Хроматография - метод разделения и анализа смесей веществ, а также изучения физико-химических свойств веществ. Основан на распределении соединений между двумя фазами - неподвижной и подвижной (элюент). Хроматографические методы применяют для разделения, очистки, идентификации и количественного определения исследуемых соединений. Качественной характеристикой во всех видах хроматографии является подвижность определяемого вещества, которая зависит от его структуры и молекулярной массы, а также от условий хроматографирования. Отношение пути перемещения вещества к пути перемещения растворителя есть величина постоянная, обозначаемая Rf. Она является константой для данных условий разделения и используется для идентификации лекарственных веществ. Количественной характеристикой служит интенсивность аналитического сигнала, который в различных методах различен: например, размеры и интенсивность окраски пятна на пластинке, величина отклика детектора и др.

Классификация видов хроматографии может быть различной в зависимости от признака, положенного в основу.

I. По агрегатному состоянию фаз или по характеру подвижной и неподвижной фазы

1. Газо-жидкостная хроматография

2. Газо-твёрдофазная или газо-адсорбционная хроматография 3. Жидкостно-жидкостная хроматография

4. Жидкостно-твёрдофазная хроматография

II. По механизму разделения компонентов на молекулярном уровне. Например,

1. Распределительная хроматография. В распределительной хроматографии разделение происходит за счет разной растворимости веществ в подвижной фазе (растворителе) и неподвижной фазе, находящейся на поверхности неподвижного носителя.

2. Ионообменная хроматография. Этот вариант хроматографии позволяет разделять ионы и полярные молекулы, основываясь на ионных взаимодействиях.

3. Адсорбционная хроматография. Этот вид хроматографии основан на адсорбции исследуемых веществ поверхностью твердой неподвижной фазы.

IIII. По технике выполнения

1. Колоночная хроматография. Компоненты разделяют на колонке-трубке, заполненной хроматографическим сорбентом.

2. Капиллярная хроматография. Разновидность колоночной хроматографии; для разделения используют трубку (капилляр), в которой слой сорбента расположен только на внутренних стенках колонки, а центральная часть остается свободной.

3. Плоскостная хроматография. Для разделения используют плоский слой сорбента небольшой толщины. Плоскостная хроматография делится на бумажную хроматографию и хроматографию в тонком слое сорбента. Для бумажной хроматографии в качестве неподвижной фазы используют специальную хроматографическую бумагу. В методе хроматографии в тонком слое сорбента неподвижная фаза представляет собой тонкий слой сорбента (например, силикагель), закрепленный на инертной подложке (алюминий, стекло и т.д.)

IV. По цели проведения

1. Аналитическая хроматография. Целью этого метода является собственно хроматографическое определение.

2. Препаративная хроматография проводится с целью выделения индивидуальных соединений из смеси в чистом виде.

ВЭЖХ отличается от ГЖХ тем, что подвижной фазой служит не газ, а жидкость, причем она проходит через колонку, наполненную сорбентом, с большой скоростью за счет значительного давления, Поэтому ВЭЖХ позволяет разделять многокомпонентные смеси на индивидуальные вещества высокой степени чистоты. ВЭЖХ отличается высокой чувствительностью. На разделение 10-15 компонентов затрачивается 20-30 мин. Жидкостный хроматограф включает такие узлы, как дозатор, насос высокого давления, высокоэффективная колонка, детектор с регистрирующим устройством. Колонки изготавливают из нержавеющей стали, они имеют длину 10-25 см. Внутренний диаметр 0,3 - 0,8 см и плотно набиваются адсорбентом с размером частиц 5 - 10 мкм. В качестве элюента используют различные углеводороды в сочетании с этанолом. Детектором обычно служит спектрофотометр с переменной длиной волны (190-900 нм), но существуют также флуориметрические, электрохимические и другие детекторы.

Идентификацию испытуемых лекарственных веществ проводят по времени выхода каждого компонента смеси из колонки, которое будет стабильно при одинаковых условиях проведения эксперимента.

Принципиальная схема газового хроматографа:

1 - система подготовки газов;

2 - система дозирования;

3 - колонка;

4 - система термостатирования;

5 - система детектирования; \

6 - блок питания детектора;

7 - усилитель сигнала детектора; 8 - регистратор (самописец, компьютер);

9 - измерители режима хроматографа (расход газов, стабилизация температур и электрического питания детекторов)

Благодаря развитию жидкостной тонкослойной и колоночной хроматографии стало возможным определение свободных аминокислот и нуклеотидов в биообъектах; исследователи получили инструмент для анализа состава белков и нуклеиновых кислот, а клиницисты - «аминокислотную» и «нуклеотидную» диагностику патологических состояний; стало возможным определение различного рода лекарственных препаратов и их метаболитов в крови и тканях органов больных экспериментальных животных, следовательно, фармакологи имеют возможность изучать фармакокинетику, а клиницисты - контролировать эффективность лечения

Литература

1. Государственная фармакопея РФ XII: Часть 1. - М.: Научный центр экспертизы средств медицинского применения, 2008. - 704 с.

2. Фармацевтическая химия: учеб. пособие для вузов/ ред. А.П. Арзамасцев. М.: «ГЭОТАР-Медиа», 2005. - 635 с.

3. Беликов В.Г. Фармацевтическая химия в 2-х частях / Учеб. для фарм. инст. и фарм. факул. мед. инст. - Ч. 1. - М.: Высшая школа, 1993. - 432 с. Ч. 2. - Пятигорск, 1996. - 608 с.

4. Руководство к лабораторным занятиям по фармацевтической химии: Учеб. Пособие. ред. А.П. Арзамасцев. М:.:Медицина, 2004.

5. Кулешова М.И., Гусева Л.Н., Сивицкая О.К. Анализ лекарственных форм, изготовляемых в аптеках. / Изд. 2-е перераб. и доп. - М.: Медицина, 1989. - 288 с.

6. Лабораторные работы по фармацевтической химии: Учеб. пособие для фарм. инст. и фарм. факул. мед. инст. / Беликов В.Г., Вергейчик Е.Н., Годяцкий В.Е. и др. - М.: Высшая школа, 1989. - 375 с.

7. Фармацевтическая химия: руководство к практическим занятиям для студентов, обучающихся по специальности 060108 фармация / Е.С. Гагарина, А.В. Озерская, Н.В. Кувачева и др. - Красноярск: типография КрасГМУ, 2009. - 176 с.

8. Дудко В.В., Тихонова Л.А. Анализ лекарственных веществ по функциональным группам. - Томск, 2004. - 137 с.

Размещено на Allbest.ru