Определение витамина В12 в биологических объектах

Размещено на http://www.allbest.ru/

Размещено на http://www.allbest.ru/

МИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ И НАУКИ УКРАИНЫ

НТУ «ХПИ»

Кафедра аналитической химии и биотехнологии

КУРСОВАЯ РАБОТА

ПО ТЕМЕ:

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ВИТАМИНА В12 В БИОЛОГИЧЕСКИХ ОБЬЕКТАХ

СТУДЕНТКИ 3-го КУРСА

ГРУППЫ О-57а

КУПИНОЙ А.В.

ПРЕПОДАВАТЕЛЬ

БЕЛЫХ И.А.

ХАРЬКОВ-2009

СОДЕРЖАНИЕ

Вступление

1. Витамин В12 (циклокобаламин)

2. Общая информация об определении витаминов в биообъектах

3. Определение витамина В12 различными методами

Заключение

Список использованной литературы

ВСТУПЛЕНИЕ

Витамины - это вещества, которые относятся к незаменимым факторам питания человека и животных. Это низкомолекулярные биологические активные вещества, обеспечивающие нормальное течение биохимических и физиологических процессов в организме. Они является необходимой составной пищи и оказывают действие на обмен веществ в очень малых количествах. Суточная потребность в витаминах измеряется в миллиграммах, микро граммах. Некоторые витамины могут вообще не синтезироваться в организме или синтезироваться в недостаточных количествах и должны поступать извне (суточная потребность холина - 1 г/сут, суточная потребность в полиненасыщенных высших жирных кислотах 1 г/сут).

Все витамины разнообразные по химическому строению, и свойствам. И их разделяют на 2 группы по растворимости:

· водорастворимые витамины - С, группа В, и др.

· жирорастворимые - А,Д,Е,К.

Витамины называют или латинскими буквами (А,В,С,D). Некоторые буквы, например В, охватывают целые группы: от B1 до B15. Ещё эти вещества называют химическим названием или по авитаминозу который присущ данному витамину.

1. Витамин В12 (Цианокобаламин)

Химическая формула

Соa-[a-(5,6-Диметилбензимидазолил)]-Соb-кобамидцианид или

a-(5,6-диметилбензимидазолил)-кобамидцианид

Химическая структура

B12 имеет самую сложную по сравнению с другими витаминами структуру, основой которой является корриновое кольцо. Коррин во многом аналогичен порфирину (сложной структуре, входящей в состав гема, хлорофилла и цитохромов), но отличается от порфирина тем, что два пиррольных цикла в составе коррина соединены между собой непосредственно, а не метиленовым мостиком.

В центре корриновой структуры располагается ион кобальта. Четыре координационных связи кобальт образует с атомами азота. Ещё одна координационная связь соединяет кобальт с диметилбензимидазольным нуклеотидом. Последняя, шестая координационная связь кобальта остаётся свободной: именно по этой связи и присоединяется цианогруппа, гидроксильная группа, метильный или 5'-дезоксиаденозильный остаток с образованием четырёх вариантов витамина B12, соответственно. Ковалентная связь углерод-кобальт в структуре цианокобаламина -- единственный в природе пример ковалентной связи металл-углерод.

Краткая характеристика витамина

Цианокобаламин - является одним из немногих водорастворимых витаминов, которые накапливаются в человеческом организме. Витамин B12 аккумулируется в таких органах как почки, печень и легкие, а так же селезенка. Оказывает существенное влияние на процессы обмена веществ - белков, синтез аминокислот, нуклииновых кислот, пуринов. Стимулирует рост у детей.

Витамин B12 представлен в виде насыщенно красного порошка, без вкуса и запаха. Витамин В12 не теряет своих свойств при воздействии высоких температур и попадании прямых солнечных лучей.

Витамину В12, точнее кобамидным коферментам, принадлежит важнейшая роль в синтезе, а возможно, и в переносе подвижных метильных групп. В процессах синтеза и переноса одноуглеродистых фрагментов наблюдается связь (механизм которой ещё не выяснен) между фолиевыми кислотами и группой кобаламина. Предполагают, что витамин В12 учавствует также в ферментной системе. Невозможность использования в организме В 12 возникает в результате атрофии железистых клеток дна желудка, продуцирующих гастромукопротеин, который является обязательным компанентом, обеспечивающим усвоение этого витамина организмом.

Действие цианокобаламина в организме

Цианокобаламин обладает выраженным липотропным действием, он предупреждает жировую инфильтрацию печени, повышает потребление кислорода клетками при острой и хронической гипоксии. Витамин B12 участвует в процессах трансметилирования, переноса водорода. Цианокобаламин принимает непосредственное участие в процессе синтеза метионина. Также витамин B12 играет важную роль в регуляции функции кроветворных органов: он принимает участие в синтезе пуриновых и пиримидиновых оснований, нуклеиновых кислот, необходимых для процесса эритропоэза, активно влияет на накопление в эритроцитах соединений, содержащих сульфгидрильные группы.

Цианокобаламин помогает нормализовать пониженное кровяное давления. Стимулируя синтез протеина в человеческом организме, витамин В12 является своеобразным анаболиком. В самое последнее время получены данные, что витамин B12 имеет важное значение и для образования костей. Рост костей может происходить лишь в том случае, когда в остеобластах (клетках, из которых создаются кости) имеется достаточный запас витамина. Витамин В12 увеличивает количество лейкоцитов и ускоряет их деятельность, то есть воздействует на ретикулоэндотелиальную систему, благодаря данному препарату повышается сопротивляемость организма всем возможным заболеваниям. Недостаток витамина B12 значительно сокращает жизнь больных СПИДом. Витамин В12 стимулирует деятельность кровеносных органов и оказывает существенное влияние на способность человека к восприятию и усвоению новой информации. Его недостаток вызывает депрессивное состояние и рассредоточение внимания. Витамин B12 является одним из веществ, необходимых для здоровья репродуктивных органов - Очень важен для поддержания в хорошей форме женского и мужского здоровья - он способен корректировать снижение содержания сперматозоидов в семенной жидкости.

ИСТОЧНИКИ ВИТАМИНА В12

Витамин В12 является единственным витамином, синтез которого осуществляется исключительно микроорганизмами; ни растения, ни ткани животных этой особенностью не наделены. Этот витамин вырабатывается в пищеварительном тракте любого организма, мясо которых употребляется людьми в пищу, а также в пищеварительном тракте человека. В растительных продуктах содержится очень малое количество этого витамина. Они практически не способны синтезировать его (несмотря на то, что иногда содержат много кобальта, который входит в состав витамина B12).

Витамин B12 человек может в первую очередь получать с животной пищей, в том числе с мясом (особенно с печенью и почками), рыбой, яйцами и молочными продуктами. Главным местом накопления витамина В12 в организме человека является печень, в которой содержится до нескольких миллиграммов витамина. В печень он поступает с животной пищей или синтезируется микрофлорой кишечника при условии доставки с пищей кобальта. Так же источником витамина В12 могут быть обогащённые им продукты: например, таким источником являются сухие завтраки, пивные дрожжи и пищевые дрожжи, витаминизированные хлопья и изделия из дроблёного зерна, а также специальные добавки. Во многих странах пищевой промышленности витамин добавляют в такие продукты, как сухие завтраки, шоколадные батончики, энергетические напитки.

Так же витамин В12 производится посредством бактериальной ферментации. Для получения цианокобаламина используют следующие микроорганизмы Prop, freudenreichii ATCC 6207, Prop, shermanii ATCC 13673, Prop, shermanii BKM-103 и их варианты и мутанты.

Суточная потребность в витамине В12 для взрослого человека составляет около З мкг (0,003 мг).

2. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ВИТАМИНОВ В БИОЛОГИЧЕСКИХ ОБЬЕКТАХ (ОБЩАЯ ИНФОРМАЦИЯ)

Как было установлено, витамины содержатся в продуктах растительного и животного происхождения, поэтому важно знать содержание витаминов в продукте.

Единого метода определения витаминов нет и не может быть, так как химически это совершенно разные вещества, которые объединяются лишь по своим биологическим свойствам, но в отличие от других биологически активных веществ, они действуют не на один какой-то орган, а на всю жизнедеятельность организма. Специальные реакции на отдельные витамины зависят того, к какой группе химических соединений они относятся.

Современные методы определения витаминов в биологических объектах делят на физико-химические и биологические.

Физико-химические

Основаны на зависимости физических свойств вещества от его природы. Физико-химические методы анализа могут включать химические превращения определяемого соединения, растворение образца, концентрирование анализируемого компонента, маскирование мешающих веществ и т.д. В отличие от "классических" химических методов анализа, где аналитическим сигналом служит масса вещества или его объем, в физико-химических методах анализа в качестве аналитического сигнала используют интенсивность излучения, силу тока, электропроводность, разность потенциалов…

При взаимодействии витаминов с рядом химических соединений наблюдаются характерные цветные реакции, интенсивность окраски которых пропорциональна концентрации витаминов в исследуемом растворе. Поэтому витамины можно определить фотоколориметрически, например витамин В1 - при помощи диазореак-тива и т.д. Эти методы позволяют судить как о наличии витаминов, так и о количественном содержании их в исследуемом пищевом продукте или органах и тканях животных и человека. Для выяснения обеспеченности организма человека каким-либо витамином часто определяют соответствующий витамин или продукт его обмена в сыворотке крови, моче или биопсийном материале. Однако эти методы могут быть применены не во всех случаях. Встречаются трудности при подборе специфического реактива для взаимодействия с определенным витамином. Некоторые витамины обладают способностью поглощать оптическое излучение только определенной части спектра. В частности, витамин А имеет специфичную полосу поглощения при 328-330 нм. Измеряя коэффициент поглощения спектрофотометрически, можно достаточно точно определить количественное содержание витаминов в исследуемом объекте. Для определения витаминов В1, В2 и других применяют флюорометрические методы. Используют и титриметрические методы.

Биологические методы

Методы качественного обнаружения и количественного определения неорганических и органических соединений, основанные на применении живых организмов в качестве аналитических индикаторов. Живые организмы всегда обитают в среде строго определенного химического состава. В биологических методах анализа устанавливаются связи характера и (или) интенсивности ответного сигнала с кол-вом определяемого компонента. В качестве индикаторов применяются микроорганизмы (бактерии, дрожжи, плесневые грибы), водоросли и высшие растения, водные беспозвоночные и позвоночные животные (простейшие, ракообразные, моллюски, личинки комаров, олигохеты, пиявки, рыбы., насекомые, черви, а также ткани, различные органы и системы (нервная, кровеносная, половая и др.) теплокровных. Питательная среда может быть естественной, искусственной или синтетической.

Биологические методы основаны на определении того минимального количества витамина, которое при добавлении к искусственной диете, лишенной только данного изучаемого витамина, предохраняет животное от развития авитаминоза или излечивает его от уже развившейся болезни. Это количество витамина условно принимают за единицу (в литературе известны «голубиные», «крысиные» единицы). Большое место в количественном определении ряда витаминов: фолиевой, пара-аминобензойной кислот и др. - в биологических жидкостях, в частности в крови, занимают микробиологические методы, основанные на измерении скорости роста бактерий; последняя пропорциональна концентрации витамина в исследуемом объекте. Количество витаминов принято выражать, кроме того, в миллиграммах, микрограммах, международных единицах (ME, или IU).

Из пищевых продуктов витамины выделяют, используя полярные и неполярные растворители. Для разделения витаминов используются хромотаграфические методы - разделение и анализ смесей анализируемых веществ сорбционными методами в динамических условиях. Метод основан на различном распределении веществ между двумя несмешивающимися фазами - подвижной и неподвижной.

3. ОПРЕДЕЛЕНИЕ В12 РАЗЛИЧНЫМИ МЕТОДАМИ

Рассмотрим возможность применения этих методов для определения цианокобаламина в биологических обьектах.

Применение физико-химических методов

· Хроматография

Цианкобаламин накапливается в клетках бактерий, поэтому операции по выделению витамина заключаются в следующем: сепарирование клеток, экстрагирование водой при рН 4,5-5,0 и температуре 85-90?С, в присутствии стабилизатора (0,25% раствор натрия нитрита), Экстракция протекает в течение часа, после чего водный раствор охлаждают, нейтрализуют раствором едкого натра, добавляют коагулянты белка - хлорид железа трехвалентного и алюминия сульфат с последующим фильтрованием. Фильтрат упаривают и дополнительно очищают, используя методы ионного обмена и хроматографии, после чего проводят кристаллизацию витамина при 3-4С из водно-ацетонового раствора.

Итак, в данном случае в качестве аналитического метода используют тонкослойную хроматографию. Этот тип определения отличается простотой осуществления и экономией времени. Он основан на том, что растворимость биологически активных веществ весьма различна. Знание этой величины играет большую роль как при экстракции, так и при нанесении и разделении. Водорастворимые витамины на высушенном слое силикагеля значительно стабильнее жирорастворимых витаминов, что облегчает нанесение и количественное определение.

Условия разделения и результаты

При использовании смеси Генсхирта и Мальзахера на силикагеле цианкобаламин остается в точке старта (см. табл. 1), а водой перемещается (Rf * 100 е^22).

Обнаружение и возможности определения

Табл 1. Ориентировочная величина Rf x 100 и непосредственное обнаружение витамина В12 с использованием различных источников освещения на слоях силикагеля с флуоресцирующей добавкой

Рис. 2. Одномерная хроматограмма водорастворимых витаминов.

Разделение водой на слое силикагель + флуоресцентный индикатор (время анализа около 40 мин); снято в коротковолновом УФ-свете. 1 -- 30 мг тиамина * НС1; 2 -- 3 мг рибофлавина;7--10 дг цианокобаламина

Для идентификации относительно больших количеств цианкобаламина можно рассматривать подобную хроматограмму при различном освещении. При дневном свете по красной окраске можно определить еще 0,3 мг, в Уф-свете при длине волны 365 мм -- 0,5 мг и при длине волны 254 мм -- 1 мг в виде темных пятен на флуоресцирующем фоне. После хлорирования и опрыскивания раствором о-толидин -- иодид калия (реактив № 32) можно еще обнаружить даже 0,2 мг в виде фиолетовых пятен. Для микроопределения следует также использовать биоавтографию.

ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВИТАМИНА В12 ИММУНОФЕРМЕНТНЫМ И СПЕКТРОФОТОМЕТРИЧЕСКИМ МЕТОДАМИ

Поскольку содержание кобаламинов в организме крайне незначительно, определение их возможно современными высокочувствительными методами - радиоиммунными, энзимоиммунными и иммунофлюоресцентными. Большинство наборов, выпускаемых фирмами в данное время, приспособлено для автоматизированных “закрытых” систем и очень дороги, поэтому разработка относительно недорогого иммуноферментного метода, приспособленного для “открытой” системы, является весьма актуальной проблемой. Применяют твердофазный иммуноферментный метод, используя моноклональные антитела против витамина В12. Поскольку витамин В12 является гаптеном, для проведения иммуноэнзимного анализа требуется получение конъюгатов этого соединения с бычьим сывороточным альбумином.

Получение конъюгатов проводили карбодиимидным методом. Для конъюгата витамина В12 использовали его карбоксильное производное. Ниже приводится описание метода по получению конъюгатой Альб- В12.

10 мг карбоксилатного производного цианкобаламина (7 мкмоль) растворяют в 2 мл абсолютного диметилформамида, и добавляют по 2 мг дициклогексилкарбодиимида(10 мкмоль). Реакционную смесь инкубируют в темноте в течение 2-х суток витамина В12 до выпадения кристаллов дициклогексилмочевины. Затем супернатант с N-гидрокси-сукцинимидилкобаламином юобавляют к 6,5 мл раствора БСА(10 мг/мл) в 0,1 М карбонатном буфере, рН 9,2. Реакцию конъюгирования проводят в течение 6 часов при комнатной температуре в темноте, после чего конъюгат диализируют в темноте при 4°С против 0,01М трис-хлоридного буфера, рН 7,2, содержащего 0,15М хлорида натрия для удаления несвязавшихся продуктов реакции (соответственно цианкобаламина). Степень модификации БСА цианкобаламином определяли спектрофотометрически, используя коэффициент экстинкции 8700 М -1 см -1 при L=550 нм. В нашем случае она составила 0,3 моля на моль белка.

Твердофазным носителем служили иммунологические планшеты, которые были сенсибилизированы растворами конъюгатов. Стандартные растворы получают из конъюгатов Альб-В12, определяя их концентрацию спектрофотометрически. В данной системе был применен непрямой конкурентный метод иммуноферментного анализа с использованием моноклональных антител против витамина. Количество связавшихся антител определяют, используя конъюгат анти-IgG человека с пероксидазой хрена /анти-IgG-ПХ/, по его связыванию с твердой фазой. Субстратом реакции служил ТМВ.

Проводят работа по подбору эквивалентных концентраций всех реагентов, участвующих в реакции.

Ниже приводятся условия постановки реакции с указанием подобранных разведений для всех реагентов.

Сенсибилизацию планшетов проводили конъюгатами Альб-В12 и Альб-фолат в разведении 1:20 в фосфатном буфере с БСА в течение первых 3-х часов при 37 0С, а затем в течение ночи в холодильнике. Затем планшеты отмывают несколько раз ФСБ. Антигены, т.е. стандартные растворы и испытуемые образцы, предварительно прогревают при 100 0С в растворе 0,3N NaOH с KCN и с дитиотретолом /ДТТ/ для перевода всех дериватов в циан-форму и предотвращения денатурации при кипячении. Используют следующие концентрации стандартных растворов: 1300 пг/мл, 650 пг/мл, 300 пг/мл, 150 пг/мл и 75 пг/мл - для витамина В12 и 20нг/мл.

Стандартные растворы и испытуемые образцы - 0,1 мл - помещают в специальные пробирки и добавляют по 0,1 мл раствора NaOH(0,3 N) c KCN(1мг/мл) и ДТТ (50мкл ДТТ на 6 мл раствора щелочи). Пробирки закрывают крышечками из фольги и помещают на 10 мин в кипящую водяную баню. Затем все пробы охлаждают и вносят по 0,1 мл в сенсибилизированные планшеты. Реакцию проводят в течение 12-14 часов при 4-60 , после чего планшеты снова отмывают, а затем вносят соответственно по 0,1 мл антител против витамина В12 в разведении 1:1000. Планшеты снова помещают в холодильник на 12-14 часов, после чего их в очередной раз отмывают ФСБ. Затем во все лунки планшета вносили по 0,1 мл анти-IgG-ПХ в разведении 1:10000 и помещают в термостат на 2 часа, снова отмывают ФСБ и затем добавляют 0,1 мл ТМВ, а после развития окраски через 10-15 мин реакцию закрепляют 4% H2SO4. Результаты спектрофотометрируют на при L=450 nm. На основании стандартных разведений строят кривую, по которой затем определяют концентрацию исследуемого соединения(В12) в испытуемых образцах.

Ниже приведены стандартные кривые, полученные при использовании данного метода.

Всего определение витамина было проведено в образцах крови 25-ти доноров и 250-ти больных с различными видами анемий. Средние значения витамина В12 в норме составило 700± 150 мг/мл (350-900).

ОПРЕДЕЛЕНИЕ В РАСТВОРАХ

Спектрофотометрический

Растворы, содержащие в 1 мл 0,03 мг, и растворы, со-0,1; 0,2; 0,5 или 1 мг в -1 мл, предварительно водой в .отношении 1:2, 1:4, 1:10 и 1:20, помещают в кювету спектрофотометра с толщиной слоя в 1 см и определяют оптическую плотность при длине волны 361 нм.

Содержание цианокобаламина в миллиграммах в 1 мл (х) вычисляют по формуле:

X=(E*10*v)/201

где v -- разведение, 10-- постоянный коэффициент, Е-- найденная оптическая плотность.

Колориметрический метод

Испытуемый раствор наливают в кювету метра с толщиной слоя 1--2 см и находят величину оптической плотности раствора (зеленый светофильтр). По найденной величине, пользуясь калибровочным графиком, устанавливают содержание витамина В12 в 1 мл раствора прямым путем.

Для построения калибровочного графика берут растворы чистого кристаллического цианокобаламина, содержащие 0,02; 0,025; 0,03; 0,035; 0,04; 0,045; 0,05; 0,055; 0,065 и 0,07 мг в 1 мл и определяют оптическую плотность этих растворов.

На оси абсцисс откладывают содержание витамина B12, а на оси ординат--соответствующие плотности.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ В12 В КРИСТАЛЛИЧЕСКОМ ПРЕПАРАТЕ

(спектрофотометрический метод)

Около 0,02 г препарата (точная навеска) растворяют в воде в мерной колбе емкостью 500 мл и доводят водой до метки. Определяют оптическую плотность раствора на спектрофотометре при длине волны 361 нм в кювете с толщиной слоя 1 см, употребляя в качестве контрольного раствора воду.

Содержание витамина В12 а процентах (х) рассчитывают по формуле:

витамин цианокобаламин биологический

X=(c*500*100)/(207*100*a)

Где С - оптическая плотность раствора, а - навеска в граммах, 50 - разведение в мл, 100 - постоянный коэффициент, 100 - пересчёт в %.

Применение биологических методов

Определение цианокобаламина c Escherichia coli в драже или таблетках

Содержание цианокобаламина определяют микробиологическим методом с Escherichia coli 113-3 в качестве тест - микроорганизма.

Точную навеску порошка растертых драже, таблеток или количество таблеток, покрытых оболочкой, растертых в порошок, указанное в соответствующих частных статьях, количественно переносят водой в мерную колбу определенной вместимости и доводят объем раствора водой до метки, перемешивают и фильтруют. Из полученного раствора делают разведение 1% раствором натрия цитрата с таким расчетом, чтобы концентрация раствора для анализа была близкой к контрольной концентрации раствора стандартного образца - 0,05 мкг в 1 мл.

В чашки Петри (6 чашек для построения стандартной кривой и 3 чашки для раствора испытуемого препарата) одинакового диаметра с ровным и плоским дном, установленные на горизонтальном столе, отрегулированном по ватерпасу, разливают по 10-12 мл расплавленной и охлажденной до температуры 48-50 град. С основной среды, засеянной суспензией Е. coli 113-3 из расчета от 4 до 6 мл суспензии на 200 мл основной среды. После застывания среды на каждой чашке стерильным бором делают по трафарету под углом 60 град. С друг к другу 6 лунок диаметром 8 мм. В три лунки (через одну) 6 чашек, используемых для построения стандартной кривой, и 3 чашек - для раствора испытуемого препарата, вносят по 0,1 мл раствора Государственного стандартного образца контрольной концентрации (0,05 мкг/мл). В три лунки (через одну) каждых 3 чашек вносят по 0,1 мл одной из концентрации остальных растворов Государственного стандартного образца, а также раствора испытуемого препарата. Чашки выдерживают в термостате при 37 град. С от 16 до 18 ч. После этого измеряют диаметры зон стимуляции роста тест - микроорганизма для каждой концентраций растворов стандартного образца. После измерения зон роста для всех концентраций рассчитывают среднюю величину зоны, учитывая в каждом случае 3 чашки, т. е. 9 зон, затем рассчитывают среднюю величину зоны для контрольной концентрации, учитывая все чашки, т. е. 27 зон. По разности между средней величиной зоны контрольной концентрации раствора (0,05 мкг/мл), выведенной из всех чашек, и средней величиной зоны контрольной концентрации раствора Государственного стандартного образца, выведенной из 3 чашек с каждой отдельной концентрацией, находят поправку к величине зоны данной концентрации. Найденную поправку прибавляют к средней величине зоны данной концентрации, если она положительная, и вычитают, если она отрицательная. Аналогичным образом делают поправку к концентрации раствора испытуемого препарата. Содержание С63Н88СоN14О14Р (цианокобаламина) в одном драже или одной таблетке в граммах (X) вычисляют по формуле:

С х б х К

Х = -------------,

а х 1 000 000

где С - содержание цианокобаламина в 1 мл испытуемого раствора,найденное по стандартной кривой, в микрограммах; К - коэффициент разведения; а - навеска препарата в граммах или количество таблеток, покрытых оболочкой; б - средняя масса одного драже в граммах; 1 000 000 - пересчет в граммы.

Выделение В12 из микробной массы и животных тканей

Витамин В12 кристаллизуется в виде темно-красных игл или призм. Цвет варьирует от величины кристаллов. Кристаллографические измерения показывают, что кристаллы относятся к орторомбической системе и имеют призматическую форму. При кристаллизации из водного раствора и из смеси воды с ацетоном они содержат значительное, но изменчивое количество непрочно связанной кристаллизационной воды. Ее можно удалить нагреванием при пониженном давлении, причем кристаллы не теряют своей формы. После этого обезвоженный материал может снова поглощать влагу из атмосферного воздуха в количестве 10-12%; это и есть тот продукт, который обычно выпускается под названием витамина В12 и зарегистрирован в фармакопеях Англии и США. Витамин В12 довольно хорошо растворим в воде (около 1,2% при комнатной температуре), а также в низших спиртах, в низших алифатических кислотах и в фенолах, но нерастворим во многих других органических жидкостях. Он практически не растворяется в пиридине и других третичных аминах, но растворим в некоторых жидких или расплавленных амидах, например в ацетамиде и диметилформамиде. Витамин является левовращающим веществом, но интенсивная, окраска затрудняет измерение оптического вращения. Витамин В12 обладает диамагнитными свойствами, что указывает на трехвалентное состояние кобальта. Обычно витамин выделяют из микробной массы или животных тканей, используя растворы, содержащие цианид-ионы, играющие роль шестого лиганда кобальта. Однако сам цианкобаламин метаболически не активен. В состав ферментов входит соединение, в котором цианогруппа замещена остатком 5-дезоксиаденозина или метальным радикалом.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Сегодня существует масса методов анализа биологических систем, таких как молекулярная динамика, жидкостная хроматография, масс-спектрометрия, рентгеноструктурный анализ, инфракрасная спектроскопия, электронная микроскопия, сканирующая электронная микроскопия, биофизические нанотехнологии. Но в связи с тем, что каждый исследуемый продукт имеет ряд индивидуальных характеристик, которые невозможно определить тем или иным методом, применять в биохимической деятельности приходится далеко не все подобные методы. Так же роль играет и не очень хорошее обеспечение реагентами лабораторий, и высокая стоимость, а также продолжительность некоторых аналитических процессов.

Следовательно, современная научная деятельность нуждается в новых и более выгодных методах исследования веществ.

В курсовой работе я рассматривала физико-химические и биологические методы анализа. Все эти методы удобны и действенны, а кроме того ещё и надёжны. Я считаю, что работать только с теоретическим материалом мало для того, чтобы сделать точную оценку методам определения витамина В12, но возможности для практической работы нет.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Борисова Т.Г. Основы технологии антибиотиков и витамина В12

2. Девятнин В.А. Методы химического анализа в производстве витаминов

3. Богомолов А.И. Современные методы исследования органических веществ

4. Шнайдман Л.О.. Производство витаминов

5. www.vitamini.ru

Размещено на Allbest.ru