Бруцеллез крупного рогатого скота

Аллергическую пробу проводили путем введения аллергенов внутрикожно в дозе 0,2 см³ в среднюю треть шеи. Учет реакции проводили через 48 часов после введения препарат.

Отбор проб для бактериологического исследования, проверку активности, стерильности комплемента, гемолитической сыворотки, методы постановки РА, РСК, РБП, аллергической пробы проводили согласно ГОСТ 25385-82 (СТСЭВ 2703-80), утвержденным Постановлением Государственного Комитета СССР по стандартам.

Концентрацию микробных клеток бруцелл определяли по стандарту мутности ГНИИСиК им. Л.Ф. Тарасевича.

Чувствительность бруцелл к антибиотикам определяли методом серийных разведений.

Определение минимальной инфицирующей дозы бруцелл для морских свинок проводили согласно описанию.

Проверку препаратов на стерильность проводили в соответствии с ГОСТом 28085-89 (ст СЭВ 6280-88) [№ГОСТ].

Проверку безвредности, реактогенности, абортогенности, активности биопрепаратов проводили согласно методом описанным [50].

Изучение реактогенности проводили в соответствии методике описанной [51].

Индекс инфицированности зараженных животных определяли по формуле:

а х 100

Х = ------------, где

б х с

Х - индекс инфицированности;

а - число выделенных культур;

б - количество животных в опыте;

с - количество органов, лимфатических узлов взятых для посева от каждого животного.

Статистическую обработку цифровых материалов проводили по методике описанной [52].

4. Результаты собственных исследований

4.1 Анализ эпизоотической ситуации по бруцеллезу крупного рогатого скота в разрезе районов Западно-Казахстанской области

По данным биологического отдела Западно-Казахстанской областной территориальной инспекции Комитета ветеринарного контроля и надзора МСХ РК в 2006-2012 годах в Западно-Казахстанской области исследовано на бруцеллез 4156804 голов КРС, соответственно выявлено 102663 (2,4%) голов больного бруцеллезом скота.

Таблица 2. Динамика заболеваемости бруцеллезом крупного рогатого скота в Западно-Кахастанской области в 2006-2012 годах

№	Районы	Заболеваемость КРС бруцеллезом, в%
		г о д ы
		2006	2007	2008	2009	2010	2011	2012
1	Акжаикский	0,6	0,8	1,07	6,5	4,8	3,9	1,6
2	Бокейординский	1,8	1,2	2	7,7	7	5,1	2,7
3	Бурлинский	0,35	0,1	0,4	2	1,4	1	0,3
4	Жанакалинский	0,9	0,7	1,2	11,3	9,7	5,1	1,6
5	Жанибекский	0,08	0,07	0,06	15,2	7,7	6,6	1,7
6	Зеленовский	0,2	0,9	0,9	1,1	0,8	0,3	0,3
7	Казталовский	1	1,1	1,1	7	7,4	3,6	2,0
8	Каратюбинский	0,7	0,9	1,9	5,4	3,3	2	0,7
9	Сырымский	1,2	1,3	1,7	7,6	3,9	3	0,8
10	Таскалинский	0,05	0,02	0,1	0,7	0,5	0,8	0,6
11	Теректинский	0,5	1	1,5	1,7	1,4	1	0,8
12	Чингирлауский	0,3	0,2	0,4	4,4	3,7	2,2	0,8
13	Уральск	0,2	0,5	0,3	0,5	0,2	0,05	0,2
	Итого	0,8	0,8	1,1	5,7	4,1	3,2	1,3

Данные табл. 2 свидетельствуют о том, что за 2006-2012 годы показатель заболеваемости характеризовалось периодами подъема и спада. При этом период снижения заболеваемости бруцеллезом крупного рогатого скота по сравнению с 2009-2011 годам отмечено в 2012 году. В последующие годы отмечается неравномерный подъем уровня заболеваемости, пик подъема которой достигла за 2009 год, это связано с тем, что начиная с 2009 года по всей стране все поголовье крупного рогатого скота исследовались на бруцеллез с помощью метода ИФА (иммуноферментный анализ). За весь период наблюдения отмечалась значительная заболеваемость в Жанибекском (15,2%), Жанакалинском (11,3%), Бокейординском (7,7%), и Сырымском (7,6%) районах. Эти показатели соответственно на 9,5; 5,6; 2,0 и 1,9%, чем средний показатель по области (5,7%).

На рис. 1 приведены сравнительные данные заболеваемости бруцеллезом всего поголовья крупного рогатого скота, коров и телок перед случкой за 2006-2012 годы.

Рис.-1. Заболеваемость бруцеллезом коров и телок в Западно-Казахстанской области за 2006-2012 гг.

Из рис. 1 видно, что удельный вес больного бруцеллезом маточного поголовья по сравнению с другими половозрастными группами выше. При этом следует отметить, что наивысший уровень заболеваемости среди коров наблюдался в 2006 году (1,27%) с последующим снижением в 2008 году до 0,8% или в 1,59 раза. В 2009 году заболеваемость коров бруцеллезом вновь возросло до 1,2% с незначительным и неравномерным снижением ее в последующие годы. Далее следует отметить, что наименьший уровень заболеваемости наблюдается среди телок случного возраста, которая также характеризуется периодами неравномерного спада и подъема, что подтверждается данными рис. 2. При этом наиболее интенсивный спад уровня заболеваемости среди телок случного возраста наблюдался в 2010 и 2012 годы, а пик подъема - 2006 и 2008 гг.

Рис.-2. Динамика выявляемой КРС больного бруцеллезом в Западно-Казахстанской области

Анализ данных, приведенных в рис. 2 показывает, что начиная с 2007 года в области наблюдается увеличение число реагирующих на бруцеллез крупного рогатого скота. Так, за 2009, 2010 и 2011 годы выявляемости больного бруцеллезом животных по сравнению с 2006 годом увеличилась в 6,6, 4,8 и 4,8 раза соответственно и это так же можно обьяснить в связи с применением метода ИФА при серологическом исследовании на бруцеллез.

Следующим этапом наших исследований было определение показателя неблагополучия, как показателя развития эпизоотического процесса. Результаты исследований приведены на рис. 3.



Рис.-3. Показатель неблагополучие по бруцеллезу крупного рогатого скота в Западно-Казахстанской области за 2002-2008 гг.

Анализируя данные, приведенных на рис. 3 установили, что по показателям неблагополучия при бруцеллезе крупного рогатого скота большинство сельские округа входят в зону с максимальным распространением бруцеллеза. При этом показатель неблагополучия в среднем составила 63,3%, хотя наблюдается незначительное снижение напряженности в 2012 году на 2,7%.

При определении экстенсивного показателя уровень распространения бруцеллеза по области или статуса территорий сельских округов в соответствии «Ветеринарно-санитарным и санитарно-эпидемиологическим правилам по профилактике и борьбе с заразными болезнями, общими для человека и животных (бруцеллез)», утвержденным приказом Министра сельского хозяйства №632 от 05.11.2004 г. получены нижеследующие данные (рис. 4):



Рис.-4. Распределения территории на классы согласно статуса по бруцеллезу

По итогам анализа данных за 2006-2012 годы по области следует отметить, что только 21,8-30,8% сельских округов относится к чистой зоне. Из числа оставшихся округов относится: к классу А -24,5%, к классу С - 24,0% и к классу В - 51,5%. Эти данные показывают, что в хозяйствах области отмечается широкое распространение бруцеллеза среди крупного рогатого скота.

За изучаемый период отмечено осложнение эпизоотического состояния в некоторых хозяйствах области. Примером, которого является КХ «Нур» Бурлинскского района, где подтверждается факт повсеместного распространения данного заболевания.

Согласно проведенного нами анализа в КХ «Нур» Бурлинскского района за период с 2006 по 2008 годы при плановых диагностических исследованиях КРС на бруцеллез не были зарегистрированы больные животные. В апреле месяце 2012 года по данным ЗКО областного филиала на ПХВ «РВЛ» КВК и Н МСХРК из 470 голов в 52 (11,1%) случаях зарегистрирован реагирующих на бруцеллез животных. В последующих исследованиях, проведенного в филиале «Западно-Казахстанская научно-исследовательская ветеринарная станция ТОО «КазНИВИ» в период с мая по август месяца, количество больных бруцеллезом составило 149 голов, и уровень заболеваемости достигла до 10,9%. Причиной распространения данного заболевания в этом хозяйстве явились следующие факторы:

- в 2008-2011 годы не проведены работы по механической очистке и санации животноводческих помещений и их прилагающей территории;

- отсутствие на территории ферм ветеринарных защитных объектов (ветсанпропускник, дезбаръеров, ограждения и т.д.);

- доступ бродячих собак и скота частного владельца на территории ферм;

- не соблюдения сроков прохождения медицинского обследования работниками хозяйства;

- отсутствие искусственного осеменения коров и телок.

- в зимнее - стойловый период 2011 года наблюдались 10-15 случаев аборта. Об этом не был осведомлен госветинспектор сельского округа и соответственно абортированный плод не был отправлен в лабораторию для исключения бруцеллеза. Абортировавшие коровы не были изолированы от основного стада. Вследствие чего, вышеперечисленные факторы и явились причиной возникновения и распространения бруцеллеза среди скотопоголовья КХ «Нур».

Таким образом, приведенные выше данные показывают, что бруцеллез крупного рогатого скота получил широкое распространение в агроформированиях области и мероприятия проводимые в хозяйствах области согласно комплексного плана по профилактике и борьбе с бруцеллезом и туберкулезом сельскохозяйственных животных на 2006-2012 годы ощутимых результатов не дали. В результате чего произошел рост заболеваемости крупного рогатого скота в отдельных районах от 0,8 до 5,7% при среднеобластном показателе 5,7%. Поэтому необходимо разрабатывать более перспективные меры борьбы, в которых были бы включены препараты, высокой диагностической и профилактической активностью.

4.2 Выявление путей передачи возбудителей бруцеллеза в животноводстве Западно-Казахстанской области, а также источников бруцеллеза людей

Известная реструктуризация в аграрном секторе способствовала развитию многоукладных форм хозяйствования на селе. Вместо крупных специализированных хозяйств появились многочисленные средние и мелкие хозяйствующие субъекты. Изменилось соотношение поголовья животных в частном секторе, которое на сегодняшний день составляет более 80%.

Причем технология ведения животноводства в индивидуальном секторе и мелких фермерских хозяйствах, начиная от содержания, кормления и заканчивая воспроизводством далека от совершенства, как в зоотехническом плане, так и в особенности в ветеринарно-санитарном отношении.

Разработанная ранее система противобруцеллезных мероприятий включающая систематическое диагностическое исследование с последующим изъятием и организованным убоем больных, санацию окружающей среды и специфическую защиту восприимчивых животных в настоящее время практически не осуществима, что послужило причиной обострению как эпизоотической так и эпидимиологической ситуации. В последние годы отмечается тенденция роста заболевания людей бруцеллезом.

Заболеваемость людей бруцеллезом важный и единственный показатель неблагополучия эпизоотической ситуации. В качестве основных причин и факторов способствующих возникновению и распостранения бруцеллеза на территории ЗКО можно назвать следующие:

§ Отсутствие учета, повышенная миграция животных, ограниченность материальных средств при диагностических исследованиях не позволяют до конца выявить источник инфекций;

§ Недоработки в механизме изъятия и организованного убоя выявленных больных животных способствуют сохранению и передачи возбудителя;

Обеспеченность сельских округов ветсанобъектами (убойными пунктами, скотомогильниками и др.) не превышает 10-15%

§ Совместное содержание и выпас разных видов и половозрастных групп животных также способствуют передачи возбудителя при вольной случке и межвидовой миграции.

§ Профессиональная неграмотность владельцев животных и потребителей животноводческой продукции о бруцеллезе. Вновь приобретаемые животные без консультации с ветспециалистом, преварительного карантинирования вводятся в стадо животных. Молочная продукция без соотвествующих документов и ВСЭ реализуется в неустановленных местах. В период окотной компании для ухода за животными привлекаются дети, кормящие матери и др.

4.2 Аллергическая диагностика бруцеллеза крупного рогатого скота

Изготовление аллергена для диагностики бруцеллеза животных

В настоящее время весьма важно на вооружении иметь мобильные препараты при помощи, которых можно было бы многократно (вплоть до ежемесячного), без особых трудовых затрат, проводить диагностические исследования с целью выявления инфицированных животных. При этом перспективно, если при помощи этих препаратов можно было бы проводить провоцирование латентные формы бруцеллеза тем самым довыявлять инфицированных, на месте отмечать реагирующих животных и в кратчайшие сроки изолировать их из стада, где находятся условно здоровые животные. Кроме того, необходимо отметить, что применения таких препаратов (аллергены) для прижизненной аллергической диагностики бруцеллеза животных выгодно отличаются от антигенов используемые для постановки серологических реакций и позволяет исключить трудоемких процессов связанных с взятием крови в специально подготовленные посуды (пробирки, контейнера, вакутейнеры), постановкой затратоемких серологических реакции (необходима специальная посуда, реактивы, приборы, возможно аппаратура). Так же следует отметить, что аллергически метод диагностики является более безопасной для исполнителей при работе в условиях неблагополучия и в экологическом плане.

Поэтому, перед нами были поставлены задачи изыскания более оптимального варианта приготовления высокочувствительного аллергена с использованием авирулентного шт. B. abortus 19.

Это решение было принято по причине того, что он является наиболее безопасным штаммом, который характеризуется следующими признаками:

Происхождение штамм B. abortus 19. Данный штамм получен 1923 г. в США из молока коровы. Идентифицирован по определителю бактерий Берджи, М. (1997, т. 1, С. 81-82). Сравнен с типовым штаммом коллекционный №В - 0027 В. Abortus 54 (эталонный). Штамм получен путем отбора колоний в S - форме. Штамм при серологической типизации с S-бруцеллезной и моноспецифической антиабортусной сыворотками дает позитивные реакции, а с моноспецифической антимелитензисной и R - бруцеллезной сыворотками негативную реакцию.

Биотехнологические характеристики: штамм типовой, слабовирулентный, используется для приготовления вакцинных и диагностических препаратов. Хорошо растет в агаре Д, эритрит агаре, МПА, МППГГА, не растет на средах с добавлением пенициллина в дозе 2,5-5 тыс. ед/мл среды.

Растет на среде с добавлением фуксина (1:50000) и не растет на среде с тионином (1:25000 и 1:50000). Проба с трипафлавином (1:500) и реакция термоагглютинации отрицательные.

Морфолого - культуральные свойства: хорошо растёт на эритрит - агаре, Т°+37-38 °С, 48 час в термостате; овоиды, длина 0,4-2,5 мкм, ширина 0,4-0,6 мкм; очертания концов округлые, грамотрицательные, кислотонеустойчив, неподвижные, тип клеточной стенки липополисахарид, специализированные клетки не образует, колоний плотные, гладкие, поверхность блестящая, S - форма.

Физиолого - биохимические свойства: хемоорганотроф, аэроб, тип катаболизма - дыхание, внутриклеточный паразит, чувствителен к пенициллину 2,5-5 ЕД/мл среды, рост стимулируется добавлением крови и сыворотки; источник углерода - глюкоза, глицерин, источник серы - цистин, обладает уреазной, оксидазной, каталазной активностью, образует Н₂S, желатин не разжижает, индол не образует, не лизирует эритроциты, не образует ацетилметилкарбинол, выявляются иммунохимическими методами - РА, РСК, ИФА, ПЦР, слабопатогенен для животных.

Культуру B. abortus 19, содержащий в своём составе S-формы бруцелл выращивали на твердой питательной среде в течении 3 суток с последующим их смывом 0,5%-ный физиологическим раствором, полученную бактериальную массу фильтровали через тройной марлевый фильтр, затем взвесь бруцелл стерильной дистиллированной водой доводили до концентрации 100 млрд микробных клеток в 1,0 смі. Далее полученную суспензию автоклавировали при 1 атм. в течении 30 мин. и оставляли при комнатной температуре на 2-3 сут., затем фильтровали через стерильные фильтры, полученный фильтрат разводили в 10 раз 0,85%-ный физиологическим раствором, в качестве консерванта использовали формалин 37 - 38%, который добавляли в количестве 0,2 смі в 100 смі фильтрата и использовали его в качестве целевого продукта.

Определение стерильности аллергена проводили путем высева на эритрит - агаре и мясо - пептонном бульоне. В результате проведенных исследований высевы оставались в течении 10 дней (период наблюдения) стерильными, что свидетельствуют об отсутствии бактериальной загрязнённости аллергена.

При испытании безвредности из общей пробы аллергена стерильной пипеткой взяли 3-4 смі и ввели подкожно по 0,5 смі 5 белым мышам массой 18-20 г. в области паха. При этом аллерген не вызывал воспалительных реакций на месте введения, общее состояние животных были нормальные, случаи их заболевания и гибели в течении 10 дней не отмечались, что свидетельствует о безвредности испытуемого аллергена.

Определение специфичности предлагаемого аллергена проводили на 10 здоровых морских свинках массой 350-400 г., путем внутрикожного введения его в дозе 0,1 смі в депилированный участок на боковой поверхности туловища.

Одновременно на симметричном участке другой стороны туловища вводили по 0,1 смі противопоставляемого аллергена (известного аллергена). Учет реакции проводили через 24-48 часов.

Оба аллергена не вызвали воспалительной реакции у опытных животных в течении 48 часов, что свидетельствовало о специфичности аллергенов.

Определение активности проводили на 10 сенсибилизированных морских свинках массой 350-400 г., сенсибилизированных путем подкожного введения двухсуточной агаровой культуры B. abortus 19 в дозе 1 млрд. микробных клеток по оптическому стандарту мутности ГНИИСК им. Л.А. Тарасевича. Через 25-30 суток после прививки на морских свинках проводили определение активности аллергена. Животные с этой целю использовались в опытах не более 6 месяцев с интервалом между испытаниями не менее 25 суток. Предлагаемый и противопоставленный противобруцеллезные аллергены вводили 10 морским свинкам внутрикожно в депиллированные участки в дозе 0,1 смі в разные стороны туловища. Иглу вводили в складку кожи морской свинки, зажатую между большим и указательным пальцами, параллельно поверхности кожи с таким расчетом, чтобы иглы были не менее 3 мм погружено в кожу. Затем складку кожи отпускали и нажимом на поршень вводили точно 0,1 смі препарата. На месте инъекции образовалась припухлость величиной с маленькую горошину. С целью предупреждения вытекания аллергена иглу после введения задерживали на 2-3 секунды в коже и затем извлекали. Для введения аллергенов применяли маркированные вместимостью 1 смі шприцы, не пропускающие раствор под поршень или иглу. Каждый аллерген вводили отдельным шприцем, в том числе иглой. Интенсивность реакций проверяли через 48 час. После введения аллергенов, измеряя два взаимно перпендикулярных диаметра отеков, образующихся в месте введения, и вычисляли среднее значение, которое и является показателем интенсивности реакции. При этом на месте введения аллергенов у морских свинок появлялись воспалительные реакции в виде различной отечной припухлости различного размера и гиперемии кожи. Следует отметить, что реакция на предлагаемый и противопоставленный аллерген была идентичными, размеры, которых в среднем составляли соответственно 4,5+ 0,25 и 4,4 + 0,21 мм, что свидетельствует об их достаточной активности (таблица 3).

Для определения специфичности и чувствительности предлагаемого аллергена в различных по эпизоотологической характеристике агроформированиях (благополучный, условно благополучный) исследовали сельскохозяйственных животных на бруцеллёз. Работа проводилась на территории Успеновского сельского округа Бурлинского района (КХ «Асем»; КХ «Еркешбай»; КХ «Нур»; ТОО «Бумакол»). Бруцеллезные аллергены вводили крупному рогатому скоту внутрикожно в среднюю треть шеи безыгольным инъектором БИ - 7М.

Учет и оценку реакции у животных на внутрикожное введение аллергена учитывали через 48 часов путем осмотра и пальпации складки кожи на месте введения препарата в сравнении со складкой кожи из нормального участка тела.

При этом через 48 часов у больных бруцеллезом животных на месте введения аллергена появлялась воспалительная реакция в виде плотного отека с ярко выраженным контуром и достаточной плотной консистенцией, обычно хорошо видимого при визуальном осмотре. У здоровых животных местная аллергическая реакция не возникала.

Оценку реакции проводили по схеме:

Положительная реакция - утолщение кожной складки против физиологической нормы на 10 мм и более;

Сомнительная реакция - утолщение кожной складки против физиологической нормы от 4 мм и более;

Отрицательная реакция - отсутствие каких-либо признаков на введение аллергена.

Полученные данные отражены в таблице 4.

Таблица 3. Результаты испытания аллергена на активность

№ п/п	Сроки постановки аллергопробы, сенсибилизированным морским свинкам, в сут.
	25	50	90	120	150	180
	аллергены
	Испытуем.	Против. постав.	Испытуем.	Против. постав.	Испытуем.	Против. постав.	Испытуем.	Против. постав.	Испытуем.	Против. постав.	Испытуем.	Против. постав.
	Утолщение кожной складки в мм.
1	3,0	3,0	4,2	4,2	4,6	4,5	5,2	4,9	5,0	5,0	4,2	4,2
2	3,5	3,6	4,5	4,5	4,5	4,5	5,1	4,9	5,1	5,2	4,7	4,6
3	4,2	4,0	4,4	4,5	4,8	4,9	4,9	5,2	5,2	5,2	4,6	4,6
4	4,0	3,9	4,6	4,3	5,0	4,9	5,2	5,3	5,3	5,4	4,3	4,2
5	3,7	3,7	4,2	4,4	5,0	5,1	5,4	5,1	5,2	5,1	4,5	4,5
6	4,3	4,2	4,4	4,5	4,8	4,8	4,9	5,4	5,5	5,4	4,3	4,3
7	4,0	4,1	4,5	4,2	4,6	4,9	5,0	5,1	5,3	5,2	4,0	4,0
8	3,7	3,6	4,0	4,0	4,7	4,7	4,9	5,0	5,1	5,0	4,0	3,9
9	3,5	3,5	4,2	4,3	4,9	4,9	4,9	5,1	5,1	5,2	4,3	4,2
10	3,2	3,2	4,2	4,2	4,5	4,6	5,0	5,0	5,0	5,1	4,4	4,4
М±m	3,71	3,68	4,32	4,31	4,74	4,78	5,05	5,1	5,18	5,18	4,33	4,29

Таблица 4. Результаты сравнительных исследований животных на бруцеллез предлагаемым и противопоставленным аллергеном

№ п/п	Вид животных	Эпизоотологическая характеристика	Количество	Результаты исследований аллергенами:
				положительно	сомнительно	отрицательно
				предлагаемый	противопоставленный	предлагаемый	противопоставленный	предлагаемый	противопоставленный
1	крупный рогатый скот	благополучный по бруцеллезу гурт	10
2	крупный рогатый скот	благополучный по бруцеллезу гурт	45
3	крупный рогатый скот	благополучный по бруцеллезу гурт	27
4	мелкий рогатый скот	благополучная по бруцеллезу отара	120
5	крупный рогатый скот	неблагополучный по бруцеллезу гурт	98	6	5		1	92	93
6	крупный рогатый скот	неблагополучный по бруцеллезу гурт	44	4	4			40	40
7	мелкий рогатый скот	неблагополучная по бруцеллезу отара	187	13	11		2	174	176
Всего:	531	23	20		3	306	309

Как видно из таблицы 4, при аллергическом исследовании крупного и мелкого рогатого скота, находящиеся в благополучных по бруцеллёзу хозяйствах, получены отрицательные результаты, что свидетельствуют о специфичности аллергена.

При исследовании животных разных видов из неблагополучного по бруцеллёзу хозяйств предлагаемым аллергеном на 4 (21,1%) положительных результатов получено больше, чем противопоставленным аллергеном.

Сомнительных результатов с предлагаемым аллергеном не было, тогда, как с известным аллергеном они отмечены у 4 (21,1%) животных.

Эти данные свидетельствуют о специфичности и большей чувствительности предлагаемого аллергена.

Использование предлагаемого аллергена позволит быстро и эффективно выявить заражённых бруцеллезом животных, тем самым ускорить сроки оздоровления неблагополучных по бруцеллёзу хозяйств.

Новизну на способ изготовления аллергена для диагностики бруцеллеза сельскохозяйственных животных Комитет по правам интеллектуальной собственности Министерства юстиции Республики Казахстан подтвердил выдачей инновационного патента за №19907, зарегистрированный в Государственном реестре изобретений Республики Казахстан 28.05.2011 года.

4.3 Результаты изучения аллергической реакции при бруцеллезе крупного рогатого скота

До сих пор в ветеринарной практике не нашло признания аллергическая диагностика бруцеллёза животных особенно в хозяйствах, содержащих большое количество животных или наоборот (малое количество).

Первостепенное значение при мониторинге эпизоотической ситуации, проведение диагностических исследований, оздоровительных мероприятий принадлежит средствам диагностическим. Среди них особое место можно отвести аллергической диагностике. Это связано с высокой их специфичностью, активностью, показательностью, простотой постановки и меньшими физическими, экономическими затратами.

Аллергическая реакция у инфицированных животных может проявляться на внутрикожное введение, конъюнктивальное, внутривенное введение.

Нами было поставлено изучить значение аллергической реакции на внутрикожное введение.

В этой связи перед нами были поставлены следующие задачи:

- изучить безвредность, сенсибилизирующие свойства, активность;

- изыскать оптимальное место введения препарата;

- определить влияние сезонности на проявление аллергической реакции в западно-Казахстанской области у крупного рогатого скота.

Также эффективность аллергена для диагностики бруцеллёза животных при оздоровлении неблагополучных хозяйств.

Разработанный аллерген при проверке на стерильности, безвредности на 10 белых мышах показал себя как стерильный безвредный препарат.

При проверке аллергена на сенсибилизирующие свойства в опыте было использовано 10 голов коров из благополучного стада КХ «Нур» Бурлинского района. Животным, испытуемый аллерген вводили подкожно в области средней треть шеи в дозе 1,0 см³ трехкратно с интервалом между введениями 25-30 дней. Через каждые 25-30 дней после первичного, а также же последующих введениях у животных брали кровь и исследовали по классическим серологическим тестам (РБП, РА, РСК).

Таблица 5. Результаты испытания сенсибилизирующих свойств аллергена в опытах на крупном рогатом скоте «КХ «Нур»

№ п/п	Идентиф. №	РБП	РА	РСК
		Исследовано после введения аллергена, через дней
		30	60	90	30	60	90	30	60	90
1	0516	-	-	-	-	-	-	-	-	-
2	07072	-	-	-	-	-	-	-	-	-
3	07075	-	-	-	-	-	-	-	-	-
4	05013	-	-	-	-	-	-	-	-	-
5	05999	-	-	-	-	-	-	-	-	-
6	09116	-	-	-	-	-	-	-	-	-
7	07165	-	-	-	-	-	-	-	-	-
8	07241	-	-	-	-	-	-	-	-	-
9	05514	-	-	-	-	-	-	-	-	-
10	00898	-	-	-	-	-	-	-	-	-

Из данной таблицы 5 видно, что во всех сроках исследований сывороток крови опытных животных получены негативные серологические показания.

Полученные результаты показывают, что испытуемый препарат не обладает сенсибилизирующими свойствами.

Таким образом, проверка сенсибилизирующих свойств аллергена показало, что испытуемый аллерген не обладает сенсибилизирующей активностью, на трехкратное введение его с интервалом 25-30 дней не наблюдается проявления иммунологических реакции (РБП, РА, РСК).

Согласно данным многих исследователей было определено, что активность препарата зависит от штамма, из которого приготовлен аллерген. Несмотря на это нами в качестве материала для изготовления аллергена был использован авирулентный штамм B. abortus 19. Причиной этому послужило то, что названный штамм достаточно изучен, относится к производственному штамму (готовят вакцину, диагностикумы).

Далее нами решено было изыскать оптимальное место введения аллергена. Для этого определено три следующих места:

- подхвостовую складку (внутрикожно);

- пальпебральную пробу (подкожно);

- среднюю треть шеи (внутрикожно).

При проведении исследования (одному животному препарат вводился в 3 точки) было определено, что при введении в подхвостовую складку потребовалось на 50 животных времени в среднем 60 минут, пальпебральная проба заняла в среднем 50 минут на 50 животных, а в среднюю треть шеи вся манипуляция на 50 коров заняла 15 минут (препарат вводился при помощи безыгольного инъектора «Овод»).

Необходимо отметить, что хронометраж проводился без учета времени на загон животных в раскол, фиксация животных.

Согласно полученным данным определено, что оптимальным местом введения аллергена является средняя треть шеи, так при этом не было необходимости фиксировать животных, и времени на проведение одной манипуляции ушло 18 секунд, тогда как при введении в подхвостовую складку 1,2 мин, пальпебрально- 1 минута.

Таким образом, оптимальным местом введения препарата является средняя треть шеи.

Далее нами определялось качество (показательность) реакции. При чистке реакции определено, что наиболее показательная реакция была в средней трети шеи, нежели пальпебрально и в подхвостовую складку.

При наблюдении места введения было определено, что у всех животных наблюдался болезненный отек, который в основном при неспецифической реакции рассасывается в течении 12-15 часов, а к 24-25 часам угасает на 100%, специфическая реакция максимума достигает к 48 часам, и просматриваются в виде четко очерченных круглых, овальных отеков. Важно отметить, что реакции были настолько показательны, что в основном кутиметром затруднительно было пользоваться, так как у многих животных толщина кожной складки была более 15 мм, а диаметр отека был равен 4,5 см, а часто превосходил 10 см.

Согласно полученным данным мы пришли к заключению, что показатели реакции при туберкулинизации менее выражены, чем показатели реакции при бруцеллезе и поэтому при оценке результатов реакции при бруцеллезе могут быть подразделены следующим образом:

- толщина складки до 4 мм - отрицательная (?)

- толщина складки от 4 до 10 мм - сомнительная реакция (±),

- толщина складки от 10 до 12 мм - положительная реакция (+),

- толщина складки от 12 до 14 мм - положительная (+ +),

- толщина складки более 17 мм - положительная (+ + + +).

Животных, показавших сомнительные результаты, через 20 дней необходимо переисследовать, в случае повтора показаний их считать положительными.

Список литературы

1. Вершилова П.А. Бруцеллез. - М.: Медгиз, 1961. -414 с.

2. Юсковец М.К. Бруцеллез сельскохозяйственных животных. - М., 1960. - 496 с.

3. Студенцов К.П. Бруцеллез животных. - Алма-Ата: Кайнар, 1975. - 238 с.

4. Kadostits О.М., Gay С.С., Blood D.С., Hinchcliff К.W. А. Textbook of the diseases of cattle, cheep, pigs, goats and horses. 9^th Ed. W.В. Saunders // Veterinary medicine. - 2000. - р. 868.

5. Garcia Carrillo С. Animal and human brucellosis in the Americas. Paris // OIE Publication. - 1990. - р. 287.

6. РеменцоваюМ.М. Бруцеллез диких животных. - Алма-Ата. 1962. - 272 с.

7. Амиреев С.А. Пораженность работников отгонного животноводства токсоплазмозом и бруцеллезом. - В кн.: Бруцеллез в Казахстане. - Алма-Ата, 1970 - С. 24-28.

8. Павловский Е.Н., Галузо И.Г. 0 природной очаговости бруцеллеза. // Вестник АМН CCCP. 1949 - №5 - С. 15-20.

9. Ременцова М.М. Распространение некоторых антропозоонозов и пути их изучения в Казахстане // Антропозоонозы в Казахстане. - 1975. - С. 3-13.

10. Белозеров Е.С. Бруцеллез. - Ленинград, «Медицина». - 1985. - С. 6-11.

11. Хоч А.А. Бруцеллез животных в Якутии / PАС ХН. Сиб. отделение, Науч.-произв. об-ние.

12. Красиков А.П. Новые механизмы искусственной регуляции паразито - хозяинных отношений при бруцеллезе животных: автореф. дис… докт. вет. наук.: - Новосибирск. 1996. - 42 с.

13. Ramon G., Chassigneux, Richou R. et Gerbeaux С. // С.R. Acad. Sci., 1952. - V. 235. - Р. 111.

14. Тен В.Б., Абуталип А., Мустафин М.К. Изучение иммуностимуляторов для создания неживой противобруцеллезной вакцины // Актуальные проблемы болезней животных в современных условиях // Мат. междунар. науч-практич. конф. - Душанбе. 2003. - С. 76-77.

15. Белобаб В.И., Калашников К.А., Тен В.Б. Влияние некоторых стимуляторов на иммуногенность бруцеллезных препаратов и на морфоструктурные изменения органов // Меры борьбы с инфекционными и незаразными болезнями сельскохозяйственных животных в Казахстане. - Алма-Ата, 1985. - С. 10-16.

16. Игнатов П.Е., Блинов Н.И., Кирш Ю.З. Действие иммуностимуляторов в условиях in vito и in vivo // Проблемы ветеринарной иммунологии: Тр. ВИЭВ. - 1983. - Т. 57. - С. 74-77.

17. Игнатов П.Е., Блинов Н.И. Сравнительное изучение иммуностимуляторов различного происхождения // Ветеринария. - 1983. - №9. - С. 30-31.

18. Драновская Е.А., Игнатов П.Е., Изучение синтетических полимеров в качестве стимуляторов и пролонгаторов // ЖМЭИ. - 1982. - №3. - С. 63-73.

19. Жованик П.Н. Бруцеллез. - Издательство «Урожай». - Киев. - 1975. - С. 107-110.

20. Пашковский А.Н. Реакция аллергии как метод диагностики аборта Банги крупного рогатого скота // Радяньска ветеринария. - 1932. - С. 13-14.

21. Вышелесский С.Н. Аллергическая реакция в диагностике бруцеллеза домашних животных // Советская ветеринария. - 1934. - №4. - С. 37-41.

22. Адо А.Д. Общая аллергология. - М., 1970. - 350 с.

23. Касьянов А.Н. Аллергическая и серологическая диагностика и профилактика бруцеллеза животных: дис… докт. вет. наук. М., 1987. - 345 с.

24. Усманова Ф.И., Сафронов Н.В., Бельченко В.Б., Гаврилова А.Н. Результаты производственного испытания бруцеллина ВИЭВ. // Сельское хозяйство Казахстана, 1967. - С. 12.

25. Иванов Н.П, Чубуков А.А. Изыскание и испытание аллергенов для диагностики заболевания вызываемого В. ovis // Труды КазНИВИ. - Алма - Ата, 1983. - С. 80-83.

26. Сафронов Н.В., Студенцов К.П., Белобаб В.И. Изменчивость бруцелл в иммуном организме // Матер. республ. Семинара-совещания вет. специалистов. Меры борьбы с туберкулезом и бруцеллезом в Казахстане. - Алма-Ата, 1973. - С. 71-73.

27. Бронников А.К. Влияние беременности на показатели серологической реакции при бруцеллезе у коров // Болезни животных и их профилактика. - 1987. - С. 18-22.

28. Нуратинов Р.А., Ургуев К.Р., Юсупов О.Ю., Нажалов М.И. Серологическая диагностика бруцеллеза КРС // Ветеринария. - 1993. - №11. - С. 55-56.

29. Bordet J. // Ann. Inst. Pasteur. - 1899. - V. 13. - Р. 225.

30. Тен В.Б. Методологические основы изготовления и совершенствования профилактических противобруцеллезных препаратов и диагностических средств: Автореф…. докт. вет. наук. - Алматы, 1996. - 45 с.

31. Сайдулдин Т.С. Основы серологии. - Алма-Ата: ?ылым, 1992. - С. 157 - 160.

32. Вышелесский С.Н. Научные предпосылки и практические возможности борьбы с бруцеллезом // Бруцеллез сельхоз. животных, 1940. - С. 51.

бруцелла животное антибиотик скот

Размещено на Allbest.ru