Диагностические сыворотки используются для установления лабораторным путем диагноза инфекционного заболевания: при помощи специфических антител распознается выделенный из организма микроб -- возбудитель данного заболевания.

Лечебные и диагностические сыворотки готовятся путем иммунизации животных соответствующими антигенами. Для получения больших количеств лечебной сыворотки иммунизируют крупных животных (лошадей); диагностические сыворотки получаются чаще всего путем иммунизации кроликов. Иммунизация проводится путем подкожных или внутривенных инъекций антигена в возрастающих количествах обычно с интервалами между инъекциями в 5--8 дней; число инъекций зависит от цели иммунизации и характера антигена.

Первым этапом в технике получения иммунных сывороток является приготовление антигенов. Антигенами называются чужеродные для организма вещества, которые вызывают в организме образование антител. Последние различным образом воздействуют на микробы или их продукты. Антигеном может быть любое вещество белковой природы -- микробы или другие клетки, продукты микробов (например, токсины) и, наконец, другие белковые вещества (например, сыворотка).

По окончании курса иммунизации у животных стерильно берут кровь (у лошадей -- путем кровопускания из яремной вены, у кроликов--непосредственно шприцем из сердца) и получают из нее после свертывания сыворотку. С этой целью кровь, собранную в стерильную посуду, сначала помещают в термостат при 37° на 4--6 часов, для ускорения свертывания, затем в ледник на сутки. Полученную прозрачную сыворотку осторожно отсасывают в стерильную посуду, прибавляют к ней для консервирования 0,5% хлороформа или других веществ. Лечебные сыворотки выдерживают на леднике в течение 4--6 месяцев. За это время происходит просветление сыворотки вследствие выпадения нестойких белков, снижаются ее токсические для человека свойства и устанавливается более или менее устойчивый титр антител. Затем сыворотки титруются на содержание антител, проверяются на стерильность и на безвредность для животных и расфасовываются по ампулам. Сыворотки сохраняются на холоду и в темноте; срок годности их считается 1 год; сыворотки помутневшие не допускаются к употреблению.

Наибольшее распространение приобрели антитоксические лечебные сыворотки (противодифтерийная, противостолбнячная, противогангренозные и др.), дающие быстрый терапевтический эффект благодаря нейтрализации микробного токсина в организме больного. Антибактериальные сыворотки (противоменингококковая, противострептококковая) оказывают более медленный эффект.

При практическом применении лечебных сывороток больному всегда вводят строго определенные дозы этих сывороток. Для антитоксических сывороток лечебную силу определяют в так называемых антитоксических единицах, обозначаемых АЕ. Единица антитоксина является условной величиной. Так, для дифтерийного антитоксина I АЕ считается то наименьшее количество иммунной сыворотки, которое нейтрализует 100 Dim дифтерийного токсина для морской свинки весом 250 г.

Диагностические сыворотки (агглютинирующие, преципитирующие и гемолитические) широко применяются в лабораторной практике.

Иммунизация кролика. Наиболее распространенным способом иммунизации животных является подкожное или внутривенное введение антигена (техника введения та же, что при заражении животных, см. стр. 107--109).

Антиген вводят в вену при помощи стерильного шприца с тонкой иглой. Наполнив шприц соответствующим антигеном, необходимо удалить пузырьки воздуха во избежание воздушной эмболии в случае попадания .воздуха в вену; для этого берут шприц вертикально, вверх иглой, (насаживают на конец иглы кусок стерильной (ваты и осторожно проталкивают поршнем поднявшиеся кверху пузырьки воздуха вместе с некоторым количеством жидкости. Техника внутривенного введения описана на стр. 109.

Объем вводимой в вену жидкости обычно равен 0,5--1-- 1,5 мл. Если антигеном являются бактерии, то делают суспензию по стандарту из суточной культуры бактерий, убивают бактерий нагреванием при 60° в течение часа и вводят в вену 1 мл суспензии. При иммунизации эритроцитами отмывают их физиологическим раствором путем троекратного центрифугирования и отсасывания жидкости над осадком, затем приготовляют 50% взвесь эритроцитов в физиологическом растворе и вводят в вену 0,5 мл этой взвеси. При повторной иммунизации доза антигена увеличивается.

Взятие крови у кролика. Небольшие количества крови у кролика берут из краевой ушной вены. Техника взятия крови из вены подобна технике внутривенных инъекций, отличаясь тем, что здесь берут пустой шприц, в который медленно набирают, вытягивая поршень, свободно поступающую из вены кровь. Если нет необходимости в сохранении стерильности крови, то можно получать ее путем прокола вены иглой шприца, через которую кровь обильно вытекает в подставленную пробирку. Большие количества крови извлекают непосредственно из сердца стерильным шприцем (см. стр. 110), после чего кролику вводят подкожно равный объем подогретого до 38° физиологического раствора.

Получение адсорбированной агглютинирующей сыворотки методом истощения (адсорбции) по Кастеллани.

Метод адсорбции агглютининов по Кастеллани

При постановке реакции агглютинации иногда наблюдается явление групповой агглютинации, когда сыворотка больного (а иногда и агглютипирующая диагностическая сыворотка) агглютинирует не один вид микроба, а несколько видов, родственных один другому. Так, например, сыворотка больного брюшным тифом может агглютинировать не только брюшнотифозных бактерий, но и паратифозных А и В; диагностическая дизентерийная сыворотка агглютинирует несколько видов дизентерийных бактерий. То же явление может встретиться и при определении вида исследуемого микроба путем агглютинации, когда обнаруживается, что он агглютинируется не одной специфической сывороткой, но и другими сыворотками близких типов.

В этих случаях, благодаря наличию идентичных компонентов в сложных бактериальных антигенах, в иммунной сыворотке могут оказаться не только антитела к специфическому микробу, но и групповые антитела к родственным видам микробов. Это явление, затрудняющее точную серодиагностику и идентификацию микроба, может быть устранено методом адсорбции агглютининов, предложенным Кастеллани.

Метод основан на том, что при добавлении к иммунной сыворотке специфического антигена он адсорбирует полностью все антитела -- и специфические, и групповые, в то время как неспецифический антиген способен связать только побочные (групповые) антитела, оставляя свободными антитела к специфическому антигену. Так, в приведенном выше примере после прибавления брюшнотифозных бактерий к сыворотке больного брюшным тифом они адсорбируют все антитела, и в дальнейшем эта сыворотка больше не будет способной к агглютинации. Если же к другой порции этой сыворотки прибавить микробов паратифа, то в наступившей групповой реакции паратифозные бактерии свяжут только групповые антитела, но не специфические, после чего сыворотка окажется вполне способной агглютинировать специфических микробов -- брюшнотифозные палочки.

Титрование агглютинирующей сыворотки:

Тип реакции: реакция агглютинации.

Исследуемый материал: сыворотка животного, гипериммунизированного бактериальной взвесью.

Диагоностический препарат: взвесь убитых бактерий, применявшихся для гипериммунизации.

Принцип метода: к серийным разведениям агглютинирующей сыворотки добавляют равные количества взвеси убитых бактерий, применявшихся для получения этой сыворотки.

Положительный результат реакции: образование хлопьев, просветление жидкости. Отрицательный результат: равномерная муть. Применение: для определения титра агглютинирующей сыворотки.

Титр агглютинирующей сыворотки - наибольшее разведение сыворотки, в которой еще наблюдается агглютинация. В данном случае титр агглютинирующей сыворотки равен

Серотипирование - изучение антигенного состава микроорганизмов

Методические указания

Постановка реакции агглютинации

Существует несколько методов постановки реакции агглютинации:

1) макроскопическая (развернутая) агглютинация в пробирках, которая учитывается через 2 часа выдерживания при 37° и на следующий день стояния при комнатной температуре;

2) ориентировочная агглютинация на предметном стекле в капле концентрированной агглютинирующей сыворотки, наступающая в течение нескольких минут;

3) ускоренный метод Нобля с применением концентрированных сывороток н встряхиванием, для чего требуется 8--10 минут.

Агглютинирующая диагностическая сыворотка готовится путем иммунизации кроликов; полученную иммунную сыворотку, определив ее титр (максимальное разведение), разливают по ампулам с добавлением консерванта; следует иметь в виду, что обозначенный на ампуле титр сыворотки со временем снижается. Иногда употребляют высушенную сыворотку; при пользовании сухими сыворотками разводят их дестиллированной водой 1 : 9 из расчета, что сыворотка потеряла при высушивании 9 частей веса.

Сыворотка от больного для постановки реакции агглютинации получается из его крови, взятой стерильно из локтевой вены в количестве 5--10 .мл. Одновременно часть крови употребляют для посева. Если же кровь берут только для постановки реакции, то вполне достаточно 1--2 мл; тогда берут кровь из пальца путем прокола иглой Франка.

Антигеном для реакции агглютинации являются соответствующие культуры бактерий в живом или убитом состоянии. Живыми культурами пользуются тогда, когда агглютинация ставится с целью определения вида бактерий, выделенных из Какого-либо субстрата; в таком случае суточную агаровую культуру бактерий смывают 1-- 2 мл физиологического раствора и полученной взвесью бактерий пользуются для реакции.

При постановке же реакции с сывороткой больного принято пользоваться заранее заготовленными диагностикумами -- взвесью убитых бактерий.

Приготовление О- и Н-антигенов

Соматический 0-антиген бактерий является по своему составу сложным химическим комплексом, специфичность которого определяется глюцидолштоидополипептидпым компонентом.

Этот антиген устойчив к воздействию температуры, спирта в противоположность жгутиковому Н-антигену. Эта различная устойчивость О- и Н-антигенов к нагреванию и спирту положена в основу приготовления 0-антигена.

Наиболее простым способом приготовления 0-антигена является прогревание пробирки со смывом агаровой культуры соответствующего микроорганизма в кипящей водяной бане в течение 1,5--2 часов (по Кауфману достаточно 30 минут).

Для приготовления спиртового 0-антигена берут возможно более густую взвесь микробов в физиологическом растворе (смыв агаровой культуры). К определенному объему взвеси маленькими порциями медленно добавляют равный объем абсолютного этилового спирта, причем после добавления каждой его порции пробирку с антигеном встряхивают. После добавления всего объема спирта пробирку помещают в термостат на 12--24 часа, после чего в нее добавляют физиологический раствор в количестве половины объема жидкости, содержащейся в данной пробирке (концентрация спирта--33%). Перед употреблением полученный антиген разводят еще в 6 раз.

Приготовление жгутикового Н-антигена основано на том, что обработка подвижных микробов формалином приводит к понижению активности соматического антигена. Для приготовления жгутикового антигена к взвеси агаровой культуры микробов в физиологическом растворе добавляют 0,2% формалина, после чего взвесь выдерживают в термостате при 37° в течение 24 часов.

Агглютинирующая диагностическая сыворотка содержит антитела, полученные из сыворотки крови гипериммунизироанных животных, предназначена для постановки реакций агглютинации

Определение антигенного состава Х-культуры с помощью неадсорбированных и адсорбированных агглютинирующих сывороток.

1. Ориентировочная реакция агглютинации

Ориентировочную реакцию агглютинации ставят на предметном стекле. Наносят пастеровской пипеткой каплю физиологического раствора, затем в ней тщательно размешивают небольшое количество культуры до получения гомогенной взвеси бактерий. Если отсутствует реакция самооглютинации, продолжают исследование. Рядом с первой каплей наносят каплю сыворотки в разведении 1 : 10, 1 : 20 и смешивают обе капли. Через несколько минут в случае положительного результата наблюдается образование агглютината , которое еще ускорится, если слегка покачивать стекло

2. Реакция развернутой агглютинации с целью серотипирования E. сoli

Применяется для подтверждения результатов ориентировочной реакции агглютинации с моновалентными сыворотками.

Сначала готовят основное разведение взвеси микроорганизмов (1:50). из которого делают серию разведений путем последовательного переноса 0,5 мл из предыдущей пробирки в следующую пробирку ряда (0,5 + 0,5 физраствора). Из последней пробирки 0,5 мл разведенной взвеси удаляют для сохранения одинакового объема. В контрольную пробирку (контроль антигена) вносят 1 мл изотонического раствора хлорида натрия.

В каждую пробирку с разведениями и в контрольную пробирку вносят пастеровской пипеткой по 2 капли моновалентной сыворотки. Пробирки встряхивают и помещают в термостат при 37°С на 2 ч, затем сутки выдерживают при комнатной температуре.

Учет реакции развернутой агглютинации производят, оценивая последовательно каждую пробирку, начиная с контрольных, при осторожном встряхивании. В контрольных пробирках агглютинации не должно быть. Интенсивность реакции агглютинации отмечают следующими знаками: "++++" -- полная агглютинация (хлопья агтлютината в абсолютной прозрачной жидкости), "+++" -- неполная агглютинация (хлопья в слабоопалесцирующей жидкости), "++" -- частичная агглютинация (хлопья четко различимы, жидкость слегка мутная), "+" -- слабая , сомнительная агглютинация (жидкость очень мутная, хлопья в ней плохо различимы), "--" -- отсутствие агглютинации (жидкость равномерно мутная).

Контрольные вопросы

1. Какими свойствами обладают антигены?

2. Какие виды антител Вы знаете?

3. Назовите стадии антителообразования

4. Каков механизм реакций иммунитета.

5. Перечислите виды реакций аглютинации.

6. Охарактеризуйте основные способы получения иммунных сывороток.

Список литературы

Обязательная:

1. Хаитов P.M., Игнатьева Г.А.,Сидорович И.Г. Иммунология:Учебник.--М.:Медицина,2000.-- 432 с : ил.(Учеб. лит. для студ. медвузов).

2. Ковальчук Л.В и др. Иммунология: практикум: учеб. пособие - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2012. - 176 с.

3. Поздеев О.К. Медицинская микробиология / под ред. акад. РАМН В.И. Покровского - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2001. - 768 с.

4. Борисов Л.Б. Руководство к практическим занятиям по микробиологии. М. 1997 г.

Дополнительная:

1. Генкель П.А., Микробиология с основами вирусологии. М.,1974 г.

2. Коротяев А.И., Бабичев С.А. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология: учебник для мед. вузов.- 3-е издание, испр. и доп. - СПб, СпецЛит. 2002. - 591 с.

3. Борисов Л.Б., Смирнова А.М., Медицинская микробиология, вирусология, иммунология, М., Медицина. 1994 г.

4. Тимаков В.Д., Левашов В.С., Борисов Л.Б. Микробиология. М. 1983 г.

Тема № 4: ИММУНИТЕТ: ИММУНОЛОГИЧЕСКАЯ ПАМЯТЬ И ТОЛЕРАНТНОСТЬ. ТРАНСПЛАНТАЦИОННЫЙ ИММУНИТЕТ. ИММУННЫЕ РЕАКЦИИ

Цель: Познакомиться с механизмами иммунологической памяти и толерантности. Изучить особенности трансплантационного иммунитета. Научиться ставить реакцию Видаля, РНГА. Уметь интерпретировать результаты реакций.

Вопросы для самоподготовки:

1. Иммунологическая память.

2. Иммунологическая ареактивность

3. Иммунологическая толерантность.

4. Трансплантационный иммунитет.

5. Реакции агглютинации (РА ). Нагрузочные реакции. РНГА

6. Критерии серодиагностики: дигностический титр, нарастание титра антител.

7. Применение реакций АГ+АТ в диагностике: изучение антигенного состава микроорганизмов (серотипирование), экспрессдиагностика, индикация антигенов в объектах внешней среды, серодиагностика.

План:

Программа:

1. Иммунологическая память и толерантность

2. Трансплантационный иммунитет

3. Критерии серодиагностики

3. Реакции агглютинации (РА) для серодиагностики брюшного тифа

4. Нагрузочные реакции. РНГА

Демонстрация:

1. Диагностические препараты для выявления антител (диагностикумы).

2. Результаты постановки реакции агглютинации по Видалю.

3. Результаты постановки РНГА.

Задание студентам:

1. Поставить развернутую реакцию агглютинации для определения титра антител к возбудителю брюшного тифа. Протоколировать и оценить результаты реакции.

2. Поставить РНГА с целью серодиагностики. Оценить результаты РНГА, поставленной с целью серодиагностики.

Информационный материал

Иммунологическая память

При повторной встрече с антигеном организм формирует более активную и быструю иммунную реакцию -- вторичный иммунный ответ. Этот феномен получил название иммунологической памяти.

Иммунологическая память имеет высокую специфичность к конкретному антигену, распространяется как на гуморальное, так и клеточное звено иммунитета и обусловлена В- и Т-лимфоцитами. Она образуется практически всегда и сохраняется годами и даже десятилетиями. Благодаря ней наш организм защищен от повторных антигенных интервенций.

Известно два наиболее вероятных механизма формирования иммунологической памяти.

1.Предполагает длительное сохранение антигена в организме. Этому имеется множество примеров: инкапсулированный возбудитель туберкулеза, персистируюшие вирусы кори, полиомиелита, ветряной оспы и некоторые другие патогены длительное время, иногда всю жизнь, сохраняются в организме, поддерживая в напряжении иммунную систему. Вероятно также наличие долгоживущих дендритных АПК, способных длительно сохранять и презентировать антиген.

2.Предусматривается, что в процессе развития в организме иммунного ответа часть антигенореактивных Т- или В-лимфоцитов дифференцируется в малые покоящиеся клетки, или клетки иммунологической памяти. Они отличаются высокой специфичностью к конкретной антигенной детерминанте и большой продолжительностью жизни (до 10 лет и более), активно циркулируют в организме, но постоянно возвращаются в места своего происхождения за счет хоминговых рецепторов. Это обеспечивает постоянную готовность иммунной системы реагировать на повторный контакт с антигеном по вторичному типу.

Феномен иммунологической памяти широко используется в практике вакцинации людей. Осуществляют это 2-3-кратными прививками при первичной вакцинации и периодическими повторными введениями вакцинного препарата -- ревакцинациями .

Однако феномен иммунологической памяти имеет и отрицательные стороны. Например, повторная попытка трансплантировать уже однажды отторгнутую ткань вызывает -- криз отторжения.

Иммунологическая толерантность

Иммунологическая толерантность -- явление, противоположное иммунному ответу и иммунологической памяти. Проявляется она отсутствием специфического продуктивного иммунного ответа организма на антиген в связи с неспособностью его распознавания.

Иммунологическая толерантность предполагает изначальную ареактивность иммунокомпетентных клеток к определенному антигену.

Открытию иммунологической толерантности предшествовали работы Р. Оуэна (1945), который обследовал разнояйцовых телят-близнецов. Ученый установил, что такие животные в эмбриональном периоде обмениваются через плаценту кровяными ростками и после рождения обладают одновременно двумя типами эритроцитов -- своими и чужими. Наличие чужеродных эритроцитов не вызывало иммунную реакцию и не приводило к внутрисосудистому гемолизу. Явление было названо эритроцитарной мозаикой. Однако Оуэн не смог дать ему объяснение.

Собственно феномен иммунологической толерантности был открыт в 1953 г. независимо чешским ученым М. Гашеком и группой английских исследователей во главе с П. Медаваром. Гашек в опытах на куриных эмбрионах, а Медавар -- на новорожденных мышатах показали, что организм становится нечувствительным к антигену при его введении в эмбриональном или раннем постнатальном периоде.

Иммунологическую толерантность вызывают антигены, которые получили название толерогены. Ими могут быть практически все вещества, однако наибольшей толерогенностью обладают полисахариды.

Иммунологическая толерантность бывает врожденной и приобретенной. Примером врожденной толерантности является отсутствие реакции иммунной системы на свои собственные антигены. Приобретенную толерантность можно создать, вводя в организм вещества, подавляющие иммунитет (иммунодепрессанты), или же путем введения антигена в эмбриональном периоде или в первые дни после рождения индивидуума. Приобретенная толерантность может быть активной и пассивной. Активная толерантность создается путем введения в организм толерогена, который формирует специфическую толерантность. Пассивную толерантность можно вызвать веществами, тормозящими биосинтетическую или пролиферативную активность иммунокомпетентных клеток (антилимфоцитарная сыворотка, цитостатики и пр.).

Иммунологическая толерантность отличается специфичностью -- она направлена к строго определенным антигенам. По степени распространенности различают поливалентную и расщепленную толерантность. Поливалентная толерантность возникает одновременно на все антигенные детерминанты, входящие в состав конкретного антигена. Для расщепленной, или моновалентной, толерантности характерна избирательная невосприимчивость каких-то отдельных антигенных детерминант.

Степень проявления иммунологической толерантности существенно зависит от ряда свойств макроорганизма и толерогена. Так, на проявление толерантности влияет возраст и состояние иммунореактивности организма. Иммунологическую толерантность легче индуцировать в эмбриональном периоде развития и в первые дни после рождения, лучше всего она проявляется у животных со сниженной иммунореактивностью и с определенным генотипом.

Наибольшей толерогенностью обладают наименее чужеродные по отношению к организму антигены, имеющие малую молекулярную массу и высокую гомогенность. Легче всего формируется толерантность на тимуснезависимые антигены, например, бактериальные полисахариды.

Важное значение в индукции иммунологической толерантности имеют доза антигена и продолжительность его воздействия. Различают высокодозовую и низкодозовую толерантность. Высокодозовую толерантность вызывают введением больших количеств высококонцентрированного антигена. При этом наблюдается прямая зависимость между дозой вещества и производимым им эффектом. Низкодозовая толерантность, наоборот, вызывается очень малым количеством высокогомогенного молекулярного антигена. Соотношение «доза-эффект» в этом случае имеет обратную зависимость.

В эксперименте толерантность возникает через несколько дней, а иногда часов после введения толерогена и, как правило, проявляется в течение всего времени, пока он циркулирует в организме. Эффект ослабевает или прекращается с удалением из организма толерогена. Обычно иммунологическая толерантность наблюдается непродолжительный срок -- всего несколько дней. Для ее пролонгирования необходимы повторные инъекции препарата.

Механизмы толерантности многообразны и до конца не расшифрованы. Известно, что ее основу составляют нормальные процессы регуляции иммунной системы. Выделяют три наиболее вероятные причины развития иммунологической толерантности:

1. Элиминация из организма антигенспецифических клонов лимфоцитов.

Блокада биологической активности иммунокомпетентных клеток.

Быстрая нейтрализация антигена антителами.

Элиминации, или делеции подвергаются, как правило, клоны аутореактивных Т- и В-лимфоцитов на ранних стадиях их онтогенеза. Активация антигенспецифического рецептора (TCR или BCR) незрелого лимфоцита индуцирует в нем апоптоз. Этот феномен, обеспечивающий в организме ареактивность к аутоантигенам, получил название центральной толерантности.

Основная роль в блокаде биологической активности иммунокомпетентных клеток принадлежит иммуноцитокинам. Воздействуя на соответствующие рецепторы, они способны вызвать ряд «негативных» эффектов. Например, пролиферацию Т- и В-лимфоцитов активно тормозит в-ТФР. Дифференцировку ТО-хелпера в Т1 можно заблокировать при помощи ИЛ-4, -13, а в Т2-хелпер -- г-ИФН. Биологическая активность макрофагов ингибируется продуктами Т2-хелперов(ИЛ-4, -10, -13, в-ТФР и др.).

Биосинтез в В-лимфоците и его превращение в плазмоцит подавляется IgG. Быстрая инактивация молекул антигена антителами предотвращает их связывание с рецепторами иммунокомпетентных клеток -- элиминируется специфический активирующий фактор.

Возможен адаптивный перенос иммунологической толерантности интактному животному путем введения ему иммунокомпетентных клеток, взятых от донора. Толерантность можно также искусственно отменить. Для этого необходимо активировать иммунную систему адъювантами, интерлейкинами или переключить направленность ее реакции иммунизацией модифицированными антигенами. Другой путь -- удалить из организма толероген, сделав инъекцию специфических антител или проведя иммуносорбцию.

Феномен иммунологической толерантности имеет большое практическое значение. Он используется для решения многих важных проблем медицины, таких как пересадка органов и тканей, подавление аутоиммунных реакций, лечение аллергий и других патологических состояний, связанных с агрессивным поведением иммунной системы.

Трансплантационный иммунитет

Трансплантология - область биологии и медицины, изучающая проблемы трансплантации, разрабатывающая методы консервирования органов и тканей, создания и применения искусственных органов.

Участие иммунной системы в отторжении чужеродной ткани впервые были проведены П. Медаваром в 1945 г. Эти первые наблюдения явились отправной точкой для формирования экспериментально- практического направления исследований - трансплантационной иммунологии.

Основные закономерности отторжения чужеродной ткани были выявлены при трансплантации кожных лоскутов между инбредными линиями мышей. При первичной пересадке аллотрансплантата в перве два дня устанавливается общее кровообращение между трансплантатом и реципиентом, края пересаженной кожи срастаются с кожей хозяина. Внешне в течение 4 - 5 дней трансплантат кажется прижившимся. Однако именно в этот внешне благополучный период формируются эффекторные механизмы отторжения. К 6 -7 дню наблюдается отечность трансплантата, прекращается его кровоснабжение, развиваются геморрагии. В зоне локализации трансплантата скапливаются клетки воспалительной реакции, среди которых доминируют лимфоциты. Начинается процесс деструкции трансплантата. К 10 - 11 дню трансплантат погибает, а его пересадка на исходного донора не приводит к восстановлению жизнеспособности.

При повторной пересадке трансплантата от того же донора реакция отторжения развивается приблизительно в два раза быстрее - за 6 - 8 дней.

Основными провоцирующими отторжение факторами являются молекулы (антигены) МНС.

Однако при условии полной идентичности по МНС между донором трансплантата и реципиентом, но различиях по другим антигенам (так называемым минорным антигенам гистосовместимости) реакция все - таки развивается, хотя носит хронический характер.

Кроме того, в отторжении участвуют Т - клетки, и основными эффекторами являются цитотоксические СD8 Т - клетки и CD 4 Т- клетки воспаления. Последние привлекают в зону отторжения трансплантата клетки воспаления и в первую очередь макрофаги. Распознавание трансплантационных антигенов происходит либо непосредственно на клетках трансплантата, либо в ближайшей (региональной) лимфоидной ткани, куда поступает отрывающийся от клеточной поверхности антиген.

Особое место в отторжении трансплантата играют антитела, которые по тем или иным причинам предсуществуют в организме реципиента. Такие антитела, взаимодействуя с антигенами эндотелия сосудов, пронизывающих трансплантат, инициируют систему комплемента и каскад реакций, приводящих к закупорке сосудов.

Практический успех трансплантации зависит от правильного подбора пар донор - реципиент по антигенам гистосовместимости, эффективного применения иммуносупрессорных препаратов, успешной профессиональной работы хирурга.

Серодиагностика - распознавание этиологической сущности заболеваний (бактериальных, грибковых, вирусных и паразитарных преимущественно) посредством выявления антител в сыворотке крови (отсюда и происходит термин «серодиагностика»). На практике чаще всего используются реакция связывания комплемента (РСК), реакция агглютинации (РА), реакция гемагглютинации (РГА), реакции преципитации (РП) и бактериолиза.

Экспресс-диагностика - это быстрое обнаружение микроорганизмов или их антигенов в материале от больного.

Методические указания

Применение реакции агглютинации в серодиагностике.

РА с целью серодиагностики брюшного тифа (реакция Видаля).

1. Реакция агглютинации по Видалю с целью серодиагностики брюшного тифа

Для постановки реакции берут:

сыворотку исследуемого больного для определения в ней
антител;

О - и Н-диагноста кумы бактерий брюшного тифа, паратифа А и паратифа В;

физиологический раствор.

Кровь для получения сыворотки берут в количестве--15--20 капель путем укола мякоти пальца или 2 --3 мл при помощи венепункции.

Дают крови свернуться в термостате в течение 30--60 минут, затем простерилизованной петлей обводят сгусток, отделяя его от стенки пробирки, и дают отстояться сыворотке на холоду до образования над сгустком прозрачного слоя. Сыворотку помещают пипеткой в отдельную пробирку. Первое разведение (1:50) делают при помощи пипетки--0,1 мл сыворотки + 4,9 мл физиологического раствора. Дальнейшие разведения (1:100-- 1:200 -- 1 : 400--1:800) готовят по обычной схеме.

Берут 6 рядов пробирок по 6 пробирок в каждом. По 1 мл сыворотки разведения 1: 100 наливают в первую пробирку каждого ряда, 1: 200 -- во вторую, 1 : 400 -- в третью и т. д.; в шестую, контрольную, пробирку наливают 1 мл физиологического раствора.

Во все пробирки первого ряда добавляют по 1--2 капли брюшнотифозного Н-диагностикума; в пробирки второго ряда -- брюшнотифозный 0-диагностикум; в пробирки третьего я четвертого ряда добавляют А-паратифозный, Н - и 0-диагностикумы, а в 5-й и 6-й ряд-- В-паратифозный H - и 0-диагностикум. Пробирки ставят в термостат на 2 часа, отмечают результат реакции, затем оставляют при комнатной температуре на сутки; после этого срока дают заключение об окончательном результате реакции.

Возбудителем заболевания считается тот микроб, который агглютинируется сывороткой больного. Реакция считается положителыной, если агглютинация произошла хотя бы в первой пробирке с разведением 1: 100; обычно она наступает в больших разведениях. Если происходит групповая агглютинация с двумя или с тремя антигенами, то за возбудителя болезни принимается тот микроб, с которым произошла агглютинация в наиболее высоком разведении сыворотки.

Нагрузочные реакции

2. РНГА с Vi-эритроцитарным диагиостикумом

Тип реакции - реакция непрямой гемагглютинации.

Исследуемый материал - сыворотка крови обследуемого.

Диагностический препарат - Vi-эритроцитарный диагностикум (взвесь в физиологическом растворе эритроцитов барана с нагруженными на них Vi - антигенами S.typhi ).

Принцип реакции: к разведениям сыворотки обследуемого добавляют Vi-эритроцитарный диагностикум.

Положительный результат - гемагглютинат ("зонтик"); отрицательный результат - плотный осадок эритроцитов на дне лунки ("пуговка").

Диагностический тигр реакции 1/ 40.

Применение: отбор лиц, имеющих титр антител к Vi - антигенам S.typhi выше диагностического.

Трактовка результатов: лица с положительной реакцией в титре выше, чем 1/40 считаются подозрительными на бактерионосительство S.typhi и подлежат бактериологическому обследованию на наличие S.typhi в кале, моче и желчи.

Контрольные вопросы

1.Каков механизм иммунологической толерантности?

2. Какими свойствами обладают толерогены?

3.Что изучает трансплантология?

4.Какие виды антител Вы знаете?

5.Что такое серодиагностика?

6.Каков механизм реакции развернутой агглютинации.

Список литературы

Обязательная:

1. Хаитов P.M., Игнатьева Г.А.,Сидорович И.Г. Иммунология:Учебник.--М.:Медицина,2000.-- 432 с : ил.(Учеб. лит. для студ. медвузов).

2. Ковальчук Л.В и др. Иммунология: практикум: учеб. пособие - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2012. - 176 с.

3. Поздеев О.К. Медицинская микробиология / под ред. акад. РАМН В.И. Покровского - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2001. - 768 с.

4. Борисов Л.Б. Руководство к практическим занятиям по микробиологии. М. 1997 г.

Дополнительная:

1. Генкель П.А., Микробиология с основами вирусологии. М.,1974 г.

2. Коротяев А.И., Бабичев С.А. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология: учебник для мед. вузов.- 3-е издание, испр. и доп. - СПб, СпецЛит. 2002. - 591 с.

3. Борисов Л.Б., Смирнова А.М., Медицинская микробиология, вирусология, иммунология, М., Медицина. 1994 г.

4. Тимаков В.Д., Левашов В.С., Борисов Л.Б. Микробиология. М. 1983 г.

Тема №5 ИММУНИТЕТ: ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ ФАКТОРОВ ИММУНИТЕТА И НЕСПЕЦИФИЧЕСКОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ ПРИ ИНФЕКЦИЯХ РАЗЛИЧНОЙ ЭТИОЛОГИИ. ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЙ ИММУНИТЕТ. КОМПЛЕМЕНЗАВИСИМЫЕ СЕРОЛОГИЧЕСКИЕ РЕАКЦИИ

Цель: Познакомиться с особенностями взаимодействие факторов иммунитета и неспецифической резистентности при инфекциях различной этиологии. Изучить механизмы противоопухолевого иммунитета. Научиться учитывать результаты реакции иммунного гемолиза и РСК и интерпретировать их результаты

Основные вопросы, разбираемые на занятии:

1. Особенности взаимодействие факторов иммунитета и неспецифической резистентности при инфекциях различной этиологии

2. Противоопухолевый иммунитет, его значение.

3. Реакции с участием комплемента (реакции иммунного бактериолизиса, иммунного гемолиза, РСК).

4. Получение препаратов: комплемент, гемолитическая сыворотка.

5. Определение периода болезни с помощью серодиагностики (раздельное определение IgM, IgG).

План

Программа

1.Взаимодействие факторов иммунитета и неспецифической резистентности при инфекциях различной этиологии

2. Противоопухолевый иммунитет

3. Комплементзависимые серологические реакции

Демонстрации.

1. Таблицы и схемы, иллюстрирующие иммунный ответ при различных инфекциях.

2. Результаты РСК

Задание студентам

1. Зарисовать схему иммунного ответа при бактериальных инфекциях

2.Зарисовать схему иммунного ответа при вирусных инфекциях

3. Зарисовать схему иммунного ответа при протозойных инвазиях

4. Зарисовать схему иммунного ответа при глистных инвазиях

5. Зарисовать схему иммунного ответа при микозах

6. Учесть результаты РСК

Информационный материал

При бактериальных инфекциях различают:

антибактериальный иммунитет - иммунитет против структурно-функциональных компонентов бактериальной клетки

антитоксический иммунитет - иммунитет против белковых токсинов микроорганизмов.

Противовирусный иммунитет - иммунитет при вирусных инфекциях

Иммунная защита макроорганизма при вирусных инфекциях имеет особенности, обусловленные двумя формами существования вируса: внеклеточной и внутриклеточной.

Противогрибковый иммунитет - иммунитет при микозах. Антигены грибов имеют относительно низкую иммуногенность, они стимулируют клеточное звено иммунитета, основными действующими факторами противогрибкового иммунитета являются активированные макрофаги.

Противопаразитарный иммунитет - иммунитет при паразитарных инвазиях, изучен слабо. Паразитарная инвазия сопровождается формированием в макроорганизме гуморального и клеточного иммунитета.

Противоглистный иммунитет - иммунный ответ на глистные инвазии. Ведущую роль в осуществлении иммунной зашиты макроорганизма от глистной инвазии играют эозинофилы.

Противоопухолевый иммунитет - иммунный ответ на наличие в организме опухолевых клеток.

Раковая болезнь - не одно определенное заболевание, этим понятием объединяют большую группу злокачественных опухолей, которые отличаются друг от друга местом возникновения, скоростью развития, клиническими признаками и рядом других особенностей. Но у всех злокачественных образований есть общие признаки, и один из них - это появление в опухолевых клетках специфических антигенов, отсутствующих в нормальных тканях организма.

Опухоль зарождается в нормальной ткани организма, среди его нормальных клеток. Некоторые из них в результате мутации, другие в результате действия особых вирусов или веществ канцерогенов способны превращаться в раковую, которая начинает интенсивно делиться и дает начало опухоли. Самой важной особенностью опухолевых клеток является их автономность - независимость темпов размножения и других проявлений их жизнедеятельности от внешних воздействий, изменение и регулировка жизнедеятельности нормальных клеток.

Характерной чертой злокачественных новообразований является способность опухолевой ткани врастать в окружающие ткани и, разрушая, замещать их. Основными этапами метастазирования можно считать отделение опухолевых клеток от основного узла и попадания их в кровоток, венозный или лимфатический сосуд.

Отличительным признаком многих особенно злокачественных опухолей является анаплазия ткани, возвращение ее к более примитивному типу. Различают морфологическую анаплазию, т.е. утрата опухолевой тканью особенностей, характерных для дифференцировки тканей. Функциональная анаплазия - частичная или полная утрата опухолевой тканью способности выполнять специфические функции, характерные для нормальной ткани: секреторные, сократительные и т.д. Биохимическая анаплазия проявляется в исчезновении из опухолевых клеток части или всех специфических факторов характерных для нормальных клеток. Иммунологическая анаплазия проявляется в исчезновении из опухолевых клеток ряда антигенов, типичных для нормальных клеток. В ряде случаев опухолевые клетки приобретают способность подавлять иммунный ответ и тем самым «ускользать» из под контроля со стороны иммунной системы.

Представление о противоопухолевом иммунитете в последние годы меняется и от общепринятой теории Т - клеточного надзора приближается к концепции, согласно которой естественный и адаптивный иммунитет защищает против разных опухолей, как это происходит, например, при внедрении болезнетворных микробов.

Одной из важных сторон классификации является номенклатура опухолей, в которой отражено их тканевое происхождение, суффикс «ома» (с греч.- опухоль), присоединяется к корням слов, например, гематосаркома. Злокачественная эпителиома носит название «рак» вероятно в связи с тем, что первые наблюдения древних врачей относились к раку молочной железы или кожи, прорастая в окружающей ткани тяжами, напоминает клешни рака.

Все опухоли разделяют на доброкачественные и злокачественные. К благоприятным (доброкачественным) относят опухоли обладающие свойствами: они медленно растут и не дают метастазов, они лишь отодвигают, раздвигают или сдавливают окружающие ткани не разрушая их. Злокачественные опухоли отличаются быстрым прогрессирующим ростом. Дают метастазы, инфильтруют, прорастают в окружающие ткани и разрушают их.

Профилактика злокачественных опухолей

Выделяют три этапа профилактических мер:

1. Предупреждение развития избыточных клеточных пролифераз, которые чаще проявляются на фоне хронического воспалительного процесса или гормональных гиперплазий. Необходимо проводить широкие оздоровительные мероприятия, направленные на устранение вредных факторов среды.

2. Своевременное выявление и адекватное лечение уже возникающих пребластоматозных состояний.

3. Предупреждение прогрессирования уже возникшей злокачественной опухоли путем своевременного применения рациональных методов лечения.

Реакции с участием комплемента

Реакция иммунного бактериолизиса - реакция Аг+Ат, в которой происходит лизис бактерий в присутствии комплемента

Реакция иммунного гемолиза реакция Аг+Ат, в которой происходит лизис этроцитов в присутствии комплемента

Реакция связывания комплемента (РСК). Реакция связывания комплемента - одна из наиболее чувствительных иммунологических диагностических реакций. Принцип ее заключается в том, что при взаимодействии специфических антигена и антитела происходит связывание комплемента. Индикатором служит гемолитическая система (эритроциты барана и гемолитическая сыворотка к ним). Отсутствие гемолиза (для него также необходим свободный комплемент) свидетельствует о том, что комплемент уже связан и, следовательно, в данной сыворотке (смешанной с данным антигеном) имеются антитела, способные взаимодействовать с избранным антигеном. В таких случаях говорят, что РСК положительна. Появление гемолиза свидетельствует о том, что комплемент свободен и таким образом против исследуемого антигена в крови больного нет антител; РСК отрицательна.

Методические указания

1. Реакции Вассермана (серодиагностика сифилиса)

Тип реакции: РСК.

Исследуемый материал: сыворотка обследуемого.

Диагностические препараты:

1. Неспецифический кардиолипиновый АГ (антиген) для реакции Вассермана - спиртовая липидная вытяжка из миокарда быка, обогащенная холестерином.

2. Специфический ультраозвученный трепонемный АГ - содержит АГ культуральных трепонем, разрушенных ультразвуком.

Дополнительные ингредиенты реакции: комплемент в рабочей дозе; гемолитическая сыворотка в рабочей дозе; эритроциты барана (3 % взвесь).

Положительная реакция - задержка гемолиза; отрицательная - гемолиз.

Качественный метод - сыворотку обследуемого вносят в 2 лунки, добавляют соответственно АГ 1 и АГ 2, а затем в обе лунки - дополнительные ингредиенты реакции. Применение: отбор лиц для постановки количественной реакции Вассермана.

В данном случае обследованы пациенты ... (результат, вывод).

Количественный метод - диагностика сифилиса, контроль эффективности терапии. Готовят разведения положительной сыворотки (по качественной реакции). К каждому разведению добавляют трепонемный ультраозвученный АГ (АГ2) и дополнительные ингредиенты реакции. Положительный результат - ЗГ (задержка гемолиза), отрицательный - Г (гемолиз).

Результат интерпретируют, основываясь на количестве антител.

2. РСК с целью раздельного определения IgM и IgG

Тип реакции - реакция связывания комплемента.

Исследуемый материал - сыворотка крови больного (нативная и обработанная меркаптоэтанолом).

Диагностический препарат - известный антиген для РСК.

Дополнительные ингредиенты реакции: комплемент в рабочей дозе; гемолитическая сыворотка в рабочей дозе; эритроциты барана (3 % взвесь).

Положительная реакция - задержка гемолиза; отрицательная - гемолиз.

Принцип метода: при обработке сыворотки меркаптоэтанолом разрушаются IgM.

Следовательно, с обработаной сывороткой реакция идет только за счет IgG.

Постановка реакции: готовят разведения нативной и обработанной сывороток, добавляют диагностический препарат и дополнительные ингредиенты реакции.

Трактовка результатов: если с обработанной сывороткой реакция идет практически таком же титре, как с необработанной, значит она содержит преимущественно IgG Если в обработанной сыворотке титр антител резко снизился по сравнению с необработанной, значит она содержит преимущественно IgM.

В данном случае...(результат и вывод).

Для получения достоверного результата необходимо, чтобы все известные ингредиенты были взяты в определенных количествах (рабочие дозы). Для этого колмплемент и гемолитическую сыворотку предварительно титруют и вычисляют их рабочие дозы.

3. Титрование комплемента

Тип реакции - реакция иммунного гемолиза.

Исследуемый материал - свежая сыворотка крови.

Дополнительные ингредиенты реакции: гемолитическая система (гемолитическая сыворотка в рабочей дозе и 3% взвесь эритроцитов барана).

Положительная реакция - гемолиз; отрицательная - задержка гемолиза.

Титр комплемента - наибольшее разведение комплемента, в котором наблюдается гемолиз.

Применение: для определения титра комплемента. Если речь идет о титровании комплемента перед постановкой РСК, то титр определяют для дальнейшего расчета рабочей дозы. Используется разведение на 25% концентрированнее, чем титр.

4.РСК с целью раздельного определения IgM и IgG в сыворотке больного сыпным тифом.

Тип реакции - реакция связывания комплемента.

Исследуемый материал - сыворотка крови больного (нативная и обработанная меркаптоэтанолом).

Диагностический препарат - известный антиген для РСК.

Дополнительные ингредиенты реакции: комплемент в рабочей дозе; гемолитическая сыворотка в рабочей дозе; эритроциты барана (3 % взвесь).

Положительная реакция - задержка гемолиза; отрицательная - гемолиз.

Принцип метода: при обработке сыворотки меркаптоэтанолом разрушаются IgM.

Следовательно, с обработаной сывороткой реакция идет только за счет IgG.

Постановка реакции: готовят разведения нативной и обработанной сывороток, добавляют диагностический препарат и дополнительные ингредиенты реакции.

Трактовка результатов: если с обработанной сывороткой реакция идет практически таком же титре, как с необработанной, значит она содержит преимущественно IgG Если в обработанной сыворотке титр антител резко снизился по сравнению с необработанной, значит она содержит преимущественно IgM.

Контрольные вопросы

1. Назовите особенности противовирусного иммунитета.

2. Что такое антибактериальный иммунитет?

3. Как получают комплемент для диагностических целей?

4. Что такое противоопухолевый иммунитет?

5. Для чего проводится раздельное опеделение IgG и IgM?

Список литературы

Обязательная:

1. Хаитов P.M., Игнатьева Г.А.,Сидорович И.Г. Иммунология:Учебник.--М.:Медицина,2000.-- 432 с : ил.(Учеб. лит. для студ. медвузов).

2. Ковальчук Л.В и др. Иммунология: практикум: учеб. пособие - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2012. - 176 с.

3. Поздеев О.К. Медицинская микробиология / под ред. акад. РАМН В.И. Покровского - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2001. - 768 с.

4. Борисов Л.Б. Руководство к практическим занятиям по микробиологии. М. 1997 г.

Дополнительная:

1. Генкель П.А., Микробиология с основами вирусологии. М.,1974 г.

2. Коротяев А.И., Бабичев С.А. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология: учебник для мед. вузов.- 3-е издание, испр. и доп. - СПб, СпецЛит. 2002. - 591 с.

3. Борисов Л.Б., Смирнова А.М., Медицинская микробиология, вирусология, иммунология, М., Медицина. 1994 г.

4. Тимаков В.Д., Левашов В.С., Борисов Л.Б. Микробиология. М. 1983 г.

Тема № 6: Иммунитет: ГНТ И ГЗТ. АНТИТОКСИЧЕСКИЙ ИММУНИТЕТ

Цель: Познакомиться с особенностями ГНТ и ГЗТ, с механизмами антитоксического иммунитета. Научиться осуществлять постановку реакций преципитации и нейтрализации, интерпретировать их результаты

Основные вопросы, разбираемые на занятии:

1. Особенности реакций гиперчувствительности, их классификация и значение.

2. Реакции гиперчувствительности I типа, механизм их развития.

3. Реакции гиперчувствительности II типа, механизм их развития

4. Реакции гиперчувствительности III типа, механизм их развития

5. Реакции гиперчувствительности IV типа, механизм их развития

6. Антитоксический иммунитет и методы его изучения

7. Реакции преципитации.

8. Реакции нейтрализации токсина антитоксической сывороткой in vivo и in vitro

9. Кожные аллергические пробы.

План

Программа

1. Особенности аллергических реакций.

2. Класссификация аллергических ракций.

3.Антитоксический иммунитет.

4. Реакции преципитации.

5. Особенности постановки и применение кожных аллергических проб

Демонстрации.

1. Таблицы и схемы с механизмами различных реакций гиперчувтвительности.

2.Результат реакции Асколи

3. Результат реакции Оухтерлони

4. Результат реакции флоккуляции

Задание студентам.

1.Заполнить таблицу: Механизм основных типов реакции гиперчувствительности

2.Осуществить постановку реакции по Асколи.Учесть ее результаты.

3.Осуществить остановку реакции преципитации по Оухтерлони.

Учесть ее результаты.

4. Учесть результат реакции флоккуляции

Информационный материал.

Иммунитет антитоксический - невосприимчивость организма к инфекционным болезням, возбудители которых продуцируют экзотоксины. Иммунитет антитоксический достигается активной иммунизацией, введением в организм анатоксина, вызывающего синтез антитоксинов, антитоксических сывороток или пассивной иммунизацией.

Антитоксический иммунитет

Беринг еще только готовил свое открытие к научной публикации, а Эрлих -- этот «неисчерпаемый творец руководящих идей» (так говорил о нем сам И. И. Мечников) -- узрел в новом факте проблему большой биологической значимости. Впрыскивая животным растительные яды -- рицин, касторовое масло, абрин, Эрлих убедился, что во всех этих случаях в крови образуются антитоксины.

Итак, из экспериментального наблюдения, сделанного в соседней комнате, Эрлих вывел учение об антитоксическом иммунитете. Он показал, что такой иммунитет может быть наследственным, так как мать передает его потомству через плаценту и с молоком. Развивая далее идею, Эрлих выдвигает объяснение, подсказанное его опытами с красителями тканей. Он утверждает, что процессы питания клеток и реакции иммунитета -- эти два основополагающих процесса жизни происходят по единому механизму. Клеточное ядро, по Эрлиху, имеет многочисленные группы атомов, которые могут отщепляться от ядра и присутствовать в протоплазме клетки и даже на ее поверхности. Исследователь дает им название «боковых цепей», «рецепторов» (от recipio -- воспринимать). Заметим, что термин «рецептор» является одним из наиболее распространенных в сегодняшней иммунологии. Соединение клетки с питательными веществами зависит от присутствия в ней специальных рецепторов, имеющих сродство с химической структурой питательных веществ. Другие рецепторы воспринимают токсины или иные антигены, и только вступив в прочный химический контакт 45 клеткой, они побуждают ее вырабатывать противоядие -- антитоксины.

Антитоксины

Антитоксины -- антитела, возникающие в сыворотке крови при попадании в организм токсинов или анатоксинов. Способны взаимодействовать с токсинами , нейтрализуя их активность. Антитоксины могут синтезироваться в результате естественного контакта организма с токсинами, при искусственном введении их в организм животных в сублетальных дозах и при иммунизации анатоксинами человека или животных. Широкое применение в медицине имеют антитоксические сыворотки против токсинов, выделяемых патогенными микроорганизмами (палочками дифтерии, столбняка, газовой гангрены и ботулизма), используемые для профилактики и лечения этих болезней, а также сыворотки против ядов змей, насекомых. Антитоксины, применяемые в медицинской практике в виде антитоксических сывороток, получают путем гипериммунизации лошадей возрастающими дозами токсинов. Антитоксины против ботулизма и газовой гангрены поливалентны, то есть содержат антитела к нескольким токсинам. Сила антитоксинов измеряется количеством антитоксических единиц (АЕ) в 1 мл, способ определения которых зависит от вида антитоксина. Сыворотки, содержащие антитоксины, высушивают в вакууме и сохраняют при низкой температуре.Антитоксины (от греч. anti -- против + токсины) -- антитела, которые образуются в организме животных и человека в ответ на появление токсинов микробного, растительного или животного происхождения, специфически обезвреживают соответствующие токсины и являются мощным фактором антитоксического иммунитета . Наибольшее значение имеют антитоксины, которые вырабатываются против экзотоксинов или растворимых токсинов микробов -- возбудителей высокотоксигенных инфекций: дифтерии, столбняка, газовой гангрены, ботулизма, а также дизентерийных бактерий Григорьева--Шига, скарлатинозного стрептококка, стафилококка. Антитоксический иммунитет может быть воспроизведен искусственно активной иммунизацией анатоксинами или пассивной иммунизацией антитоксическими сыворотками.
Содержание антитоксинов в антитоксических сыворотках выражается в антитоксических единицах (АЕ). О напряженности антитоксического иммунитета можно судить по содержанию антитоксинов в сыворотке крови. Наличия в 1 мл крови 1/30 АЕ дифтерийного антитоксина достаточно, чтобы обеспечить невосприимчивость ребенка к дифтерии; при этом реакция Шика у него будет отрицательной. Защита от столбняка, по данным Регамея (R. Н. Regamey, 1965), обеспечивается присутствием в 1 мл крови 0,005 АЕ противостолбнячного антитоксина.