Кометаболизм ЭДТА и глюкозы у бактериального штамма LPM-4

Хелатирующие соединения. Строение и комплексообразование ЭДТА. Бактериальная деградация ЭДТА. Кометаболизм. Периодическое культивирование и его условия. Методика приготовления питательных сред. Вычисление энергетического выхода роста штамма LPM-4.

Рубрика Биология и естествознание
Вид дипломная работа
Язык русский
Дата добавления 15.12.2008
Размер файла 77,4 K

Отправить свою хорошую работу в базу знаний просто. Используйте форму, расположенную ниже

Студенты, аспиранты, молодые ученые, использующие базу знаний в своей учебе и работе, будут вам очень благодарны.

Согласно литературным данным, фермент первичной деградации ЭДТА (ЭДТА-монооксигеназа) является индуцебельным и его активность резко снижается в отсутствие ЭДТА [30].

Значения выхода клеток по массе и по энергии из ЭДТА были максимальны в контроле и составили 20,2% и 28,9% соответственно, а минимальны в варианте 3 и составили 17,1% и 24,4% соответственно (табл. 3.2.1.1). В вариантах 1 и 2 данные показатели мало отличались друг от друга.

Таблица 3.2.1.1

Показатели роста штамма LPM-4 при многократном внесении ЭДТА в среду

Показатели

Время внесения добавок ЭДТА

До посева

(вариант 1)

4 сутки

(вариант 2)

6 сутки

(вариант 3)

ЭДТА потребленный, г/л

0,94

1,26

1,68

Биомасса потребленная, г/л

0,190

0,444

0,662

Биомасса в день добавки, г/л

-

0,200

0,374

Биомасса, образованная из внесенного ЭДТА, г/л

0,190

0,244

0,288

Выход клеток по массе из ЭДТА,ЭДТА%

20,2

19,4

17,1

Выход клеток по энергии из ЭДТА, ЭДТА%

28,9

27,7

24,4

Из полученных данных можно сделать следующее заключение. Во-первых, культура сохраняет способность ассимилировать ЭДТА при дополнительном внесении ЭДТА в среду. Во-вторых, повторное добавление ЭДТА в среду приводит к увеличению биомассы, то есть запаса питательных компонентов среды достаточно для поддержания роста клеток. В-третьих, голоданием культуры по ЭДТА в течение одних суток привело к снижению активности фермента, ответственного за деградацию ЭДТА. И в четвертых, снижение показателей выхода клеток по массе и по энергии из ЭДТА в вариантах 2 и 3 очевидно связано с постепенным истощением питательной среды.

3.2.2. Исследование ЭДТА-индуцированной ассимиляции глюкозы штаммом LPM-4 в процессе длительного культивирования с добавлением глюкозы

Описание: культуру выращивали на среде, содержащей ЭДТА и глюкозу (вариант 4 - контроль). Потребление глюкозы в контроле началось только после потребления ЭДТА, т.е. на четвертые сутки, и закончилось на девятые сутки (рис. 3.2.2.1, приложение 10). При этом наблюдалось увеличение биомассы от 0,075 г/л до 0,507 г/л. Затем после потребления глюкозы в среду дополнительно внесли глюкозу (вариант 6). Ее ассимиляция началась сразу же и закончилась уже на 13 сутки роста культуры, при этом биомасса продолжала интенсивно расти, и прирост биомассы составил 0,295 г/л. На 13 сутки после потребления глюкозы еще добавили глюкозу (вариант 8).

На этот раз ее ассимиляция началась сразу же, как и в предыдущем варианте, но продолжалась дольше и практически закончилась на 22 сутки роста культуры.

Таблица 3.2.2.1.

Показатели роста штамма LPM-4 при многократном внесении глюкозы в среду

Показатели

Время внесения добавок глюкозы

До посева

(вариант 4)

9 сутки

(вариант 6)

13 сутки

(вариант 8)

21 сутки

(вариант 10)

Глюкоза потребленная, г/л

1,38

1,69

1,64

1,35

Биомасса максимальная, г/л

0,507

0,721

0,839

0,868

Биомасса, образованная из ЭДТА г/л

0,28

0,426

0,682

0,818

Выход клеток по массе из глюкозы, Глюкоза%

16,5

17,5

9,6

3,7

Выход клеток по энергии из глюкозы, Глюкоза%

20,6%

21,9

12.0

4,6

Прирост биомассы наблюдался, но незначительный и составил 0,157 г/л. При завершении ассимиляции глюкозы на 21 сутки роста мы еще добавили глюкозу. Ее потребление происходило очень медленно, а прироста биомассы не происходило. Максимальное значение биомассы, которое культура достигла за 30 суток культивирования, составило 0,851 г/л.

Выход клеток по массе и по энергии из глюкозы были максимальны в четвертом и шестом варианте и составили 16,5% и 20,6%; 17,5% и 21,9% соответственно, а минимальны в 10 варианте и составили 3,7% и 4,6% соответственно (табл. 3.2.2.1).

Таким образом, мы убедились еще раз, что ассимиляция глюкозы начинается только после полного потребления ЭДТА и приводит к увеличению биомассы. Кроме того, штамм LPM-4 сохраняет способность ассимилировать глюкозу при многократном ее введении. Несколько сниженная ассимиляция глюкозы в варианте 8 и очень медленная ее ассимиляция в варианте 10, по сравнению с контролем (вариант 4), а также незначительный прирост биомассы в этих вариантах объясняется тем, что в среде ужу отсутствуют питательные компоненты: азот, макроэлементы (такие, как фосфор, калий, сера), микроэлементы и витамины, необходимые для роста клеток. Низкие показатели выхода клеток по энергии в 8 и 10 вариантах говорят о том, что хоть глюкоза и потребляется, но синтеза биомассы не происходит.

3.2.3. Исследование способности штамма LPM-4 к переключению метаболизма от ассимиляции глюкозы к ассимиляции ЭДТА

Описание: культуру выращивали на среде, содержащей ЭДТА и глюкозу (вариант 4 - контроль), а после исчерпания глюкозы на девятые сутки роста добавляли ЭДТА (вариант 5). ЭДТА очень быстро потребился и уже на 11 сутки роста культуры ЭДТА в среде не был обнаружен (рис. 3.2.3.1, приложение 11). Биомасса значительно увеличилась и прирост ее на этот период составил 0,325 г/л, после чего наступила стационарная фаза.

Выход клеток по массе и по энергии из ЭДТА в контроле составили 22,8% и 32,6% соответственно, а в опыте 16,9% и 24,1% соответственно (табл. 3.2.3.1).

На 13 сутки к культуре, выращенной на глюкозе, добавили ЭДТА (вариант 7). Потребление ЭДТА происходило быстро и закончилось на 15 сутки роста (рис. 3.2.3.2, приложение 12). Прирост биомассы был небольшим, и составил за этот период 0.146 г/л.

Выход клеток по массе из ЭДТА в варианте 7 составил 9,2%, а по энергии 13,1% (табл.3.2.3.2).

При добавлении ЭДТА к 13-суточной культуре, выращенной в присутствии глюкозы (вариант 9), потребление ЭДТА произошло быстро и закончилось на следующие сутки (рис. 3.2.3.3 и приложение 13), однако прирост биомассы был незначителен. Выход клеток по массе из ЭДТА составил 6,6%, а выход клеток по энергии - 9,4% (табл. 3.2.3.3).

В итоге можно сделать следующее заключение. Во-первых, культура сохраняет способность к ассимиляции ЭДТА, добавленного на разные сутки роста штамма LPM-4 в присутствии глюкозы. Следовательно, клетки сохраняют способность к переключению метаболизма от ассимиляции глюкозы к ассимиляции ЭДТА даже после длительного потребления глюкозы.

Во-вторых, значения выхода клеток по массе и по энергии из ЭДТА с увеличением времени роста культуры уменьшаются, что, по-видимому, связано с истощением питательных компонентов среды. В-третьих, выход клеток по массе и энергии из ЭДТА и выход клеток по массе и энергии из глюкозы мало отличаются друг от друга.

Таблица 3.2.3.1.

Показатели роста штамма LPM-4 при добавлении ЭДТА или глюкозы к 9 суточной культуре, выращенной в присутствии глюкозы

Показатели

Добавки

Контроль

(вариант 4)

ЭДТА

(вариант 5)

Глюкоза

(вариант 6)

ЭДТА потребленный, г/л

1,23

1,92

-

Глюкоза потребленная, г/л

1,38

-

1,69

Биомасса максимальная, г/л

0,507

0,759

0,721

Биомасса, образованная

из ЭДТА г/л

0,28

0,434

0,426

Биомасса, образованная

из глюкозы, г/л

0,227

0,325

0,295

Выход клеток по массе из ЭДТА,ЭДТА%

22,8

16,9

-

Выход клеток по массе из глюкозы, Глюкоза%

16,5

-

17,5

Выход клеток по энергии из ЭДТА, ЭДТА%

32,6

24,1

-

Выход клеток по энергии из глюкозы, Глюкоза%

20,6

-

21,9

Таблица 3.2.3.2.

Показатели роста штамма LPM-4 при добавлении ЭДТА или глюкозы к 13-суточной культуре, выращенной в присутствии глюкозы

Показатели

Добавки

Контроль

(вариант 6)

ЭДТА

(вариант 7)

Глюкоза

(варианты 8)

ЭДТА потребленный, г/л

-

1,58

-

Глюкоза потребленная, г/л

1,69

-

1,64

Биомасса максимальная, г/л

0,721

0,845

0,839

Биомасса в день добавки, г/л

0,426

0,699

0,682

Биомасса, образованная из внесенного субстрата, г/л

0,295

0,146

0,157

Выход клеток по массе из ЭДТА,ЭДТА%

-

9,2

-

Выход клеток по массе из глюкозы, Глюкоза%

17,5

-

9,6

Выход клеток по энергии из ЭДТА, ЭДТА%

-

13,1

-

Выход клеток по энергии из глюкозы, Глюкоза%

21,9

-

12.0

Таблица 3.2.3.3.

Показатели роста штамма LPM-4 при добавлении ЭДТА или глюкозы к 21-суточной культуре, выращенной в присутствии глюкозы

Показатели

Добавки

Контроль

(вариант 8)

ЭДТА

(вариант 9)

Глюкоза

(вариант 10)

ЭДТА потребленный, г/л

-

1,57

-

Глюкоза потребленный, г/л

1,64

-

0,87

Биомасса максимальная, г/л

0,839

0,880

0,851

Биомасса в день добавки, г/л

0,682

0,777

0,818

Биомасса, образованная из внесенного субстрата, г/л

0,157

0,103

0,033

Выход клеток по массе из ЭДТА,ЭДТА%

-

6,6

-

Выход клеток по массе из глюкозы, Глюкоза%

9,6

-

3,8

Выход клеток по энергии из ЭДТА, ЭДТА%

-

9,4

-

Выход клеток по энергии из глюкозы, Глюкоза%

12.0

-

4,8

Таким образом, полученные результаты показывают, что штамм LPM-4 сохраняет способность к деградации ЭДТА при дополнительном внесении ЭДТА в среду, что приводит к увеличению биомассы. Также доказано, что ЭДТА-индуцированная способность штамма LPM-4 к ассимиляции неростового субстрата глюкозы является стабильной и сохраняется в течение длительного культивирования с подпиткой глюкозой. Снижение прироста биомассы с увеличением времени культивирования объясняется, по-видимому, истощением питательной среды. Показано, что неростовой субстрат, то есть глюкоза, в процессе длительного культивирования становится ростовым субстратом. Установлена способность бактерий к переключению метаболизма от ассимиляции глюкозы к ассимиляции ЭДТА в процессе длительного культивирования.

Заключение

В результате проведенных исследований установлено, что присутствие косубстрата (глюкозы) не оказывает влияния на деградацию ростового субстрата (ЭДТА) штаммом LPM-4.

При внесении глюкозы в среду до посева ее потребление началось после завершения деградации ЭДТА и сопровождалось увеличением плотности биомассы в два раза по сравнению с контролем. При внесении косубстрата в момент исчерпания ростового субстрата, индукция ассимиляции косубстрата требует длительной лаг фазы, вероятно, из-за недостатка энергии. Не обнаружено ассимиляции глюкозы при ее внесении в среду через 1-3 суток после потребления ЭДТА.

Величины выхода клеток по массе из ЭДТА и глюкозы (при внесении глюкозы до посева или на 1-3 сутки) мало различались и составили 22,4% и 19,9-21,4% соответственно. Однако, поскольку ЭДТА и глюкоза характеризуются различным энергосодержанием, более правильно сравнивать энергетический выход клеток из этих субстратов. Энергетический выход характеризует долю энергии субстрата, перешедшую в биомассу. Поскольку энергосодержание глюкозы выше, чем ЭДТА (значения составляют 1,6 и 1,4 соответственно), выход биомассы по энергии из ЭДТА был выше, чем из глюкозы и составлял 32%, тогда как выход клеток по энергии из глюкозы изменялся в пределах от 24,9 до 26,8 %.

Анализируя результаты второго этапа опытов, мы убедились, что культура сохраняет способность ассимилировать ЭДТА при дополнительном внесении ЭДТА в среду. Повторное добавление ЭДТА в среду приводит к увеличению биомассы, то есть запаса питательных компонентов среды достаточно для поддержания роста клеток.

Показано, что штамм LPM-4 сохраняет ЭДТА-индуцированную способность ассимилировать глюкозу при многократном ее введении. Несколько сниженная ассимиляция глюкозы по сравнению с контролем и незначительный прирост биомассы при длительном культивировании бактерий (в течение 1321 суток) объясняется тем, что в среде уже отсутствуют компоненты питательной среды, необходимые для роста культуры. Низкие показатели выхода клеток по массе и энергии при длительном культивировании говорят о том, что хоть глюкоза и потребляется, но синтеза биомассы не происходит.

Показано, что клетки штамма LPM-4 сохраняют способность к переключению метаболизма от ассимиляции глюкозы к ассимиляции ЭДТА в процессе длительного культивирования.

Результаты данного исследования важны для дальнейшей разработки нового биопрепарата по очистке сточных вод, который будет включать ЭДТА-разрушающий штамм LPM-4. Полученные данные помогут в выборе условий, оптимальных для деятельности штамма. Но нужно провести еще много работы, чтобы получить этот биопрепарат.

Выводы

1. Установлено, что кометаболизм ЭДТА и глюкозы у штамма LPM-4 не оказывает влияния на деградацию ЭДТА.

2. Показано, что ассимиляция глюкозы бактериальным штаммом

3. LPM-4 индуцируется только в процессе интенсивной деградации ЭДТА.

4. Обнаружено, что штамм LPM-4 сохраняет способность к деградации ЭДТА при дополнительном внесении ЭДТА в среду.

5. Доказано, что бактерии сохраняют способность к ЭДТА-индуцированной ассимиляции глюкозы в процессе длительного культивирования с многократным добавлением глюкозы.

6. Установлено, что штамм LPM-4 способен к переключению метаболизма от ассимиляции глюкозы к ассимиляции ЭДТА в процессе длительного культивирования в присутствии глюкозы.

Литература

1. Биологическая очистка сточных вод. http://www.rfbr.ru

2. Босоло Ф. Химия координационных соединений.- М.: Мир, 1966.-145с.

3. Kari F.G. Modeling the photochemical degradation of ethylenediaminetetraacetate in the river Glatt/ F.G. Kari, W. Giger// Environ.Ski Technol.- 1995.-V.29.-P.2814-2827.

4. Bucheli-Witschel M., T. Egli Environmental fate and microbial degradation of aminopolycarboxylic acids // FEMS Microbiol. Rev. - 2001. - V.25. - P.69 - 106

5. Gschwind N. Biologischer Abbau von EDTA in einem Modelwasser // Wasser Abwasser. - 1992. - V.133. - P.546 - 549.

6. Chistyakova T.I., Dedyukhina E.G., Satroutdinov A.D., Kaparullina E.N.,

Gavrish E.Yu., Eroshin V.K. EDTA- dependent bacterial strain.//Process Biochem. 2005. V. 40. N 2. P. 601-605.

7. Бек М. Химия равновесий реакций комплексообразования. - М.: Мир, 1973. 145с.

8. Арчаков А.И. Оксигеназы биологических мембран. - М.: Наука, 1983. - 120 с.

9. Ляхович В.В. Структурные аспекты биохимии монооксигеназ. - Новосибирск.: Наука, 1978. - 47 с.

10. Witschel M., Nagel S., Egli T. Identification and characterization of the two-enzyme system catalyzing the oxidation of EDTA in the EDTA-degrading bacterial strain DSM-9103 // J.Bacteriol. - 1997. - V.179. - P.6937 - 6943.

11. Lauff J.J., Steele D.B., Coogan L.A., Breitfeller J.M. Degradation of the ferric chelate of EDTA by a pure culture of an Agrobacterium sp. // Appl. Environ. Microbiol. 1990. V.56. P. 3346-3353.

12. Nцtermann B. Total degradation of EDTA by mixed cultures and a bacterial isolate // Appl. Environ. Microbiol. 1992. V.58. P. 671-676.

13. Chistyakova T.I., E.N. Kaparullina, E.Yu. Garvish, V.K. Eroshin. A novel-EDTA-degrading Pseudomonas sp. // World Journal of Microbiology and Biotechnology 2003 P.977-980

14. Foster J.W. Hidrocarbons as substrates for microorganisms.// Antonie van Leeuwenhock J. Microbiol. And Serol. 1962

15. Higgins I.J., Best D.J., Hammond R.C. New findings in methane-utilizing bacteria highlight their importance in the biosphere and their commercial potential// Nature (London). - 1980. - 286

16. Malashenco Yu.R. Syntabolism, the transformation of non-growth substrates up to biomass by obligate methane-oxidizing bacteria // 4th Int. symp. Microbial growth on C1- compounds (Minneapolis, Sept., 1983): Abstrs. - Minneapolis,1983. - Thes. 2-10

17. Малашенко Ю.Р., Соколов И.Г., Романовская В.А. Микробный метаболизм неростовых субстратов.- Киев. Изд-во “ Наукова думка” 1987

18. Современная микробиология. Прокариоты. Под редакцией Ленгелера Й., Древса Г.- М.: Мир 2005.

19. Ваккеров-Коузова Н.Д. Характеристика почвенных бактерий, трансформирующих азобензол.// Прикладная биохимия и микробиология. 2005, №2. М.: Наука.

20. Бабошин М. А. Кометаболизм флуорена культурами Rhodococcus rhodochrous и Pseudomonas fluorescens / Бабошин М. А., Финкельштейн З. И., Головлева Л. А. // Микробиология. - 2003. - Т. 72, N 2. - С. 194-198

21. Дзюбан А. Н., Косолапов Д. Б., Кузнецов И. А. Влияние промышленно-коммунальных стоков г. Череповца на функционирование бактериальных сообществ илов Рыбинского водохранилища // 11 Международный симпозиум по биоиндикаторам "Современные проблемы биоиндикации и биомониторинга" Сыктывкар , 17-21 сент.,2001 - С. 51-52 . Рус.; рез. англ.

22. Matthew F. Verce, Ricky L. Ulrich and David L. Freedman. Transition from Cometabolic to Growth-Linked Biodegradation of Vinil Chloride by a Pseudomonas sp. Isolated on Ethene.// Environ. Sci. Technol. 2001. V.35. P. 4242-4251.

23. Ленинджер А. Биохимия. Молекулярные основы структуры и функционирования клетки. - М: Мир. 1974 -957с.

24.Шлегель Г. Общая микробиология. М: Мир 1987. c. 194-197

25. Перт С.Дж. Основы культивирования микроорганизмов и клеток. - М: Мир. 1978. 331с.

26. bioengineering@yandex.ru, copyright 2003

27. Характеристики культур с подпиткой рекомбинантной Escherichia coli, содержащих аналог человеческого коллагена кДНК при различных удельных скоростях роста. http://www.biogene.ru/articles2.html

28. Гибридные системы биодеструкции с использованием биологически агрессивного химического реагента / Кузнецов А. Е., Сафронов В. В. // Сб. науч. тр. - Рос. хим.-технол. ун-т. , 2001 . № 179 .- С. 227-241.].

29. Минкевич И.Г. Материально-энергетический баланс и кинетика роста микроорганизмов.- Москва-Ижевск: НИЦ “Регулярная и хаотическая динамика”; Институт компьютерных исследований, 2005.-352с.

30. Satroutdinov A., Dedyukhina E., Chistyakova T., Witschel M., Minkevich I., Eroshin V., Egli T. Degradation of Metal-EDTA Complexes by Resting Cells of the Bacterial Strain DSM 9103. Environ. Sci. Technol. 2000, 34, 1715-1720

Приложение 1.

Таблица. Рост культуры на среде с ЭДТА (вариант 1)

Время культивирования, сутки

рН

Биомасса, г/л

ЭДТА, г/л

Аммоний, г/л

0

7,35

0,025

0,873

0

1

8,13

0,026

0,734

7,0

2

8,52

0,072

0,526

8,0

3

9,21

0,183

0

9,9

4

9,64

0,179

0

13,6

5

9,77

0,196

0

30,0

6

9,64

0,182

0

33,8

7

9,59

0,160

0

36,2

8

9,76

0,157

0

36,6

9

9,55

0,149

0

27,0

10

9,53

0,128

0

30,5

Приложение 2

Таблица. Рост культуры на среде с ЭДТА с добавлением глюкозы до посева бактерий (вариант 2)

Время культивирования, сутки

рН

Биомасса, г/л

ЭДТА, г/л

Глюкоза, г/л

Аммоний, мг/л

0

7,50

0,019

0,873

0,91

0

1

8,18

0,031

0,735

0,86

7,7

2

8,33

0,121

0,440

0,88

8,2

3

9,18

0,257

0

0,72

9,7

4

9,39

0,297

0

0,61

14,3

5

9,40

0,293

0

0,46

28,6

6

9,27

0,311

0

0,39

32,3

7

8,95

0,348

0

0,09

31,4

8

9,61

0,378

0

0

28,2

9

8,72

0,442

0

0

14,8

10

8,82

0,528

0

0

13,9

11

8,85

0,599

0

0

9,0

12

8,87

0,657

0

0

8,0

14

8,62

0,594

0

0

6,9

Приложение 3.

Таблица. Рост культуры на среде с ЭДТА с добавлением глюкозы на первые сутки роста (вариант 3)

Время культивирования, сутки

рН

Биомасса, г/л

ЭДТА, г/л

Глюкоза, г/л

Аммоний, мг/л

1

8,20

0,022

0,743

0,98

7,8

2

8,33

0,082

0,452

0,98

8,7

3

9,16

0,232

0

0,80

10,4

4

9,36

0,268

0

0,71

19,2

5

9,23

0,274

0

0,60

27,2

6

9,25

0,306

0

0,50

34,3

7

8,90

0,360

0

0,22

31,0

8

9,52

0,391

0

0

26,4

9

9,49

0,371

0

0

14,6

10

9,55

0,361

0

0

14,9

Приложение 4

Таблица. Рост культуры на среде с ЭДТА с добавлением глюкозы на 2 сутки роста (вариант 4)

Время культивирования, сутки

рН

Биомасса, г/л

ЭДТА, г/л

Глюкоза, г/л

Аммоний, мг/л

2

8,43

0,069

0,477

1,02

9,2

3

9,19

0,223

0

0,98

11,4

4

9,47

0,205

0

0,78

15,1

5

9,45

0,235

0

0,79

29,4

6

9,53

0,244

0

0,76

34,7

7

9,40

0,208

0

0,64

33,8

8

9,05

0,304

0

0,34

32,8

9

9,42

0,392

0

0,06

22,0

10

9,56

0,399

0

0

14,1

Приложение 5

Таблица. Рост культуры на среде с ЭДТА с добавлением глюкозы на 3 сутки роста (вариант 5)

Время культивирования, сутки

рН

Биомасса, г/л

Глюкоза, г/л

Аммоний, мг/л

3

9,64

0,183

1,06

13,2

4

9,62

0,201

0,95

15,9

5

9,65

0,199

0,95

34,8

6

9,77

0,196

0,93

34,4

7

9,75

0,165

0,89

32,3

8

9,64

0,188

0,86

31,0

9

9,37

0,211

0,83

21,3

10

8,57

0,362

0,34

12,5

11

9,09

0,413

0

10,7

12

9,.48

0,423

0

9,5

14

-

0,389

0

6,4

Приложение 6

Таблица. Рост культуры на среде с ЭДТА с добавлением глюкозы на 4 сутки роста (вариант 6)

Время культивирования, сутки

рН

Биомасса, г/л

Глюкоза, г/л

Аммоний, мг/л

4

9,60

0,179

0,98

18,1

5

9,67

0,197

0,98

30,9

6

9,81

0,199

0,96

37,5

7

9,75

0,142

0,99

34,2

8

9,75

0,168

0,98

36,2

9

9,65

0,146

0,94

27,9

10

9,62

0,145

0,92

26,9

Приложение 7

Таблица. Рост культуры на среде с ЭДТА с добавлением глюкозы на 5 сутки роста (вариант 7)

Время культивирования, сутки

рН

Биомасса,

г/л

Глюкоза,

г/л

Аммоний,

г/л

5

9,73

0,223

1,09

39,9

6

9,77

0,221

1,10

38,9

7

9,75

0,162

1,08

42,5

8

9,72

0,181

1,02

38,2

9

9,66

0,164

1,02

33,0

10

9,63

0,171

0,98

31,5

Приложение 8

Таблица. Рост культуры на среде с ЭДТА с добавлением глюкозы на 6 сутки посева (вариант 8)

Время культивирования, сутки

рН

Биомасса, г/л

Глюкоза, г/л

Аммоний, мг/л

6

9,64

0,227

0,78

47,1

7

9,75

0,179

0,77

44,2

8

9,72

0,193

0,72

41,6

9

9,67

0,166

0,75

36,8

10

9,73

0,149

0,71

35,6

Приложение 9

Таблица. Влияние добавок ЭДТА в среду на рост штамма LPM-4

Время

культиви-

рования,

сутки

Время внесения добавок ЭДТА

Контроль (до посева) (вариант 1)

4сутки

(вариант 2)

4, 6 сутки

(вариант 3)

ЭДТА,

г/л

Биомасса,

г/л

ЭДТА,

г/л

Биомасса,

г/л

ЭДТА,

г/л

Биомасса,

г/л

0

0,94

0,010

0,94

0,010

0,94

0,010

1

0,78

0,016

0,78

0,016

0,78

0,016

2

н/о

0,026

-

0,026

-

0,026

3

0,62

0,092

0,62

0,084

0,62

0,084

4

0

0,190

1,26

0,200

1,26

0,200

5

-

0,188

0,01

0,380

0,01

0,380

6

-

0,177

0

0,366

1,68

0,374

7

-

0,175

-

0,389

0,98

0,432

8

-

0,180

-

0,444

0,90

0,436

9

-

0,165

-

0,402

0,84

0,429

10

-

0,158

-

0,428

0,46

0,502

11

-

0,173

-

0,417

0,03

0,661

12

-

0,182

-

0,437

0

0,637

13

-

0,179

-

0,404

-

0,602

14

-

0,177

-

0,400

-

0,662

15

-

0,170

-

0,392

-

0,649

16

-

-

-

-

-

0,642

17

-

-

-

-

-

0,649

Приложение 10.

Таблица

ЭДТА-индуцированная ассимиляция глюкозы у штамма LPM-4 при многократном добавлении глюкозы в среду.

Время

культиви-

рования,

сутки

Время внесения добавок глюкозы

Контроль (до посева) (вариант 4)

9сутки

(вариант 6)

13 сутки

(вариант 8)

21 сутки

(вариант10)

ЭДТА, г/л

Глюкоза, г/л

Биомасса. г/л

Глюкоза, г/л

Биомасса. г/л

Глюкоза, г/л

Биомасса. г/л

Глюкоза, г/л

Биомасса. г/л

0

1,23

1,35

0,011

1,35

0,011

1,35

0,011

1,35

0,011

1

н/о

1,39

0,014

1,39

0,014

1,39

0,014

1,39

0,014

2

1,06

1,38

0,019

1,38

0,019

1,38

0,019

1,38

0,019

3

0,91

1,38

0,075

1,38

0,075

1,38

0,075

1,38

0,075

4

0

1,04

0,280

1,04

0,280

1,04

0,280

1,04

0,280

5

-

1,0

0,262

1,0

0,262

1,0

0,262

1,0

0,262

6

-

0,91

0,287

0,91

0,287

0,91

0,287

0,91

0,287

7

-

0,62

0,293

0,62

0,293

0,62

0,293

0,62

0,293

8

-

0,22

0,383

0,22

0,359

0,22

0,359

0,22

0,359

9

-

0

0,422

1,69

0,426

1,69

0,426

1,69

0,426

10

-

-

0,423

0,96

0,550

0,96

0,550

0,96

0,550

11

-

-

0,446

0,67

0,622

0,67

0,622

0,67

0,622

12

-

-

0,477

0,31

0,721

0,31

0,721

0,31

0,721

Время

культиви-

рования,

сутки

Время внесения добавок глюкозы

Контроль (до посева) (вариант 4)

9сутки

(вариант 6)

13 сутки

(вариант 8)

21 сутки

(вариант10)

ЭДТА, г/л

Глюкоза, г/л

Биомасса. г/л

Глюкоза, г/л

Биомасса. г/л

Глюкоза, г/л

Биомасса. г/л

Глюкоза, г/л

Биомасса. г/л

13

-

-

0,477

0,05

н/о

1,64

0,682

1,64

0,682

14

-

-

0,507

0

0,693

1,61

0,743

1,61

0,743

15

-

-

0,474

-

0,661

1,18

0,777

1,18

0,777

16

-

-

-

-

0,637

1,05

0,792

1,05

0,792

17

-

-

-

-

0,614

0,85

0,805

0,85

0,805

18

-

-

-

-

0,621

0,64

0,802

0,64

0,802

19

-

-

-

-

0,585

0,40

0,781

0,40

0,781

20

-

-

-

-

0,575

0,22

0,780

0,22

0,780

21

-

-

-

-

0,612

0,17

0,794

1,35

0,818

22

-

-

-

-

0,572

0,05

0,811

1,19

0,834

23

-

-

-

-

0,598

0

0,839

1,14

0,868

24

-

-

-

-

0,583

-

0,734

0,94

0,847

28

-

-

-

-

0,603

-

0,625

0,4

0,843

29

-

-

-

-

0,611

-

0,639

0,36

0,846

30

-

-

-

-

-

-

н/о

0,31

0,851

Приложение 11

Таблица. Ассимиляция ЭДТА 9-суточной культуры штамма LPM-4, выращенной в присутствии глюкозы

Время

культивирования,

сутки

Время внесения ЭДТА

Контроль (до посева) (вариант 4)

9 сутки (вариант 5)

ЭДТА, г/л

Глюкоза, г/л

Биомасса. г/л

ЭДТА, г/л

Биомасса. г/л

0

1,23

1,35

0,011

1,23

0,011

1

н/о

1,39

0,014

н/о

0,014

2

1,06

1,38

0,019

1,06

0,019

3

0,91

1,38

0,075

0,91

0,075

4

0

1,04

0,280

0

0,280

5

-

1,0

0,262

-

0,262

6

-

0,91

0,287

-

0,287

7

-

0,62

0,293

-

0,293

8

-

0,22

0,383

-

0,371

9

-

0

0,422

1,92

0,434

10

-

-

0,423

0,01

Н/о

11

-

-

0,446

0

0,682

12

-

-

0,477

-

0,710

Время

культивирования,

сутки

Время внесения ЭДТА

Контроль (до посева) (вариант 4)

9 сутки (вариант 5)

ЭДТА, г/л

Глюкоза, г/л

Биомасса. г/л

ЭДТА,

г/л

Биомасса. г/л

13

-

-

0,477

-

0,713

14

-

-

0,507

-

0,679

15

-

-

0,474

-

0,700

16

-

-

-

-

0,733

17

-

-

-

-

0,748

18

-

-

-

-

0,759

19

-

-

-

-

0,716

20

-

-

-

-

0,666

21

-

-

-

-

0,725

22

-

-

-

-

0,739

23

-

0,748

24

-

0,747

Приложение 12

Таблица. Деградация ЭДТА 13-суточной культуры штамма LPM-4,выращенной в присутствии глюкозы.

Время

культивирования,

сутки

Время внесения ЭДТА

Контроль

(вариант 6)

13 сутки

(вариант 7)

Глюкоза, г/л

Биомасса. г/л

ЭДТА, г/л

Биомасса. г/л

8

-

0,359

1,58

0,359

9

1,69

0,426

0,27

0,426

10

0,96

0,550

0

0,550

11

0,67

0,622

-

0,622

12

0,31

0,721

-

0,721

13

0,05

0,699

-

0,699

14

0

0,693

-

0,693

15

-

0,661

-

0,747

16

-

0,637

-

0,794

17

-

0,614

-

0,809

18

-

0,621

-

0,807

19

-

0,585

-

0,771

20

-

0,575

-

0,780

21

-

0,612

-

0,796

22

-

0,572

-

0,787

23

-

0,598

-

0,814

24

-

0,583

-

0,811

28

-

0,603

-

0,827

29

-

0,611

-

0,845

Приложение 13

Таблица. Ассимиляция ЭДТА 21-суточной культуры штамма LPM-4,выращенной в присутствии глюкозы.

Время

культивирования,

сутки

Время внесения добавок ЭДТА

Контроль

(вариант 8)

21 сутки

(вариант 9)

Глюкоза, г/л

Биомасса. г/л

ЭДТА, г/л

Биомасса. г/л

13

1,64

0,682

0

0,682

14

1,61

0,743

0

0,743

15

1,18

0,777

0

0,777

16

1,05

0,792

0

0,792

17

0,85

0,805

0

0,805

18

0,64

0,802

0

0,802

19

0,40

0,781

0

0,781

20

0,22

0,780

0

0,780

21

0,17

0,794

1,57

0,777

22

0,05

0,811

0,01

0,836

23

0

0,839

0

0,854

24

-

0,734

0

0,819

28

-

0,625

0

0,828

29

-

0,639

0

0,880


Подобные документы

Работы в архивах красиво оформлены согласно требованиям ВУЗов и содержат рисунки, диаграммы, формулы и т.д.
PPT, PPTX и PDF-файлы представлены только в архивах.
Рекомендуем скачать работу.