом «Селевит» на осмотическую резистентность эритроцитов в условиях in vivo

Через 6 часов после введения препаратов практически не наблюдается различий между показателями осмотической резистентности эритроцитов 2-х опытных групп, хотя и наблюдается тенденция к снижению гемолиза эритроцитов 2-ой опытной группы. Через 12 часов гемолиз эритроцитов кроликов после введения 1,1-ДМГ составляет 51,38±1,24 (р0,005), тогда уровень гемолиза эиртроцитов после сочетанного действия 1,1-ДМГ с селевитом приближается к контрольным значениям. Резкие изменения в резистентности эритроцитов наблюдаются через 24 часа после введения препаратов: гемолиз эритроцитов 1-ой опытной группы составляет 118,34±2,26 (р0,005), а в присутствии селевита - 81,45±1,65 (р0,005), в контрольной группе - 45,38±1,28 (р0,005).

Таким образом, результаты определения осмотической резистентсноти эритроцитов контрольной и опытных групп животных показали, что 1,1-диметилгидразин увеличивает гемолиз эритроцитов, а введение дополнительно селевита снижает повреждающий эффект 1,1-ДМГ. Различие показателей гемолиза эритроцитов в растворах NaCl различной концентрации, вероятно, связаны с тем, что концентрация равная 0,35г/100 мл близка к нижней границе резистентности (0,32-0,28г/100мл), в которой должны гемолизироваться все эритроциты, а концентрация равная 0,5г/100 мл близка к верхней границе резистентности (0,48-0,44г/100 мл), в которой должны разрушаться наименее резистентные эритроциты. Поэтому в 0,35г/100 мл растворе NaCl мы не заметили особых различий в резистентности эритроцитов контрольной и опытных групп животных, тогда как с увеличением концентрации растворов NaCl до 0,5 г/100 мл видно, что резистентность эритроцитов после действия 1,1-ДМГ снижается, а при совместном действии с селевитом повреждающий эффект токсиканта уменьшается.

Влияние 1,1-диметилгидразина и препарата «Селевит» на проницаемость эритроцитарных мембран в условиях in vivo.

Для того, чтобы выяснить с чем связано изменение осмотической резистентности эритроцитов в следующей серии экспериментов исследовали изолированное и сочетанное с селевитом влияние 1,1-диметилгидразина на проницаемость эритроцитарных мембран. ПЭМ изучали при разных соотношениях изотонических растворов мочевины и NaCl (рисунки 1-5).

На рисунке 39 приведены данные по исследованию ПЭМ при соотношении растворов мочевины и NaCl - 40:60.

Видно, что уже через 3 часа после введения препаратов наблюдается резкое увеличение уровня гемолиза эритроцитов 1-ой опытной группы (125,23±2,26; р0,005), при совместном действии с селевитом величина гемолиза ниже контрольной величины и составляет 53,54±0,76 (р0,001). При сравнении показателей ПЭМ в разные интервалы времени от начала эксперимента видно, что при сочетанном с селевитом влиянии 1,1-ДМГ уровень гемолиза ниже изолированного действия токсиканта. Следует отметить, что сопоставление изменений ПЭМ в зависимости от времени последействия выявило увеличение гемолиза эритроцитов контрольных животных через 12 часов после начала эксперимента по сравнению с эритроцитами опытных групп животных.

По оси абсцисс: время в часах; по оси ординат: величина гемолиза в % (соотношение растворов мочевины и NaCl - 40:60).

Рисунок 39 - Изолированное влияние 1,1-диметилгидразина и в сочетании с препаратом «Селевит» на проницаемость эритроцитарных мембран в условиях in vivo.

Такого же типа изменение в проницаемости мембран эритроцитов контрольных животных зарегистрировано и при соотношении растворов мочевины и NaCl - 45:55 (рисунок 40). Из рисунка 40 видно, что через 3, 6 и 12 часов после начала эксперимента показатель проницаемости мембран эритроцитов 1-ой опытной группы выше по сравнению с эритроцитами животных, подвергнутых действии 1,1-ДМГ совместно с селевитом. Через 24 часа ПЭМ контрольной и опытных групп животных практически не отличается.

По оси абсцисс: время в часах; по оси ординат: величина гемолиза в %. (соотношение растворов мочевины и NaCl - 45:55)

Рисунок 40 - Изолированное влияние 1,1-диметилгидразина и в сочетании с препаратом «Селевит» на проницаемость эритроцитарных мембран в условиях in vivo

На рисунке 41 представлены данные по определению ПЭМ при соотношениях растворов мочевины и NaCl - 50:50. Из рисунка видно, что в разные интервалы времени после действия препаратов тенденция увеличения проницаемости эритроцитов при однократном действии 1,1-диметилгидразина и снижения - при совместном действии 1,1-ДМГ с селевитом сохраняется. Необходимо отметить, что через 12 часов от начала эксперимента показатель проницаемости мембран эритроцитов как контрольной, так и опытных групп животных снижается.

По оси абсцисс: время в часах; по оси ординат: величина гемолиза в % (соотношение растворов мочевины и NaCl - 50:50)

Рисунок 41 - Изолированное влияние 1,1-диметилгидразина и в сочетании с препаратом «Селевит» на проницаемость эритроцитарных мембран в условиях in vivo

Влияние изолированного и в сочетании с препаратом «Селевит» действия 1,1-диметилгидразина на проницаемость эритроцитарных мембран приведены на рисунках 42 и 43 при соотношениях растворов мочевины и NaCl 55:45 и 60/40. Сравнение показателей ПЭМ после действия исследованных препаратов также выявили тенденцию снижения проницаемости при совместном действии 1,1-ДМГ и селевита. Снижение уровня гемолиза эритроцитов контрольных и опытных групп животных сохраняется в 12-часовом интервале. Можно предположить, что к 12 часам после начала эксперимента в крови увеличивается содержание более резистентных эритроцитов в результате эритропоэза.

Сопоставление данных, полученных при определении показателей ПЭМ в растворах с разными соотношениями мочевины и NaCl, показали, что проницаемость мембран эиртроцитов при однократном действии 1,1-диметигидразина снижается по сравнению с эритроцитами контрольной и 2-ой опытной группой животных.

По оси абсцисс: время в часах; по оси ординат: величина гемолиза в %. (соотношение растворов мочевины и NaCl 55:45).

Рисунок 42 - Изолированное влияние 1,1-диметилгидразина и в сочетании с препаратом «Селевит» на проницаемость эритроцитарных мембран в условиях in vivo.



По оси абсцисс: время в часах; по оси ординат: величина гемолиза в %. (соотношение растворов мочевины и NaCl - 60:40).

Рисунок 43 - Изолированное влияние 1,1-диметилгидразина и в сочетании с препаратом «Селевит» на проницаемость эритроцитарных мембран в условиях in vivo

Влияние 1,1-диметилгидразина и препарата «Селевит» на перекисный гемолиз эритроцитов в условиях in vivo.

В следующей серии экспериментов определяли перекисный гемолиз эритроцитов кроликов, подвергнутых изолированному и сочетанному с селевитом действию 1,1-ДМГ. Следует отметить, что перекись водорода легко проникает через биологические мембраны внутрь клеток и может оказывать повреждающее действие на клеточную мембрану. Поэтому устойчивость эритроцитов к действию H2O2 зависит от состояния клеточных мембран. Из рисунка 44 видно, что с увеличением времени последействия исследованных препаратов изменяется устойчивость эритроцитов к действию перекиси водорода.



По оси абсцисс: время в часах; по оси ординат: величина гемолиза в % (H2O2 - 250 мМ)

Рисунок 44 - Изолированное влияние 1,1-диметилгидразина и в сочетании с препаратом «Селевит» на перекисную резистентность эритроцитов в условиях in vivo

Через 3 часа у эритроцитов кроликов 1-ой опытной группы уровень гемолиза выше по сравнению с эритроцитами контрольных животных и животных 2-ой группы и составляет 125,29±1,78 (р0,001), 95,24±1,96 (р0,005), 55,05±0,86 (р0,005) соответственно. С увеличением интервала времени до 6 часов перекисный гемолиз эритроцитов кроликов после действия 1,1-ДМГ несколько снижается (до 110,09±1,48; р0,005) по сравнению с 3-х часовым интервалом, хотя уровень гемолиза остается выше контрольной величины и выше гемолиза эритроцитов контрольной и 2-ой опытной групп животных. При дальнейшем увеличении интервала времени после начала эксперимента перекисная резистентность эритроцитов и контрольных и опытных животных снижается, хотя гемолиз эритроцитов животных, получивших разовую дозу 1,1-диметилгидразина, сохраняет более высокие значения по сравнению с эритроцитами остальных групп животных. Необходимо отметить, что при всех исследованных интервалах времени после действия препаратов в присутствии селевита показатели гемолиза значительно ниже значений контрольных животных и животных, получивших дозу 1,1-ДМГ.

Таким образом, результаты экспериментов по определению перекисной резистентности эритроцитов показали, что препарат «Селевит» повышает резистентность мембран эритроцитов и защищает клеточную мембрану от повреждающего действия 1,1-диметилгидразина.

Влияние 1,1-диметилгидразина и препарата «Селевит» на активность каталазы эритроцитов в условиях in vivo.

Перекись водорода относится к активным формам кислорода, в организме Н2О2 разрушается каталазой. Каталаза широко распространена в организме человека и животных, причем наибольшее количество фермента обнаружены в эритроцитах, печени и почках. Функцией фермента является предотвращение накопления перекиси водорода, оказывающей повреждающее действие на клеточные компоненты. В связи с этим представляло интерес изучить влияние однократного действия 1,1-ДМГ в отдельности и в сочетании с препаратом «Селевит» на активность этого фермента в эритроцитах кролика.