При приеме больших количеств алкоголя он содержится в организме до суток и более. При этом в конце срока действия алкоголя к его непосредственному действию присоединяется влияние продуктов его распада и изменения внутренней среды организма, вызываемые интоксикацией алкоголем, такие как, например, гипогликемия и метаболический ацидоз. Именно этим объясняют симптомы, наблюдаемые после алкогольной интоксикации в период, когда алкоголя в организме уже нет: утомляемость, жажда, дрожание конечностей, головная боль, потливость, сердцебиение, колебание артериального давления, неустойчивое, а нередко депрессивное настроение.

В наркологической практике при проведении медицинского освидетельствования принято определять наличие алкоголя или его концентрацию в выдыхаемом воздухе, слюне, моче и крови.

Определение алкоголя в выдыхаемом воздухе, крови или другой биологической среде организма не позволяет окончательно судить о степени опьянения человека. Это связано с неодинаковой реакцией различных людей и непостоянной реакцией одного человека на одни и те же дозы алкоголя, а также фазой алкогольной интоксикации. Однако выявление в биологических средах организма содержания алкоголя, превышающего эндогенный уровень, свидетельствует о факте употребления спиртных напитков.

2.1.6 Определение алкоголя в выдыхаемом воздухе

В выдыхаемый воздух алкоголь проникает из крови, диффундируя через стенки альвеол. Соотношение концентрации алкоголя в крови и альвеолярном воздухе постоянно, оно определяется разностью плотности сред: крови и воздуха и составляет в среднем 1: 2200 при колебаниях от 1300 до 3000. Это означает, что в 2200 см3 альвеолярного воздуха содержится такое же количество алкоголя, как и в 1 см³ крови.

Содержание паров алкоголя в выдыхаемом воздухе выражается в миллиграммах на 1 м3 (мг/м3) и с учетом отношения плотностей крови и воздуха может быть ориентировочно выражено в промилях по крови. При этом 0,1 град./00 алкоголя в крови соответствует примерно 45 мг/м3 алкоголя в выдыхаемом воздухе.

Как правило, в выдыхаемом воздухе в небольших количествах может находиться ряд органических, так называемых редуцирующих веществ, таких как ацетон, альдегиды и др., которые также, как и алкоголь могут влиять на результаты исследования при применении неизбирательных к алкоголю методов.

Следует отметить, что при исследовании выдыхаемого воздуха на алкоголь нередко допускаются ошибки. Чаще всего они обусловлены неточным выполнением методики исследования. Кроме того, имеются по крайней мере два обстоятельства, влияющие на результат исследования. Во-первых, иногда ошибочный результат исследования может быть получен за счет небольших количеств алкоголя, адсорбировавшегося на слизистой оболочке ротоглотки при употреблении накануне исследования спиртосодержащих лекарств. Это так называемый фиксированный алкоголь. При употреблении небольших количеств, например 20 капель спиртовой настойки валерианы, алкоголь адсорбируется на слизистой оболочке ротовой полости и глотки и выделяется с выдыхаемым воздухом в течение 10-20 минут в значительной концентрации.

Во-вторых, ошибка может быть обусловлена наличием в полости рта либо в окружающей среде примесей редуцирующих веществ. Например, наличие в окружающем воздухе в значительных концентрациях ацетона, бензина, выхлопных газов и других летучих веществ приводит к их вдыханию обследуемым с последующим введением с выдыхаемым воздухом в реакционную камеру приборов и искажению результатов исследования. В течение 4-5 минут после курения на результаты исследования могут оказывать влияние выделяющиеся из дыхательных путей соединения углерода.

В целях недопущения ошибок, вызываемых изложенными выше причинами, следует соблюдать следующие правила:

· помещение перед проведением исследования должно быть хорошо проветрено; проведение исследования не допускается при наличии запахов спирта, эфира, бензина, ацетона, одеколона и других летучих горючих веществ от одежды, рук, лица обследуемого; до начала исследования запахи должны быть устранены (наличие летучих горючих веществ в окружающей атмосфере может быть оценено с помощью тех же методов и устройств, которые применяются для анализа выдыхаемого воздуха);

· перед тем, как приступить к проведению пробы, обследуемого предупреждают об этом и спрашивают его, о чем бы он хотел сообщить в связи с проведением медицинского освидетельствования; такая постановка вопроса позволяет получить более точные сведения об употреблении накануне спиртных напитков или спиртосодержащих лекарств, прямые же вопросы о приеме накануне обследования спиртосодержащих жидкостей нередко наталкивают испытуемого на неверные ответы;

· проба проводится не ранее, чем спустя 15-20 минут после употребления спиртных напитков, приема спиртосодержащих лекарств, полоскания рта дезодорантами.

2.1.7 Химические способы определения алкоголя в выдыхаемом воздухе Проба Рапопорта А.М.

Наиболее простым и доступным для применения в любом медицинском учреждении способом является проба Рапопорта.

В две чистые сухие пробирки наливают по 2 мл дистилированной воды. В одну из них опускают пипетку с узким вытянутым концом, и испытуемый пропускает через нее 1,9-2,1 л выдыхаемого воздуха. Объем воздуха может дозироваться продолжительностью выдоха или с помощью дозирующего устройства. В первом случае для продувания воздуха используют пипетку типа пастеровской, и воздух продувают в течение 20-30 секунд.

Проходя через воду, алкоголь, содержащийся в выдыхаемом воздухе, растворяется в ней, и затем наличие его определяют с помощью следующей химической реакции.

В обе пробирки приливают осторожно по 20 капель химически чистой концентрированной серной кислоты и после этого по 1 капле 0,5% свежеприготовленного раствора марганцовокислого калия. Необходимо тщательное выполнение технологии проведения пробы: соблюдение последовательности операций, использование свежеприготовленных дистиллированной воды и 0,5% раствора перманганата калия, чисто вымытых и высушенных пробирок и пипеток, шлангов, проведение реакции в контрольной пробирке.

Внимание! Соблюдение описанной последовательности действий обязательно. Недопустимо продувание выдыхаемого воздуха через раствор, содержащий серную кислоту, т.к. в этих случаях возможно попадание кислоты в дыхательные пути.

Результаты исследования оцениваются в течение 1-2 минут с момента введения в пробирку раствора марганцовокислого калия. Если в течение 2 минут раствор в сравнении с контрольным не изменил цвета - экзогенного алкоголя в организме обследуемого нет, испытуемый на момент исследования под воздействием алкоголя не находится.

При полном или частичном обесцвечивании раствора пробу через 15-20 минут проводят повторно. Полное обесцвечивание раствора за 1-2 минуты при повторной пробе свидетельствует о наличии экзогенного алкоголя в выдыхаемом воздухе, что при точном соблюдении методики исследования может подтверждать факт потребления испытуемым спиртных напитков.

Если при повторной пробе полного обесцвечивания раствора в течение 2 минут не наступило, результаты пробы расцениваются как отрицательные.

Изменение цвета раствора в контрольной пробирке свидетельствует о нарушении условий проведения пробы (загрязненная посуда, некачественные реагенты) и опровергает результаты исследования.

2.1.8 Индикаторные трубки Мохова - Шинкаренко и "Контроль трезвости"

Эти трубки имеют сухую индикаторную набивку (реагент), что исключает необходимость в проведении каких-либо манипуляций с реактивами в момент экспертизы. Реагент индикаторных трубок состоит из носителя (Силикагеля), импрегнированного раствором хромового ангидрида в концентрированной серной кислоте. При воздействии на реагент парами этилового спирта происходит реакция, во время которой пары этилового спирта восстанавливают ионы 6-тивалентного хрома до ионов 3-х валентного хрома, в связи с чем оранжевый или желтый цвет реагента изменяются на зеленый, что оценивается как положительная реакция.

Несмотря на некоторую неспецифичность метода, все же индикаторные трубки выгодно отличаются от других проб тем, что при воздействии на реагент парами некоторых веществ, лекарств и ядов отсутствует положительная реакция реагента, в то время как она имеет место в других пробах. Реагент изменяет цвет на зеленый при воздействии паров следующих веществ: этилового и метилового спиртов, эфиров, ацетона, альдегидов, сероводорода. При воздействии бензина, скипидара, уксусной кислоты, камфары, а также фенола, дихлорэтана реагент приобретает темно - коричневую или коричневую окраску. При воздействии паров валидола, ментола, воды, хлороформа, хлорангидрата, керосина, аммиака, щелочи, этиленгликоля, окиси углерода, чистого выдыхаемого воздуха и слюны цвет реагента - оранжевый.

Правила пользования индикаторными трубками, каждая из которых рассчитана только для однократного употребления, предусматривают несколько манипуляций. Перед употреблением на герметичной индикаторной трубке делаются напильником два надреза: один вблизи заплавленного широкого конца трубки, а другой вблизи вершины конусообразной наплавки.

После этого оба конца трубки отламываются. Трубку предлагают взять обследуемому в рот со стороны широкого конца и интенсивно непрерывно продувать воздух в направлении реагента в течение 20-25 минут. Этого времени вполне достаточно для обнаружения присутствия паров спирта. При слабом продувании выдыхаемого воздуха, содержащего пары алкоголя, оранжевая окраска индикатора может измениться в зеленый цвет не полностью, а частично. Однако и в этом случае реакция окажется положительной. Контроль за интенсивностью струи продуваемого воздуха осуществляется путем надувания емкости, или наблюдения за отклонением пламени горящей спички, подносимой к периферическому суженному концу трубки. При отсутствии спички рекомендуется направить трубку на увлаженную поверхность тыльной стороны кисти и об интенсивности струи продуваемого воздуха судить по ощущению охлаждения.

Трубка Мохова - Шинкаренко обладает большим сопротивлением, что затрудняет ее продувание. Облегчить процедуру отбора проб и контролировать достаточное продувание реагента выдыхаемым воздухом можно с помощью несложного приспособления. Между обследуемым и трубкой Мохова - Шинкаренко с помощью трехходовой трубки устанавливается полиэтиленовый мешок емкостью 650-750 куб. см., а на периферический суженный конец индикаторной трубки - полиэтиленовый мешок емкостью 120-130 куб. см. Обследуемому дается команда дуть в мундштук до полного заполнения обоих мешков. При выполнении пробы воздух "вредного" пространства дыхательных путей за счет высокого сопротивления трубки Мохова - Шинкаренко первоначально заполняет мешок емкостью 650-750 см3 находящийся перед трубкой, а затем альвеолярный воздух проходит реагент и наполняет мешок емкостью 120-130 куб. см., находящийся на выходе из трубки.

Благодаря такому приспособлению на реагент поступает только альвеолярный воздух, которого для проведения пробы необходимо в несколько раз меньше, чем воздуха, смешанного с воздухом "вредного" пространства.

Ввиду гигроскопичности индикатора трубки вскрываются непосредственно перед употреблением. По этой же причине индикаторные трубки рассчитаны только для однократного употребления даже при наличии отрицательной реакции.

Индикаторные трубки, имеющие нарушение герметизации, а также изменившие окраску реагента на зеленый цвет, употреблению не подлежат.

2.1.9 Термокаталитический метод

Метод основан на сорбировании паров алкоголя выдыхаемого воздуха с последующей термодесорбцией и сжиганием на элементах чувствительного детектора. Этот принцип реализуется с помощью прибора для определения паров спирта в выдыхаемом воздухе - ППС-1.

Конструкция прибора обеспечивает подогревание выдыхаемого воздуха и отбор для анализа пробы именно альвеолярного воздуха. Калибровка прибора производится с помощью генератора контрольных смесей ГС-1, производящего пароспиртовоздушные смеси с определенным содержанием в них алкоголя.

Прибор ППС-1 более чувствителен и точен в сравнении с качественными реакциями.

Инструкция по медицинскому применению прибора ППС-1 с описанием порядка работы и указанием критериев выявления паров алкоголя в выдыхаемом воздухе входит в комплект прибора.

Следует отметить, что термокаталитический метод, реализуемый с помощью прибора ППС-1, также, как и качественные пробы на алкоголь (Рапопорта, трубки Мохова - Шинкаренко и "Контроль трезвости"), неизбирателен по отношению к этиловому спирту. Указанные способы дают положительные результаты и при наличии в выдыхаемом воздухе ряда других летучих веществ, например, ацетона, эфиров, метанола. В связи с этим в практике экспертизы алкогольного опьянения перечисленные методы используются как предварительные пробы. Доказательное значение имеет лишь отрицательный результат качественных проб и исследований с помощью прибора ППС-1 или сочетание положительных реакций с клинической картиной опьянения. В ряде случаев у освидетельствуемого необходимо собирать на исследование жидкие биологические среды (мочу, слюну либо кровь) для проведения количественного определения алкоголя в них предпочтительно методом газовой хроматографии.

2.1.10 Методы количественного определения алкоголя в жидких биологических средах

Из жидких биологических сред при освидетельствовании для установления факта употребления алкоголя и алкогольного опьянения наиболее часто исследуются моча и слюна. Кровь для определения алкоголя может забираться только при наличии соответствующих медицинских показаний.

Оценивая результаты исследований, следует иметь в виду, что даже при одновременном отборе проб различных биологических жидкостей количество алкоголя в них может быть неодинаковым. Это обусловлено рядом причин:

- во-первых, плотностью среды, количеством в ней воды. В связи с гидрофильностью алкоголя, при равных условиях в среде с большим содержанием воды больше и алкоголя. Например, если определить концентрацию алкоголя в цельной крови, плазме и эритроцитарной массе из одной и той же пробы крови, то, соответственно, наибольшее количество алкоголя будет определено в плазме, меньшее в цельной крови и еще меньшее в эритроцитарной массе;

- во-вторых, имеет значение фаза опьянения. В фазе резорбции наибольшая концентрация алкоголя определяется в артериальной крови. В этой фазе алкоголь проникает из артериальной крови в ткани, и в венозной крови, оттекающей от тканой, его концентрация ниже. В фазе резорбции артериовенозная разница по алкоголю может достигать 0,6 град./оо. Что касается мочи, то ее проба из мочеточников содержит алкоголя столько же, сколько и омывающая почки кровь. Поскольку на практике для пробы отбирается пузырная моча, то концентрация алкоголя в ней зависит от времени отбора пробы и времени, предшествующего опорожнению пузыря, т.к. в пузыре идет постоянное смешивание порций мочи, поступающей в различные фазы опьянения. Тем не менее, определенно известно, что в фазе резорбции концентрация алкоголя в пузырной моче всегда ниже, чем в крови. В фазе элиминации содержание алкоголя в моче может быть выше, чем в крови. И, наконец, после опьянения, когда в крови экзогенный алкоголь уже не обнаруживается, он все еще может определяться в моче.

Содержание эндогенного алкоголя в крови, согласно литературным данным, находится в пределах 0,008-0,4 град./оо. Результаты определения эндогенного алкоголя зависят, прежде всего, от применяемого метода. При не избирательных к алкоголю способах, обладающих большой погрешностью измерения, например способе Видмарка, Никлу, фотоколориметрическом, максимальными уровнями эндогенного алкоголя в биологических жидкостях принято считать 0,3-0,4 град./оо. При газохроматографическом исследовании в биологических жидкостях в зависимости от методики исследования эндогенного алкоголя определяют не более 0,02-0,07 град./оо.

Результаты исследования во многом зависят от точности соблюдения методики пробоотбора биологической жидкости, условий хранения пробы и транспортировки, погрешности метода, ошибок при проведении исследований. С учетом сказанного обнаружение алкоголя в биологической жидкости в концентрации ниже 0,3 град./оо не может достоверно свидетельствовать о факте употребления алкоголя.

Забор биологических сред у лиц, освидетельствуемых для установления состояния алкогольного опьянения, должен проводиться в любое время суток.

Взятие крови и мочи у лиц, подозреваемых или обвиняемых в совершении правонарушений, а также у потерпевших производится в порядке, установленном ст.ст. 141 и 186 УПК РСФСР и соответствующими статьями союзных республик.

Моча отбирается в сухой стерильный флакон из-под пенициллина "под пробку". Флакон тотчас же закрывают пробкой. Отбор пробы мочи должен производиться в условиях, исключающих подмену или замену ее другими жидкостями.

Слюна отбирается в стерильный сухой флакон из-под пенициллина в количестве 5 мл и тут же закрывается пробкой.

У всех флаконов с отобранными пробами фиксируют пробки алюминиевыми колпачками с помощью приспособления для обжима колпачков (ПОК-1), обеспечивающего герметизацию флакона, и ставят их в холодильник. В случае герметизации другим способом флаконы должны быть опечатаны. На каждый флакон наклеивается этикетка с указанием номера пробы (по регистрационной книге), даты, времени забора пробы, фамилии освидетельствуемого, фамилии медицинского работника, подготовившего пробу.

Перед отбором пробы крови в сухой стерильный флакон из-под пенициллина закапывают 1-2 капли гепарина или 0,8 мл 3,8%-го раствора цитрата натрия и встряхиванием флакона смачивают его стенки.

Кровь в количестве 5 мл отбирается пункцией кубитальной воды при строгом соблюдении асептических условий самотеком во флакон, обработанный гепарином или цитратом. Флакон тотчас же закрывают стандартной резиновой пробкой, фиксируют пробку и содержимое флакона перемешивают. Кожа в месте пункции предварительно обрабатывается раствором сулемы 1:1000 или риванолом 1:500. Дезинфекция кожи спиртом, эфиром, настойкой йода или бензином не допускается.

Данные о взятии мочи, слюны или крови заносятся в журнал регистрации анализов и их результатов (форма №250/у, утвержденная Приказом Минздрава СССР от 04.10.80 №1030). При этом указываются: порядковый номер, дата и время взятия мочи, крови или слюны; фамилия, имя, отчество врача, производившего взятие пробы крови (откуда взята кровь и способы обработки кожи), количество взятых биосред, дата и время передачи биосред на анализ, дата проведения исследования, результаты исследования. Листы регистрационного журнала должны быть пронумерованы, прошнурованы и скреплены сургучной печатью учреждения.

Пробы биологических сред следует хранить в холодильнике при температуре не ниже -4 град. С.

В лабораторию пробы мочи, крови и слюны передаются с направлением, в котором указаны порядковый номер пробы (по регистрационной книге), наименование, количество, дата и время взятия биосред, условия хранения, цель анализа, Ф.И.О. направившего врача, адрес направившего учреждения.

Биосреды, как правило, должны исследоваться не позднее суток с момента их отбора. Допускается их хранение до исследования в холодильнике при температуре не ниже -4 град. С в течение 5 суток. При длительном хранении биосред с нарушением температурного режима хранения в них развиваются бродильные и гнилостные процессы, которые могут существенно исказить результаты количественного определения.

Часть исследуемой среды (из флакона) используют для определения этилового алкоголя, оставшуюся часть хранят в холодильнике для возможных контрольных исследований в течение 35 дней.

Склянки (пробирки), предназначенные для взятия крови и мочи, моются 2%-ным раствором соды, ополаскиваются дистиллированной водой и стерилизуются обычным способом.

В настоящее время для количественного определения алкоголя в биологических жидкостях в нашей стране используются методы фотоколориметрии и газожидкостной хроматографии.

Первый из них недостаточно избирателен к алкоголю, обладает значительными погрешностями, однако до сих пор используется в отдельных лечебных учреждениях в тех случаях, когда не представляется возможным анализ более избирательным и точным способом.

В кабинете медицинского освидетельствования для установления факта употребления алкоголя и состояния опьянения количественное определение алкоголя в биологических жидкостях должно производиться методом газовой хроматографии. Этот метод обладает высокой специфичностью и точностью.

2.1.11 Газовая хроматография

Среди известных хроматографических методик для определения алкоголя в биологических жидкостях к настоящему времени Минздравом рекомендованы к использованию две модификации нитритного метода (см. Методическое письмо №10-95/14-32 от 22.04.68 с Дополнениями от 12.08.71 и методические указания о повышении качества исследований при количественном определении этилового спирта в крови и моче (1977 г.), а также методику, излагаемую ниже).

Сущность нитритного метода заключается в превращении спиртов в алкилнитриты, более летучие, чем спирты, и в дальнейшем хроматографировании алкилнитритов. Разделенные на хроматографической колонке компоненты смеси последовательно поступают в детектор по теплопроводности - катарометр, сигналы которого регистрируются в виде ряда хроматографических пиков на хроматограмме. Идентификация веществ производится по времени их удержания, которое исчисляется от момента введения анализируемого вещества в колонку до появления максимума пика. Чувствительность для этилового спирта составляет 0,01%. Расчет концентрации этилового алкоголя производят после калибровки по методу внутреннего стандарта. Внутренним стандартом служит изопропиловый спирт.

Для работы могут быть использованы отечественные газовые хроматографы ЛХМ-8МД, ЛХМ-80, "Цвет-100", 102, 106, 162 и другие, комплексованные детектором по теплопроводности (катарометром).

2.1.12 Методика определения этилового спиртаДанная модификация методики разработана заведующим химико-токсикологической лаборатории Республиканского центра лечения острых отравлений А.А. Калдаевым

Газовый хроматограф с детектором по теплопроводности. Газ - носитель: гелий, скорость потока: 24 мл/мин. Колонка металлическая, диаметром 3 мм и длиной 2 м, температура колонки 60 град. С. Твердый носитель (ТН) - целит С-22, фракция 60 - 80 меш, модифицированный металлическим серебром. Неподвижная фаза (НФ) - полиэтиленгликоль - 1500. Соотношение НФ к ТН - 1:10.

Примечание. В приборах с раздельными термостатами детектора и колонок температура термостата детектора - 100 град. С.

2.1.13 Подготовка твердого носителя

В качестве твердого носителя можно использовать любые вещества на основе кизельгура (целиты, хромосорб, хромотон, цветохром и т.п.) с размером частиц 0,16-0,20 мм, предварительно модифицированные слоем металлического серебра.

Модификация металлическим серебром проводится в следующем порядке: 0,2 г нитрата серебра растворяют в 3 - 4 каплях воды и добавляют 25 мл этанола. Раствор переносят к круглодонную колбу со шлифом и к раствору добавляют 10 г твердого носителя. Колбу присоединяют к вакуумному насосу на 25-30 мин. Затем колбу помещают на водяную баню (80-90 град. С) и отгоняют 10-15 мл спирта. Колбу снимают с бани и отсоединяют от вакуумного насоса. При постоянном перемешивании в колбу вносят 5 мл 10%-ного раствора аммиака. Колбу присоединяют на 15-20 мин. к вакуумному насосу. После отключения насоса в колбу вносят 3 мл раствора формальдегида, перемешивают и помещают на 5 мин. в водяную баню при постоянном перемешивании. Затем твердый носитель промывают декантацией горячей дистиллированной водой и переносят на сито. Твердый носитель на сите промывают водой до нейтральной реакции, затем свежеприготовленным 1% раствором едкого калия, и раствору дают свободно стечь. После этого твердый носитель сушат при 90-95 град. С досуха, а затем прокаливают 3 часа при 160-180 град. С.

Приготовленный твердый носитель сохраняют в склянках с притертой пробкой.

Примечание. Перемешивание твердого носителя осуществляется только (!) вращением колбы, применение стеклянных палочек или мешалок недопустимо.

2.1.14 Нанесение неподвижной фазы

В выпаривательной чашке растворяют 1 г неподвижной фазы в 20 мл перегнанного хлороформа и в раствор вносят 10 г подготовленного твердого носителя. Содержимое перемешивают покачиванием в течение 8-10 мин. и чашку помещают на водяную баню с температурой 60-65 град. С при постоянном перемешивании до полного удаления растворителя и отсутствия запаха хлороформа.

Подготовку твердого носителя и нанесение неподвижной фазы можно производить на ротационном испарителе.

2.1.15 Заполнение и кондиционирование колонок

Перед кондиционированием с помощью бюретки с дистиллированной водой или расчетным путем измеряют объем колонки и снабжают ее биркой с указанием объема колонки, наименования твердого носителя, неподвижной фазы и даты заполнения.

Незаполненные хроматографические колонки предварительно промывают раствором жидкого детергента, ополаскивают дистиллированной водой, промывают спиртом, эфиром и хлороформом, продувают воздухом и прокаливают в сушильном шкафу при 200-250 град. С в токе инертного газа в течение 2 часов.

Новые колонки необходимо после прокаливания установить в прибор, включить газ - носитель и проверить герметичность соединений.

Заполняют колонку "под иглу" точно измеренным количеством наполнителя (твердый носитель с нанесенной неподвижной фазой). Заполненные колонки присоединяют к блоку ввода пробы, оставляя свободным второй конец, устанавливают поток газа - носителя 24 мл/мин., проверяют герметичность и термостатируют, повышая температуру от 50 град. С до 90 град. С ступенчато - 10 град. в час. После чего устанавливают температуру 90 град. С и кондиционируют 24 часа. Только после кондиционирования отключают термостат, охлаждают до комнатной температуры и подсоединяют колонку к детектору.

Подготовленная по описанной выше методике колонка работоспособна более одного года при условии соблюдения температурного режима (не меньше 95 град. С и чистоты газа-носителя. Необходимо также избегать перегрузки колонок большим количеством исследуемой пробы (т.е. более одного см3 парогазовой фазы или 5 мкл жидкой пробы).

После кондиционирования колонки проводится проверка ее эффективности.

2.1.16 Определение метрологических характеристик

Оценка точности газохроматографических измерений проводится в соответствии с Методическими рекомендациями "Методика по нормированию метрологических характеристик, градуировке, проверке хроматографических приборов универсального назначения, по оценке точности результатов хроматографических измерений", изд. Стандартов, М., 1978.

2.1.17 Методика обнаружения этанола в биологической пробе

Во флакон из-под пенициллина, содержащий 0,5 мл раствора трихлоруксусной кислоты, вносят 0,5 мл исследуемой пробы. Флакон закрывают стандартной резиновой пробкой и фиксируют алюминиевым колпачком с помощью ПОК (прибор для обжима пенициллиновых флаконов).

После энергичного перемешивания во флакон шприцем вводят 0,35 мл раствора нитрита натрия. Содержимое флакона энергично встряхивают (30 маятникообразных движений) и оставляют на 1 минуту. Затем из флакона шприцем путем прокола пробки отбирают 0,5 мл парогазовой фазы, которую тотчас же вводят в прибор. С помощью секундомера измеряют время удерживания от начала выхода пика несорбирующегося компонента (воздуха) до максимума измеряемого пика. Это время удерживания вещества в колонке. При наличии в исследуемой крови алифатических спиртов на хроматограмме появляются пики соответствующих алкилнитритов.

2.1.18 Количественное определение

Количественный анализ проводят с помощью калибровки по методу внутреннего стандарта, используя для расчета отношение высот пика этанола к пику изопропанола. Калибровочный график для количественных исследований строят ежедневно, т.к. при повторном включении прибора условия хроматографии могут изменяться. График зависимости от концентрации этанола строят по 3-4 точкам, используя точные растворы этилового спирта в воде.

Для построения графика используются эталонные растворы этанола в концентрации 0,4-2; 0-4,0%, которые подвергаются газохроматографическому исследованию в тех же условиях, что и исследуемые пробы. На графике на оси абсцисс откладываются значения соотношения высот пиков этилнитрита к пропилнитриту (изопропилнитриту), во избежание дробных чисел среднее значение соотношения высот пиков для каждой концентрации этанола умножают на 100. Масштаб: 1 см = 0,1. На оси ординат - соответствующие им значения концентрации эталонных растворов. Масштаб: 1 см = 0,4%.

Пробу биологической среды подготавливают к вводу в прибор следующим образом: во флакон из-под пенициллина, содержащий 0,5 мл трихлоруксусной кислоты, вносят 0,5 мл раствора изопропанола (внутренний стандарт) и 0,5 мл исследуемой пробы; флакон закрывают стандартной пробкой. Пробку фиксируют. Содержимое флакона перемешивают и во флакон шприцем вводят 0,35 мл раствора нитрита натрия. Флакон энергично встряхивают (30 маятникообразных движений) и оставляют на 1 минуту. После чего из флакона шприцем путем прокола пробки отбирают 0,5 мл парогазовой фазы, которую тотчас же вводят в прибор. Для получения достоверных результатов проводят три параллельных исследования. На хроматограмме измеряют высоту пиков.

Для расчета концентрации этилового спирта удобнее пользоваться величиной f - фактор чувствительности.

2.1.19 Приборы и оборудование

1. Газовый хроматограф ЛХМ-8МД, ЛХМ-80, Цвет-100 и другие с детектором по теплопроводности. Колонки - 2 м.

2. Баллоны металлические для хранения сжатых газов (гелия или азота) - 3шт.

3. Водоструйный насос, или вакуумный насос, или электроотсос хирургический - 1 шт.

4. Редукторы газовые 3 шт.

5. Шкаф сушильный с диапазоном температур 50 град. С - 240 град. С - 1 шт.

6. Приспособление для обжима алюминиевых колпачков К-1 - 1 шт.

7. Секундомер - 1 шт.

8. Шприц типа "Рекорд" на 1 мл, обязательно с силиконовым уплотнением (Chirana, ЧССР) - 1 шт.

9. Иглы к шприцам типа "Рекорд", например, А-04, 20-1-15 для отбора парогазовой фазы) и 0806 (для ввода) - 1 компл.

10. Шкаф вытяжной - 1 шт.

11. Холодильник бытовой - 1 шт.

12. Мойка для мытья лабораторной посуды (двухсекционная) - 1 шт.



2.1.20 Посуда

1. Колба мерная на 1 л - 50 шт.

2. Колба мерная на 100 мл - 10 шт.

3. Стакан мерный на 100 мл - 5 шт.

4. Склянка с притертой пробкой на 100 мл - 10 шт.

5. Пипетки мерные на 1, 2, 5, 10 мл со знаком аттестации Госстандарта - по 100 шт.

6. Флаконы из-под пенициллина с пробками - 500-1000 шт.

7. Колпачки алюминиевые - 500-1000 шт.

8. Колба круглодонная со шлифом №29 на 0,5 л - 10 шт.

2.1.21 Химические реактивы (на 2000 анализов в год)

1. Целит С-22, целит 545, или хромотон, или хромосорб с зернением 60 - 80 меш. (0,16 - 0,20 мм) - 25 см³

2. Полиэтиленгликоль 1500 (ПЭГ-1500) - 3 г

3. Серебра нитрат "хч" - 3 г

4. Натрия гидрат окиси "хч" - 15 г

5. Натрия сульфат безводный "хч" - 10 г

6. Натрия нитрит "хч" - 60-30 г натрия нитрита в мерном стакане доводят дистиллированной водой до 100 мл. Хранят в склянке из темного стекла в холодильнике.

7. Трихлоруксусная кислота "чда", "хч" - 500 г, 50 г трихлоруксусной кислоты в мерном стакане доводят дистиллированной водой до 100 мл. Хранят в склянке из темного стекла при комнатной температуре.

8. Аммония гидрат окиси, 25%-ный раствор - 25 мл

9. формальдегида 40%-ный раствор - 25 мл

10. Хлороформ (перегнанный) - 100 мл

11. Изопропанол "осч" для ГХ - 4 мл. 0,4 мл изопропанола в мерной колбе доводят дистиллированной водой до 100 мл. Хранят в склянке с притертой пробкой в холодильнике 5 суток.

12. Едкое кали "хч" - 100 мг

13. Этиловый спирт для приготовления эталонных растворов - 2 мл

Предварительно спиртометром измеряются процент (объемный) исходного алкоголя. По алкоголеметрической таблице (Государственная фармакопея) объемные проценты переводятся в весовые с указанием удельного веса. Затем производится расчет необходимого количества алкоголя для приготовления 10%-ного раствора спирта.

Для приготовления эталонного раствора в концентрации 0,4% пипеткой отмеривается 2 мл раствора спирта, количественно переносится в мерную колбу емкостью 50 мл и разбавляется дистиллированной водой до отметки. Для приготовления 2%-го раствора берется 10 мл 1%-ного раствора спирта, а для приготовления 4% эталонного раствора берется 20 мл 1% раствора спирта, дальнейшее разведение осуществляется как указано выше.

Эталонные растворы хранятся в склянках темного стекла с хорошо зашлифованными пробками при температуре +4-+6 град. С. При пользовании эталонными растворами следует как можно меньше оставлять их открытыми. Перед открыванием склянки с этанолом ее необходимо тщательно встряхнуть. При соблюдении этих условий эталонные растворы могут использоваться в течение 5 - 10 дней, практически не теряя своей концентрации. По истечении этого срока приготавливаются новые эталонные растворы.

2.2 Изменение концентрации этанола во внутренних органах трупа в ранние сроки посмертного периода

В крови и моче трупа при острой алкогольной интоксикации уже в ранние сроки (несколько суток) после наступления смерти наблюдают как снижение содержания этанола за счет окисления и испарения, так и его повышение обусловленное диффузией и процессом новообразования. В тех случаях, когда не удается получить пробы крови и мочи (при исследовании расчлененных и гнилостно-измененных трупов), важное значение приобретает исследование этанола во внутренних органах трупа. Трактовка полученных при этом результатов всегда представляет значительные трудности, особенно в случаях со значительным сроком посмертного периода.

В связи с этим в эксперименте и на секционном материале изучены изменения концентрации этанола в ранние сроки посмертного периода в различных внутренних органах трупа при острой алкогольной интоксикации.

Основной целью исследования явилось установление конкретных внутренних органов, в которых происходят минимальные изменения концентрации этанола в посмертном периоде.

Эксперименты проведены на 125 белых крысах обоего пола, массой 300-380 г, содержащихся в виварии на обычном пищевом режиме. Животным через зонд внутрижелудочно вводили по 6 мл 70% раствора этанола. Такая доза была обусловлена необходимостью обеспечить максимальное насыщение внутренних органов животных этанолом, не вызывая при этом их гибели в ближайшие часы после затравки. Через 2 ч после затравки (в конце фазы резорбции) животных забивали и сразу же подвергали вскрытию для взятия проб органов, без их эвисцерации. Для исследования брали головной мозг, миокард (левый желудочек), печень, почку, мышечную ткань (бедро). На желудок накладывали лигатуры, часть желудка иссекали, для исследования брали отмытый участок стенки желудка. Содержимое этанола определяли методом газожидкостной хроматографии. После взятия проб для исследования головной мозг помещали в брюшную полость; переднюю брюшную стенку ушивали.

Учитывая, что характер изменений содержания этанола в органах трупа в значительной степени зависит от температуры окружающей среды, мы провели 2 серии экспериментов. В первой серии (77 животных) трупы сохраняли при комнатной температуре (18-22^оС). После затравки и забоя животных ежедневно (на протяжении 5 сут) из трупов животных (по 12-20 крыс) повторно брали пробы тех же органов. Во второй серии опытов (48 крыс) трупы животных хранили при более низких температурах (4-6^оС) в условиях холодильника. При этом материл для повторного исследования брали из трупов животных (по 5-10 крыс) на 1, 3, 5, 7, 9, 11 и 13 е сутки посмертного периода.

Данные распределения животных с учетом сроков исследования и условий хранения трупов приведены в табл. 1.

Следует отметить, что трупы крыс уже в первые дни хранения при комнатной температуре подвергались резкому гнилосному разложению, а их внутренние органы к концу первой недели распадались вплоть до разжижения. В условиях более низких температур сохраняемость внутренних органов и тканей оказалось более продолжительной, поэтому в холодильнике трупы в животных содержали более длительный срок (2 нед).

Результаты определения содержания этанола в изученных органах в различные сроки посмертного периода представлены в табл. 2 и 3.

Из табл. 2, 3 видно, что в стенки желудка из трупов экспериментальных животных обеих серий происходило снижение концентрации этанола по сравнению с исходным уровнем, а в веществе головного мозга, сердца, печени и почках отмечалось, наоборот повышение содержания этанола, причем особенно значительное в течение первых 3 сут. посмертного периода. Такие количественные изменения (повышение) концентрации этанола обусловлены процессом диффузии его из полостей стенки желудка в окружающие органы и ткани. Этот процесс обусловлен значительной разницей концентрации этанола в содержимом желудка, а также в органах и тканях, причем он более выражен у животных, трупы которых находились в холодильнике. При комнатной температуре, благоприятствующей окислению и испарению этанола относительное повышение содержания его по сравнению с исходным уровнем было менее выраженным.

Из табл. 2, 3 видно, что в почках и мышечных тканях бедра животных обеих серий экспериментов такое относительное повышение содержания этанола в первые дни посмертного периода было менее выраженным по сравнению с другими изученными органами. При комнатной температуре в течение первых 2 сут. посмертного периода отмечено некоторое снижение содержания этанола по сравнению с исходным уровнем. С одной стороны, это можно объяснить тем, что условия диффузии этанола из желудка в мышцы бедра являются ограниченными (в сравнении с другими органами), а с другой - процесс окисления и испарения этанола при более высоких температурах носит более интенсивный характер.

Проведенные нами экспериментальные исследования динамики концентрации этанола во внутренних органах трупа в ранние сроки посмертного периода свидетельствуют, что колебания её зависят не только от давности наступления смерти, но и от температуры окружающей среды. Наши данные согласуются с результатами других авторов.

С учетом полученных в работе экспериментальных данных нами была также изучена динамика концентрации этанола в почках и мышечной ткани бедра у трупов людей, умерших от различных причин в состоянии алкогольной интоксикации.

Исследовали трупы мужчин (20) и женщин (3) в возрасте 25-58 лет. После вскрытия и взятия проб для исследования ежедневно в течении нескольких суток повторно брали пробы. В течение этого срока трупы хранили в условиях холодильной камеры в морге при 4-6^оС. Полученные нами данные о содержании этанола в почках и мышечной ткани бедра трупов людей на протяжении первых 6 сут. после наступления смерти приведены в табл. 4.

Из табл. 4 видно, что коэффициент корреляции для почки на протяжении всего срока исследования был высоким, что свидетельствует о наличии выраженной положительной связи уровня этанола при первичном и повторном (для каждого срока) исследовании. Для мышечной ткани бедра коэффициент корреляции также оказался высоким (за исключением 6 сут. после смерти, когда величина коэффициента была близка к нулю), что свидетельствует о существенной коррелятивной взаимосвязи исходного и окончательного уровня содержания этанола в течение всего срока исследования.

Окончательно установившийся уровень этанола как в почке, так и в мышечной ткани бедра в среднем по группе для каждого срока (суток) исследования претерпевает изменения в пределах ±20% по сравнению с исходным уровнем. Такие изменения концентрации этанола в течение посмертного периода обусловлены процессами диффузии, особенности и закономерности которой изучены еще недостаточно.

Таким образом при наличии выраженных трупных изменений содержание этанола следует определять в почке и мышечной ткани бедра, в которых лучше всего сохраняется этанол в течение посмертного периода, причем уровень этанола в этом случае наиболее соответствует исходному, изменяясь по сравнению с ним в пределах ±20% в течении ранних сроков посмертного периода.



Выводы

1. С применением газожидкостной хроматографии определение этанола во внутренних органах трупа облегчилось и стало более точным.

2. Установлены конкретные внутренние органы, в которых происходят минимальные изменения концентрации этанола в посмертном периоде, это - головной мозг, стенка желудка, сердце, печень, почки.

3. Доказано, что в трупах, которые хранятся при низкой температуре (4-6^оС) содержание алкоголя сохраняется дольше, чем в трупах, хранимых при более высоких температурах.

4. Было установлено, что на различных стадиях посмертного периода концентрация этанола в различных органах и средах трупа может как повышаться, так и понижаться вплоть до полного исчезновения.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В моей работе отчетливо видно отрицательное действие алкоголя на организм человека, что очень актуально в настоящее время. Многие люди не задумываются о последствиях, которые может у них вызвать применение спиртных напитков. Очень часто по этой причине случаются дорожно-транспортные происшествия. Наша задача заключается в том, чтобы это предотвратить и уж, если случилось не поправимое, выяснить настоящую причину гибели людей.

За последние годы медицина преуспела в этом направлении. Большой популярностью пользуется газожидкостная хроматография, которую может применять врач при проведении освидетельствования употребления алкоголя.

Врач, проводящий освидетельствование, должен не только констатировать сам факт потребления алкоголя, но и правильно квалифицировать состояние обследуемого, поскольку диагностика соответствующих синдромов служит медицинским критерием для установления определяемых в законе правонарушений, связанных с потреблением алкоголя.

Кроме того, при проведении освидетельствования в целях предупреждения заболеваний, несчастных случаев и обеспечения безопасности труда необходимо выявлять нарушения функционального состояния, требующие отстранения от работ с источниками повышенной опасности.

Недопустимым является установление факта употребления алкоголя и состояния опьянения у обследуемого исключительно на основании запаха алкоголя изо рта, а также сведений о потреблении спиртных напитков.

В случаях неполной или неясной клинической картины опьянения необходимо исследовать различные биосреды, применять сочетание 2-3 химических тестов на алкоголь, а при исследовании выдыхаемого воздуха или слюны повторять их проведение через 20 - 30 минут. Заключение об установлении факта употребления алкоголя и состояния опьянения должно выноситься на момент первичного обследования освидетельствуемого. Это связано в первую очередь с приходящим характером симптоматики опьянения. Кроме того, определенное значение здесь может иметь влияние сопутствующих факторов, например, введение обследуемому наркотических или спиртосодержащих препаратов по медицинским показаниям.

При возбуждении уголовного дела (например, по факту дорожно-транспортного происшествия или уголовно наказуемого правонарушения) и возникновении необходимости в ретроспективной оценке состояния указанная оценка осуществляется в рамках судебно-медицинской или судебно-психиатрической экспертизы по постановлению следователя, прокурора или определению суда.



СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ ИСТОЧНИКОВ

1. Приказ от 2 сентября 1988 г. №06-14/33-14 «Медицинское освидетельствование для установления факта употребления алкоголя и состояния опьянения»

2. Государственная фармакопея Х.

3. Мельников Ю.Л., Ольховик В.П. Некоторые аспекты метаболизма этанола при алкогольной интоксикации// Суд. мед. экспертиза 1990 - Т-33 №3 - с. 37-39.

4. Рыболовлев Ю.Р. Некоторые аспекты токсикологической характеристики алкоголя // Гематологтя и трансфизиология - 1997 - Т. 32, №1, С. 52-54.

5. Емолкин Ю.В. Модификация узла ввода пробы для газового хроматографа. Судебно-медицинская экспертиза, 1978. Т. 21. № 2. с. 43-44.

6. Кузнецова Л.В., Петрова В.Г. Определение этанола в мышечной ткани методом газожидкостной хроматографии // Судебно-медицинская экспертиза - 1986 - Т. 29. №4. с. 47-48.

7. Динамика содержания этанола во внутренних органах в различные сроки посмертного периода при остром алкогольном отравлении: / В.В. Томилин, Ю.Д. Гурочкин, Е.А. Красовская, С.Н. Сергеев, Судебно-медицинская экспертиза, 1982, Т. 28, №4, с. 45-48.

8. Успенский А.Е., Листвина В.П. Алкоголь и действие лекарств // Вопросы наркологии - 1988 - №3 - с. 51-56.

9. Гурочкин Ю.Д. Изменение концентрации этанола во внутренних органах трупа в ранние сроки посмертного периода // Судебно-медицинская экспертиза. - 1987. - Т. 30 №1. - с. 38-41.

10. П.С. Ганжара; А.А. Новиков «Учебное пособие по клинической токсикологии», Москва, 1979г.

11. М.Д. Швайкова «Токсикологическая химия». - 3-е изд. - Москва, 1975.

12. Интернет



ПРИЛОЖЕНИЕ

Таблица 1

Распределение экспериментального материала (животные) по срокам исследования и условиям хранения трупов

Условия хранения трупов	Срок посмертного периода, сут	Итого
	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	12	13
Комнатная температура (18-22оС)	13	12	17	21	14	_	_	_	_	_	_	_	_	77
В холодильнике (4-6оС)	5	_	6	_	5	_	15	_	6	_	5	_	6	48

Таблица 2

Содержание этанола (в ‰) во внутренних органах трупов крыс, хранившихся при комнатной температуре в различные сроки посмертного периода.

Объект исследования	Срок посмертного периода, сут
	1	2	3	4	5
Головной мозг	2,25/5,20	1,76/2,58	2,11/3,48	1,98/3,99	1,57/1,08
Стенка желудка	7,51/6,49	8,46/3,30	5,88/2,63	8,52/6,69	5,62/0,64
Сердце	1,88/3,31	1,71/2,99	1,71/2,79	1,03/3,07	1,32/0,34
Печень	2,39/6,39	1,88/4,18	1,44/4,63	0,97/2,63	1,2/1,74
Почка	2,53/6,74	2,14/5,03	1,56/5,23	1,71/4,38	1,48/2,37
Скелетная мышца	1,87/1,71	1,68/1,61	1,6/1,68	1,81/1,98	1,21/1,98

Примечание. Здесь и в табл. 3 в числителе - сходный уровень этанола, в знаменателе - окончательно установившийся уровень.

Таблица 3

Содержание этанола (в ‰) во внутренних органах трупов крыс, хранившихся в холодильнике, в различные сроки посмертного периода

Объект исследования	Срок посмертного периода, сут
	1	3	5	7	9	11	13
Головной мозг	0,66/2,63	0,83/6,46	4,55/10,0	1,39/4,98	1,48/2,20	3,74/8,35	1,99/4,41
Стенка желудка	7,61/3,43	8,7/4,55	7,46/7,78	6,28/5,90	5,96/2,14	8,18/5,01	7,2/4,58
Сердце	0,59/2,15	0,55/5,50	4,33/8,76	1,39/4,96	0,95/1,38	3,9/6,22	1,73/1,80
Печень	0,37/2,86	0,7/6,39	4,1/10,0	1,08/3,49	0,91/2,12	5,11/8,46	2,48/6,63
Почка	0,75/2,14	0,98/5,99	4,21/10,0	1,61/4,35	0,58/2,65	6,73/8,48	2,09/6,41
Скелетная мышца	0,68/1,00	0,73/0,97	4,57/5,00	1,45/2,63	1,27/2,18	4,24/7,39	1,55/2,37

Таблица 4

Содержание этанола (в ‰) в почке и мышечной ткани бедра трупов людей в различные сроки посмертного периода

Причина смерти	Исходный уровень этанола	Срок посмертного периода, сут
		1	2	3	4	5
Отравление алкоголем	4,1/2,85	--	4,7/4,75	--	4,3/4,55	4,1/4,06
Ушибленные раны головы. Острая кровопотеря	3,05/2,75	3.3/2.85	--	2,25/2,4	2,3/3,6	2,4/2,7
Колото-резаные раны туловища. Острая кровопотеря	2,3/2,7	2.1/1.5	2,5/1,65	1,9/1,0	--	1,1/1,3
Отравление алкоголем	5,8/3,5	5,0/2,45	6,45/1,9	--	5,7/1,55	--
Автомобильная травма. Травма спинного мозга	2,55/2,85	2,8/2,4	1,75/1,65	2,25/2,0	--	--
Отравление алкоголем	8,15/5,2	8,7/10,0	10,0/10,0	3,75/4,8	7,5/7,5	--
Отравление алкоголем	1,8/2,1	4,1/3,25	--	4,0/5,0	--	5,1/3,15
Хроническая ишемическая болезнь сердца	0,3/0,3	0,3/0,3	--	0,01/0,01	--	1,6/0,45
Отравление алкоголем	5,4/4,6	5,6/7,5	--	6,2/4,5	--	4,25/0,16
Отравление угарным газом	4,0/2,2	0,8/2,0	2,85/0,0	0,1/0,8	0,5/0,0	--
Переохлаждение тела	2,7/2,35	1,75/2,35	3,15/1,6	3,0/2,1	--	--
Повешение	0,85/0,8	2,8/1,46	3,3/1,9	1,1/1,8	--	--
Коэффициент корреляции ( r)		0,79/0,67	0,9/0,76	0,52/0,36	0,86/0,79	0,46/-0,01
Коэффициенты регрессии:
a		0,67/1,29	0,51/1,93	1,52/1,17	2,5/2,2	1,19/2,57
b		0,79/0,43	0,76/0,3	0,64/0,58	0,62/0,32	0,53/-0,01

Примечание. В числителе - содержание этанола в почке, в знаменателе - в скелетной мышце Размещено на Allbest.ru