Исследование почвы на наличие яиц и личинок гельминтов

Размещено на http://www.allbest.ru/

Размещено на http://www.allbest.ru/

Исследование почвы на наличие яиц и личинок гельминтов

Введение

гельминт личинка аскарида угрица

Cанитарно-гельминтологические исследования - это неотъемлемый компонент комплексной оценки санитарного состояния очага / объекта. Лабораторный санитарнопаразитологический контроль является основным и часто единственным способом установить степень риска заражения населения возбудителями гельминтозов.

Эванс и Стеффенсон показали, что, хотя на фоне применения антигельминтных препаратов можно на время незначительно снизить уровень заболеваемости населения кишечными гельминтозами, в условиях риска реинвазии одного лечения недостаточно. Необходимы меры по охране окружающей среды в интенсивных очагах гельминтозов. В первую очередь это обеспечение населения доброкачественной питьевой водой, внедрение систем санитарной очистки населенных пунктов, улучшение мер личной и общественной гигиены.

При выборе объектов для санитарно-гельминтологического исследования следует учитывать, имеется ли потенциальная возможность их обсеменения инвазионным материалом. Например, бесполезно изучать обсемененность яйцами гельминтов участков почвы, плотно утрамбованных и постоянно облучаемых солнцем.

При санитарно-гельминтологических исследованиях определяют:

* наличие, вид и жизнеспособность пропагативных стадий геогельминтов;

* степень загрязнения объекта (общее количество возбудителей в единице объема или массы исследуемого объекта окружающей среды);

* степень обсемененности объекта (отношение числа положительных проб к числу исследованных проб).

Методы санитарно-гельминтологических исследований основаны на применении флотационных растворов солей разной концентрации. Флотационный раствор с более высокой удельной плотностью, чем у яиц гельминтов, позволяет им всплывать и концентрироваться в поверхностном слое.

Большое значение при выполнении санитарно-гельминтологических исследований имеет правильный отбор проб.

1. Отбор проб

Отбор проб почвы для санитарно-гельминтологических исследований производят: во дворах - с поверхности (1-3 см); на огородах, в садах, на полях орошения - с поверхности и с глубины 10-20 см. С каждого исследуемого объекта (пробной площадки) отбирается проба массой 200 г., состоящая из 10 точечных проб (по 20 г. каждая).

Точечные пробы отбирают методом конверта или любым другим способом с учетом того, что каждая проба должна представлять собой часть почвы, типичной для горизонтов или слоев данного типа. Пробы отбирают ножом, совком или шпателем, послойно. При необходимости отбор проб проводят из более глубоких (40-60 см) слоев почвы, также послойно.

Пробы помещают в контейнеры с крышками или пластиковые пакеты и маркируют с указанием места отбора, даты, глубины, характера исследуемого участка (в тени или на солнце, состав почвы, наличие растительности и т.д.).

Количество и площадь пробных участков на обследуемой территории устанавливают с учетом эпидемиологической значимости данного объекта и его общей площади.

Периодичность санитарно-паразитологического исследования почвы зависит от эпидемиологической значимости объекта.

Санитарно-гельминтологическое исследование проб почвы при возможности проводят в день доставки их в лабораторию. В остальных случаях пробы хранят в холодильнике при температуре около 5°C (почву без обработки хранят не более 1 месяца).

Во время хранения необходимо проводить регулярное (раз в неделю) увлажнение и аэрацию проб для предотвращения пересыхания, и развития личинок. Для этого пробы почвы извлекают из холодильника и оставляют на 3 ч при комнатной температуре, при потере влаги увлажняют, а затем вновь помещают в холодильник.

Если хранить пробы почвы необходимо длительное время (более месяца), применяют консервирующие средства - жидкость Барбагалло или 3%-ный раствор соляной кислоты, которые добавляют к пробе, предварительно поместив ее в стеклянный сосуд или кристаллизатор, и затем хранят пробу в холодильнике.

Перед началом исследования объединенную пробу почвы необходимо:

* очистить от посторонних объектов (корней растений, мелких камней, насекомых, угля и др.);

* растереть в ступке фарфоровым пестиком;

* просеять через сито с диаметром ячеек 1 мм.

2. Методы исследований

Исследование проб почвы на яйца гельминтов

Метод Романенко

Из объединенной пробы берут на исследование 4 порции почвы массой по 25 г., помещают их в центрифужные пробирки емкостью 250 мл и заливают 3%-ным раствором гидроксида натрия или калия (в соотношении 1: 1). Содержимое пробирок тщательно размешивают, отстаивают в течение 20-30 минут и центрифугируют в течение 5 минут при 800 об/мин. Надосадочную жидкость сливают, а почву промывают водой (от 1 до 5 раз в зависимости от типа почвы: для песчаных и супесчаных достаточно одной промывки, для глинистых, суглинистых, черноземных - от 2 до 5) до получения прозрачной надосадочной жидкости. После промывки к почве добавляют 1/3 объема пробирки насыщенного (плотность 1,38-1,40) раствора нитрата натрия. Полученную смесь тщательно размешивают и затем центрифугируют. Пробирки устанавливают в штатив, доливают тот же насыщенный раствор соли до уровня на 2-3 мм ниже краев пробирок и накрывают предметными стеклами. Чтобы исключить потерю поверхностной пленки между краем пробирки и краем предметного стекла, вначале оставляют зазор шириной не более 10 мм. В этот зазор с помощью пипетки вносят насыщенный раствор соли до его соприкосновения с нижней стороной стекла, которое затем осторожно передвигают до полного покрытия центрифужной пробирки. Через 20-25 минут стекла снимают, переворачивая нижней поверхностью вверх. На предметные стекла с поверхностной пленкой наносят 1-2 капли 30%-ного раствора глицерина, затем их накрывают гидрофильным целлофаном и микроскопируют. Для обнаружения яиц гельминтов препарат просматривают при увеличении х80, а для определения степени их развития или деформации - х400.

Для оценки результатов число яиц, обнаруженных в четырех порциях пробы, умножают на 10, получая показатель содержания яиц в 1 кг исследуемой почвы. Эффективность метода колеблется от 59,6 до 83,1%, в среднем составляя 73,0%.

Метод Васильковой и Гефтер

Из объединенной пробы берут 50 г. почвы, помещают в центрифужную пробирку емкостью 250 мл. Одновременно проводят обработку почвы из четырех проб. Отобранные навески заливают 3%-ным раствором щелочи (NaOH, KOH) или 1%-ным раствором стирального порошка без биодобавок в соотношении 1: 2 и выдерживают в течение 60 минут для размягчения почвы. Содержимое пробирок тщательно перемешивают в течение 5 минут, а затем центрифугируют в течение 5 минут при 800-1000 об/мин. Надосадочную жидкость сливают (при исследовании черноземной, торфяной почвы или илового осадка обработку щелочью повторяют, почву промывают от 1 до 5 раз, в зависимости от ее типа, до получения прозрачной надосадочной жидкости). К осадку добавляют насыщенный раствор нитрата натрия (удельная плотность 1,38-1,40) в соотношении 1: 2, тщательно перемешивают в течение 5 минут и центрифугируют в течение 5 минут при 800-1000 об/мин.

Эту процедуру повторяют 3 раза. После каждого центрифугирования раствор над уплотненным осадком сливают в отдельную емкость для дальнейшего фильтрования.

Раствор фильтруют через мембранные фильтры с диаметром пор 35 мм. С фильтра делают покровным стеклом соскоб осадка, помещают его в каплю 50%-ного раствора глицерина и микроскопируют.

сследование почвы на личинки гельминтов

Метод Бермана

Из объединенной пробы берут 20 г. почвы и помещают на металлическую сетку, которую устанавливают в аппарат Бермана. Систему закрепляют в штативе, наполняют теплой (45-50°C) водой, затем металлическую сетку с почвой помещают в воронку - так, чтобы нижняя часть ее соприкасалась с водой.

Воронку с почвой ставят в термостат при температуре 37°C. Личинки гельминтов, обладая термотропностью, мигрируют из почвы через сито в теплую воду и оседают на дно пробирки. Через 3-4 часа осторожно отсоединяют пробирку от воронки, сливают верхний слой жидкости, а осадок переносят в чашки Петри и микроскопируют в стереоскопическом микроскопе (при его отсутствии осадок центрифугируют, надосадочную жидкость сливают, затем осадок переносят на предметные стекла и микроскопируют).

Метод Супряги

В химический стаканчик помещают 10 г. почвы, заливают теплым (40°C) физиологическим раствором - так, чтобы он полностью покрывал пробу. Через 20 минут жидкость сливают в чашку Петри и исследуют под стереоскопическим бинокулярным микроскопом. По эффективности этот метод не уступает методу Бермана.

3. Определение жизнеспособности яиц или личинок гельминтов по внешнему виду

Яйца гельминтов микроскопируют вначале при малом, затем при большом увеличении. У деформированных и мертвых яиц гельминтов оболочка разорвана или прогнута внутрь, содержимое мутное, разрыхленное. Нежизнеспособные яйца содержат бластомеры разного размера, неправильной формы, которые часто сдвинуты к одному полюсу. Иногда встречаются аномальные яйца, которые, имея внешние изменения, развиваются нормально. У живых личинок аскарид мелкая зернистость имеется только в средней части тела, по мере их гибели она распространяется по всему телу, появляются крупные блестящие гиалиновые вакуоли, так называемые «нити жемчуга».

Для определения жизнеспособности зрелых яиц аскарид и власоглавов следует нагреть препарат до температуры не выше 37°C, чтобы вызвать активные движения личинок.

Жизнеспособность личинок аскарид и власоглавов удобнее оценивать после их высвобождения из скорлупы яйца, что достигается надавливанием на покровное стекло препарата препаровальной иглой или пинцетом.

У инвазионных личинок аскарид часто замечается чехлик, отслоившийся на головном конце, а у закончивших развитие в яйце личинок власоглавов на этом месте при большом увеличении обнаруживается стилет. У погибших личинок гельминтов независимо от их местонахождения (в яйце или вне его) можно заметить распад тела. При этом внутренняя структура личинки становится глыбчатой или зернистой, а тело - мутным и непрозрачным. В теле обнаруживаются вакуоли, а на кутикуле - разрывы.

Жизнеспособность незрелых яиц нематод следует определять во влажной камере (чашках Петри), помещая яйца аскарид в 3%-ный раствор формалина, приготовленный на изотоническом растворе натрия хлорида при температуре 24-30°C. Для определения жизнеспособности яиц власоглавов используют 3%-ный раствор соляной кислоты при температуре 30-35°C. Чашки Петри следует открывать 1-2 раза в неделю для лучшей аэрации и снова увлажнять фильтровальную бумагу чистой водой.

Наблюдения за развитием яиц гельминтов ведут не реже 2 раз в неделю. Отсутствие признаков развития в течение 2-3 месяцев свидетельствует о нежизнеспособности яиц. Признаками развития яиц гельминтов являются стадии дробления, затем деление содержимого яйца на отдельные бластомеры. В течение первых дней развивается до 16 бластомеров, которые переходят во вторую стадию - морулу и т.д.

Яйца анкилостомид культивируют в стеклянном цилиндре (высотой 50 см и диаметром 7 см), закрытом пробкой. Смесь из равных объемов стерильного песка, древесного угля и испражнений с яйцами анкилостомид, разведенную водой до полужидкой консистенции, осторожно наливают на дно цилиндра при помощи стеклянной трубки. В течение 1-2-суточного отстаивания в темноте при температуре 25-30°C из яиц выходят сформировавшиеся рабдитовидные личинки, а через 5-7 суток они становятся уже филяриевидными: личинки выползают вверх по стенкам цилиндра, где видны даже невооруженным глазом.

Определение жизнеспособности личинок анкилостомид и стронгилид

Метод Фюллеборна

Личинки анкилостомид и стронгилид культивируют на агаре в чашке Петри с добавлением животного угля. После выдерживания в термостате при температуре 25-30°C в течение 5-6 часов личинки расползаются по агару, оставляя за собой дорожку из бактерий.

4. Аскарида человеческая

Аскарида человеческая - возбудитель аскаридоза, антропоноза (резервуар - человек).

Аскарида - один из наиболее распространенных гельминтов, аскаридозом инфицировано порядка 1 млрд человек во всем мире.

Тело аскариды сильно вытянуто, постепенно сужается на концах, круглое в поперечном сечении. Аскариды раздельнополые. Самки крупнее самцов, имеют длину до 40 см; самцы - до 25-30 см. У самок задний конец прямой, у самцов - заострен и загнут на брюшную сторону. В полости тела находятся внутренние органы. Пищеварительная система хорошо развита. Выделительная система представлена одной кожной железой, находящейся в передней части тела аскариды. Нервная система состоит из окологлоточного нервного кольца и отходящих от него нервных стволов. Дыхательная и кровеносная системы у аскариды отсутствуют. Половая система имеет вид трубок разного диаметра.

Жизненный цикл. Аскарида - геогельминт, ее развитие происходит без смены хозяев. Яйца аскариды крупные, овальной формы, устойчивы к действию внешней среды. Они покрыты плотными оболочками, наружная оболочка имеет бугристую поверхность. Из кишечника человека яйца попадают в почву где формируется личинка. Такое яйцо с развитой личинкой называют инвазионным. Из почвы яйца через грязные руки, воду, овощи и фрукты попадают в кишечный тракт человека. Сквозь стенку кишечника они попадают в кровеносные сосуды и мигрируют по организму. Личинки с током крови проникают в печень, правое предсердие, желудочек сердца, а потом в легочную артерию и капилляры легочных альвеол. Они разрывают стенки капилляров и попадают в полость альвеол, бронхи и трахею. При откашливании личинки попадают в глотку.

Инвазионная форма - зрелое яйцо с личинкой.

Путь заражения человека. Алиментарный (через грязные руки, немытые фрукты и овощи, загрязненную воду и пищу).

Диагностика. Обнаружение яиц в фекалиях при микроскопировании. Обнаружение личинок в мокроте. Оплодотворенные яйца овальной формы с толстой многослойной оболочкой. крупнобугристая. Внутри яйца центральное положение занимает шаровидный бластомер. Размеры яйца: 50-70x40-50 мкм. Неоплодотворенные яйца сильно вытянуты. Яйцо заполнено полигональными желточными клетками. Размеры 50-100x40-50 мкм. Для обнаружения яиц целесообразно готовить большие мазки и использовать методы обогащения с использованием растворов нитрата натрия или аммония.

Профилактические мероприятия. Разъясняется необходимость мыть руки перед приемом пищи и после загрязнения их землей; употреблять в пищу только тщательно промытые и ошпаренные кипятком овощи, ягоды и фрукты, особенно редис и морковь, которые тесно контактируют с землей.

5. Власоглав

Власоглав. Возбудитель трихоцефалеза. Длина тела самки власоглава достигает 5,5 см, самца - 4-5 см. Тела: передний конец тела сужен и имеет вид тонкой нити, задний конец тела утолщен. В переднем, нитевидном, отделе тела размещен только пищевод; кишечник и органы половой системы расположены в задней части тела гельминта. Задний конец тела самца спирально закручен на вентральную сторону.

Яйца власоглава напоминают по форме лимон с пробочками на полюсах. Яйца светлые, прозрачные, длиной до 50 мкм.

Власоглав паразитирует только в организме человека. Промежуточного хозяина у власоглава нет. Оплодотворенная самка откладывает в кишечнике яйца, с фекалиями они попадают в почву. В яйце формируется личинка. Заражение человека происходит при проглатывании инвазионных яиц, содержащих личинки власоглава. В кишечнике человека под действием пищеварительных ферментов оболочка яйца растворяется, из него выходит личинка. Половой зрелости паразит достигает в кишечнике человека через несколько недель после заражения.

Инвазионная форма - зрелое яйцо.

Пути заражения человека. Заражение происходит перорально при употреблении загрязненных яйцами власоглава овощей, ягод, фруктов или другой пищи, а также воды.

Взрослый гельминт локализуется в нижних отделах тонкого кишечника (преимущественно в слепой кишке), верхних отделах толстого кишечника, червеобразном отростке. Паразитируя в толстом кишечнике, червь повреждает передним концом слизистую оболочку его стенки и питается кровью. При массовом заражении нарушается работа пищеварительного тракта, происходит потеря аппетита, появляются боли в животе, диарея.

Диагностика. Обнаружение яиц власоглава в фекалия, методы обогащения или приготовление мазков по методу Като. Взрослые гельминты могут быть обнаружены при колоноскопии. Яйца власоглава бочкообразной формы с толстой многослойной оболочкой, прозрачные. На полюсах яйца расположены пробковидные образования. Внутри яйца определяется мелкозернистое содержимое.

Профилактика. Соблюдения правил личной гигиены, тщательное мытье овощей, ягод и фруктов.

6. Кривоголовка

Анкилостомоз. Заражение: алиментарное - личинки вместе с овощами, ягодами и грязными руками заносятся в рот; активное парентеральное - личинки активно внедряются ч/з кожу, при ходьбе босиком по почве. Морфология паразита: Нематоды длиной 1-2 см бледно-розового цвета. Головной конец имеет ротовую капсулу с 4 хитиновыми зубцами у анкилостомы и 2 режущие пластинки полулунной формы у некатора. Раздельнополые. У самцов на хвостовом конце есть колоколовидное расширения кутикулы (половая бурса, или сумочка). Яйца: овальные, бесцветные, прозрачные, с закругленными концами, внутри 4-8 бластомеров (зародышевых клеток). В фекалиях, находившихся в тепле в течение суток в яйцах развиваются личинки.

Жизненный цикл: паразитируют в тонком кишечнике человека. Яйца выделяются с испражнениями. При попадании яиц в теплую, влажную рыхлую почву личинки развиваются в течение 10-15 дней и затем несколько месяцев они могут жить в почве. Личинки вместе с овощами, ягодами или грязными руками заносятся в рот. Личинки некатора, иногда и анкилостомы активно внедряются через кожу, при ходьбе босиком, лежания раздетым на траве (перкутанно). Проникнув в организм, личинки мигрируют по току крови в легкие, откуда через просвет альвеол и бронхов попадают в глотку и затем в 12-персную кишку, где превращаются во взрослую форму, прикрепляется к стенке и выделяет антикоагулянты и питается кровью. Могут менять места присасывания. Срок жизни анкилостомид 5-15 лет.

Клиническая картина: меняя места прикрепления появляются длительно кровоточащие ранки > анемия. В период миграции: недомогание, t, тошнота, кашель В хронической стадии: общая слабость, головные боли, головокружения, боль в животе, снижение аппетита, расстройство стула.

Лабораторная диагностика: при исследовании испражнений обнаруживают яйца. В результат вносят: общий анкилостомидоз, так как вид анкилостомиды определить по яйцам невозможно. Яйца анкилостомид обнаруживаются в фекалиях методами обогащения.

Профилактика: выявление и лечение больных. Не ходить босиком по почве.

7. Угрица кишечная

Стронгилоидоз. Заражение: алиментарное - поедая плохо обработанное мясо (чаще свиней).

Морфология паразита: Мелкая прозрачная нитевидная нематода, раздельнополая, длина до 2-3 мм. Обитает в тонком кишечнике человека, проникая в просвет кишечных крипт, а также желчных и панкреатических ходов. Каждая самка откладывает около 50 яиц в сутки. Из яиц еще в кишечнике выходят рабдитовидные (неинвазионные) личинки, передний конец тела тупой с четко выраженным ротовым отверстием, задний конец - заострен. Пищевод личинок имеет два характерных вздутия. Размер личинки - 0,2 мм.

Жизненный цикл может полностью или частично проходить во внешней среде или организме хозяина - человека. Рабдитовидные личинки, с испражнениями человека в почве, превращаются через 1-4 дня в филяриевидные (инвазионные) личинки, отличающиеся цилиндрическим пищеводом, который занимает половину длины тела, хвостовой конец раздвоен, длина тела достигает 0,6 мм. Далее личинки либо проникают в организм человека активным путем через кожу или проглатываются с грязными овощами и ягодами, либо достигают половой зрелости в почве, где размножается и проводит оставшуюся жизнь. Личинки, вылупившиеся и задержавшиеся в кишечнике на 24 часа могут превратиться в инвазионные и проникнуть через слизистую оболочку стенки кишки в кровеносные сосуды совершить миграцию (аутосуперинвазия).

Клиника в стадии миграции: ^ t, кожный зуд, крапивница, эозинофильные инфильтраты в легких. В хронической (кишечной) стадии: слабость, головные боли, поносы, боли в области живота, печени и желчного пузыря, отмечается похудание.

Лабораторная диагностика: на ранней фазе учитывают высокую эозинофилию крови. Микроскопия мокроты с целью обнаружения мигрирующих личинок. Обнаружение личинок в дуоденальном содержимом и рвотных массах и фекалиях.

Литература

гельминт личинка аскарида угрица

1. Новожилов К.А., Черникова Е.А. Актуальность и совершенствование санитарно-гельминтологических методов исследования почвы. Медицинская паразитология и паразитарные болезни. 2014; с. 58-60.

2. Романенко Н.А., Падченко И.К., Чебышев Н.В. Санитарная паразитология. Москва: Медицина; 2000.

3. Генис Д.Е. «Медицинская паразитология».

4. Павлович С.А. «Медицинская паразитология с энтомологией».

Размещено на Allbest.ru