Молекулярно-генетические методы исследования и дифференциальная диагностика туберкулеза

Для исследования были отобрано:

- 46 проб для ПЦР исследования культур взятых с плотных и жидких (BACTEС MGIT 960 )питательных сред.

Рис. 4 - Видовая идентификация МБТ

Данная диаграмма показывает, что метод ПЦР дает точно определить видовую принадлежность микобактерий выделенных на плотных питательных средах и методом исследования с помощью BACTEC MGIT 960.

3.2 Продолжительность молекулярно-генетического метода исследования

Для исследования были отобрано:

- 46 проб для ПЦР исследования культур взятых с плотных и жидких (BACTEС MGIT 960 )питательных сред.

Таблица 2 - Продолжительность исследования ПЦР.

Данная таблица показывает, что микробиологическое исследование с использованием BACTEC MGIT 960 существенно уступает по времени проведения молекулярно-генетическому методу исследования (p<0,001).

3.3 Определение лекарственной чувствительности к противотуберкулезным препаратам

Для исследования были отобрано:

- 30 проб для определения лекарственной чувствительности одних и тех же пациентов по данным ПЦР и BACTEC MGIT 960

Таблица 3 - Сравнение результатов, полученных молекулярно-генетическим методом исследование и на системе BACTEC MGIT 960

Рис. 4 - Результаты определения лекарственной чувствительности методом ПЦР

Рис. 5 - Результаты определения лекарственной чувствительности на BACTEC MGIT 960

Примечание: I- изониазид; S- стрептомицин; R- рифампицин; E- этамбутол.

Таблица 4. - Сравнительная характеристика определения лекарственной чувствительности Методом ПЦР с международным стандартом

Международный стандарт является индикатором качества определения лекарственной устойчивости МБТ методом ПЦР. Исходя из данных, приведенных выше, можно сделать вывод, что DNA-STRIP метод можно использовать в качестве диагностического теста на чувствительность МБТ к ПТП, поскольку его результаты являются весьма достоверными.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Проанализировав данные, приведенные выше в результатах собственных исследований, можно сделать следующие выводы:

При микробиологическом исследовании мокроты от больных с подозрением на туберкулез легких период тестирования образца методом ПЦР занимает значительно меньше времени, чем на автоматизированной системе BACTEC MGIT 960 ( в среднем 6 часов вместо 16 дней).

DNA-STRIP метод позволяет довольно в короткие сроки и точно определить видовую принадлежность микобактерий после положительных результатов на плотных и жидких питательных средах. Так мы получили из 46 положительных проб взятых с плотных и жидких питательных сред и выявили 21 МБТ и 25 НТМБ. Из этого мы делаем вывод что данный метод играет большую роль в диагностике и дифференциальной диагностике туберкулеза легких.

Современные бактериологические способы определения чувствительности микобактерий к противотуберкулезным препаратам Молекулярно-генетическим методом дают возможность получить результаты, хорошо сопоставимые с автоматизированной системой BACTEC MGIT 960. Согласованность данных наблюдалась для изониазида (93%), рифампицина (85%), стрептомицина (87%) и для этамбутола (93%). Высокая степень совпадения двух методов по определению лекарственной чувствительности микобактерий к препаратам первого ряда позволяет рассматривать их как взаимозаменяемые и отдавать предпочтение молекулярно-генетическому методу как более объективному, стандартизованному и ускоренному.

Сравнение эффективности использования молекулярно-генетического метода для выявления возбудителя туберкулеза , дифференциальной диагностике туберкулеза легких и определения лекарственной чувствительности МБТ с традиционными методами на плотных средах и автоматизированном методе ВАСТЕС 960 демонстрирует более высокие диагностические качества. Однако DNA-STRIP метод также имеет свои недостатки и не может полностью заменить собой применение плотных и жидких питательных сред . Метод необходим для составления ориентировочного плана лечения больного с учетом лекарственной чувствительности МБТ к противотуберкулезным препаратам. Поэтому более целесообразно его использование в качестве дополнительного метода в диагностике туберкулеза наряду с традиционными и другими автоматизированными методами.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

Щербо, С.Н. ПЦР в клинической лабораторной диагностике: реальности и перспективы/ С.Н. Щербо - Москва: 2006. - 48с.

Тарасенко, И.М. Правила организации работы КДЛ с патогенными биологическими агентами/ И.М. Тарасенко; под ред. Анищенко Д.П. - Москва: 2007. - 40 с.

Херсонская А.М. Современные методы клинической диагностики: ПЦР в режиме реального времени/ А.М.Херсонская - Саратов: 2008. - 36с.

Чухловин.А.Б. Метод ПЦР в клинической лабораторной диагностике/ А.Б.Чухлобин - Москва 2008. - 50 с.

Кошечкин, В.А.Туберкулез/ В.А. Кошечкин, З.А. Иванова - Москва: 2007. - 243 с.

Park, H. Comparison of a conventional antimicrobial susceptibility assay to an oligonucleotide chip system for detection of drug resistance in Mycobacterium tuberculosis isolates/ Н. Park. E. Song: 2006 - 44 p.

Perkins, MD Progress towards improved tuberculosis diagnostics for developing countries. Lancet/ Perkins, MD: 2006 - 232p.

Perkins, MD. PCR-based diagnostics for infectious diseases: uses, limitations, and future applications in acute-care settings. Int J Tuberc Lung Dis./ Perkins MD, Small PM: 2006 - 10 p.

Piersimoni, C. Current perspectives on drug susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis complex: the automated nonradiometric systems. J Clin Microbiol 2006; 44: 20-8.

Pfyffer GE. Laboratory diagnosis of tuberculosis. In: Kaufmann SHE, Hahn H, eds. Mycobacteria and TB. Basel/ C. Piersimoni,A. Olivieri, L. Benacchio, C. Scarparo - Switzerland: 2003. pp. 67-68.

Ramazanzadeh, R, Comparison between molecular epidemiology, geographical regions and drug resistance in Mycobacterium tuberculosis strains isolated from European patients. Chemotherapy/ R, Ramazanzadeh. P. Farnia: 2006. pp 42-43.

Черноусова Л. Н. Современные тенденции и способности микробиологической диагностики туберкулеза/ Л.Н Черноусова - Москва: 2009. - 96с.

Reed MB. Strain identification of Myco-bacterium tuberculosis by DNA fingerprinting: recommendations for a standardized methodology / Reed MB, P. Domenech, C. Manca 2004. - 59p.

Savelkoul PH. Detection of Mycobacterium tuberculosis complex with Real Time PCR: comparison of different primer-probe sets based on the IS6110 element. J Microbiol Methods/ Savelkoul PH, A. Catsburg,S. Mulder - 2006. - 80 p.

Ларионова, Е.Е. Информативность полимеразной цепной реакции для диагностики туберкулеза легких: автореф. дис. к.б.н. 03.00.07/ Е.Е.Ларионова; Рос.акад.мед. наук - Москва, 2005. - 21 с.

Размещено на Allbest.ru