Клинико-диагностические значение редокс-системы у больных урогенитальным хламидиозом

Инфекционные агенты	Основная группа (n=296)	Группа сравнения (n=62)
Mycoplasma genitalium	7,82,1	-
Ureaplasma hominess	4,13,6	-
Ureaplasma urealyticum	5,42,8	-
CMV	4,42,9	-
Herpes simplex virus spp.	10,84,0	8,12,7
HPV 16	5,43,1	3,21,3
HPV 18	6,42,5	1,60,9
N. gonorrhoeaе	1,40,8	-
Trichomonas vaginalis	3,02,2	-

Из таблицы видно, что наиболее часто ассоциантом урогенитального хламидиоза являлся урогенитальный герпес (32 пациента), затем в порядке убывания частоты встречаемости можно отметить микоплазменную инфекцию (23 больных) и папилломавирусы (19 человек).

Только у 182 обследованных женщин, которые вошли в основную группу исследуемых лиц, урогенитальный хламидиоз встречался в виде моноинфекции. В ходе исследований 62 женщин из группы сравнения 10 человек были исключены из исследований, в связи с обнаружением в ПЦР-исследованиях вирусов герпеса и остроконечных кондилом. Полученные данные сравнивали с результатами исследования 52 практически здоровых женщин, репрезентативных по возрасту.

Возраст обследуемых женщин колебался от 19 до 58 лет, при среднем показателе в основной группе - 29,61,2 года, в контрольной группе - 26,12,3 года. Сравнительный анализ возрастных параметров женщин представлен в таблице 5.

Таблица 5

Распределение женщин с урогенитальным хламидиозом по возрасту (%)

Группы	до 25 лет	25-35 лет	36-45 лет	46-55 лет	старше 55 лет
Основная группа (n=182)	24,22,8	37,93,1	19,22,5	13,82,2	4,91,4
Группа сравнения (n=52)	21,22,1	32,73,8	17,32,9	15,43,2	13,42,9

При последующих клинико-лабораторных обследованиях женщин репродуктивного возраста с изолированным течением урогенитального хламидиоза (182 пациентки) установлено, что 51,6% обследованных (94 женщины) не предъявляли жалоб, характерных для воспалительных процессов в урогенитальном тракте.

Только 82 обследованные женщины (48,4%) основной группы отмечали незначительные субъективные расстройства, частота встречаемости которых представлена в таблице 6.

Таблица 6

Субъективные симптомы урогенитального хламидиоза у женщин (%)

Субъективные симптомы	Количество наблюдений (n=82)
Тяжесть внизу живота	29,4
Боль в области поясницы, особенно в период менструации	25,6
Болезненные ощущения в начале мочеиспускания	37,8
Зуд и жжение в мочеиспускательном канале и области наружных половых органов	70,7
Частые позывы к мочеиспусканию	51,2
Слизистые выделения (скудные, не имеющие цвета)	47,6
Чрезмерная влажность половых органов	92,7
Кровянистые выделения после полового акта	21,9
Общее недомогание	14,6
Повышенная температура тела	-
Нарушения менструального цикла	20,7

Установлено, что больше половины (51,6%) обследованных субъективных ощущений при урогенитальном хламидиозе не испытывали. У остальных женщин отмечались незначительные субъективные ощущения, наиболее частыми из которых являлись: чрезмерная влажность половых органов - 92,7% обследованных, зуд и жжение в области урогенитального тракта - 70,7% и скудные слизистые выделения - 47,6% соответственно.

У всех женщин с хламидиозом изменений в моче и крови (лейкоцитоз, СОЭ, показатель гемоглобина, количество эритроцитов и др.) не наблюдалось.

Пациентки обращались за медицинской помощью по рекомендации половых партнеров, либо для сдачи анализов с целью обследования. Однако, при сборе анамнестических данных часто выявлялся факт длительного самостоятельного лечения воспалительных процессов мочеполовой системы.

При объективном осмотре у 91,8% женщин (167 человек) были выявлены признаки воспаления в урогенитальном тракте и только у 15 пациенток (8,2%) отсутствовали какие-либо изменения в нижних и верхних отделах мочеполовой системы, характерные для хламидиоза. Основные клинические симптомы урогенитального хламидиоза у женщин представлены в таблице 7.

Таблица 7

Клинические симптомы урогенитального хламидиоза у женщин (%)

Симптомы	Количество наблюдений (n=182)
Серозно-гнойные выделения (бели)	64,36,9
Воспаление бартолиниевой железы	1,10,0
Гиперемия и отек слизистой оболочки наружного отверстия уретры	52,27,1
Боли и тяжесть внизу живота при обследовании	45,65,8
Отечность и гиперемия слизистой оболочки шейки матки	41,24,9
Нарушение менструальной функции	16,54,8
Нарушение генеративной функции	31,95,2
Расстройства половой функции	12,62,2
Бессимптомное течение	8,21,4

Кольпоскопическая картина характеризовалась отеком и гиперемией слизистой оболочки, в 12-и случаях - наличием мелких папул, расположенных на передней губе шейки матки. В подслизистой ткани определялись резко расширенные сосуды.

Таким образом установлено, что наиболее частыми клиническими симптомами урогенитального хламидиоза у женщин были серозно-гнойные выделения (бели), они отмечены у 117 (64,36,9%), гиперемия и отечность слизистой оболочки наружного отверстия мочеиспускательного канала - у 95 (52,27,1%), боли и тяжесть внизу живота при обследовании - у 83 (45,65,8%) пациенток соответственно.

Дизурические явления - императивные (ложные) позывы к мочеиспусканию, учащенное, болезненное мочеиспускание, боли в области мочевого пузыря отмечены только у 35 (19,22,3%) женщин. У 2 (1,10,0%) обследованных с урогенитальным хламидиозом был диагностирован острый бартолинит, который сопровождался болезненными ощущениями в области наружных половых органов (2 случая).

3.2 Микробиоценоз урогенитального тракта женщин при урогенитальном хламидиозе

С целью установления характера сопутствующей бактериальной флоры у женщин с урогенитальным хламидиозом было проведено бактериоскопическое (табл.8) и бактериологическое исследование всем пациенткам, в первые несколько дней после окончания менструации или перед менструацией.

Таблица 8

Степень чистоты влагалищного содержимого (%)

Степень чистоты влагалищного содержимого	Основная группа (n=182)	Группа сравнения (n=52)
I степень	-	-
II степень	-	34,65,1
III степень	37,413,2	59,66,4
IV степень	62,69,1*	5,81,2

* - достоверность показателя по сравнению со здоровыми женщинами (р<0,05)

При бактериоскопическом исследовании установлено, что в группе обследованных с урогенитальным хламидиозом не встречались женщины с I и II степенью чистоты влагалищного содержимого, в группе сравнения (52 женщины) этот показатель составил - 34,65,1% (18 обследованных).

Женщины с III степенью чистоты влагалищного содержимого выявлены в 37,413,2% случаев (68 пациенток) в основной группе и 59,66,4% (31 человек) в группе сравнения (р0,05). Частота встречаемости IV степени чистоты влагалищного содержимого составила 62,69,1% (114 женщин) основной и значительно реже - 5,81,2% (3 человека) в группе практически здоровых женщин (р0,05).

Подробная картина результатов бактериоскопического исследования у женщин с урогенитальным хламидиозом представлена в таблице 9.

Таблица 9

Результаты бактериоскопического исследования гениталий (%)

Показатели	Основная группа (n=182)	Группа сравнения (n=52)
Лейкоциты	10	19,24,8*	46,17,9
	10-20	49,56,2	48,16,7
	20	31,34,1*	5,82,1
Флора	скудная	13,75,2*	61,54,9
	умеренная	40,16,4	32,76,2
	обильная	46,26,0*	5,82,1
Слизь	+	20,97,5*	42,36,3
	++	37,36,9	51,97,1
	+++	41,88,1*	5,82,1
Эпителий	10	47,86,6*	15,44,2
	10-20	33,09,1	36,55,7
	20	19,25,8*	48,16,3

* - достоверность показателя по сравнению со здоровыми женщинами (р<0,05)

Из представленных в таблице данных отмечаются значительные изменения в мазках у женщин с урогенитальным хламидиозом, по сравнению с данными, полученными в группе сравнения. Так, выявлено значительное увеличение количества лейкоцитов, микрофлоры и слизистого отделяемого в образцах (p<0,05).

При проведении бактериологических исследований с изучением качественного (идентифицированного до рода) и количественного состава микрофлоры влагалища 182 женщин с урогенитальным хламидиозом и 52 практически здоровых женщин, было выделено 896 штаммов микроорганизмов в основной и 158 штаммов в группе сравнения.

Подробное изучение видового состава выделенных микроорганизмов урогенитального тракта показало существенные различия в составе микрофлоры у женщин в сравниваемых группах.

Установлено, что у пациенток основной группы 598 (66,77,2%) штаммов являлись представителями анаэробной и 298 (33,36,5%) аэробной микрофлоры. У женщин группы сравнения отмечено иное распределение видового состава - 94 (59,55,8%) и 64 (40,56,1%) соответственно, т.е. соотношение анаэробов/аэробам составило в основной группе 2,0:1 в группе сравнения 1,5:1 (рис.3).

Рис.3. Соотношение аэробной к анаэробной микрофлоры у женщин с урогенитальным хламидиозом

У женщин с урогенитальным хламидиозом выявлены изменения микрофлоры вагинального и цервикального биотопов. Диагностированы значительные изменения представителей рода Lactobacillus spp. - доминантного симбионта микробиоценоза влагалища, определяющего состояние его колонизационной резистентности (табл.10).

Таблица 10

Частота встречаемости симбионтов на урогенитальном тракте (%)

Виды микроорганизмов	Влагалище	Цервикальный канал
	УГХ	Контроль	УГХ	Контроль
Доминантный симбионт
Lactobacillus spp.	45,14,9*	86,56,2	37,47,8	50,08,2
Ассоциативные симбионты
Bifidobacterium spp.	7,12,6*	15,43,8	4,92,4*	11,53,5
Staphylococcus epidermidis	8,83,7*	1,90,8	4,91,4*	13,53,6
Streptococcus agalactiae	10,44,1	9,63,2	6,03,1	5,82,4
Staphylococcus hominis	7,12,5*	3,81,9	6,02,0*	1,91,2
Escherichiae сoli	31,35,1*	17,34,5	15,43,8*	5,82,2
Enterococcus faecalis	49,56,1*	23,15,6	31,96,6*	13,54,8
Propionibacterium spp.	4,43,4*	7,82,9	1,60,6*	5,81,7
Corynebacterium spp.	9,32,3*	3,81,4	4,92,2	1,92,5
Candida spp.	26,45,9*	11,54,7	10,43,7	5,83,4

* - достоверность различия показателя, по сравнению со здоровыми женщинами (р<0,05)

Лактобациллы, являясь доминантным членом симбиоза, обнаружены у 86,56,2% здоровых женщин во влагалищном и у 50,08,2% - в цервикальном отделяемом, частота встречаемости ассоциативных симбионтов во влагалищном была выше, чем в цервикальной слизи. Наличие воспалительного процесса в урогенитальном тракте, вызванного хламидийной инвазией, сопровождалось уменьшением количества лактобактерий и изменением их видового соотношения. Показатели обсемененности доминантного и ассоциативных симбионтов влагалища превышали уровень обсемененности в цервикальной слизи.

Видовой спектр лактобацилл, выделенных у женщин с урогенитальным хламидиозом был представлен L. acidophilus (33,3%), L. rhamnosus (20,6%), L. plantarum (18,9%), L. fermentum (15,8%), L. casei (11,4%) (рис.4 а).

У здоровых женщин группы сравнения лактобактерии были представлены следующими видам: L. acidophilus (46,1%), L. fermentum (34,6%), L. rhamnosus (11,5%), L. plantarum (5,8%), L. casei (1,9%) (рис.4 б).



Рис.4. Частота встречаемости Lactobacillus spp. у пациенток с урогенитальным хламидиозом (а) и здоровых женщин (б)

У пациенток с урогенитальным хламидиозом обсемененность лакто- и бифидобактериями, выделенными из влагалища, составила 3,9±1,11 lg КОЕ/мл и 2,12±1,16 lg КОЕ/мл соответственно. Показатели обсемененности этими видами микроорганизмов цервикального канала были ниже: 1,43±0,31 lg КОЕ/мл и 1,41±1,20 lg КОЕ/мл соответственно (табл.11).

Таблица 11

Показатель микробной обсемененности урогенитального тракта (lg КОЕ/мл)

Виды микроорганизмов	Влагалище	Цервикальный канал
	УГХ	Контроль	УГХ	Контроль
Доминантный симбионт
Lactobacillus spp.	3,9±1,11	7,0±1,48	1,430,30*	4,9±0,91
Ассоциативные симбионты
Bifidobacterium spp.	2,12±1,16*	5,72±1,33	1,41±0,20*	3,14±1,48
Staphylococcus epidermidis	5,16±2,12*	3,78±1,42	3,52±1,25	3,11±1,17
Streptococcus agalactiae	4,39±1,22	3,95±1,33	2,25±1,35	1,96±0,24
Staphylococcus hominis	2,68±2,11	2,11±1,29	6,94±1,11*	5,42±1,37
Escherichia сoli	4,95±1,86	4,12±1,31	4,17±1,08	4,45±1,26
Enterococcus faecalis	8,13±1,64*	4,08±1,12	4,85±0,93*	2,17±0,68
Propionibacterium spp.	1,250,23	1,69±1,14	1,210,27	1,30±0,62
Corynebacterium spp.	5,781,20*	3,42±1,28	3,950,81*	2,16±0,63
Candida spp.	2,240,43*	3,45±1,28	1,671,21	2,05±0,93

* - достоверность различия показателя, по сравнению со здоровыми женщинами (р<0,05)

Таким образом, у пациенток с урогенитальным хламидиозом выявлено значительно изменение видового состава лактобактерий, по сравнению с группой здоровых женщин. Так, при урогенитальном хламидиозе L. fermentum высевались в 2,2 раза, L. acidophilus - в 1,2 раза реже, чем у здоровых женщин. В то время как частота встречаемости L. casei увеличилась в 6,0 раз L. plantarum - в 3,3 раза, L. rhamnosus - в 1,8 раза чаще, чем у здоровых женщин.

Анализ результатов бактериологического исследования показал, что частота встречаемости ассоциативных симбионтов у женщин с урогенитальным хламидиозом увеличилась. Так, содержание во влагалищном содержимом Bifidobacterium spр., Propionibacterium spp. снижалось соответственно в 2,2 и 1,8 раза по сравнению со здоровыми женщинами (р<0,05), и в 2,3, и 3,6 раза соответственно в цервикальной слизи (р<0,05).

Enterococcus faecalis был обнаружен во влагалищном биотопе в 2,1 раза, S. epidermidis в 4,6 раза, S. hominis в 1,9, Corynebacterium spp. в 2,4 раза и Candida spp. - в 2,5 раза чаще, чем у здоровых женщин (p<0,05). В цервикальном биотопе Staphylococcus epidermidis был выделен в 2,7 раза, Bifidobacterium spр. и Propionibacterium spp. - в 2,4 и 3,6 раза соответственно реже, чем у здоровых женщин. Частота встречаемости Enterococcus faecalis, S. hominis, Corynebacterium sрp., E. coli и Candida spp. в цервикальном биотопе была достоверно больше.

Плотность колонизации симбионтов при воспалительных заболеваниях репродуктивного тракта также претерпевала изменения. Так показатель микробной обсемененности (ПМО) Lactobacillus spp., выделенных из цервикального канала, был в 3,4 раза меньше, чем у здоровых женщин.

Показатель микробной обсемененности бифидобактерий, выделенных из обоих биотопов, были достоверно снижены. Однако ПМО Enterococcus faecalis и Corynebacterium spp. во влагалищном биотопе был выше в 2,0 и 1,7 раза, а в цервикальном отделяемом в 2,2 и 1,8 раза, по сравнению с группой здоровых женщин (р<0,05).

Следовательно, при урогенитальном хламидиозе происходило снижение частоты встречаемости доминантной микрофлоры на фоне увеличения ассоциативных симбионтов. Показатели микробной обсемененности ассоциативных симбионтов репродуктивного тракта при урогенитальном хламидиозе отличались значительно, кроме отдельных видов микроорганизмов.

Таким образом, изучение видового состава микрофлоры влагалища у женщин с урогенитальным хламидиозом показало, что при этом заболевании происходит значительное нарушение микроэкологической системы, проявляющееся достоверным изменением видового состава микроорганизмов влагалищного и цервикального биотопов.

Дисбиотические нарушения в мочеполовой системе женщин с урогенитальным хламидиозом могут вызывать нарушения и в других регулирующих системах, изучению которых посвящены посвящена следующие главы.

3.3 Частота встречаемости и колонизационная активность энтерококков у женщин с урогенитальным хламидиозом

Проведенными исследованиями установлено нарушение стабильности ассоциативного симбиоза урогенитального тракта женщин при хламидийной инвазии, проявлявшееся в повышении показателей частоты встречаемости и плотности колонизации ассоциативных симбионтов на фоне снижения основных симбионтов влагалища и цервикального канала.

Наиболее выраженные изменения указанных показателей было выявлено у микросимбионта Е. faecalis. В связи с этим были изучены биологические свойства клинических изолятов энтерококков при ассоциативном взаимодействии с C. trachomatis in vivo.

Из всех обследованных женщин с урогенитальным хламидиозом энтерококки были выделены из влагалищного и цервикального канала у 49,56,1% и 31,96,6%, в группе сравнения - у 23,15,6% и 13,54,8% соответственно. Установлено, что у женщин с хламидиозом энтерококки обнаруживались почти в два раза чаще, чем у здоровых. Показатель микробной обсемененности Е. faecalis, при урогенитальном хламидиозе увеличивался во влагалище в 2,0 раза, а в цервикальном канале - в 2,2 раза.

Клинические изоляты энтерококков на плотных питательных средах вырастали в виде сероватых колоний диаметром 0,5-1,0 мм с зоной неполного гемолиза по периферии. При микроскопии Е. faecalis представляли собой клетки овальной формы, грамположительные, в ряде случаев - подвижные. Видовую принадлежность энтерококков определяли на основании биохимических тестов, дифференцирующих энтерококки от других грамположительных факультативно-анаэробных кокков (табл.13).

Таблица 13

Результаты биохимических тестов, дифференцирующих энтерококки от других грамположительных факультативно-анаэробных кокков

Род	ванкомицин	газ из глюкозы	гидролиз эскулина	ПИР	6,5% NaCl	групповой D-антиген	рост при 100 С	рост при 450 C	гидролиз аргинина	ЛАП
Enterococcus	ч	-	+	+	+	±	±	+	±	+
Streptococcus	ч	-	±	-	-	-	-	±	±	+
Lactococcus	ч	-	±	±	±	-	+	±	-	+
Aerococcus	ч	-	±	+	+	-	-	-	±	-
Gemella	ч	-	-	±	-	-	-	-	-	+
Leuconostoc	р	+	+	-	±	+	+	-	-	-
Pediococcus	р	-	+	-	±	+	+	±	±	+

Изучение вирулентности клинических изолятов Е. faecalis методом внутрибрюшинного заражения мышей показало, что из 167 штаммов энтерококков, выделенных у женщин с урогенитальным хламидиозом, только 118 (70,7%) вызывали гибель животных (рис.5), показатель LD50 /lg этих штаммов варьировал от 3,2±0,3 до 6,1±0,8.

В зависимости от величины данного показателя эти штаммы были разделены на три группы.

Рис.5. Количество вирулентных штаммов Е. faecalis

Так, LD50/lg штаммов первой группы (высоковирулентные - 32 штамма) составлял 3,2±0,3-4,4±0,2; второй группы - 4,5±0,3-5,0±0,4 (умеренно вирулентные - 64 штамма) и третьей группы - 5,1±0,6-6,1±0,8 (слабовирулентные - 22 штамма).

Таким образом, установлено, что только 70,7% изолятов Е. faecalis были вирулентными. Их показатели вирулентности варьировали в пределах от 3,2±0,3 до 6,1±0,8 LD50/lg, наибольшее количество изолятов (54,3%) обладало умеренно выраженной вирулентностью.

С целью изучения патогенных свойства энтерококков, выделенных у женщин с урогенитальным хламидиозом, проводили выявление генетических детерминант патогенности: cpd (бактериоциногенность), cps (адгезия и колонизация) и сylm (токсигенность, цитолизин).

Для обнаружения искомых участков ДНК в работе были использованы суточные культуры E. fаecalis (370 С). Выбранные мишени-гены были проверены системой BLAST, базы данных GeneBank (США) на предмет совпадения с cpd, cps и сylm последовательностями известных микроорганизмов.

Используя набор указанных праймеров, амплифицирующих фрагменты генов cpd, cps и cylm было протестировано 167 штаммов E. faecalis, выделенных из ассоциаций с C. trachomatis, а также 19 штаммов энтерококков, выделенных из симбиозов, где хламидии не встречались.

Исследования показали, что частота встречаемости гена cpd у штаммов E. faecalis, выделенных из ассоциации с хламидиями, составила 61,1±5,3% (p<0,05), изолированных без хламидий - 31,6±4,8% (рис.6).



Рис.6. Частота встречаемости гена cpd у монокультуры E. faecalis и

энтерококков, выделенных из ассоциации с хламидиями

Изучение штаммов E. faecalis, выделенных из ассоциации с хламидиями, на наличие гена cps и cylm выявило их присутствие в 39,5±6,4% и 51,5±8,1% штаммов соответственно (табл.14).

Таблица 14

Частота встречаемости нуклеотидных последовательностей cps и сylm генов культур E. fаecalis, выделенных из микробных сообществ

Штаммы E. fаecalis	Частота встречаемости генов (%)
	cps	сylm
С хламидийной инвазией (n=167)	39,5±6,4*	51,5±8,1*
Монокультура (n=20)	15,8±2,3	26,3±3,4

* - показатель достоверности различий между энтерококками, выделенными в сочетании с хламидиозом и монокультурой (р<0,05)

В группе штаммов энтерококков, выделенных в виде монокультуры указанные гены диагностировались в 2,5 и 1,9 раза реже (p<0,05).

Микросимбионт C. trachomatis вызывал статистически значимое увеличение показателей частоты встречаемости генов cpd, cps и сylm у энтерококков, что является свидетельством их влияния на способность реализации патогенного потенциала ассоциативных микроорганизмов.

Следовательно, можно предположить, что механизмы взаимоадаптации штаммов E. faecalis в условиях макроорганизма в сообществе с хламидиями приводят к увеличению численности особей, в генотипе которых локализованы cpd, cps и сylm гены патогенности.

ГЛАВА 4. СОСТОЯНИЕ РЕДОКС-СИСТЕМЫ ПРИ УРОГЕНИТАЛЬНОМ ХЛАМИДИОЗЕ, ПРОТЕКАЮЩЕМ НА ФОНЕ

ИНВАЗИИ ЭНТЕРОКОККАМИ

Известно, что воспалительный процесс отвечает не только изменением активности звеньев иммунной системы, но и состоянием перекисного окисления липидов (ПОЛ) и антиоксидантного статуса. Нарушение окислительно-восстановительного гомеостаза (редокс-баланса) приводит к возникновению окислительного стресса, ключевым событием которого является гиперпродукция активных форм кислорода (Меньщикова Е.Б. и соавт., 2006).

Активные кислородные метаболиты являются обязательными компонентами нормального функционирования клеток. Первичные свободные радикалы вызывают окисление ненасыщенных жирных кислот в клеточных мембранах, в результате образуются гидроперекиси, которые в дальнейшем распадаются на вторичные и конечные продукты ПОЛ: диеновые коньюгаты жирных кислот и малоновый диальдегид. Продукты ПОЛ повреждают иммунокомпетентные клетки, снижают неспецифическую резистентность организма (Лазарашвили Н.А., 2005).

4.1 Состояние не ферментативной подсистемы антиоксидантной защиты

Повреждение мембранных структур клетки при процессах ПОЛ предотвращается системой антиоксидантной защиты, состоящей из двух подсистем - не ферментативной и ферментативной. Не ферментативная подсистема образована антиоксидантами - «ловушками» свободных радикалов. Эти вещества, отдавая свой атом водорода, превращают свободные радикалы в стабильные молекулы и предупреждают цепное развитие реакций перекисного окисления и, тем самым, выступают в качестве регуляторов пролиферативных процессов (Андреева Н.Б., 2002).

Важным элементом не ферментативной подсистемы антиоксидантной защиты организма являются белки плазмы крови, из которых антиоксидантный эффект наиболее выражен у альбумина и в-глобулинов (Куликова А.И. и соавт., 2008). У всех обследованных произведено изучение соотношения фракций белков сыворотки крови (табл.15).

Ферментативная подсистема включает несколько ферментов: супероксиддисмутазу, каталазу, глутатионпероксидазу, глутатионредуктазу, глутатион-s-трансферазу и церулоплазмин. Все они катализируют реакции, в результате которых токсичные свободные радикалы и перекиси превращаются в нетоксичные соединения.

Таблица 15

Соотношение фракций белков сыворотки крови у больных УГХ

Нозологии	Общий белок(г/л)	Альбумины (%)	Глобулины (%)
			б1	б2	в	г
УГХ+ энтерококки	68,3±7,1	59,6±6,1*	2,7±0,2	14,2±2,1*	8,3±1,5	15,2±2,5
УГХ моноинфекция	71,5±6,2	62,1±5,8	2,9±0,3	12,6±1,6*	8,1±1,2	14,3±2,9
Контроль	79,2±6,9	70,1±4,7	3,2±0,3	6,4±1,2	7,7±1,3	12,6±3,2

* - достоверное различие показателя с контролем (р<0,05)

Установлено, что у пациенток с урогенитальным хламидиозом формировалась диспротеинемия с уменьшением содержания альбуминов, особенно выраженным при наличии энтерококков в урогенитальном тракте женщин - 59,6±6,1%, в контроле - 70,1±4,7% (р<0,05). Изменение показателей глобулиновых фракции белков сыворотки крови сопровождалось статистически значимым повышением б2-глобулинов, при любом варианте течения урогенитального хламидиоза (p<0,05). Уровень г-глобулинов незначительно повышался (рис.7), но не достигал статистически значимых отличий, по сравнению со здоровыми женщинами (р>0,05).

Выявленное снижение содержания альбуминов, незначительное повышение уровня в-глобулинов (р>0,05) и статистически значимое повышение б2-глобулинов, которые принимают участие в окислении Fe2+ в Fe3+ может свидетельствовать о изменении процессов перекисного окисления липидов у больных урогенитальным хламидиозом.

* - достоверное различие показателя с контролем (р<0,05)

Рис.7. Соотношение фракций глобулинов сыворотки крови у больных УГХ

Которое свидетельствует о снижении активности антиоксидантной белковой буферной системы, при воспалительных процессах в урогенитальном тракте женщин.

4.2 Оценка системы перекисного окисления липидов эритроцитов и плазмы крови

Всем пациенткам с УГХ проведено исследование основных показателей системы перекисного окисления липидов эритроцитов и плазмы крови - малонового диальдегида (МДА) и ферментативной подсистемы антиоксидантной защиты: каталазы и глутатионредуктазы.

При синдроме эндогенной интоксикации, возникающей на фоне инфекционных процессов, происходит накопление в биологических жидкостях тела промежуточных продуктов нормального или нарушенного обмена, которые распределяются между плазмой крови и эритроцитами. В формирующихся расстройствах эритроцитам принадлежит основная роль из-за их многочисленности, огромной площади поверхности и способности к адсорбции целого ряда веществ. Эритроциты одними из первых вступают в контакт с токсическими продуктами метаболизма, что нарушает их функционирование и играет важную роль в патогенезе расстройств во всем организме (Сторожук П.Г., Корочанская С.П., 2001).

Установлено, что у пациенток с УГХ происходило повышение активности ферментов системы ПОЛ, что свидетельствует об активации процессов свободнорадикального окисления, выраженность которых зависела от присутствия E. faecalis (табл.16). Для проверки статистической разницы значений применен метод расхождение между двумя усреднениями.

Таблица 16

Уровень МДА в плазме крови и эритроцитах больных УГХ (мкмоль/л)

Нозологии	МДА (эритроциты)	МДА (плазма крови)
УГХ+энтерококки	1318,9±120,4*/*	8,41±0,54*
УГХ моноинфекция	1051,6±98,6	8,27±0,42*
Здоровые	831,5±87,3	6,13±0,28

* - показатель достоверности между больными УГХ и здоровыми

* - показатель достоверности между больными УГХ+энтерококки и УГХ в виде моноинфекции

Установлено, что у больных урогенитальным хламидиозом значение МДА достоверно возрастает, по сравнению со здоровыми женщинами, как в эритроцитах, так и в плазме крови. Так, у женщин с УГХ значительное повышение уровня малонового диальдегида как в эритроцитах, так и в плазме крови наблюдалось при сочетании с энтерококками (1318,9±120,4 мкмоль/л и 8,41±0,54 мкмоль/л соответственно; p<0,05). Выявлено статистически значимое увеличение показателя МДА у пациенток с сочетанием урогенитального хламидиоза с энтерококками, по сравнению с женщинами, у которых диагностирован хламидиоз в виде моноинфекции (1318,9±120,4 и 1051,6±98,6 мкмоль/л соответственно; p<0,05).

При УГХ, протекавшем в виде моноинфекции у пациенток наблюдалось снижение уровня МДА, более выраженное в эритроцитах периферической крови - 1051,6±98,6 мкмоль/л (в контроле - 831,5±87,3 мкмоль/л; p>0,05) (рис.8а).

* - показатель достоверности между больными УГХ и здоровыми;

* - показатель достоверности между больными УГХ+энтерококки и

УГХ в виде моноинфекции

Рис.8. Уровень малонового диальдегида у женщин при УГХ

В то же время в плазме крови этот показатель оставался на высоком уровне (8,27±0,42 мкмоль/л; p<0,05), сохраняя статистически значимую разницу по сравнению с данными здоровых женщин из группы сравнения - 6,13±0,28 мкмоль/л (рис.8б).

4.3 Показатели антирадикальной защиты у женщин с урогенитальным хламидиозом

Супероксиддисмутаза (СОД) - один из основных ферментов внутриклеточной антирадикальной защиты, который обезвреживает супероксидные анион-радикалы путем их дисмутации с образованием перекиси водорода и кислорода, и, таким образом, участвует в регуляции свободнорадикальных процессов в живых клетках. СОД является внутриклеточным ферментом и в межклеточных жидкостях (плазма крови) быстро разрушается (Кипиани В.А. и соавт., 2006).

В ходе исследований проведено изучение активности антиоксидантного фермента супероксиддисмутазы в эритроцитах и плазме крови больных урогенитальным хламидиозом (табл.17), по методу Е.Е. Дубининой и соавт. (1995).

Таблица 17

Активность супероксиддисмутазы (СОД) эритроцитов и плазмы крови

у женщин с УГХ (усл.ед/мг белка)

Группы	СОД (эритроциты)	СОД (плазма крови)
УГХ+энтерококки	32,82±3,24*	1,39±0,14*
УГХ моноинфекция	34,43±3,65	1,41±0,16*
Здоровые	41,37±4,19	1,89±0,23

* - показатель достоверности между больными УГХ и здоровыми

Выявлено значительное снижения активности СОД в плазме крови у женщин с урогенитальным хламидиозом, протекавшим как в сочетании с энтерококками, так и в виде моноинфекции - 1,39±0,14 усл.ед/мг белка и 1,41±0,16 усл.ед/мг белка соответственно, в контроле - 1,89±0,23 усл.ед/мг белка (p<0,05) (рис.9а).

Также отмечено незначительное снижение активности супероксиддисмутазы эритроцитов периферической крови при хламидиозе, протекавшем в виде моноинфекции - 34,43±3,65 усл.ед/мг белка, в контроле - 41,37±4,19 усл.ед/мг белка (р>0,05). Только при сочетании УГХ с энтерококками отмечалось статистически значимое снижение активности СОД эритроцитов, по сравнению с показателями здоровых женщин группы сравнения (рис.9б).



* - показатель достоверности между больными УГХ и здоровыми

Рис.9. Активность супероксиддисмутазы у женщин с УГХ

Таким образом, установлено, что у женщин с урогенитальным хламидиозом на фоне высокого уровня продуктов перекисного окисления липидов (МДА) наблюдается дефицит фермента супероксиддисмутазы, который является одним из ключевых ферментов, регулирующих свободнорадикальные процессы в тканях. Снижение активности СОД является подтверждением декомпенсации антиоксидантных процессов в тканях при урогенитальном хламидиозе.

Активность каталазы, которая катализирует окислительно-восстановительные реакции, в ходе которых из двух молекул перекиси водорода образуются вода и кислород, используют в качестве показателя антирадикальной защиты и резистентности организма (Чеснокова Н.П., Понукалина Е.В., Бизенкова М.Н., 2006).

Определение уровня каталазы эритроцитов у женщин с УГХ также выявило ее значительную активность у больных урогенитальным хламидиозом (табл.18).

Таблица 18

Уровень каталазы в эритроцитах и плазме крови больных УГХ (ммоль/с·л)

Нозологии	Каталаза (эритроциты)	Каталаза (плазма крови)
УГХ+энтерококки	75,31±5,62*	0,186±0,12*
УГХ моноинфекция	69,52±6,83	0,173±0,10*
Здоровые	57,32±2,31	0,024±0,005

* - показатель достоверности между больными УГХ и здоровыми

Исследованиями выявлен разнонаправленный характер изменений показателей каталазы в эритроцитах и плазме крови. Так, установлено значительное повышение уровня каталазы в плазме крови у женщин с урогенитальным хламидиозом, протекавшим как в сочетании с энтерококками, так и в виде моноинфекции - 0,186±0,12 ммоль/с·л и 0,173±0,10 ммоль/с·л соответственно, в контроле - 0,024±0,005 ммоль/с·л (p<0,05) (рис.10а).

Вместе с этим, отмечено незначительное повышения уровня каталазы эритроцитов периферической крови при хламидиозе, протекавшем в виде моноинфекции - 69,52±6,83 ммоль/с·л, в контроле - 57,32±2,31 ммоль/с·л (р>0,05). Только при сочетании УГХ с энтерококками отмечалось статистически значимое повышение каталазы эритроцитов, по сравнению с показателями здоровых женщин группы сравнения (рис.10б).



* - показатель достоверности между больными УГХ и здоровыми

Рис.10. Уровень каталазы у женщин с урогенитальным хламидиозом

Таким образом, установлено, что активность фермента каталазы плазмы крови, который осуществляет антирадикальную защиту, у больных урогенитальным хламидиозом в сочетании с энтерококками превышал контрольные значения здоровых женщин в 7,8 раза, при хламидийной моноинфекции - в 7,2 раза соответственно (p<0,01). В месте с тем, повышение показателей каталазы эритроцитов было менее выраженным - в 1,4 раза, при сочетании УГХ с энтерококками. Следовательно, у женщин с урогенитальным хламидиозом на фоне высокого уровня продуктов ПОЛ наблюдается дефицит антиоксидантной защиты организма. Наблюдаемое увеличение содержания каталазы эритроцитов имеет компенсаторное значение и зависит от степени активизации процессов ПОЛ.

Перекисное окисление липидов клеточных мембран является разрушительным процессом, которому противостоят ферменты антиоксидантной защиты, в частности глутатионредуктаза. Она катализирует реакции разложения перекиси водорода с помощью восстановленного глутатиона, защищая липиды мембран от окисления и тем самым препятствует развитию патологических состояний.

У всех обследованных пациенток проводили определение уровня активности глутатионредуктазы эритроцитов и плазмы крови (табл.19).

Таблица 19

Уровень глутатионредуктазы в эритроцитах и плазме крови больных УГХ (мкмоль/с·л)

Нозологии	Глутатионредуктаза (эритроциты)	Глутатионредуктаза (плазма крови)
УГХ+энтерококки	7,24±1,59*	1,20±0,19*
УГХ моноинфекция	7,87±1,62*	1,31±0,24
Здоровые	13,10±1,41	1,38±0,16

* - показатель достоверности между больными УГХ и здоровыми

Как следует из представленных данных, активность глутатионредуктазы эритроцитов (рис.11а) достоверно понижена, по сравнению со значениями здоровых лиц: максимально - при сочетании УГХ с энтерококками 7,24±1,59 мкмоль/с·л (p<0,05), минимально - при изолированном поражении урогенитального тракта хламидиями 7,87±1,62 мкмоль/с·л (в группе здоровых женщин - 13,10±1,41 мкмоль/с·л; p<0,05).

Показатели антиоксидантного фермента глутатионредуктазы в плазме крови также имели тенденцию к снижению, наиболее выраженную 1,20±0,19 мкмоль/с·л (p<0,05) у больных с сочетанием хламидий и энтерококков, в контроле - 1,38±0,16 мкмоль/с·л (рис.11б).

* - показатель достоверности между больными УГХ и здоровыми

Рис.11. Уровень глутатионредуктазы у больных УГХ

Сравнение уровня глутатионредуктазы в эритроцитах и плазме крови у больных на фоне и без инвазии энтерококками выявило статистически недостоверные изменения его значений (p>0,05). Снижение активности данного фермента свидетельствует о возникновении тканевой гипоксии и является одной из причин усиления процесса свободнорадикального окисления (Шепелев А.П. и соавт., 2000).

Повышение активности каталазы в эритроцитах и плазме крови можно рассматривать как приспособительную реакцию организма в ответ на усиление процессов ПОЛ при эндогенной интоксикации, развивающейся при урогенитальной инфекции. Активность каталазы используют в качестве показателя антирадикальной защиты и резистентности организма (Соцкова В.А., 2007).

Повышение содержания МДА в эритроцитах и плазме крови является информативным показателем процессов деградации липидов и свободнорадикального окисления полиненасыщенных жирных кислот (Кодин А.В. и соавт., 2007). Полученные результаты, свидетельствующие о накоплении МДА в организме больных урогенитальным хламидиозом, характерны для развития тканевой гипоксии. Выявлено усиление перекисного окисления липидов тканей, при одновременном снижении в них активности ферментов антиоксидантной защиты, что может существенно влиять на характер течения воспалительных процессов в мочеполовой системе при урогенитальном хламидиозе.

4.4 Изменение уровня регуляторных белков (R-белки), при хламидийной инфекции

Повышение уровня ПОЛ и снижение АОС патогенетически связаны с развитием процессов деструкции рецепторного аппарата клеточных мембран. Клеточные рецепторы, представляющие собой регуляторные белки (R-белки) относятся к белкам неиммуноглобулиновой природы, распознающим соответствующий лиганд и взаимодействующие с ним. Нарастание содержания R-белков в начале патологического процесса служит наиболее ранней манифестацией проявления воспаления. Объясняется это структурной организацией и биохимическими свойствами фрагментов клеточных рецепторов, несущих лиганд-связывающие центры, выражающиеся в сходстве их антигенных характеристик. Принадлежность R-белков к универсальным эндотоксинам определяется не только способностью конкурировать за лиганды с клетками, но и проявлением супероксидазной активности, приводящей к снижению в биологических жидкостях активного кислорода и тем самым опосредовано повышению вязкости клеточных мембран.

Выявление R-белка служит показателем распада на мембране всех видов рецепторов, приводящее к сокращению контакта с повреждающими агентами. В результате ускоренного распада клеточных рецепторов при патологическом процессе независимо от причины его возникновения происходит накопление R-белка. Поступая в здоровые ткани, окружающие патологический очаг эти белки взаимодействуют с необходимыми клеткам метаболитами. Вследствие этого развиваются нарушения метаболизма окружающих здоровых клеток. Распространяясь таким образом, накапливающиеся во все больших количествах R-белки способны дезорганизовать обменные процессы далеко за пределами патологического фокуса и в конечном счете - во всем организме. Имеются данные о выраженном влиянии R-белков на звенья иммунной системы, в частности на фагоцитарную активность макрофагов (Бабанина М.Ю., 2002).

В исследованиях нами проводилось определение количества R-белков в плазме крови больных урогенитальным хламидиозом, при сочетании с энтерококками и в виде моноинфекции. Проведенные исследования выявили повышение уровня R-белков у больных УГХ, однако эти изменения у больных с инвазией энтерококками носили более выраженный характер (рис.12).

* - показатель достоверности между больными УГХ и здоровыми

Рис.12. Содержание R-белков в плазме крови больныхурогенитальным хламидиозом

Так, показатель R-белков у больных УГХ в сочетании с энтерококками составил 4,97±0,22 lg (p<0,05), у здоровых - 3,49±0,18 lg. При отсутствии энтерококков в урогенитальном тракте содержание R-белков снижалось до 4,01±0,16 lg, сохраняя высокие значения (р<0,05), по сравнению со здоровыми женщинами.

Полученные результаты свидетельствуют о деструкции клеточных мембран как о патогенетическом звене дисрегуляции системы ПОЛ-АОС у больных УГХ, что подтверждается выявленной сильной положительной достоверной корреляционной взаимосвязью между уровнем МДА и R-белков при сочетании УГХ с энтерококками (r=+0,82; р=0,031), при урогенитальном хламидиозе протекавшем в виде моноинфекции коэффициент положительной корреляции составил - r=+0,79; р=0,026).

Таким образом, в механизмах развития урогенитального хламидиоза у женщин важную роль играет нарушение биологического баланса в системе «оксиданты-антиоксиданты», в основе которого лежит гиперактивация процессов свободнорадикального окисления и снижение антиоксидантной активности.

Собственными исследованиями показана активация свободнорадикальных процессов в эритроцитах и плазме крови больных УГХ, сопровождающаяся снижением содержания антиокислительных факторов. Так, у пациенток с урогенитальным хламидиозом в сочетании с энтерококками выявлено значительное повышение уровня МДА (1318,9±120,4 мкмоль/л; p<0,05). При УГХ без энтерококков наблюдалось менее выраженное изменение уровней малонового диальдегида (p>0,05).

У женщин с УГХ максимальное снижение активности фермента супероксиддисмутазы обнаружено как в эритроцитах 32,82±3,24 усл.ед/мг, так и в плазме крови - 1,39±0,14 усл.ед/мг (p<0,05) при сочетании с энтерококками. Снижение активности СОД является признаком декомпенсации антиоксидантных процессов в тканях при урогенитальном хламидиозе.

Напротив, выявлено значительное повышение активности фермента каталазы у больных урогенитальным хламидиозом. Так, при сочетании УГХ с энтерококками значения каталазы плазмы крови превышали контрольные значения здоровых женщин в 7,8 раза, при хламидийной моноинфекции - в 7,2 раза соответственно (p<0,01). В месте с тем, повышение показателей каталазы эритроцитов было менее выраженным - в 1,4 раза, при сочетании УГХ с энтерококками.

Активность глутатионредуктазы была достоверно понижена, максимально - при УГХ в сочетании с энтерококками (7,24±1,59 мкмоль/с·л; р<0,05), минимально - при моноинфекции (1,20±0,19 мкмоль/с·л; р<0,05), в контроле - 13,10±1,41 мкмоль/с·л и 1,38±0,16 мкмоль/с·л соответственно.

Выявленные изменения системы ПОЛ-АОС поддерживают хроническое течение урогенитальных инфекций и участвуют в патогенезе их обострений. В связи с этим определение биохимических показателей системы «оксиданты-антиоксиданты» целесообразно использовать для оценки риска развития, тяжести течения и прогноза урогенитального хламидиоза.

Выявлена устойчивая положительная коррелятивная зависимость между содержанием R-белков и содержанием МДА, что свидетельствует о патогенетическом единстве перекисных нарушений и деструкции клеточных рецепторов. Проведенные исследования выявили повышение уровня R-белков у больных УГХ, однако эти изменения у больных в сочетании с энтерококками носили более выраженный характер. Так, показатели R-белков у пациенток с энтерококками составил 4,97±0,22 lg (p<0,05), при моноинфицировании - 4,01±0,16 lg (p<0,05), у здоровых - 3,49±0,18 lg соответственно.

Накопление в организме R-белков служит важным признаком дестабилизации биологического равновесия, их рассматривают как один из важнейших медиаторов патологического процесса, причиной которого могут быть заболевания различной этиологии и органной локализации. Считают, что выявление R-белков принадлежит к числу наиболее информативных тестов, поэтому количественное определение их в плазме крови можно использовать не только для выявления наличия патологического процесса, но и для определения структурно-функциональных изменений клеточных мембран, оценки степени тяжести заболевания и прогнозирования течения воспалительных процессов в тканях.

ГЛАВА 5. СОСТОЯНИЕ ИММУНИТЕТА У ЖЕНЩИН С УРОГЕНИТАЛЬНЫМ ХЛАМИДИОЗОМ

В ходе проведенных исследований было установлено увеличение патогенного потенциала E. faecalis, представителя ассоциативной микрофлоры урогенитального тракта женщин, в присутствии C. trachomatis. Полученные данные свидетельствуют о значительном влиянии хламидий на способность реализации патогенного потенциала ассоциативных микроорганизмов. В связи с этим, нами проведено изучение особенностей иммунных реакций у женщин с урогенитальным хламидиозом.

Иммунологический статус определяли у 182 больных урогенитальным хламидиозом и 52 лиц группы сравнения, репрезентативных по возрасту. Из общего количества больных с хламидиозом у 78 пациенток (42,9%) была выявлены C. trachomatis и энтерококки, у 104 больных (57,1%) хламидийная инвазия без E. faecalis в половых путях (рис.13).

Рис.13. Группы пациенток, вошедшие в дизайн исследования

5.1 Количественные показатели клеточного иммунитета

У всех пациенток с хламидийной инфекцией определяли количество лейкоцитов в периферической крови (табл.20). Для определения достоверности различий показателей количества лейкоцитов в периферической крови использовали непараметрический метод статистического анализа (U критерий Манна-Уитни).

Таблица 20

Содержание лейкоцитов в периферической крови больных с УГХ

Нозологии	Лейкоциты (·109/л)	Палочкоядерные нейтрофилы (%)	Сегментоядерные нейтрофилы (%)	Лимфоциты (%)
УГХ + энтерококки	5,49±0,87*	1,48±0,42	53,78±12,11	40,61±4,72*
УГХ моноинфекция	5,78±1,12	1,32±0,35	57,91±11,82	36,47±5,34
Группа сравнения	6,25±0,91	1,21±0,45	61,27±10,94	32,12±3,89

* - показатель достоверности между больными УГХ с энтерококками и здоровыми (p<0,05)

Из таблицы видно, что различие содержания лейкоцитов в периферической крови у больных урогенитальным хламидиозом и энтерококками по сравнению с пациентами УГХ без контаминации E. faecalis было статистически не достоверным (p>0,05). При сравнении результатов исследования со здоровыми женщинами выявлено статистически значимое снижение количества лейкоцитов, при одновременном повышении числа лимфоцитов в крови у пациенток с УГХ и контаминацией энтерококками (р<0,05).

С целью изучения клеточного иммунитета определяли содержание различных субпопуляций лимфоцитов у женщин с хламидийной инфекцией. Сравнительное определение показателей клеточного иммунитета выявило достоверное (р<0,05) снижение у лиц обследуемой группы Т-лимфоцитов и их субпопуляций относительно группы сравнения (табл.21).

Таблица 21

Абсолютное содержание субпопуляций Т-лимфоцитов у женщин

с урогенитальным хламидиозом 

Показатели·109/л	УГХ + энтерококки n=78	УГХ моноинфекция n=104	Контроль n=52
CD3+	1,450,06*	1,560,08	1,810,08
CD4+	1,290,12*	1,360,12*	1,650,09
CD8+	0,670,10	0,690,09	0,730,07
CD16+	0,29±0,09*	0,26±0,08	0,18±0,04
CD4/CD8	1,920,05*	1,970,11	2,260,05

*- достоверное различие с показателем контроля (р<0,05)

Как следует из таблицы, у женщин с хламидийной инфекцией на фоне контаминации энтерококками формировалась статистически значимая CD3+ и CD4+ лимфоцитопения. Содержание CD3-лимфоцитов было снижено до 1,45±0,06·109/л (в контроле - 1,81±0,08·109/л; р<0,05), CD4-лимфоцитов - до 1,29±0,12·109/л (р<0,05), при контрольных значениях - 1,65±0,09·109/л (рис.14). В случае инфицирования хламидиями в виде моноинфекции только показатели содержания CD4-лимфоцитов были статистически значимо ниже (1,360,12·109/л; р<0,05), по сравнению с группой здоровых женщин.

Выявлена статистически недостоверное снижение уровня CD8-лимфоцитов - до 0,67±0,10·109/л (р>0,05) при урогенитальном хламидиозе в сочетании с контаминацией энтерококками и 0,690,09·109/л (р>0,05) при моноинфекции (в контроле - 0,73±0,07·109/л).



*- достоверное различие с показателем контроля (р<0,05)

Рис.14. Содержание CD3, CD4, CD8 и CD16 субпопуляций Т-лимфоцитов у пациенток с хламидийной инфекцией

Одновременно со снижением абсолютного содержания субпопуляций Т-лимфоцитов, экспрессирующих CD3- и CD4-рецепторы, установлено статистически значимое повышение уровня CD16+ лимфоцитов, наиболее выраженное при сочетании урогенитального хламидиоза и E. faecalis в урогенитальном тракте - 0,29±0,09·109/л, в контроле - 0,18±0,04·109/л (p<0,05).

В группе женщин, больных УГХ+энтерококки констатировано достоверное снижение соотношения иммунорегуляторного индекса (ИРИ) лимфоцитов (1,920,05; р<0,05), по сравнению с обследуемыми из группы сравнения (2,260,05) и больными с хламидиозом в виде моноинфекции (1,970,11; p>0,05), что может свидетельствовать о затяжном или хроническом течении инфекционного процесса в организме обследованных пациенток.

Таким образом, выявлено достоверное снижение абсолютного содержания субпопуляций Т-лимфоцитов, экспрессирующих CD3- и CD4-рецепторы, наиболее выраженное при сочетании урогенитального хламидиоза и E. faecalis в урогенитальном тракте, по сравнению с результатами здоровых женщин из группы сравнения. Полученные данные могут свидетельствовать о иммуносупрессивном влиянии хламидий и представителей ассоциативной микрофлоры урогенитального тракта женщин, на состояние иммунной системы.

5.2 Изучение функциональной активности клеточного иммунитета

Функциональную активность Т-лимфоцитов определяли при помощи реакции торможения миграции лейкоцитов периферической крови (РТМЛ) и бластной трансформации лимфоцитов (РБТЛ) у пациенток с УГХ и здоровых женщин.

Вследствие неспецифической стимуляции конканавалином А (Кон А) лимфоциты секретируют лимфокины, в том числе фактор торможения миграции лейкоцитов. В связи с этим, по степени торможения миграции лейкоцитов судят о лимфокинпродуцирующей способности лимфоцитов и, следовательно, и об их способности продуцировать цитокины. Усиление миграции лейкоцитов свидетельствует об иммунодефицитном состоянии организма, снижение процента миграции лейкоцитов по сравнению с нормой указывает на активацию Т-лимфоцитов. Результаты РТМЛ у больных УГХ представлены в рисунке 15.

* - показатель достоверности между больными УГХ с энтерококками и

здоровыми

Рис.15. Результаты РТМЛ у больных УГХ (%)

Как видно из диаграммы в ответ на действие Кон А показатели РТМЛ были понижены, при любом варианте течения урогенитального хламидиоза у женщин. Однако, статистическую значимость различий данных показателей, по сравнению со здоровыми (47,59±7,95%), выявили при сочетании УГХ с энтерококками 38,71±8,43% (p<0,05).

С целью изучения функциональной активности пула Т-лимфоцитов использовали феномен спонтанной бластной трансформации (рис.16а) и под влиянием неспецифической стимуляции митогеном конканавалином А (Кон-А-индуцированную), которая характеризует функциональную способность Т-лимфоцитов к трансформации и размножению под воздействием антигенов (рис.16б).

Результаты исследований средних значений РБТЛ у больных урогенитальным хламидиозом свидетельствовали о статистически значимых отклонениях этого показателя по сравнению с группой сравнения.

* - показатель достоверности между больными УГХ с энтерококками

и здоровыми женщинами

Рис.16. Средние значения РБТЛ у больных УГХ (%)

Проведенные исследования выявили общую для всех пациенток с урогенитальным хламидиозом тенденцию к снижению способности лимфоцитов к трансформации в бласты. Следует также отметить, что показатели спонтанной РБТЛ (171,8±21,5 имп./мин.; р<0,05) и индуцированной РБТЛ (4682,9±862,3 имп./мин.; p<0,05) при УГХ в сочетании с энтерококками имели большие изменения, чем у больных хламидиозом без инвазии E. faecalis (215,7±29,2 имп./мин. и 5613,4±679,1 имп./мин. соответственно).

Следовательно, у всех больных УГХ отмечалось снижение спонтанной и индуцированной функциональной способности лимфоцитов периферической крови к трансформации в бласты, усиливающаяся при контаминации половых путей энтерококками, что во многом определяет хронический характер течения УГХ и развитие осложнений.

Изучение аффинности Е-рецепторов Т-лимфоцитов, т.е. количество «активных» T-лимфоцитов, связывающих антиген показало, что количество всех фракций Еа-РОК было снижено (табл.22), однако статистически достоверным оно было лишь у высокоаффинных Еа-РОК (р<0,05).

Таблица 22

Изменение аффинности Т-лимфоцитов больных

урогенитальным хламидиозом (·109/л)

Группы обследованных	Содержание низкоаффинных Т1-клеток	Содержание Среднеаффинных Т2-клеток	Содержание Высокоаффинных Т3-клеток
УГХ+энтерококки	0,337±0,036	0,324±0,029	0,273±0,038*
УГХ моноинфекция	0,351±0,042	0,295±0,031	0,281±0,032*
Здоровые	0,361±0,047	0,329±0,056	0,368±0,041

* - показатель достоверности между больными УГХ и здоровыми

Из представленных в таблице данных видно, что снижение показателей аффинности Т1- и Т2-клеток при всех нозологических формах было недостоверным (р>0,05), статистической значимости эти показатели достигали лишь у Т3-лимфоцитов (р<0,05) по сравнению со здоровыми. Следует отметить, что сочетание УГХ с энтерококками способствовало более выраженному снижению аффинности Т-лимфоцитов и, как следствие, нарушало эрадикацию возбудителей инфекционного процесса в урогенитальном тракте женщин.

Изучение функциональной активности нейтрофильных лейкоцитов с помощью реакции восстановления нитросинего тетразолия (НСТ), по мнению ряда авторов (Яковлева В.В. и соавт., 2003) представляет значительный интерес, так как этот показатель позволяет выявить наличие «респираторного взрыва», который возникает в нейтрофильных гранулоцитах в связи с процессом фагоцитоза. НСТ-тест не только выявляет фагоцитирующие нейтрофилы, но и характеризует их ферментные системы, поскольку интенсивность восстановления НСТ отражает энергетические процессы, обеспечивающие наработку биоокислителей с бактерицидным действием.

С помощью этой пробы можно выявить энзиматические дефекты иммунитета, ведущие к дисфагоцитозу. Закономерное увеличение способности нейтрофильных гранулоцитов восстанавливать НСТ неоднократно показано для различных инфекционных заболеваний (Бронштейн А.М., Малышев Н.А., 2004; Самойленко В.А., 2009).

В связи с этим, следующим этапом нашей работы явилось изучение функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов у больных УГХ. Результаты изучения показателей НСТ-теста представлены в табл.23.