Размещено на http://www.allbest.ru/

Размещено на http://www.allbest.ru/

Министерство здравоохранения Иркутской области

Областное государственное бюджетное

Профессиональное образовательное учреждение

Усольский медицинский техникум

Дипломная работа

Тема:

Определение подлинности препарата дибазол в виде раствора для инъекций



СОДЕРЖАНИЕ

• Введение
• Глава 1. Общие сведения о препарате Дибазол
• 1.1 История создания препарата
• 1.2 Строение дибазола и физико-химические свойства
• 1.3 Способы получения препарата Дибазола
• 1.4 Биологическая роль Дибазола
• Глава 2. Методы определения препарата дибазол
• 2.1 Качественный анализ дибазола
• 2.2 Количественное определение Дибазола
• 2.3 Другие методы исследования препарата Дибазол
• Заключение
• Глоссарий
• Список литературы

ВВЕДЕНИЕ

У каждого из оригинальных отечественных синтетических препаратов, нашедших использование в практической медицине, своя и подчас непростая история, с веками и переплетениями событий, творческими и жизненными коллизиями их участников - исследователей-разработчиков, специалистов клиницистов и технологов-внедренцев [7].

Судьба Дибазола в этом отношении примечательна. Открытие его лекарственных свойств и внедрение в клинику связано с такими неординарными личностями, как выдающиеся советские фармакологи Николай Васильевич Лазарев и Сергей Викторович Аничков, а химический синтез и разработка промышленной технологии - с плеядой блестящих химиков-органиков из школы Александра Евгеньевича Порай-Кошица [15].

Следует отметить, что большинство лекарственных препаратов на полках российских аптек - импортные, разработанных и производимых в нашей стране значительно меньше. То, что Дибазол принадлежит к числу последних, само по себе составляет повод для гордости. Вот уже более 60 лет этот препарат находится в арсенале отечественной фармакологии. За это время Дибазол зарекомендовал себя как эффективное и практически безвредное лекарственное средство. Первоначально предназначенный для лечения повреждений периферических нервов, он получил признание также в качестве антиспазматического, противогипертонического, иммуностимулирующего и адаптогенного средства. Спектр его применения удивительно широк - от педиатрии до гериатрии, от ветеринарии до спортивной медицины [16].

Актуальность темы заключается в том, что мне как будущему фармацевту, необходимо ознакомится с одним из самых распространенных и эффективных препаратов, который давно используется в медицинской практике, научится проводить качественный и количественный анализ данного препарата, позволяющие определить его подлинность.

Целью дипломной работы является: Определение подлинности препарата «Дибазол» в виде раствора для инъекций, фирмы производителя ОАО «Дальхимфарм» 1% 5 мл 10 ампул.

Объектом исследования является: препарат «Дибазол»

Предметом исследования является: препарат «Дибазол» в виде раствора для инъекций, фирмы производителя ОАО «Дальхимфарм» 1% 5 мл 10 ампул.

Задачи:

1. Познакомиться с историей создания препарата.

2. Рассмотреть строение и физические свойства, биологическая роль препарата Дибазол.

3. Изучить химические свойства препарата.

4. Рассмотреть способы получения препарата «Дибазол».

5. Определить методы возможного проведения качественного и количественного анализа препарата «Дибазол».

6. Провести анализ препарата «Дибазол» на предмет подлинности.

Теоретической основой написания дипломной работы явились учебные пособия по фармацевтической, аналитической, органической и неорганической химии, справочники по биохимии; интернет ресурсы по изучаемому вопросу.

При написании выпускной квалификационной работы использовались следующие общенаучные методы:

- общелогические: анализ, синтез, аналогия;

- теоретического уровня: обобщение;

- эмпирического уровня: наблюдение, описание, измерение, сравнение, эксперимент.

Научная новизна и теоретическая значимость работы заключается в рассмотрении дибазола с точек зрения различных областей: химическая, биологическая, фармацевтическая, фармакологическая.

Практическая значимость: содержащиеся в работе теоретические положения и выводы по химическим экспериментам, могут быть использованы при преподавании междисциплинарных курсов и учебных дисциплин по специальности «Фармация».

Объем работы составляет 40 страниц, включая приложения. Она состоит из введения, трех глав, 7 параграфов, заключения, глоссария, списка литературы, который включает 31 литературных источников.

Глава 1. Общие сведения о препарате дибазол

1.1 История создания препарата

В середине XX столетия во многих странах мира резко возросло число людей страдающих гипертонической болезнью, которая стала одной из «болезней века». Значительно вырос спрос на лекарства, понижающие артериальное давление. Но выбор таких средств был очень ограничен, по существу сводился к двум - трем препаратам. Самым эффективным из них считался папаверин, содержащийся в опии - млечном соке снотворного мака. Это лекарство производилось в ограниченном количестве из растительного сырья, и было весьма дорогим. К тому же далеко не во всех странах климат подходил для разведения снотворного мака, поэтому приходилось закупать папаверин за границей. Эти обстоятельства и заставили ученых приступить к поискам синтетических аналогов препарата.

Весной 1946 г. на кафедре красителей по инициативе Николая Васильевича Лазарева и Леонида Федоровича Ларионова проводится совещание, в котором, помимо указанных ученых фармакологов, принимают участие химики-синтетики - Александр Евгеньевич Порай-Кошиц, его сын и последователь профессор Борис Александрович Порай-Кошиц, а также Оскар Федорович Гинзбург и Л.С. Эфрос [18]. В результате совещания принято предложение химиков проводить совместные работы по синтезу и изучению биологической активности в ряду производных бензимидазола. Это предложение основывалось на том, что бензимидазол имеет структурное сходство с пурином, и исходя из распространенной тогда среди фармакологов теории «конкурентных отношений», можно было ожидать, что среди производных бензимидазола окажутся интересные лекарственные соединения.

Химическая часть намеченного, как теперь бы сказали, «проекта» была разделена на два направления: синтез производных бензимидазола, содержащих заместители в бензольном кольце, который взял на себя Л.С. Эфрос, и синтез производных бензимидазола, содержащих заместители в положении «2» имидазольного кольца, за который взялся Оскар Федорович Гинзбург. Общее руководство химической частью проекта Александр Евгеньевич Порай-Кошиц возложил на Бориса Александровича Порай-Кошица.

Всего от химиков было получено 44 соединения. Среди синтезированных Л.С. Эфросом производных бензимидазола, замещенных в бензольное кольцо, перспективных соединений обнаружено не было. Направление, в котором работал О.Ф. Гинзбург, оказалось более результативным. Уже в первой группе соединений, синтезированных О.Ф. Гинзбургом и переданных осенью 1946 г. для испытаний на кафедру фармакологии Военную Московскую Медицинскую Академию, была солянокислая соль 2-бензилбензимидазола [22].

Поскольку в военные годы на кафедре фармакологии Военной Московской Медицинскую Академии проводились интенсивные исследования стимуляторов Центральной нервной системы с целью поиска средств против усталости, внимание было обращено в первую очередь на нейротропные свойства новых соединений.

Опыты ставились на кошках. Первоначально выявленной активностью Дибазола, который хранился в пробирке №16, было резкое усиление возбудимости спинного мозга, проявлявшееся в усилении рефлекторной деятельности, при малом влиянии на функции головного мозга. Возбуждающее действие Дибазола на нервную систему было подтверждено в специально поставленных опытах по лечению морских свинок, отравленных нервным ядом трикре-зилфосфатом [23].

Дибазол испытывался в том числе и на канарейках, рефлекторная деятельность которых значительно усиливалась под влиянием Дибазола - из всех исследованных соединений только это вызывало у канареек чириканье в зимнее время. Полученные в опытах с Дибазолом результаты побудили высказать предположение о целесообразности использовать этот препарат в невропатологии для лечения параличей.

Николай Васильевич Лазарев организовал широкомасштабные исследования препарата, в том числе изучение его токсичности, переносимости и прочие, а затем и клинические испытания совместно с клиницистами. Препарат оказался малотоксичным (LD50(летальная доза) 200 мг/кг, в/б, мыши). Для испытаний на переносимость порошки с 5 мг Дибазола, смешанного с глюкозой, приняли все сотрудники кафедры Н.В. Лазарева. Никаких неприятных ощущений и последствий не наблюдали. Затем избирательное влияние Дибазола на спинной мозг человека было подтверждено в специальных тестах на 9 физически здоровых мужчинах-добровольцах по способности препарата стимулировать мышечную работоспособность [20].

Клинические испытания проводились в клиниках нервных болезней в Военной Московской Медицинской Академии (проф. Александр Викторович Триумфов) и Ленинградского педиатрического института (проф. Гедалий Давидович Аронович) [19, с. 18; 20]. В первой клинике положительный эффект в виде увеличения силы мышц был выявлен у больных с последствиями инфекционного полиневрита. Во второй клинике было выявлена эффективность Дибазола в восстановительный период заболевания полиомиелитом у детей.

После этих испытаний Дибазолу был открыт «зеленый свет»: испытания продолжились во многих неврологических клиниках, с участием ведущих специалистов, в том числе известного невропатолога-клинициста профессора Нины Александровны Крышовой. Было окончательно подтверждено стимулирующее действие Дибазола на функции спинного мозга, и он был заявлен в качестве «психостимулирующего средства», предназначенного «для лечения больных, страдающих поражениями периферического двигательного неврона [двигательные клетки спинного мозга, периферические нервы] с параличами и парезами тех или иных мышечных групп» [21].

Особенно впечатляющими были результаты применения Дибазола для лечения больных, страдающих невритом лицевого нерва. Было получено разрешение на применение Дибазола, налажено производство субстанции и лекарственных форм, появились публикации в специальной литературе и в прессе.

Опыт последующего использования Дибазола в неврологии подтвердил, что как нейротропное средство он усиливает рефлекторные реакции на уровне спинного мозга, облегчая синаптическую передачу в нем путем стимуляции межнейронных контактов [7, 15].

Такова история рождения лекарственного препарата «Дибазол» в лаборатории Николая Васильевича Лазарева. Однако параллельно с ней и не менее динамично развивалась другая история, и связана она с именем академика Сергея Викторовича Аничкова. На кафедре фармакологии Ленинградского санитарно-гигиенического медицинского института, где первичное фармакологическое изучение Дибазола проводил аспирант С.В. Аничкова гражданин Болгарии Дмитрий Спасович Пасков выдающийся болгарский фармаколог.

В лаборатории С.В. Аничкова в ИЭМ было установлено, что он обладает способностью понижать кровяное давление, а также спазмолитическим действием. В дальнейших исследованиях, проведенных под руководством Сергея Викторовича Аничкова с участием клиницистов, было установлено, что Дибазол обладает лекарственным действием при гипертонии. Приоритетный характер этих исследований был подтвержден вторым авторским свидетельством на лекарственное средство Дибазол, в котором этот препарат был заявлен в качестве спазмолитического средства, предназначенного для лечения больных, страдающих гипертонической болезнью. В этом авторском свидетельстве также отмечается, что Дибазол обладает анальгезирующим свойством, он снимает у больных пульсирующие головные боли, шум в ушах, парестезии [24].

Дибазол в качестве спазмолитического средства был «спроектирован» Сергеем Викторовичем Аничковым как синтетический аналог алкалоида бензилизохинолинового ряда Папаверина, фармакологическое действие которого сводится к преимущественному влиянию на гладкую мускулатуру, что проявляется в понижении тонуса и ослаблении сократительной деятельности гладких мышц. Из экспериментальных данных было установлено, что структурными факторами, обусловливающими действие Папаверина на гладкую мускулатуру, являются гетероциклический фрагмент изохинолин и бензильный остаток. Из этого факта было сделано предположение, что качественно аналогичным Папаверину действием на гладкую мускулатуру должны обладать и его структурные аналоги, построенные путем присоединения бензильного заместителя к азотсодержащему гетероциклическому ядру. При этом было желательно, чтобы гетероциклический фрагмент синтетического аналога Папаверина имел бы структуру свойственную метаболитам, организмов, например, структуру пурина, пиримидина или имидазола. С другой стороны, структура синтетического препарата, по сравнению с алкалоидом-прототипом, должна была быть максимально простой, чтобы этот препарат был технологичен и доступен для крупномасштабного промышленного производства. Как видно, молекула 2-бензилбензимидазола вполне соответствует указанным структурным требованиям [25].

1.2. Строение дибазола и физико-химические свойства

Дибазол - это гигроскопичный белый порошок, слегка с сероватым оттенком, горько-солёного вкуса. Температура плавления 182 -186 єC. Трудно растворим в воде, легко - в спирте, трудно или практически нерастворим в других органических растворителях, имеющий две формы:

1) 2-(Фенилметил)-1H-бензимидазол



2) В виде гидрохлорида

Дибазол является производным имидазола, с бензойным радикалом.

Имидазол обладает ароматическими свойствами. Атом N-1 обусловливает кислотность имидазола - способность образовывать соли щелочных и щелочно-земельных металлов. По атому N-1 легко образуются также N-алкил-, N-арил-, N-ацилпроизводные и другое. Атом N-3 - нуклеофильный центр, по которому протекают протонирование, кватернизация и комплексообразование. Наличие атомов N двух типов способствует электрофильному замещению в положения 4 и 5, нуклеофильному - в положение 2. Карбоксилирование имидазола протекает в положения 4 и 5, металлирование N-алкил- и N-аралкилпроизводных - в положение 2.

Имидазол устойчив к действию большинства окислителей и восстановителей: не окисляется HNO₃, Н₂СrО₄, КМnО₄, но расщепляется под действием пероксидов; не восстанавливается амальгамой Na, Zn/HCl, HI при 300°С. N-Ацетилимидазолы в присутствии Pd-катализаторов в уксусной кислоте гидрируются в тетрагидроимидазолы (имидазолидины), которые легко гидролизуются до диаминов [2, 3, 16]. Бензойный радикал проявляет все свойства ароматического соединения c реакциями электрофильного замещения.

1.3 Способы получения препарата Дибазола

Впервые 2-бензилбензимидазол был синтезирован в 1899 г. немецкими химиками Рихардом Вальтером и Т. Пулавски (R. Walther, Th. Pulawski) длительным нагреванием о-фенилендиамина с небольшим избытком фенилуксусной кислоты до 180°C. В конце 1940-х годов Оскар Фёдорович Гинзбург детально изучил кислотно катализируемую конденсацию о-фенилендиамина с карбоновыми кислотами, приводящую к образованию 2-алкил- и 2-арилбензимидазолов, и установил ее механизм.

2-Бензилбензимидазол был получен им нагреванием в запаянной трубке эквимолярной смеси о-фенилендиамина и фенилуксусной кислоты в 10% соляной кислоте в течение 40 мин при 180-185°C с выходом 98% [10].

Гидрохлорид был выделен кристаллизацией свободного основания из 5% соляной кислоты.



Этот способ получения 2-замещенных производных бензимидазола в 1947 г. был защищен авторским свидетельством. Гетероциклизацию о-фенилендиамина с фенилуксусной кислотой можно осуществить не только под давлением, но и при атмосферном давлении, а также в условиях микроволновой активации.

Предложенный в 1947 г. О.Ф. Гинзбургом, Л.С Эфросом и Б.А. Порай-Кошицем способ получения 2-бензилбензимидазола лег в основу промышленной технологии Дибазола: первый технологический регламент получения лекарственной субстанции Дибазола нагреванием о-фенилендиамина с фенилуксусной кислотой в солянокислой среде при атмосферном давлении. Промышленный выпуск Дибазола впервые был осуществлен на этом заводе несколько раньше, в 1950г. Впоследствии на этом производстве, вплоть до его остановки в 2004 г., вместо фенилуксусной кислоты использовали ее нитрил [7, 9].

В аппарат с мешалкой и приварной рубашкой загружают о-фенилендиамин и фенилуксусную кислоту из бункера. Реакционную массу нагревают до 200°C подачей дифенилметана в рубашку аппарата. Дифенилметан подогревается в нагревателе с электрической спиралью. Отработанный дифенилметан через кожухотрубчатый теплообменник возвращают в линию дифенилметана. В межтрубное пространство теплообменника подается охлаждающая вода, которая затем также возвращается в цикл насосом. Пары воды из реактора поступают в дефлегматор часть конденсата возвращают в аппарат, а другую часть сливают в канализацию. Дефлегматор охлаждают подачей воды в межтрубное пространство, которую затем возвращают в цикл насосом. Когда реакционная масса нагреется до 200°C, обогрев снимают (примерно через 3 часа) и ведут охлаждение реакционной массы. После охлаждения реакционной массы до 110°C (в течение 1,5 часов) охлаждение прекращают и в аппарат загружают воду из мерника и соляную кислоту из мерника. Реакция в аппарате идет примерно в течение часа при перемешивании и нагреве реакционной смеси до 96°C дифенилметаном.

По окончании реакции снимают обогрев и реакционную смесь из аппарата центробежным насосом перекачивают в кристаллизатор (снабженный рамной мешалкой и приварной рубашкой), загружают активированный уголь, соляную кислоту из мерника, 1% раствор двухромовокислого калия. Затем ведут процесс нагрева реакционной смеси до температуры кипения растворителя. После разогрева реакционной смеси до 100°C и протекания процесса растворения, обогрев снимают и реакционную массу перекачивают центробежным насосом, где происходит горячая фильтрация. После фильтрования реакционная масса самотеком поступает в кристаллизатор, где охлаждается подачей воды в рубашку аппарата. При охлаждении до 20°C выпадает осадок гидрохлорида 2-бензилбензимидазола. Процесс перекристаллизации проводят еще два раза с использованием для перекристаллизаций маточных растворов от предыдущих перекристаллизаций. Вторая и третья перекристаллизации ведутся только с осветлением углем. После перекристаллизации осадок гидрохлорида 2-бензилбензимидазола направляют направляют на фильтрацию в барабанный вакуум-фильтр . Дибазол после сушки направляют на таблетирование и упаковку [9].

В настоящее время в промышленном синтезе Дибазола в качестве предшественника бензильного фрагмента используют не только фенилуксусную кислоту или ее нитрил, но также и ее амид (фенилацетамид), при этом во всех случаях пятичленный цикл формируется комбинацией фрагментов [4,7,9]

В постперестроечные годы субстанцию и лекарственные формы Дибазола производили многочисленные предприятия России и ближнего зарубежья, некоторые из них продолжают выпуск этой продукции и в настоящее время.

1.4 Биологическая роль Дибазола

Обладает гипотензивным, сосудорасширяющим действием, стимулирует функцию спинного мозга. Оказывает непосредственное спазмолитическое действие на гладкие мышцы кровеносных сосудов и внутренних органов. Облегчает синаптическую передачу в спинном мозге [1, 2, 14].

Иммуностимулирующая активность связана с регуляцией соотношения концентраций цГМФ (Циклический гуанозинмонофосфат) и цАМФ (Циклический аденозинмонофосфат) в иммунных клетках (повышает содержание цГМФ), что приводит к пролиферации зрелых сенсибилизированных T- и B-лимфоцитов, секреции ими факторов взаимного регулирования, кооперативной реакции и активации конечной эффекторной функции клеток [13, 14,11]. Снижает содержание свободного кальция в гладких мышцах, вызывая их расслабление; повышает синтез нуклеиновых кислот и белков, стимулирует иммунную систему (способствует образованию антител, фагоцитозу, синтезу интерферона). Активирует межнейронные контакты в спинном мозге. Обладает непродолжительным (2-3ч) и умеренным гипотензивным эффектом, хорошо переносится. Вызывает расширение (непродолжительное) мозговых сосудов и поэтому особенно показан при формах артериальной гипертензии, обусловленных хронической гипоксией мозга из-за местных нарушений кровообращения (склероз церебральных артерий) [4, 12, 15].



Глава 2. Методы определения препарата дибазол

2.1 Качественный анализ дибазола

Для качественного анализа Дибазола на подлинность, существует множество реакций. Наиболее практичной, дающей хороший аналитический эффект, считается реакция образования красно-серебристого осадка полийодида. Для начала определения подлинности препараты дибазола надо подготовить [17].

0,5 г порошка растертых таблеток и 10 мл воды. Порошок растворяют в воде и фильтруют. Фильтрат дает реакции подлинности. Для ампулированной формы препарата их раствор сразу применяем для анализа.

1.Образование полийодида

В 3-5 мл воды растворяют 0,01-0,02 г препарата, прибавляют 3 капли разведённой соляной кислоты, 2-3 капли 0,1 н. раствора йода и взбалтывают. Образуется красно-серебристый осадок полийодида состава:

Реакцию проводят при температуре не выше 25°.

2. Образование серебряной соли

Растворяют 0,05 г препарата в 5 мл воды и прибавляют 1,5 мл 25%-го раствора аммиака. Образующийся осадок отфильтровывают, к фильтрату, подкисленному азотной кислотой, прибавляют 1 мл 2%-го раствора нитрата серебра. Выпадает белый осадок.



3. Реакция окисления ванадатом аммония

В 1 мл хлороформа растворяют 0,01-0,02 г препарата, прибавляют 3-5 капель 1% раствора ванадата аммония в концентрированной серной кислоте и встряхивают. Слой хлороформа постепенно окрашивается в вишнёвый цвет.

4. Реакция с нитратом кобальта

К 0,01 г препарата прибавляют 3 капли 3% спиртового раствора нитрата кобальта. Образуется голубое окрашивание.

5. Реакция с концентрированной серной кислотой

К нескольким крупинкам препарата прибавляют 5-6 капель концентрированной серной кислоты. При этом образуется оксониевая соль, что вызывает появление ярко-жёлтого окрашивания, постепенно переходящего в кирпично-красное. От прибавления нескольких капель воды окраска исчезает.

6. Реакция с серной и азотной кислотами

Несколько крупинок препарата помещают в пробирку и прибавляют 2 мл смеси, состоящей из 1 мл концентрированной азотной кислоты и 9 мл концентрированной серной кислоты. Появляется красное окрашивание. Прибавляют по каплям при постоянном помешивании и охлаждении 5 мл воды. Окраска переходит в коричневую, жёлтую, а затем в оранжевую. При взбалтывании полученного раствора с 3 мл хлороформа хлороформный слой окрашивается в фиолетовый цвет.

7. Реакция с сульфатом меди и роданидом аммония

Крупинку препарата растворяют в капле воды и прибавляют по 1 капле 0,1н. раствора соляной кислоты, 3% раствора сульфата меди и 2% раствора роданида аммония. Появляется коричневый осадок.

8. Реакция осаждения основания дибазола

К водному раствору прибавляют раствор гидроксида аммония, выделяется основание дибазола, которое отделяют фильтрованием, а в фильтрате хлорид ион доказывают по реакции с нитратом серебра.

NH₄Cl+AgNO₃ = AgClv + NH₄NO₃

AgCl + 2NH₃*H₂O = [Ag(NH₃)₂]Cl + 2H₂O

2.2 Количественное определение Дибазола

Для количественного анализа дибазола существует несколько методов.

1. Неводное титрование Дибазола

Около 1 г (точная навеска) порошка растертых таблеток обрабатывают хлороформом 1 раз 15 мл и 3 раза по 5 мл. Хлороформные извлечения фильтруют в сухую колбу через фильтр, смоченный хлороформом. Хлороформ отгоняют до объема 1 мл, прибавляют 10 мл безводной уксусной кислоты и далее проводят определение прибавляют 5 мл раствора ацетата окисной ртути и титруют 0,1 н. раствором хлорной кислоты до голубовато-зеленого окрашивания (индикатор-кристаллический фиолетовый).

Параллельно проводят контрольный опыт.

1 мл 0,1 н. раствора хлорной кислоты соответствует 0,02447 г, которого в высушенном препарате должно быть не менее 99,0%. и которого должно быть 0,018-0,022 г, считая на средний вес одной таблетки (например 20мг)

.

2. Реакция образования серебряной соли

Около 0,015-0,03 г препарата растворяют в 1 мл воды (при анализе дибазола в жидких лекарственных формах объём раствора, содержащий 0,015-0,03 г препарата, упаривают на водяной бане до 1-1,5 мл), добавляют 5 мл 95% спирта, 1 мл 25% раствора аммиака, и 2-3 капли раствора нитрата серебра, взбалтывают и оставляют стоять в течении 10-15 минут. Фильтруют через небольшой фильтр, колбу и осадок промывают водой (по 1-2 мл на каждое промывание) до отрицательной реакции фильтрата на ион серебра (обычно на промывание расходуется 15 20 мл воды, большое количество воды может привести к частичному растворению осадка). Затем осадок с фильтром переносят в ту же колбу, прибавляют 1-2 мл азотной кислоты (плотность 1,2), слегка подогревают до растворения осадка, охлаждают, прибавляют 30 мл воды и титруют из полу-микропипетки 0,1 н. раствором роданида аммония (индикатор - железоаммониевые квасцы):

1 мл 0,1 н. раствора роданида аммония соответствует 0,02445 г дибазола.

3. Ацидиметрическое определение дибазола после выделения основания

К точной навеске одного порошка прибавляют 2 мл 0,1 н. раствора серной кислоты и по каплям 3% раствор перманганата калия в 0,5 н. растворе серной кислоты до стойкого розового окрашивания (на водяной бане при температуре 60°C). Избыток перманганата калия разлагают путём прибавления 1-2 капель 5% раствора щавелевой кислоты. Раствор количественно переносят в делительную воронку, добавляют небольшими порциями гидрокарбонат натрия до щелочной реакции на лакмус и основание дибазола извлекают хлороформом (3 раза по 15 мл) хлороформные извлечения фильтруют через безводный сульфат натрия, хлороформ удаляют, остаток растворяют в 2-3 мл спирта, добавляют 20 мл воды и титруют из полу-микропипетки 0,1 н. раствором соляной кислоты до розового окрашивания, индикатор - метиловый оранжевый (V₁ мл); 1 мл 0,1 н. раствора соляной кислоты соответствует 0,02447 г дибазола.

4. Прямая аргентометрия

К массе лекарственной формы, содержащей 0,001 г дибазола, прибавляют 0,5 мл ацетона и 1% раствора ацетата натрия, приготовленного на 1% растворе крахмала, 2 капли 5% раствора хромата калия и титруют 0,01 н. раствором нитрата серебра (в конце медленно, взбалтывая после прибавления каждой капли титранта) до устойчивого буроватого окрашивания.

1 мл 0,01 н. раствора нитрата серебра соответствует 0,001223 г дибазола.

5. Прямое алкалиметрическое определение дибазола.

0,15 г препарата (точная навеска) растворяют в 10 мл. К 5 мл раствора прибавляют 2 капли раствора фенолфталеина, 5 мл спирто-хлороформной смеси (1:1), нейтрализованной по фенолфталеину, и титруют 0,1 н. раствором едкого натра при взбалтывании до слабо- розового окрашивания водного слоя. 1 мл 0,1 н. раствора едкого натра соответствует 0,02447 г дибазола.

6. Фотометрические методы

Разработаны методики количественного определения дибазола и его лекарственных форм спектрофотометрическим методом по внешним образцам сравнения кислоте бензойной и фенолфталеину. Методика характеризуется, хорошей воспроизводимостью. Обоснованы оптимальные условия определения: растворитель - 0,1 М раствор кислоты хлористоводородной, аналитическая длина волны - 270 нм. Определены коэффициенты пересчета. Относительное стандартное отклонение разработанной методики для субстанции составило 0,004 [6, 8].

7. Высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ)

Высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ) - это метод колоночной хроматографии, в котором подвижной фазой (ПФ) служит жидкость, движущаяся через хроматографическую колонку, заполненную неподвижной фазой (сорбентом). Колонки для ВЭЖХ характеризуются высоким гидравлическим давлением на входе в колонку, поэтому ВЭЖХ иногда называют «жидкостной хроматографией высокого давления».

Приведем пример ВЭЖХ разработанной на кафедре фармацевтической и токсикологической химии, Иркутского государственного медицинского университета, под руководством профессора Е.А. Илларионова.

Для ВЭЖХ-анализа таблеток дибазола был выбран обращено-фазный вариант хроматографии. Использованный в работе полимерный сорбент ProntoSIL-120-5-C18 AQ не проявляет ионообменных свойств по отношению к дибазолу, что позволило получить симметричные хроматографические пики определяемого соединения [5, 6, 8].

Подвижная фаза состояла из двух элюентов. Элюент A: 0,2 M лития перхлорат - хлорная кислота (рН 2,8); элюент Б - ацетонитрил с линейным увеличением доли органического компонента 1000 мкл 5-100% (0-5 мин). Эти элюенты обладают высокой прозрачностью в коротковолновой области ультрафиолетового (УФ) спектра и не содержат УФ-поглощающих примесей, проявляющихся в виде «лишних» пиков на хроматограмме. Известно, что присутствие в подвижной фазе кислоты (рН 2,8) и высокое содержание ионов лития улучшает хроматографирование азотсодержащих лекарственных веществ. Таким образом, предложенная хроматографическая система является оптимальной для определения дибазола.

Методом остановки потока был записан УФ-спектр дибазола и определен его максимум поглощения. Спектр регистрировали во время хроматографического анализа после остановки потока вблизи максимума пика (интервал длин волн 190-360 нм, шаг 2 нм). В качестве базовой для дибазола выбрана длина волны 210 нм, близкая к длине волны максимального поглощения. Нормированный УФ-спектр дибазола приведен на рис. 1.

Рисунок 1. Нормированный УФ-спектр дибазола

Длины волн максимального поглощения и детектирования дибазола приведены в табл. 1.

Таблица 1

Длины воли максимального поглощения и детектирования дибазола

Определяемое соединение	лmax НМ	лmin НМ	лдет НМ
Дибазол	270,276	248,274	230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300

Спектральные отношения, рассчитанные как отношение площадей пиков, зарегистрированных при длинах волн лх и лбаз, приведены в табл. 2.

Таблица 2

Спектральные отношения для дибазола

Определяемое соединение	Спектральное отношение, R = Sx/S270
	230	240	250	260	280	290	300
Дибазол	0,750	0,478	0,421	0,619	0,524	0,005	0,000

Дополнительные длины волн используются для расчета спектральных отношений, применение которых существенно повышает надежность идентификации пиков на хроматограмме (рис. 2).

Рисунок 2. Хроматограмма (высокоэффективная жидкостная хроматография) стандартного раствора дибазола в метаноле 0,2 мг/мл

Время удерживания дибазола составляет 3,6 минут.

Количественное определение таблеток дибазола проводили методом внешнего стандарта. В качестве образца сравнения использовали фармацевтическую субстанцию дибазола, перекристаллизованную из спирта метилового, содержание основного вещества в которой не ниже 99,9%.

Линейность метода оценивали, анализируя раствор модельной смеси с различными концентрациями дибазола (рис. 3). Метод характеризуется хорошей линейностью с коэффициентом корреляции 0,9971 для дибазола в диапазоне концентраций 0,15-0,5 мг/мл.

Рисунок 3. Калибровочный график зависимости площади пика дибазола от концентрации

Найденные условия использованы для разработки методики анализа дибазола в таблетках.

На примере модельных смесей таблеток дибазола с тремя уровнями концентраций (от 80 до 120%) от заявленного количества в лекарственной форме проведена валидационная оценка разработанной методики (табл. 3). Данные табл. 3 свидетельствуют о пригодности предложенной методики.



Таблица 3

Результаты валидационной оценки методики идентификации и количественного определения дибазола в таблетках

Параметры	Критерии валидности	Результаты испытаний
Специфичность		Методика специфична
Пригодность хроматографической системы: Эффективность колонки Коэффициент ассиметрии пика	Не менее 2000 т.т. не более 2	3500 т.т. 1,12
Прецизионность: Сходимость Таблетки 0,02 г Воспроизводимость Таблетки 0,02 г	RSD ? 2,0% RSD ? 2,0%	RSD = 0,93% RSD = 1,62%
Правильность Таблетки 0,025 г	tвыч < tтабл (tтабл = 2,45), n = 7	tвыч = 1,9
Линейность результатов	r?0,990	r = 0,9988 y = 77,93x - 1,5143
Стабильность раствора	индивидуально	одни сутки

2.3 Другие методы исследования препарата Дибазол

1. Прозрачность препарата (в форме раствора для инъекций)

Определение прозрачности испытуемого раствора по ГФ 12, част 1 с 98 (ОФС 42-0051-07).

Испытание проводят в пробирках с притёртой пробкой из прозрачного бесцветного стекла диаметром 15мм. Для сравнения берут равные объёмы воды и испытуемой жидкости 5мл. При освещении электрической лампой матового стекла мощностью 40Вт, расположенной над образцами просматривается раствор перпендикулярно оси пробирок на чёрном фоне через 5 мин после приготовления. Испытуемую жидкость считают прозрачной если она по прозрачности не отличается от воды.

2. Цветность препарата (в форме раствора для инъекций)

Определение степени окраски испытуемого раствора проводят по ГФ 12 часть 1, с.93 (ОФС 42-0050-07).

В одинаковых пробирках из бесцветного, прозрачного, нейтрального стекла с диаметром 15-25 мм используют равные слои высотой 40 мм испытуемой жидкости и воды. Сравнивают окраску в дневном отражённом свете сверху вдоль вертикальной оси пробирок на матово-белом фоне. Испытуемую жидкость считают бесцветной, если её окраска не отличалась от воды.

3. Определение pH препарата (в форме раствора для инъекций)

Определение pH испытуемого раствора проводят потенциометрически в соответствии с ГФ 12, часть 1, с.89 (ОФС 42-0050-07) и она должна быть в пределах 2,8-3,3.

4. Определение механических включений в препарате (в форме раствора для инъекций)

Визуальный контроль проводят невооружённым глазом на чёрном и белом фоне при освещении лампой дневного света мощностью 60 Вт. При этом в растворе для инъекций механических примесей обнаружено быть не должно.

5. Определение номинального объёма в препарате (в форме раствора для инъекций)

Испытание проводят в соответствии с ГФ 11, выпуск 2 (Инъекционные лекарственные формы) или ГФ 12, выпуск 2 (Извлекаемый объем лекарственных форм для парентерального применения (ОФС 42-0127-09)). Согласно данной документации объём раствора, выбранного из сосуда шприцом после вытеснения воздуха и заполнения иглы не должен быть меньше номинального.

качественный количественный фотометрия дибазол

Глава 3. Анализ раствора для внутримышечного и внутривенного введения препарата «Дибазол»

Наш препарат «Дибазол» в виде раствора для инъекций, фирма производитель ОАО «Дальхимфарм» 1% 1 мл 10 ампул. Исследуем препарат и определим его подлинность.

Из всех возможных аналитических реакций, описанных нами в предыдущей главе для установления подлинности препарата «Дибазол» в виде раствора для инъекций, мы выбирали наиболее селективные и чувствительные, имеющие яркие аналитические эффекты, но в тоже время и лёгкие в исполнении, не требующих сложного оборудования.

Для начала проверяем упаковку, маркировку, срок годности препарата. Перед нами препарат «Дибазол» в виде раствора для инъекций 10 ампул по 1 мл 1% раствора действующего вещества в картонной упаковке. В каждую пачку вложена инструкция по применению и нож ампульный. Фирма производитель ОАО «Дальхимфарм». Данная фирма производит препарат под своим торговым названием как дженерик. Открытое акционерное общество «Дальхимфарм» один из крупных российских производителей готовых лекарственных средств расположенный в Дальневосточном Федеральном округе. Начало его работы положено в феврале 1939 года, когда Хабаровский химико-фармацевтический завод был единственным на Дальнем Востоке и Восточной Сибири. В настоящее время ОАО «Дальхимфарм», с филиалом в г. Москве, - современное фармацевтическое предприятие на котором трудится 1100 человек и которое входит в ТОП-20 российских производителей по товарообороту и в ТОП-5 по производству инъекционных растворов. Производственные мощности предприятия позволяют выпускать более 150 наименований лекарственных препаратов самого различного фармакотерапевтического действия. Это стерильные лекарственные средства большой и малой дозировки и нестерильные лекарственные средства. В ассортиментном перечне продукции более 80% составляют препараты госпитальной медицины, а 56% от общего выпуска входят в перечень ЖВНЛС. В соответствии с Программой развития фармацевтической и медицинской промышленности до 2020г., разработанной Минпромторгом России, на предприятии планомерно ведется работа по повышению квалификационного уровня сотрудников и техническому перевооружению производства, продолжается так же активная работа по расширению и обновлению перечня выпускаемой продукции по программе импортозамещения. Следовательно производитель не вызывает сомнений в качестве препарата. Поэтому в анализе в первую очередь попробуем определить является ли наш препарат оригинальным или фальсифицированным. Согласно инструкции по применению, каждая ампула содержит 10мг действующего вещества бендазол (2-(Фенилметил)-1H-бензимидазол)) в 1 мл раствора. Вспомогательные вещества: этанол (спирт этиловый) 95%, глицерол (глицерин); 0,1 М раствор хлористоводородной кислоты, вода для инъекций.

Проводим качественный анализ препарата. Для этого вынимаем ампулу из ячеечной упаковки. Встряхиваем ампулу, чтобы лекарство опустилось вниз, и надпиливаем в месте перехода от узкой части к широкой пилочкой для ампул ампулу по окружности. Ваткой, смоченной спиртом, протрём ампулу и отломим кончик в направлении от себя. Опустим иглу со шприцем на 5мл в ампулу, потянем поршень на себя и наберем лекарство, которое мы перельём в бюкс на 10мл с притёртой пробкой. Перед нами прозрачная бесцветная жидкость со специфическим запахом. Из бюкса выбираем шприцом 1мл препарата и переносим в пробирку. В которую добавляем 3мл воды и 3 капли разведённой соляной кислоты, 2-3 капли 0,1 н. раствора йода и взбалтываем. Образуется красно-серебристый осадок полийодида состава:



Не забываем что температура проведения реакции не выше 25°.

Для того что бы у нас не вышло ошибки с результатом проводим другую качественную реакцию на другую функциональную группу. Из бюкса выбираем шприцом следующие 1мл препарата и переносим в пробирку, к которой прибавляем 3 капли 3% спиртового раствора нитрата кобальта. Образуется голубое окрашивание.

Данная реакция говорит о том, что у нас в действующем веществе присутствует бендазол (2-(Фенилметил)-1H-бензимидазол).

Далее проверяем на вспомогательные вещества.

Выбираем шприцом следующие 1мл препарата и переносим в пробирку. Получим гидроксид меди (II), путем сливания растворов гидроксида натрия и сульфата меди (II). Прильем полученный осадок в нашу пробирку. Осадок гидроксида меди растворяется и образуется темно-синий раствор глицерата меди (II). У нас присутствует глицерин.

Выбираем шприцом следующие 1мл препарата и переносим в пробирку, куда добавляем три, четыре капли уксусного ангидрида и две три капли концентрированной серной кислоты. Слегка нагреваем. Чувствуем характерный фруктовый запах этилацетата. В последний 1мл раствора препарата перенесённого в пробирку добавляем 0.1М раствора нитрата серебра. Наблюдаем белый творожистый осадок хлорида серебра.

То есть мы можем сделать вывод, что проведя качественный анализ препарата перед нами препарат «Дибазол».

Переходим к количественному определению действующего вещества.

Не будем прибегать к сложному оборудованию физических методов анализа. Проведём простой метод прямой алкалиметрии. Возьмём из упаковки следующую ампулу, встряхиваем, чтобы лекарство опустилось вниз, и надпиливаем в месте перехода от узкой части к широкой пилочкой для ампул ампулу по окружности. Ваткой, смоченной спиртом, протрём ампулу и отломим кончик в направлении от себя. Опустим иглу со шприцем на 5мл в ампулу, потянем поршень на себя и наберем лекарство, которое мы перельём в коническую колбу на 50мл. Далее прибавляем 2 капли раствора фенолфталеина 5 мл спирто-хлороформной смеси (1:1), нейтрализованной по фенолфталеину. Затем титруем 0,1 н. раствором едкого натра при взбалтывании до слабо- розового окрашивания водного слоя (устойчивого в течении 30 секунд).

Действующего вещества ампуле на 5мл 1% р.р 0,05г

В 1мл содержится 0,01г. В п.2.7 305 приказа смотрим отклонения ±20.

0,01-100; х - 20

х = ±0,002

Следовательно, наши пределы [0,008-0,012]

На титрование пошло 2,1 мл гидроксида натрия = V_{рабочего раствора}.

Рассчитываем массу

m = T_{рабочего раствора/определяемому веществу} * V_{рабочего раствора} = 0,024473*2,1 =

= 0,0513933г

T_{рабочего раствора/определяемому веществу} = (N_{рабочего раствора} *M_{эквивалентную определяемого}

_{вещества})/1000 = (0,1*244,73)/1000 = 0,024473г/мл

1 мл 0,1 н. раствора едкого натра соответствует 0,02447 г дибазола.

Мы израсходовали чуть больше 2.1мл 0,1 н. раствора едкого натра.

0.02447 * 2.1 = 0.05016 г. (Содержание дибазола в ампуле)

0.05016/5 = 0.010032 г

что соответствует норме в допустимом отклонении [0,008-0,012]

Для определения других параметров нашего препарате, берём третью ампулу препарата вскрываем определяем номинальный объём. Объём раствора, выбранного из сосуда шприцом после вытеснения воздуха и заполнения иглы не должен быть меньше номинального. У нас он соответствует 1 мл. Далее определяем прозрачность. Испытание проводим в пробирках с притёртой пробкой из прозрачного бесцветного стекла диаметром 15 мм. Для сравнения в одну пробирку наливаем 1 мл воды во вторую 1 мл нашего препарата из шприца. Испытание проводим при освещении электрической лампой матового стекла мощностью 40Вт, расположенной над образцами просматривая раствор перпендикулярно оси пробирок на чёрном фоне через 5 минут после приготовления. Испытуемую жидкость считают прозрачной, если она по прозрачности не отличается от воды. Наш раствор прозрачен.

Далее сравниваем окраску обоих пробирок в дневном отражённом свете сверху вдоль вертикальной оси пробирок на матово-белом фоне. Испытуемую жидкость считаем бесцветной, если её окраска не отличалась от воды. Наш испытуемый раствор бесцветен.

Определяем механические включения в препарате. Пробирку с препаратом исследуем невооружённым глазом на чёрном и белом фоне при освещении лампой дневного света мощностью 60 Вт. При этом в растворе для инъекций механических примесей мы не обнаружили.

Определение pH испытуемого раствора проводим потенциометрически на приборе иономера ЭВ-74. Прежде чем определять значение рН, необходимо установить температуру исследуемого раствора. С этой целью нажимаем клавишу «t» и ручкой «Температура раствора» по шкале №1 устанавливаем стрелку прибора на значении, соответствующем температуре раствора. Для измерения рН нажимаем клавишу «рХ» и проводим предварительную калибровку стеклянного электрода по буферным растворам с точно известными значениями рН. (Буферные растворы готовятся из фиксаналов, прилагаемых к прибору). Вливаем исследуемый раствор в стакан, опускаем в него электроды и измеряем приблизительное значение рН. Для точного определения значения рН нажимаем клавишу того узкого диапазона измерений, в который входит приблизительное значение рН, и снимаем показание по шкале №2 или №3. При этом учитываем, что для диапазона -1-4 (шкала №2) показание стрелки уже соответствует значению рН. Наше значение pH=2,8, что соответствует норме.

Следовательно, мы можем сделать вывод, что наш препарат подлинный. И перед нами препарат «Дибазол» ОАО «Дальхимфарм» в виде раствора для инъекций. Качественные реакции с раствора йода и нитратом кобальта дают основания нам утверждать что наш препарат содержит действующее вещество бендазол (2-(Фенилметил)-1H-бензимидазол). Качественные реакции с гидроксидом меди, уксусным ангидридом и нитратом серебра, позволяют нам сделать вывод о содержании всех вспомогательных веществ заявленных в аннотации к лекарственному препарату. Количественное определение методом прямой алкалиметрии. Позволил нам сделать вывод, что у нас каждая ампула содержит по 1мл 1% раствора действующего вещества бендазола (2-(Фенилметил)-1H-бензимидазола), что так же соответствует количеству, заявленному в аннотации к лекарственному препарату.

Мы могли бы прибегнуть к более точным физическим методам анализа, например, ВЭЖХ или фотометрическому методу. Но данные методы требуют сложного оборудования и дорогих реактивов. Наши же методы позволят проводить анализ быстро, не требует сложного оборудования, аналитические эффекты фиксируются визуально. Проводить их можно в любой химической лаборатории оснащённой минимальным набором реактивов и химической посуды.

Заключение

В работе были рассмотрены история получения, строение, химические, физические свойства, а так же биологические функции препарата Дибазол. В соответствии с этим можно сделать следующие выводы:

1) С ростом числа людей страдающих гипертонической болезнью, значительно вырос спрос на медицинский препарат, снижающий артериальное давление. Самым эффективным на то время считался папаверин, который производился в ограниченном количестве и был достаточно дорогим. Все эти обстоятельства, заставили ученных химиков, приступить к поискам синтетического аналога. В результате исследований, был получен препарат Дибазол, который успешно прошел широкомасштабные исследования и клинические испытания.

2) Изучив строение дибазола можно сказать что: дибазол является производным иминдазола с бензойным радикалом. Наличие бензойного радикала обуславливает все свойства ароматического соединения с реакциями электрофильного замещения. Дибазол это гигроскопичный белый порошок, трудно растворим в воде, легко в спирте.

3) Ознакомившись с биологической ролью дибазола можно с уверенностью констатировать что: дибазол обладает сосудорасширяющим действием, стимулирует функцию спинного мозга. Вызывает расширение мозговых сосудов, поэтому показан при формах артериальной гипертензии.

4) Рассмотрев разные методы качественного и количественного анализа, можно сделать следующие выводы:

· из качественных методов наиболее практичная, дающая хороший аналитический эффект, эта реакция образования красно-серебристого осадка полийодида. Так же внимания заслуживают реакции дающие хорошие аналитические эффекты, реакция с нитратом кобальта, реакция окисления ванадатом аммония и другие рассмотренные в данной работе.

· из количественного определения наиболее чувствительный метод, дающий наиболее точное определение содержание дибазола в препарате даёт метод ВЭЖХ (Высокоэффективная жидкостная хроматография) другие рассмотренные методы можно применить, если по каким либо причинам нельзя провести метод ВЭЖХ.

5) При исследовании препарата «Дибазол» ОАО «Дальхимфарм» в виде раствора для инъекций мы можем сделать вывод, что наш препарат подлинный. И перед нами препарат «Дибазол» ОАО «Дальхимфарм» в виде раствора для инъекций. Качественные реакции с растворами йода и нитрата кобальта дают основания нам утверждать что наш препарат содержит действующее вещество бендазол (2-(Фенилметил)-1H-бензимидазол). Качественные реакции с гидроксидом меди, уксусным ангидридом и нитратом серебра, позволяют нам сделать вывод о содержании всех вспомогательных веществ заявленных в аннотации к лекарственному препарату. Количественное определение методом прямой алкалиметрии, позволило нам сделать вывод, что у нас каждая ампула содержит по 1мл 1% раствора действующего вещества бендазола (2-(Фенилметил)-1H-бензимидазола), что так же соответствует количеству, заявленному в аннотации к лекарственному препарату.



Глоссарий

№ п/п	Понятие	Содержание
1	Алкалиметрия	это метод аналитического характера, с помощью которого определяется количество свободных кислот или солей в щелочных соединениях.
2	ВЭЖХ	это метод колоночной хроматографии, в котором подвижной фазой служит жидкость, движущаяся через хроматографическую колонку, заполненную неподвижной фазой (сорбентом).
3	Дефлегматор	приспособление для разделения жидкостей при фракционной перегонке
4	Дженерик	лекарственное средство, продающееся под международным непатентованным названием либо под патентованным названием, отличающимся от фирменного названия разработчика препарата
5	Кожухотрубчатый теплообменник	устройство, в котором осуществляется теплообмен между двумя теплоносителями, имеющими различные температуры
6	ОАО «Дальхимфарм»	Открытое акционерное общество «Дальхимфарм» -- один из крупных российских производителей готовых лекарственных средств расположенный в Дальневосточном Федеральном округе.
7	Полимерный сорбент ProntoSIL-120-5-C18 AQ	Не подвижная фаза при хроматографии.
8	Раствора для инъекций	это жидкая лекарственная форма для парентерального введения
9	ТОП	верхние строчки рейтинга
10	Фальсифицированное лекарственное средство	лекарственное средство, не соответствующее требованиям фармакопейной статьи либо в случае ее отсутствия требованиям нормативной документации или нормативного документа.
11	Элюент	Подвижная фаза в хроматографии



Список литературы

1. Беликов, В.Г. Фармацевтическая химия. В 2 частях. Часть 1. Общая фармацевтическая химия: Учеб. для фармацевтических институтов и факультетов мед. институтов. -- М.: Высшая школа, 1993. - 432 с.

2. Викторов, М.М. Методы вычисления физико-химических величин и прикладные расчеты. - Л.: Химия, 1977. - 359 с.

3. Глущенко, Н.Н. Фармацевтическая химия: Учебник для студентов средних профессиональных учебных заведений / Н.Н. Глущенко, Т.В. Плетенева, В.А. Попков; Под ред. Т.В. Плетеневой. -- М.: Издательский центр "Академия", 2004. -- 384 с.

4. Гетероциклические соединения т. V / Пер. с английского В.С. Володиной, М.Я. Карпейского, Р.М. Хомутова; под ред. Н.К. Кочеткова. - М.: Издательство иностранной литературы, 1961. - 602 с.

5. Жебентяев А.И., Арзамасцев А.П. Фотометрия азотсодержащих лекарственных веществ с применением кислотных красителей (обзор литературы). // Фармация. - 1993. - №4. - С. 63-67.

6. Иноземцев П.О. Cпектрофотометрический анализ дибазола и его лекарственных форм. // - Иркутск; 2009. - С. 85.

7.Илларионова Е.А., Сыроватский И.П., Иноземцев П.О. Спектрофотометрическое определение бендазола. // Сибирский медицинский журнал. - 2009. -№8.- С. 42-44.

8. Иоффе, И.Л. Проектирование процессов и аппаратов химической технологии: Учебник для техникумов. - Л.: Химия, 1991. - 352 с.

9.Логинова, Н.В., Полозов Г. И. Введение в фармацевтическую химию: Учебное пособие - Мн.: БГУ, 2003.-250 с.