Патоморфологическая диагностика висцеральных микозов

53

На правах рукописи

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук

Патоморфологическая диагностика висцеральных микозов

16.00.02 - Патология, онкология и морфология животных

Домницкий Иван Юрьевич

Саратов - 2009

Общая характеристика работы

Актуальность проблемы. Грибковые заболевания были известны человечеству во времена глубокой древности, начало их изучения относят к античной эпохе.

Среди большого количества разновидностей микозов особую группу представляют висцеральные микозы. М.А. Спесивцева отнесла к ним кандидоз, актиномикоз, криптококкоз, гистоплазмоз, кокцидиомикоз, мукороз, риноспоридиоз.

Широко распространенным является такое заболевание, как кандидоз, которым болеют животные и люди с поражением слизистых оболочек пищеварительного тракта, кожи и, иногда, с образованием гранулем во внутренних органах.

Грибы рода Candida, по данным Н.А. Бородулиной и Т.А. Быстровой, могут поражать не только взрослых животных, но и молодняк.

Н.А. Спесивцева и П.Н. Кашкин обобщают материалы о кандидозах животных и человека. О.К. Хмельницкий делает глубокий анализ литературного материала и результатов собственных исследований по кандидозу человека.

По информации А.С. Логинова и Н.И.Парфенова кандидоз кишечника на современном этапе относят к его обычной патологии. Кроме клинически выраженного кандидоза, нередко встречается кандидоносительство, а также новая форма кандидоза кишечника, которую описавший ее О.К. Хмельницкий назвал «кандидопатией».

Если лечебные мероприятия при кандидозе не проводятся или помощь оказана несвоевременно, летальность может достигать 85%, причем 50% из них приходится на первую неделю возникновения грибковой инфекции.

Другим важным заболеванием животных и людей является нокардиоз. Он характеризуется гнойным воспалением лимфатических сосудов, молочной железы, органов дыхания, кожи и подкожной клетчатки. У человека чаще поражаются легкие.

Значительную роль в изучении нокардиоза имели исследования Н.М. Берестнева. Он по этиологии и клинической картине различал два заболевания: типичный актиномикоз и нетипичный актиномикоз или нокардиоз, при котором друзы не образуются и лишь иногда наблюдаются хлопья, а в гное нити гриба.

А.И. Абрикосов указал, что патоморфологическая картина при актиномикозе и нокардиозе различна и что это отдельные заболевания.

Сравнительно более изученным патогенным видом является Nocardia asteroides - возбудитель нокардиоза крупного рогатого скота, овец, коз, собак, кошек, сумчатых животных и человека. Реже нокардиоз животных и человека вызывает N. Brasiliensis. В тропиках крупный рогатый скот поражается N. Farcinica, по данным F. I. Awad, и G. Curasson.

Значительный интерес для ветеринарных и медицинских специалистов представляет аспергиллез - респираторное, нередко генерализованное заболевание птиц, других животных и человека, вызываемое грибами рода Aspergillus. Имеют место поражения яиц при инкубации, воздухоносных мешков и легких у птиц.

Аспергиллезные поражения в легких у людей встречаются довольно часто, а летальность составляет от 50% до 87% по сообщениям S. Lin.

Аспергиллез у молодняка сельскохозяйственной птицы (индюшата, утята, цыплята) был изучен B. Hauptman. Развитие птицеводства сформировало устойчивый интерес отечественных ученных: М.А. Артемичев, Н.С. Акулова и многие другие.

Среди широкого спектра грибковых осложнений все чаще стал встречаться мукоромикоз, по данным V.Krcmery достигающий 15% инвазивных микозов на фоне неопластических процессов. Мукоровые грибы вызывают заболевания сельскохозяйственных животных, поражая легкие, мозг и другие органы, вызывая гематурию и микотические аборты у свиней и рогатого скота. Кроме гранулем, постепенно формирующих наружную капсулу, в наиболее острых случаях наблюдались микроабсцессы (Speare R., Berger L., O, Shea P., 1997).

У больных острым лейкозом людей H. Funada отметил клинико-морфологические проявления легочного мукормикоза, сходные с таковым у животных

Большинство ученых, исследующих мукорозы, считают, что степень их опасности по сравнению с другими глубокими микозами весьма значительна, хотя встречаются они реже.

Нередко в очагах поражений микотического характера обнаруживают несколько видов патогенных грибов, что позволяет говорить о смешанных микозах и, в настоящее время таких заболеваний насчитывается несколько сотен. При этом степень изученности смешанных микотических инфекций до сих пор недостаточно высока, что вызвано, в том числе, не характерными изменениями в сравнении с мономикозами. Исследованиям смешанных микозов следует уделять существенное внимание, в связи с достаточно сложными мерами борьбы с ними.

Необходимо отметить, что смешанные микозы, как и мономикозы, регистрируются и у животных и у людей.

В связи со всем выше перечисленным возникла необходимость в изучении висцеральных микозов, разработки методов дифференциальной диагностики, научно-обоснованной системы ветеринарно-санитарных, профилактических и зоогигиенических мероприятий применительно к конкретному заболеванию с учётом клинико-эпизоотологической обстановки.

Цель работы: выявить особенности клинико-эпизоотологической, патоморфологической диагностики висцеральных микозов животных (Aspergillus, Candida, Mucor и Nocardia) в Поволжском регионе.

Объект исследований: Спонтанно заболевшие и экспериментально зараженные животные различных видов и возрастных групп.

Предмет исследований: Патоморфологические изменения в органах у животных и птиц при спонтанном и экспериментальном поражении грибами Aspergillus, Candida, Mucor и Nocardia и воздействие грибов Aspergillus, Candida, Mucor и Nocardia на хромосомный аппарат подопытных животных

Задачи исследований:

1. Изучить эпизоотологическую ситуацию по висцеральным микозам животных (Aspergillus, Candida, Mucor и Nocardia) в Поволжском регионе в современных экономических и экологических условиях хозяйствования.

2. Определить клинико-морфологические изменения у разных видов и возрастных групп, спонтанно заболевших животных при висцеральных микозах (Aspergillus, Candida, Mucor и Nocardia).

3. Определить клинико-морфологические изменения при висцеральных микозах (Aspergillus, Candida, Mucor и Nocardia) у животных при экспериментальном заражении.

4. Сформулировать принципы дифференциальной патоморфологической диагностики висцеральных микозов животных (Aspergillus, Candida, Mucor и Nocardia) в регионах Поволжья в современных экономических и экологических условиях хозяйствования.

5. Изучить возможность мутагенной активности грибов Aspergillus, Candida, Mucor и Nocardia при проведении кариологических исследований.

Научная новизна:

· подробно изучены патоморфологические особенности висцеральных микозов (Aspergillus, Candida, Mucor и Nocardia) в Поволжском регионе, этиопатогенез;

· изучены клинико-эпизоотологические особенности висцеральных микозов (Aspergillus, Candida, Mucor и Nocardia) в Поволжском регионе;

· изучена динамика патогистологических изменений в органах и тканях спонтанно заболевших животных разных видов и возрастных групп и их взаимосвязь с основными симптомами при висцеральных микозах;

· изучена динамика патогистологических изменений в органах и тканях экспериментально зараженных животных разных видов и возрастных групп и их взаимосвязь с основными симптомами при висцеральных микозах;

· на микроскопическом уровне выявлена связь между патогномоничными признаками заболеваний и структурными изменениями в органах;

· проведены кариологические исследования при висцеральных микозах (Aspergillus, Candida, Mucor и Nocardia) у животных;

Теоретическая и практическая значимость. Полученные новые данные по патоморфологическим и клинико-эпизоотологическим особенностям висцеральных микозов в Поволжском регионе, по динамике патогистологических изменений в органах и тканях животных разных видов и возрастных групп и их взаимосвязи с основными симптомами при висцеральных микозах могут быть использованы практическими ветеринарными врачами для постановки более точного диагноза на висцеральные микозы, в учебном процессе при подготовке соответствующих специалистов очной и заочной форм обучения, а так же повышения квалификации ветеринарных врачей и зооинженеров.

Реализация результатов исследований.

Внедрение материалов диссертационной работы осуществлялось

- в диагностической работе ФГУ «Саратовская межобластная ветеринарная лаборатория»;

- в диагностической работе Управления ветеринарии Правительства Саратовской области;

А так же в форме выпуска методических и учебных пособий, карт обратной связи, а именно:

- при издании монографии «Нозологические основы висцеральных микозов» Саратов, 2007 - 242 с. (Рекомендовано Учебно-методическим объединением высших учебных заведений Российской Федерации по образованию в области зоотехнии и ветеринарии в качестве учебного пособия для студентов высших учебных заведений, обучающихся по специальности 110400 - Зоотехния и 111201 - Ветеринария);

- при издании раздела в справочнике ветеринарного врача - Москва, 2006 - 31 с. (Допущено Министерством сельского хозяйства Российской Федерации в качестве учебного пособия для студентов высших учебных заведений, обучающихся по специальности 111201 - «Ветеринария»);

- в учебных и научных целях на кафедрах анатомии и патанатомии, гистологии, физиологии, патофизиологии и ветеринарно-санитарной экспертизы продуктов животноводства Санкт-Петербургской государственной академии ветеринарной медицины, Ставропольского ГАУ, Самарской ГСА, Омского ГАУ, Алтайского ГАУ, Уральской ГСХА, Ивановской ГСХА, Ижевской ГСХА, Саратовского ГАУ.

Апробация работы Основные материалы НИР доложены, обсуждены и одобрены на: I Международной научной практической конференции, Витебск, 1996; Ветеринария и зоотехния: Юбилейный сборник научных работ, посвященный 150-летию ИВМиБ, 1999; В сб. проблемы инфекционных и инвазионных болезней в животноводстве на современном этапе, Москва, 1999; Всероссийской научно-методической конференции патологоанатомов ветеринарной медицины, Омск, 2000; научно-практических конференциях ИВМиБ, Саратов 2001-2007; Всероссийской научно-методической конференции патологоанатомов ветеринарной медицины, Уфа, 2003; 2-4 Региональных научно-практических конференциях 2002-2004, Саратов, 2004; Ветеринарная медицина. Современные проблемы и перспективы развития. VI Всероссийской научно-практической конференции, Саратов, 2006.; Международной научно-производственной конференции, посвященной 100 - летию со дня рождения профессора Авророва А.А. Воронеж, 2006.; международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарии в современных условиях», посвящённой 60-летию ГНУ Краснодарского НИВИ, Краснодар,2006.; Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарной патологии, физиологии, биотехнологии, селекции животных. Современные технологии переработки сельскохозяйственной продукции», Саратов, 2007; 7-й Всероссийской научно-практической конференции «Ветеринарная медицина. Современные проблемы и перспективы развития», Саратов, 2007; 16-й Всероссийской научно-практической конференции патологоанатомов, Ставрополь, 2007; Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарной патологии, физиологии, биотехнологии, селекции животных. Современные технологии переработки сельскохозяйственной продукции», Саратов, 2008; 8-й Всероссийской научно-практической конференции «Ветеринарная медицина. Современные проблемы и перспективы развития», Саратов, 2008; Всероссийской научно-практической конференции, посвященной памяти профессора Зыкина Л.Ф.

«Актуальные проблемы ветеринарной патологии сельскохозяйственных животных и птиц», Саратов, 2008; Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарной патологии, физиологии и морфологии», посвященной 90-летию факультета(института) ветеринарной медицины.

Основные положения, выносимые на защиту:

- особенность эпизоотологии микотической инфекции у животных и птицы и ее связь с эпидемическим процессом;

- характеристика клинико-морфологических особенностей висцеральных микозов (Aspergillus, Candida, Mucor и Nocardia) спонтанно заболевших и экспериментально зараженных животных и птиц с целью разработки и дачи рекомендаций по диагностике и профилактике висцеральных микозов в хозяйствах;

- оценка критериев клинико-морфологической дифференциальной диагностики висцеральных микозов (Aspergillus, Candida, Mucor и Nocardia) животных и птиц от сходных болезней.

изучение возможного воздействия грибов Aspergillus, Candida, Mucor и Nocardia на хромосомный аппарат подопытных животных.

Публикации По материалам диссертации опубликовано 28 научных работ, в том числе 7 из них в изданиях, рекомендованных перечнем ВАК РФ, в которых изложены основные положения и выводы проведенных исследований, а также в учебных пособиях с грифом Министерства сельского хозяйства и УМО РФ.

Структура и объём диссертации Общий объём диссертации составляет 336 страниц машинописного текста. Работа иллюстрирована 147 фотографиями с макро- и микропрепаратов. Список литературы включает 325 работ, в том числе 110 иностранных авторов.

Собственные исследования

Материалы, методы и объемы исследований

Работа выполнялась в период с 1993 - 2008 года в ФГОУ ВПО «Саратовский ГАУ им. Н.И.Вавилова». Исследования проводили с использованием материала, поступавшего из хозяйств Поволжского региона, неблагополучных по висцеральным микозам и от лабораторных животных в ходе экспериментов. Изучали клинико-эпизоотологические данные, характерные для висцеральных микозов, осуществляли отбор проб для гистологических, гистохимических и кариологических исследований.

В ходе работы было подвергнуто патологоанатомическому вскрытию и патоморфологическому исследованию 508 трупов спонтанно заболевших животных различных видов и возрастных групп, а так же 45 кроликов и 114 цыплят экспериментально зараженных.

Для патогистологических исследований проводили полное патологоанатомическое вскрытие по Шору (Жаров А.В. и др., 2000) с подробным протоколированием и извлечением органов. Кусочки тканей и органов немедленно помещали в фиксирующие растворы: жидкость Карнуа, 10% водный нейтральный раствор формалина. С парафиновых блоков на санном микротоме модели 2712 (Reichert Wien) получали гистосрезы толщиной 5 - 7 мкм. Из материала, фиксированного 10%-ным водным раствором нейтрального формалина, на замораживающем микротоме модели 2515 (Reichert Wien) готовили гистосрезы толщиной 15 мкм. Для обзорных целей гистологические срезы окрашивали гематоксилином Эрлиха и эозином, по Цилю-Нильсену, Грамм-Вейгерту (Пирс Э., 1962; Лилли Р. 1969; Меркулов Г.А. 1969; Дудка И.А., 1982).

Гистохимическими исследованиями выделяли гликоген постановкой ШИК - реакции, липиды Суданом черным В, железо окраской по Перлсу. Кроме того, проводили окраску хроматофильного вещества и ядер нервных клеток по Нисслю. Выполняли гистологическое исследование изготовленных препаратов с подробным протоколированием и фотографированием участков с отклонениями от нормы.

Кроме того, изучали патоморфологические изменения в органах при экспериментальном заражении животных и возможность возникновения изменений в хромосомном аппарате кроликов, под влиянием грибов Aspergillus, Candida, Mucor и Nocardia на хромосомный аппарат подопытных животных путем кариологического анализа клеток красного костного мозга, находящихся в стадии метафазы.

В эксперименте было использовано 45 кроликов породы советская шиншилла в возрасте 5 месяцев, отобранных по методу аналогов, учитывая такие показатели, как порода, пол, возраст, масса тела, условия кормления и содержания.

Было проведено четыре опыта по изучению влияния воздействия грибов Aspergillus, Candida, Mucor и Nocardia на животных.

Контролем служили взрослые кролики того же возраста.

Заражение проходило при введении в ушную вену суспензии конидий гриба, выделенных из пораженных органов спонтанно заболевших и павших животных.

Костный мозг получали из трубчатых костей бедра и голени непосредственно перед убоем.

Приготовление препарата для хромосомного анализа осуществляли по методу С.С. Бирбина (1970).

1. В 10 мл раствора Хенкса (без бикарбоната), подогретого до 38°С, содержащего 0,1 мг колхицина, 300 ЕД гепарина, 0,6 мл буферного двухосновного фосфата натрия, вносили 0,5 - 1,0 мл костного мозга, приготавливали суспензию, инкубировали ее 30 - 60 минут при температуре 38°С. Затем центрифугировали 10 минут при 1000 оборотов в минуту. Надосадочную жидкость осторожно удаляли.

2. К полученному осадку добавляли 10 мл 0,9% раствора лимоннокислого натра подогретого до 38°С, осадок собирали пипеткой и помещали в термостат при температуре 2 градуса по Цельсию. Затем пробирки ставили в центрифугу на 15 минут при 1000 оборотах в минуту. Надосадочную жидкость удаляли.

3. К осадку по стенке осторожно добавляли 1,5 - 3,0 мл свежеприготовленного охлажденного до 4°С фиксатора, состоящего из трех частей метанола и одной части ледяной уксусной кислоты. Осадок, не встряхивая, выдерживали в фиксаторе 10 минут, жидкость осторожно удаляли, а осадок суспензировали новой порцией фиксатора. Пробирки помещали в холодильник на 30 - 60 минут, после чего суспензию центрифугировали 3 минуты при 800 оборотов в минуту. Надосадочную жидкость удаляли, пробирки опрокидывали для лучшего стекания фиксатора. Со стенок пробирок остатки жидкости снимали ватным тампоном.

4. Осадок суспензировали в новой порции фиксатора, центрифугировали 3 минуты при 800 оборотов в минуту и надосадочную жидкость удаляли. Аналогичную манипуляцию повторили дважды.

5. К осадку добавили новую порцию фиксатора, равномерно суспензировали и готовили препараты путем выжигания фиксатора. Для этого на предметное стекло наносили 2 - 3 капли суспензии и после незначительного растекания ее поджигали от пламени спиртовки.

Препараты окрашивали азур - эозином по Нохту.

В рабочий раствор на 100 мл дистиллированной воды добавляли 1 мл буферного раствора двухосновного фосфата натрия (18,814 г фосфата на 100 мл воды). Препараты проводили через ксилол и заключали в канадский бальзам.

Для просмотра метафазных пластинок из делящихся клеток костного мозга использовали малое увеличение микроскопа. Их анализ проводили под иммерсией: учитывали размеры, форму хромосом, расположение центромер, подсчитывали количество хромосом. Всего проанализировано 100 метафазных пластинок от контрольных и подопытных животных.

Для изучения чувствительности цыплят к грибам Candida, выделенным из пораженных органов и фекалий больных кандидозом телят, было поставлено несколько опытов на 114 цыплятах.

Опыт № 1. Заражение культурой Candida albicans, выделенной из пораженного рубца теленка в возрасте 14 дней.

Культуру в виде суспензии выпаивали 2-х дневным цыплятам 1 раз в сутки 5 дней подряд. Часть цыплят убивали через каждые 2 дня.

Опыт № 2. Заражение несколькими штаммами грибов Candida, из которых были: C. albicans, C. krusei, C. parakrusei, C. рseudotropicalis, C. tenuis, выделенные из фекалий телят.

Заражали 5 групп цыплят отдельно каждым штаммом, скармливали зараженный корм в отдельных кормушках, но кормили и содержали в одном месте.

Опыт № 3. Заражение сочетанием грибов Candida albicans и Aspergillus fumigatus, выделенных из пораженного рубца (Candida) и легких (Aspergillus fumigatus) павшего теленка.

Заражали 3 группы цыплят. Одной группе выпаивали суспензию Candida albicans, второй - Aspergillus fumigatus и третьей - сочетание этих двух видов грибов.

При подозрении на кандидоз высевы фекалий делали с помощью шпателя, растирая материал по поверхности пластинчатого агара. Но этот метод не оказался приемлемым при высевах фекалий телят с подозрением на поражение плесневыми грибами. Эти виды грибов обычно быстро покрывают поверхность агара, вследствие чего не представляется возможным исключить загрязнение в момент высева, тем более, если колонии бывают единичными. При подозрении, по результатам бактериоскопии, на смешанный микоз, высевы фекалий мы делали также капельным методом, который позволял не только исключать загрязнение, но и более четко идентифицировать вырастающие колонии грибов. Если рост колоний грибов появлялся на агаре между нанесенными каплями материала, то эти колонии расценивались как загрязнение. Если же колонии грибов появлялись на капле нанесённых фекалий, то они принимались во внимание, а данный гриб расценивался как возбудитель заболевания только при условии, что бактериоскопия фекалий покажет мицелиальные формы гриба.

Для изучения влияния сыворотки молозива коров, содержащей и не содержащей противогрибковые антитела, на возникновение и развитие висцерального кандидоза, получали сыворотку, выдаивая молозиво коров в колбу, куда предварительно насыпали 0,5 г порошка химозина или наливали 1% раствор пепсина из расчета 10 мл на 100 мл молозива. Смесь выдерживали в теплом месте или в термостате при 37°С 6-12 часов. Появившуюся сыворотку отделяли фильтрованием через бумажный фильтр и затем исследовали её по РА пластинчатым и пробирочным методами на наличие антител против грибов Candida.

В качестве антигена использовали суспензию смыва 48 часовой культуры гриба Candida на физиологическом растворе с концентрацией 1 млрд. спор гриба в 1 мл.

В опытах использовали молодых морских свинок, подобранных по методу аналогов (возраст -2,5 месяца, вес - 350-400 г).

Противогрибковые свойства сыворотки молозива изучали, выпаивая её одновременно с заражением и через 7 дней после заражения, т.е. к моменту развившегося заболевания.

Заражали морских свинок суспензией гриба Candida albicans 5 дней подряд, один раз в день по 1 мл (1 млрд. клеток), путем выпаивания при помощи глазной пипетки или нанесения шпателем в защечную область агаровой культуры (6-7 колоний гриба). Одновременно задавали антибиотик (биомицин) по 25 мг один раз в день для усиления патогенного действия грибов.

Под опытом находились 36 зараженных морских свинок. Животные были разделены на 3 группы по 12 в каждой, и им выпаивали: 1-й группе - сыворотку молозива, реагирующую по РА с антигеном Candida (1:16).

2-й группе - сыворотку молозива, не реагирующую с этим антигеном.

3-й группе - контрольной, выпаивали физиологический раствор.

Результаты собственных исследований

При анализе результатов проведенных нами исследований было установлено, что висцеральные микозы (Aspergillus, Candida, Mucor и Nocardia) нередко встречаются в практической работе ветеринарных специалистов и создают определенные затруднения в вопросах диагностики. За период исследований была установлена структура соотношений отдельных висцеральных микозов (Aspergillus, Candida, Mucor и Nocardia), встречавшихся в нашей работе у различных видов и возрастных групп животных. Так на Aspergillus приходилось 45 % случаев, на Candida - 35 %, на Mucor - 15 % и на Nocardia - 5 %. Данные представлены в диаграмме.



За последнее десятилетие отмечено учащение случаев возникновения заболеваний висцеральными микозами среди людей. Особенно это относится к Aspergillus и Candida у иммунокомпрометированной категории населения.

Клинико-морфологические изменения у животных при аспергиллёзе

Аспергиллез, как заболевание, сопровождается различным характером поражений с вовлечением в процесс многих органов и систем (воздухоносные пути, пищеварительный тракт, паренхиматозные органы, головной мозг), сопровождается и абортами. Наиболее часто у человека и птиц все же отмечают поражения легких. Аспергиллез легких у птиц, например, может протекать в острой и хронической форме. При острой форме ткань легкого обычно отечная диффузно-красного цвета с наличием сероватых очажков и участков гепатизации. При хронической - обнаруживают единичные или множественные бело-желтые узелки казеозной консистенции размером от еле заметных до голубиного яйца, регистрируются также некрозы и каверны, напоминающие туберкулезные поражения. Слизистая оболочка трахеи нередко бывает покрыта серовато-зеленоватыми пленками. Отмечается и серозно-фибринозное воспаление бронхов, которые в этих случаях полностью заполнены фибринозными массами, содержащими обилие гиф гриба. Узелковые поражения наблюдаются не только в легочной ткани, но и в паренхиматозных органах и на серозных покровах. На перикарде обнаруживают серо-белый налет. Поражаются также воздухоносные мешки.

Изменения в пищеварительном тракте у птиц появляются в виде катарального воспаления.

У млекопитающих аспергиллез может протекать с поражением легких в виде гранулематозных узелков, очагов уплотнения ткани и поражения пищеварительного тракта. (Рис. 1).

Аспергиллезные узелки в легких по строению подразделяются на два типа. Узелки первого типа - неплотные, размером до лесного ореха, центр их размягчен и заполнен зернистой, влажной легко растирающейся массой зеленоватого или желтоватого цвета, окружающая зона обычно неширокая, в бронхах - слизь. Узелки второго типа - плотные, с сухим некротическим содержимым, после удаления которого остается полость с неровными серыми стенками, зона вокруг узелка широкая уплотненная с постепенным переходом на здоровый участок. У крупного рогатого скота аспергиллезные поражения характеризуются наличием в легких гранулем, очагов некроза и эмфиземы.

Для аспергиллезных узелков типичны 3 зоны: центральная - с некротическим распадом, затем - участок с серозно-фибринозным воспалением и мицелием гриба (Рис. 2) и - широкая зона из грануляционной ткани.

У телят двухнедельного возраста аспергиллез протекал с клинической картиной пневмонии крупозного типа с очагами некроза в легочной ткани и гастроэнтеритом, а в преджелудках выявляли язвы и некрозы.

У телят в 20-40 дней в легких отмечались гранулемы с зоной некроза в центре при наличии дистрофических изменений в печени.

Наиболее часто аспергиллезная инфекция протекала в виде легочных инфильтратов с резким повышением количества эозинофилов в крови. Подтверждался диагноз реакцией преципитации к антигену Aspergillus fumigatus, а так же двойной диффузией в агаровом геле.

Аспергиллез крупного рогатого скота, как заболевание преимущественно откормочных животных, наблюдалось при включении в рацион недоброкачественного жома, пораженного грибом Aspergillus fumigatus. Заболело 535 животных, из них пало - 15, вынужденно убито -188 голов. Заболевание протекало с клинической картиной: отказ от корма, угнетение, сухой болезненный кашель (особенно при движении), температура - 41,6-41,8°, гемоглобин - от 7 до 11 г/%, РОЭ - 0,2-0,25 в час, лейкоциты - 4-11 тыс. Животные погибали на 6-8 сутки.

В начале заболевания отмечали снижение удоев, угнетение, затем повышение температуры до 42°с диареей и прогрессирующим истощением. В момент развития болезни глубокостельные коровы абортировали.

Наибольшее значение для развития плесневого микоза имело не только общее ослабление организма, но и местные тканевые повреждения, способствующие проникновению спор гриба в стенку желудка.

В течение 2-х недель заболевание охватило 70% телят, протекало с клинической картиной: кашель, слизистые истечения из носа (1-2 дня), повышение температуры до 41,5°, дыхание было затрудненным, отмечали покраснение конъюнктивы, слезотечение, диарею.

Наблюдения показали, что заболевшие телята становились вялыми, в фекалиях почти постоянно обнаруживали примесь крови в виде темных сгустков. При поражении пищеварительного тракта температура тела была нормальной. Болезнь характеризовалась как бы двумя этапами, сменявшими один другой. Первый этап болезни возникал после рождения (до 5-7 дневного возраста). После применения лечебных препаратов, из которых обычно преобладали различные виды антибиотиков, состояние телят улучшалось, но через 3-4 дня наступало ухудшение, испражнения становились жидкими, непроизвольными, с примесью крови. Больные телята больше лежали, быстро худели, отмечалась мацерация кожи на задних конечностях. Телята значительно теряли в живой массе тела и погибали, несмотря на лечение теми же средствами, что давали хороший лечебный эффект на первом этапе болезни.

Описанные признаки болезни нельзя было считать специфичными для аспергиллезного гастроэнтерита, аналогичные признаки характеризовали и другие болезни, сопровождавшиеся поражением пищеварительного тракта (колибактериоз, паратиф, диплококковая септицемия и другие). Окончательным подтверждением правильности предполагаемого диагноза на аспергиллезный гастроэнтерит являлись патоморфологические и микологические исследования.

Хотя об аспергиллезе принято говорить как о заболевании, протекающем хронически, однако эта характеристика болезни для телят имела меньшее значение. Аспергиллез у телят раннего возраста с поражением пищеварительного тракта не протекал хронически (т.е. не продолжался месяцами), что отмечается, например, при аспергиллезе у взрослых животных и человека. Глубокие микозы телят, в том числе и аспергиллезный гастроэнтерит, регистрировали в преобладающем большинстве у молодняка до месячного возраста с острым течением.

Особую трудность составляла клиническая диагностика аспергиллезных пневмоний. Те признаки, которые мы наблюдали у больных, были настолько не характерны, что высказать даже предположение на это заболевание не представлялось возможным. И действительно, больные аспергиллёзом телята были малоподвижны, температура тела достигала 40-41°С, отмечались кашель, дыхание брюшного типа, иногда слизистые выделения из носа.

У взрослых же телят единственным признаком болезни был сухой кашель при общем угнетении, но такие признаки характеризуют пневмонии и другой этиологии. Об аспергиллезном характере пневмонии мы судили лишь при вскрытии, прижизненная же диагностика требует дополнительных исследований.

При вскрытии слизистые оболочки носовой и ротовой полостей были цианотичны, наблюдались множественные точечные и полосчатые кровоизлияния под костальной плеврой и эпикардом. Поверхность легких была усеяна твердыми узелками серо-желтого цвета величиной от просяного зерна до грецкого ореха. На ощупь легкие были уплотнены, на разрезе ткань пронизана мелкими плотными узелками. Картина соответствовала стадии красной гепатизации. Примерно 80-90% ткани легкого имели узелковые поражения, а лимфоузлы были гиперемированы.

При бактериоскопии пораженных участков легких обнаруживали большое количество бесцветных гиф гриба.

При гистологическом исследовании участков легких, окружающих узелки, наблюдали воспалительный процесс с явлениями пролиферации.

Высевы с пораженных участков ткани дали рост гриба Aspergillus fumigatus, что подтвердило результаты проведенных исследований на аспергиллез.

У истощённых, абортировавших коров при вскрытии, как правило, выявляли геморрагические инфаркты в слизистой оболочке сычуга, листочках книжки и печени до 3- 4 см в диаметре. Инфаркты вначале были темно-красного цвета, а затем центр их обесцвечивался, принимая серо-желтую окраску с обязательным присутствием по периферии темно-красного ободка. Выявлялись кровоизлияния в органах, селезенка была несколько набухшей. При гистологическом исследовании органов от 15 вынужденно убитых и павших животных в стенке сычуга, кишечника и в листочках книжки постоянно обнаруживали гифы гриба, которые нередко выявляли и в сосудах. За счет микотических тромбов возникали геморрагические инфаркты.

Гриб обнаруживался преимущественно в непораженной ткани, в участках же некроза он быстро распадался.

Макроскопическая картина пораженного желудка при плесневом микозе, вызванном аспергиллами, характеризуется наличием язв, окрашенных в желто-коричневый цвет и окруженных по периферии поясом гиперемированной и усеянной кровоизлияниями ткани слизистой оболочки. На дне язв обычно наблюдался пласт из некротизированной ткани, в которой присутствовали ветвящиеся и переплетающиеся нити с шаровидными утолщениями на концах. Некроз ткани являлся результатом токсического действия гриба и тромбоза вен гифами гриба.

У больных телят с признаками аспергиллёза при патоморфологическом исследовании наблюдали гиперемию слизистых оболочек глотки и трахеи, легкие были увеличены, бледноватые, с синюшным оттенком, пневмонические очаги захватывали одну или несколько долек. В центре долек различались бело-сероватые фокусы размером до горохового зерна. В бронхах, как правило, выявляли слизисто-гнойный экссудат. Окружающая ткань легких находилась в состоянии эмфиземы. В серовато-беловатых фокусах при гистологическом исследовании выявлялся серозно-клеточный экссудат, заполнявший альвеолы и бронхиолы, где различались макрофаги и плазматические клетки. Стенки альвеол были расширены, отечны и гиперемированы, в некоторых альвеолах различались гифы гриба. Лимфаденит особенно часто отмечался в регионарных лимфатических узлах легких, а в селезенке имела место слабая лейкоцитарная инфильтрация с уменьшением фолликулов. Довольно общей особенностью в других органах была вакуольная дистрофия. В слизистой оболочке кишечника имели место десквамативный катар, отек, гиперемия. Высев из пораженных органов дал рост Aspergillus fumigatus.

Аспергиллез у телят при вскрытии проявлялся в виде язвенно-некротических поражений в пищеварительном тракте, геморрагий в паренхиматозных органах, а так же наличием гранулем в легких. Локализация, характер и степень поражений имели много общего и в то же время отличались своими особенностями в зависимости от возраста, длительности течения болезни и факторов, предрасполагавших к возникновению болезни.

Аспергиллез у телят „в чистом виде" регистрировали редко, в тех же случаях, когда заболевание было вызвано только грибами Aspergillus, изменения в органах при вскрытии были характерными.

В брюшной полости нередко обращали на себя внимание единичные или множественные буроватые очажки, отчетливо выявлявшиеся на серозной оболочке рубца или сычуга размером 3x3 см. Вокруг таких очажков можно было видеть и точечные геморрагии, а пальпация этих участков указывала на утолщение стенки пораженного органа. На слизистой оболочке в подобных случаях всегда можно было видеть язвы. Регионарные лимфатические узлы были увеличены, на разрезе - покрасневшие. Содержимое рубца телят раннего возраста, у которых обнаруживали микотические поражения, всегда имело примесь подстилочного материала (соломы, сена или опилок). На слизистой оболочке, которая нередко была покрасневшей, отмечали в одних случаях уплотненные узелковые разрастания размером до горошины, которые выступали над поверхностью слизистой оболочки, за счет чего она была бугристой. Узелки имели буроватый оттенок, а на их поверхности различались зеленоватые пленки, плотно сросшиеся с узелками. При удалении пленок обнаруживалась слизистая оболочка ярко красного цвета. В других случаях на ней выявляли множественные поверхностные или глубокие некрозы. При просмотре стенки рубца через проходящий свет на месте узелков или некрозов отчетливо просматривались темные пятна, соответствовавшие по размерам очагам поражений. Наиболее часто поражения локализовались в дорзальном и вентральном мешках рубца, где встречались и язвы буроватого цвета с несколько приподнятыми краями и ярко-красным ободком вокруг. Стенка рубца в подобных случаях была утолщена и неравномерно уплотнена.

В сетке мы не встречали язв, отмечали лишь мелкие или обширные некрозы, которые локализовались на свободных краях перегородок ячеек слизистой оболочки.

В листочках книжки мы отмечали глубокие некрозы, которые иногда были диффузно покрасневшими с вишневым оттенком. Некрозы были настолько глубокими, что сопровождались полным прободением стенки листочка в виде сквозного отверстия округлой формы. Такие некрозы мы регистрировали у телят в 5-7 дневном возрасте, причем, поражения листочков отмечали только в том случае, если были язвы или некрозы в рубце.

Сычуг при этом микозе вовлекался в процесс особенно часто, а изменения почти всегда совпадали с поражениями преджелудков. Содержимое сычуга при наличии язв имело много слизи или желеобразной массы с буроватым оттенком. Язвы были единичные или множественные, они всегда были с приподнятыми краями размером до 5x5 см в диаметре, с розоватым венчиком по периферии. Дно язв было рыхлым, темного или беловатого цвета, что зависело от характера присутствовавшей микрофлоры. Стенка сычуга на месте язв была утолщена, а со стороны серозной оболочки отмечались буроватые пятна. Язвы располагались ближе к пилорической части как между складок, так и на них.

Изменения в кишечнике находились в прямой зависимости от выраженности поражений в преджелудках или сычуге. Если в желудке изменения были незначительными и поверхностными, то в тонком отделе кишечника отмечалось острое катаральное воспаление. Если же изменения были значительными и глубокими, то слизистая оболочка всех отделов кишечника геморрагически воспалена, содержимое имеет кофейно-шоколадный оттенок с пузырьками газа, кровеносные сосуды брыжейки переполнены, лимфоузлы увеличены до размера лесного ореха. В отдельных случаях отмечали инвагинацию тонкого отдела кишечника.

Изменения в легких отмечали у телят с 10 дневного возраста и характеризовались они наличием гранулем различных размеров или поражением бронхов и бронхиол у молодняка старше года. При гранулематозных поражениях под пульмональной плеврой в различных участках легочной ткани и на разрезе легкого обнаруживали единичные или множественные серо-беловатые отграниченные узелки размером от булавочной головки до горошины и более. Некоторые узелки были строго круглой формы, довольно плотной консистенции и отчетливо пальпировались в толще ткани легкого. Вокруг узелков вплотную к ним прилегали бледные серо-зеленоватые ободки, вслед за которыми в сторону здоровых участков ткани выявлялась перифокальная зона в виде ободка с буро-красноватым оттенком. На разрезе легкого можно было видеть и мелкие очажки темно-красного цвета без макроскопически выраженных гранулем. Содержимое многих гранулем можно было свободно извлечь из ткани пинцетом, а на их месте выявлялась полость с капсулой. Узелки легко раздавливались между пальцами. В бронхах и бронхиолах отмечали пенистую серовато-буроватую фибринозную массу, участками она полностью заполняла бронхиолы на большом протяжении, прилегающие участки легочной ткани были эмфизематозы и ателектатичны.

В отдельных случаях, кроме гранулем обнаруживали и обширные некрозы ткани легкого вплоть до образования каверн, которые мы наблюдали у телят 15 дневного возраста, поступавших из хозяйств Волгоградской области (колхоз „Россия" Старо-Полтавского района). В этом случае отмечали фибринозно-экссудативные плевриты с наличием серо-зеленоватых пленок.

При аспергиллезных трахеобронхитах и бронхиолитах, которые нам приходилось наблюдать у телят старших возрастов (в откормочной группе у бычков 2-х лет) на слизистой оболочке трахеи и бронхов отмечали довольно массивные, легко снимающиеся рыхлые зеленоватые пленчатые наложения вплоть до полного закрытия просвета бронхиол. В ткани легкого, кроме обширных эмфизематозных очагов, других изменений не отмечали. Следует заметить, что у телят младших возрастов при наличии поражений в легких, как правило, выявляли и поражения в преджелудках или сычуге. У телят старших возрастов аспергиллезные поражения локализовались только в бронхах и бронхиолах без вовлечения в процесс пищеварительного тракта.

Изменения в селезенке были общими и характеризовались уплотнением ткани, атрофией органа, наличием полосчатых кровоизлияний.

Почти закономерными и однотипными были поражения клапанного аппарата сердца в виде мелких или довольно крупных гематом размером до просяного зерна, или же пятнистых кровоизлияний, которые локализовались у основания клапанов. Печень всегда находилась в состоянии дистрофии вплоть до наличия чётко отграниченных некрозов, глубоко проникавших в толщу органа.

В каждом случае при аспергиллезных поражениях активно реагировал лимфатический аппарат. Все лимфатические узлы, особенно регионарные, были значительно увеличены, а на разрезе - покрасневшие.

В головном мозге сосуды сильно инъецированы, твердая мозговая оболочка покрасневшая, а в белом и сером веществе - кровоизлияния.

В гистологических срезах преджелудков обращала на себя внимание следующая особенность аспергиллезных поражений. В сосочках слизистой оболочки рубца просматривались микроабсцессы, которые имели определенную морфологическую структуру, отличавшую их от абсцессов другой природы или вызванных другим грибом. Эта особенность заключалась в том, что независимо от степени расплавления ткани, вокруг нее всегда обнаруживалась зона просветления на границе между здоровым и пораженным участками. Они нередко сливались между собой, образуя обширную зону, локализуясь в межсосочковом пространстве. В некоторых абсцессах обнаруживали гифы гриба с четко выраженной структурой, в других они были на стадии завершающегося лизиса. Гриб обнаруживали в толще слизистой и даже в мышечной оболочке стенки. При обнаружении гриба в мышечной оболочке микроабсцессы не обнаруживались. Большая часть сосочков слизистой оболочки преджелудков была некротизирована, деформирована или десквамирована, а сохранившиеся имели внутри микрополости, напоминающие соты.

При поражении сычуга, на месте язв подслизистый слой был утолщен, отечен, выявлялись очаговые скопления лимфоидных клеток, и фрагменты гриба. Гифы гриба отмечались в кровеносных и лимфатических сосудах.

Иногда, в отдельных участках стенки преджелудков или сычуга, мицелий гриба обнаруживали только в подслизистом слое, слизистая же оболочка была не повреждена. Складывалось мнение, что гриб проникал в эти отделы не через слизистую оболочку, а гематогенно из рядом расположенных очагов поражения.

Одной из особенностей поражения слизистой оболочки пищеварительного тракта у телят при аспергиллезах была вакуолизация клеток эпителия, чего не наблюдали при других микозах.

Аспергиллезная пневмония протекала по типу интерстициальной. Междольковые и межальвеолярные перегородки были расширены и инфильтрированы клеточными элементами, многие альвеолы заполнены фибринозно-геморрагичееким экссудатом и содержали в себе гифы гриба. На значительных участках ткани легкого около бронхиол и рядом с междольковыми перегородками выявлялись очаги, которые почти всегда были отделены от непораженной ткани зоной просветления. Гифы гриба выявляли в различных участках легочной ткани, но преимущественно в междольковых и межальвеолярных перегородках в виде большого скопления.

Мицелий гриба, разрастаясь радиально, образовывал сильно ветвящиеся гифы, внедрявшиеся в просвет кровеносных сосудов, альвеол, бронхиол. Стенки многих бронхиол и кровеносных сосудов оказывались проросшими мицелием, который вегетирует, внедряясь в подлежащую ткань в том направлении и месте, в котором мы видим ветвление его концевых частей.

Выявлена особенность врастания гриба в кровеносные сосуды. Внедрившись в адвентициальный слой, мицелий врастал перпендикулярно стенке сосуда до кольцевой мускулатуры, а затем вдоль мышечных волокон вокруг сосуда продвигался по направлению к просвету. В этом случае вокруг сосудов отмечали скопление лимфоидных клеток, лейкоцитов и макрофагов. Aspergillus обнаруживали в тканях в мицелиальной и друзоподобной формах, а фагоцитоз осуществлялся за счет макрофагов и гигантских клеток.

При экспериментальном заражении отмечалась гибель подопытных кроликов на 4-5 день. При патоморфологическом исследовании наблюдали наличие изменений во всех паренхиматозных органах и мышцах в виде узелковых образований.

В селезенке отмечали разрежение клеточных элементов фолликулов белой пульпы. Фолликулы были нечетко контурированы, но их центры и мякотные шнуры белой пульпы имели четкую окраску.

В тимусе имели место постоянно наблюдаемые периваскулярные клеточные узелки из лимфоидных клеток.

В головном мозге в ряде случаев находили разрыхление, отек и отслоение мягкой мозговой оболочки от подлежащего вещества мозга. Отмечали застойную гиперемию и отек головного мозга и мозговых оболочек, а так же периваскулярные отеки.

Клинико-морфологические изменения у животных при мукорозах

Заболевание у взрослых животных может протекать без каких-либо признаков и диагностируется лишь при убое, но иногда мукорозы сопровождаются стойкой атонией или остро протекающей диареей. Следует отметить, что симптомология системных микозов, в том числе и мукорозов, описана недостаточно подробно, поэтому говорить об этом микозе можно только после комплексного изучения при обязательном исследовании результатов вскрытия.

Наблюдая мукороз у коровы, отмечали, что через неделю после аборта (на 5-ом месяце) у нее развилась диарея с выделением зловонных каловых масс. У больного животного отсутствовал аппетит, температура тела - 37,7?С, предлопаточные лимфатические узлы были увеличены. Ректальным исследованием выявлялись узелки на слизистой оболочке прямой кишки. Симптоматическое лечение оказалось безрезультатным, а из кормов был выделен гриб рода Mucor.

У телят раннего возраста отмечали диарею с примесью крови в испражнениях, слабость и отсутствие аппетита. Было проведено обследование 308 телят, в результате чего у 12 из них был диагностирован микотический гастрит. При этом было отмечено, что большая часть телят, в том числе и те, у которых были диагностированы микозы, подвергались антибиотикотерапии, направленной против диареи. При изучении мукорозов у свиней и быков с клиническими признаками язвенных гастритов пришли к выводу, что при мукорозе поражаются либо пищеварительный тракт, либо дыхательная система.

Особенностью мукорозов, в отличие от других глубоких микозов, была редко наблюдаемая воспалительная реакция в пораженных тканях. Если воспаление и имело место, то оно проявлялось слабой лейкоцитарной и лимфоцитарной инфильтрацией с некротическими изменениями. При этом возникновение абсцессов отмечается редко и почти не обнаруживается очагов гнойного воспаления. Наблюдаемый некроз тканей, который является характерным для мукорозных поражений, связан не только с непосредственным действием гриба на ткань, но и с постоянно встречающимися при мукорозах расстройствами кровообращениями. Мукоровые грибы, как и другие представители этого семейства, обладают особым свойством врастать в стенки сосудов, образовывать в их просвете тромбы из сплетения нитей, что приводит к нарушению кровообращения, образованию некрозов и инфарктов. Излюбленная локализация мукоровых грибов это кровеносные сосуды.

Мукормикоз протекал как острый системный микоз. При вскрытии отмечали гранулемы во всех органах (сердце, печень, селезенка, головной мозг, легкие). Гифы гриба выявлялись гистологически, как правило, в сосудах и очагах инфарктов. (Рис. 3).

Особенно большое скопление гифов наблюдалось в очагах поражения легких. Мукорозы заслуживают особого внимания потому, что места локализации мукорозных очагов могут быть самыми различными, обнаружить и диагностировать их бывает сложно.

Мукорозы мы наблюдали у поросят до месячного возраста с клиническими признаками диареи, истощения и цианоза кожи в области брюшных стенок. Остро протекающий мукороз с признаками диареи у бычков в возрасте 18 месяцев был описан в 1993 году. При вскрытии отмечались множественные язвы в сычуге и геморрагические инфаркты в стенке рубца. При гистологическом исследовании обнаруживались тромбозы артерий и вен гифами гриба. Средостенные лимфатические узлы у 6-ти месячного, вынужденно убитого бычка с подозрением на туберкулезный лимфаденит, имели очаги некроза зеленоватого цвета с наличием мелких объизвествленных фокусов. Микологически была выделена культура гриба Mucor pusillus.

Описывая характер патоморфологических изменений при мукорозах у коров и телят, обратили внимание, что во всех наблюдавшихся нами случаях отмечалась патогномоничная картина, не вызывавшая сомнений в воздействии именно одного возбудителя. Эти изменения клинически характеризуются кровавым поносом и отеком гортани. При вскрытии из брюшной полости вытекала красно-желтая, мутноватая жидкость, а серозные оболочки были покрыты нитями фибрина и отмечались множественные петехиальные кровоизлияния. Стенка преджелудков, при этом, была пропитана кровью. У отдельных животных можно было видеть перфорацию стенки сычуга диаметром 3-5 см, особенно на месте язв в пилорической части. Стенки преджелудков при легком к ним прикосновении разрывались. Слизистая оболочка преджелудков была сине-фиолетового цвета. В тонком отделе кишечника обнаруживались сгустки крови и изъязвления слизистой оболочки. Лимфатические узлы были увеличены, отечны, с кровоизлияниями. В печени, почти у всех животных выявлялись мелкие некротические очаги.

Изменения в виде некрозов и геморрагического воспаления локализовались в кишечнике, книжке, печени, лимфатических узлах, легких. Гриб также обнаруживали в кровеносных сосудах и за их пределами. Эти материалы подтвердили более ранние наблюдения, свидетельствующие о том, что гифы фикомицетов присутствуют только в язвах или очагах некроза и не обнаруживаются в органах, если там нет поражений ткани.

При мукорозах отмечали изменения в органах различного характера. Так у теленка 4 дневного возраста отмечали фибринозно-геморрагическое воспаление слизистой оболочки рубца с наличием мелких очагов некрозов, пронизывавших всю толщу его стенки. Слизистая оболочка всех отделов кишечника была геморрагически воспалена, брыжеечные лимфатические узлы находились в состоянии гиперплазии. Под перикардом и на эндокарде встречались точечные кровоизлияния.

При гистологическом исследовании гифы гриба выявляли в тканях и кровеносных сосудах рубца. Выявлялись обширные очаги инфарктов и некроза, протекавшего по типу кариорексис с распадом ядер клеток до «пылевидных» частиц. Гриб в этих участках встречался редко и был почти полностью разрушен. Наибольшее его скопление отмечали на границе пораженной и здоровой ткани. Обращала на себя внимание особенность морфологии гриба в тканях. В толще слизистой оболочки сычуга гриб сильно вегетировал, что указывало на его активное размножение, в мышечной оболочке и подслизистом слое он выявлялся в виде обрывков нитей, имеющих вздутия на кончиках гиф и по их длине.

У теленка в возрасте 10 дней на слизистой оболочке сычуга в месте соединения с книжкой была обнаружена обширная язва округлой формы с ярко-красной зоной по периферии и почти черным центром. Регионарные лимфоузлы были значительно увеличены и цепочками располагались на серозной оболочке преджелудков и сычуга. Слизистая оболочка всех отделов кишечника была в состоянии катарально-геморрагического воспаления.