Выделение и идентификация фенольных соединений из Echinacea purpurea

Размещено на http://www.allbest.ru//

Размещено на http://www.allbest.ru//

Министерство Образования Республики Беларусь

Белорусский Государственный университет

Биологический факультет

Кафедра физиологии и биохимии растений

Выделение и идентификация фенольных соединений из Echinacea purpurea

Курсовая работа

студентки 3 курса

Карасевич А.О.

Научный руководитель:

доцент, к.б.н. Найдун С.Н.

Введение

Растения издавна занимают важное место в жизни человека. Люди используют их в качестве пищи, строительного материала, но еще в древности человек заметил, что многие растения обладают целебными свойствами. И в наше время применение их в лечении не уменьшилось, даже наоборот, с каждым годом открываются новые активные вещества, содержащиеся в растениях, которые в дальнейшем могут использоваться в лечебных целях. Сейчас все чаще отдается предпочтение натуральным растительным препаратам, так как они менее токсичны и часто более эффективны, чем их синтетические аналоги. Также использование таких препаратов экономически более целесообразно, поскольку многие вещества в них входящие имеют сложную, разветвленную структуру, что сильно усложняет их синтез, а из растений их нужно лишь выделить, что сопряжено с меньшими финансовыми затратами.

Наличие целебных свойств растений определяется присутствием в них различных веществ, в том числе флавоноидов. Флавоноиды являются вторичными метаболитами растений, выполняя ряд важных функций, начиная с повышения жизнеспособности вплоть до обеспечения их окраски. Но кроме этого они обладают обширным спектром положительного воздействия на человеческий организм. Данные вещества уже находят применение в современной фармацевтике и медицине, что влечет за собой в перспективе увеличение масштабов исследований флавоноидов, выявление возможных отрицательных действий на организм и, вероятно, постепенным широким внедрением их в фармацевтическую промышленность.

На данном этапе исследований большое внимание уделяется поиску новых растений, содержащих различные группы флавоноидов, их подробному изучению. Одним из таких растений является эхинацея, которая в последние годы стала широко применяться для лечения и профилактики различных заболеваний, так как обладает многими целебными свойствами. Но такое ее повсеместное использование является не в полной мере оправданным, так как продолжаются исследования ее биохимического состава.

В связи с вышеизложенным, целью настоящей курсовой работы было выделение и идентификация фенольных соединений из семян эхинацеи пурпурной. Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

- проработать литературные данные о структуре, классификации и свойствах флавоноидов;

- изучить имеющиеся в отечественной и зарубежной литературе данные о биохимическом составе эхинацеи пурпурной;

- освоить методы выделения и идентификации флавоноидов из лекарственных растений.

флавоноид лечебный эхинацея

1.Обзор литературы

1.1 Особенности классификации и функции флавоноидов

1.1.1 Особенности строения флавоноидов

Наиболее многочисленный класс природных фенольный соединений составляют флавоноиды - вещества с дифенилпропановым скелетом. Структурными элементами молекул этих соединений являются два ароматических кольца А и В, содержащие различное количество фенольных гидроксилов и других заместителей и соединенные между собой пропановым (С3) мостиком, посредством которого в молекулах большинства флавоноидов образуется гетероцикл (Барабой,1976).

Флавоноиды привлекают внимание исследователей как физиологически активные вещества с разносторонним спектром действия. Термин «флавоноиды» по отношению к веществам с таким строением молекул был впервые введен в обиход английскими учеными Т. Гейссманом и Е. Генрейнером еще в 1952 году. Большинство флавоноидов имеет структуру молекул, получившую название флавона (Карабанов,1981).

Нумерация атомов в молекулах большинства флавоноидов начинается с гетероатома (кислорода) с переходом на кольцо А; в халконах, отличающихся отсутствием гетероцикла, - с углеродного атома, связанного с пропановым мостиком; в кольце В отдельная нумерация атомов (1', 2' и т.п.) начинается с атома углерода, связанного с основной частью молекулы (Барабой,1976).

Собственно флавоноиды - наиболее многочисленные соединения со структурой С6-С3-С6, в которых кольцо В соединено со вторым атомом углерода (рис. 1).

Рис.1. С6-С3-С6 структура флавоноидов.

В растительных клетках флавоноиды могут находиться как в свободном, так и в связанном состоянии. Связаны они чаще всего с сахарами (глюкоза, рамноза, ксилоза, арабиноза и др.) и называются гликозидами (от греческого «гликис» - сладкий). Свободные флавоноиды называются агликонами, т.е. лишенными сахара (от греческого «а» - частица отрицания и «гликис»). Если с агликоном связан сахар глюкоза, то такой гликозид называется глюкозидом.

С сахарами агликоны связываются или через атом кислорода (О-гликозиды), или же через атом углерода (С-гликозиды). Однако наличием только названных гликозидов не исчерпывается все богатство и разнообразие флавоноидов. Оно обуславливается еще и отсутствием других веществ, присоединенных к агликону, и типом химической связи, и местом присоединения. Основная группа связанных флавоноидов - это О-гликозиды. В зависимости от количества входящих в их молекулы сахаров и порядка их приспособления эта группа подразделяется в свою очередь еще на несколько подгрупп (Карабанов,1981) .

У различных агликонов одна или более гидроксильных групп могут соединяться с остатком сахара гликозидными связями, имеющими обычно в-конфигурацию. Исключение составляют L-рамнозиды и L-арабинозиды, гликозидная связь которых имеет б-конфигурацию. Флавоноиды, содержащие в молекуле моносахаридные, дисахаридные или трисахаридные остатки, называют монозидами, биозидами или триозидами соответственно. Соединения, в которых к двум из имеющихся гидроксильных групп присоединены моносахоридные остатки, являются бимонзидами (Гудвин,1986).

1.1.2 Локализация флавоноидов в растениях

Как правило, местом накопления связанных флавоноидов являются те растительные ткани и органы, которые отличаются наиболее высоким уровнем обмена веществ. С чем это связано? Дело в том, что взаимодействие агликонов с сахарами имеет важное значение в жизни растительного организма. Ведь гликозиды очень хорошо растворимы в воде и клеточном соке, обильно заполняющих вакуоли взрослых клеток. Благодаря этому они обладают более высокой подвижностью по сравнению с агликонами, активнее их ступают в различные биохимические процессы. В ряде случаев они «охотно» отдают свой сахар на различные нужды клетки. Словом, гликозиды нужнее всего там, где оживленнее протекают важнейшие жизненные процессы растительного организма.

Свободные флавоноиды (агликоны) чаще всего обнаруживаются в органах и тканях накопления - семенах, сердцевине деревьев, ягодах и др. В целом все семейство флавоноидов подразделяются в свою очередь на ряд групп: катехины, антоцианы, лейкоантоцианы, флавонолы, флавононолы, флавоны, изофлавоны, флавононы, халконы, дигидрохалконы, ауроны. Различия в свойствах этих групп обусловлены во многом степенью окисленности или востановленности трехуглеродной цепочки, связывающей кольца А и Б их молекул.

Обычные флавоноиды растворены в клеточном соке вакуолей, реже их можно найти в стенках клеток. Однако недавно в хлоропластах найдены многие флавоноидные агликоны и некоторые ферменты, в связи с чем хлоропласт считается сейчас первичным местом образования простейших флавоноидов. В последнее время установлено присутствие в хлоропластах разнообразных флавоноидных гликозидов и эфиров (Карабанов,1981).

1.1.3 Принципы классификации флавоноидов

Флавоноиды имеют С6-С3-С6 молекулярную группировку углеродного скелета, и их относят к веществам дифинилпропанового ряда. По структуре пропанового фрагмента (-С3-) флавоноиды разделяются на 14 классов (Табл. 1). Наличие оксигрупп в ароматических кольцах позволяет отнести их к фенольным соединениям.

Многообразие флавоноидов обусловлено не только структурными изменениями пропанового фрагмента, но и наличием различных радикалов в ароматической части молекулы - кольцах А и В, степенью гликозлирования, местом присоединения углеводных остатков и их природой, величиной окисных циклов сахаров, конфигурацией гликозидных связей и характером сочленения гликозидной части с агликоном (О-гликозиды, С-гликозиды). Кроме собственно флавоноидов в природе встречаются димеры, названные бифлавоноидами (Георгиевский,1990).

Катехины, лейкоантоцианидины, дигидрохалконы, флавоноиды и флавонолы не имеют окраски, все же другие классы флавоноидов представляют собой окрашенные соединения. Благодаря наличию оксиониевой группировки (содержащей четырехвалентный атом кислорода) весьма интенсивной и разнообразной окраской обладают антоцианидины. Именно их гликозиды (антоцианы) в большинстве случаев ответственны за яркую окраску цветов, ягод и плодов (Петров,1988).

Таблица 1. Классификация флавоноидных соединений.

	Класс	Основные представители
1.	Флавоны	Апигенин, Лютеолин
2.	Флавон-3-ол	Кемпферол, Кверцетин, Мирицетин
3.	Флаваноны (дигидрофлавоны)	Нирингенин, Бутин, Эриодиктоил
4.	Флаванон-3-ол (флаванонолы)	Фусцин, Дигидрокемпфертол, Таксифолин
5.	Флаван-3-ол (катехины)	Катехин, Галлокатехин
6.	Флаван-3, 4-диол (лейкоцианидины)	Лейкоцианидин, Лейкодельфинидин
7.	Антоцианидины	Пеларгонидин, Цианидин, Дельфинидин
8.	Халконы	Изоликвиритигенин, Бутеин
9.	Дигидрохалконы	Флоретин, Гидроксифлоретин
10.	Изофлавоны	Генистеин, Оробол
11.	Изофлаванолы	Подмаксетеин
12.	Ауроны	Сульфуретин, Ауреузидин
13.	Гомоизофлаваноны	Пунктатин
14.	3, 9-Дигидрогомоизофлаваноны	Дигидропунктатин

1.1.4 Закономерность распространения флавоноидов в растениях

Изучение распространения флавоноидов в растениях имеет важное значение для решения ряда задач, связанных с хемотаксономией, и поиска новых физиологических активных соединений.

Палагают, что флавоноиды являются неотъемлемой частью высших растений и участвуют в важных процессах обмена веществ. В настоящее время они выделены из водорослей, лишайников, различных видов мхов, доказано их наличие в грибах. Подробно изучено распространение флавоноидов в хвощах, плаунах, папаротниках и в ряде голосеменных и покрытосеменных растений.

В голосеменных растениях найдены почти все виды флавоноидов: флавоны, флавонолы, флавононы, лейкоантоцианидины, бифлавоноиды и изофлавоноиды, причем часто наблюдается сходство в их строении с флавоноидами папоротников (например, С-метилированные соединения, бифлавоноиды, С-гликозиды).

Некоторые семейства голосеменных растений содержат гликозиды кверцетина, кемпферола и изорамнетина, реже - гликозиды мерицетина.

Для двудольных растений отмечают наличие 6-, 8- и 2'-замещений, окисление халконов до ауронов, тригидроксилирование антоцианидинов в кольце В, О-гликозидирование и т.д. Степень изученности семейств двудольных растений различна. Усиленно исследовались семейства Бобовых, Сложноцветных, Розоцветных, Зонтичных, Крестоцветных, Рутовых, Гречишных, Пасленовых, Ивовых и др.

Флавоноиды однодольных растений менее изучены, чем двудольных. В них найдены флавоны (апигенин, лютеолин и их С- и О-гликозиды) и флавонолы (кверцетин, кемпферол и изорамнетин в виде гликозидов с рутинозой, глюкозой и глюкуроновой кислотой).

В высших растениях особенно часто встречается кверцетин. По данным J. B. Harbone, у однодольных почти также часто встречается кемпферол. Например, в литьях однодольных кемпферол обнаруживается у 26%, кверцетин - у 17%, в белых лепестках - соответственно у 81 и 17% видов. Это можно объяснить тем, что у однодольных немало видов с белой окраской лепестков (Клышев,1978).

1.1.5 Физиологические функции флавоноидов

Участие в процессах биологического окисления. Будучи одной из распространенных групп полифенолов, флавоноиды потенциально способны принимать участие в дыхании растений. На роль полифенолов как компонентов дыхательной системы растений впервые указывал В. И. Палладин (1908), назвавший эти соединения дыхательными хромогенами. Под действием окислительных ферментов дыхательные хромогены способны к образованию дыхательных пигментов (хинонных форм полифенолов), которые присоединяют водород дыхательного субстрата и тем самым восстанавливаются снова в дыхательные хромогены.

Наиболее эффективными участниками дыхательной системы среди полифенолов служат флавоноиды с орто-диоксигруппировкой, способные образовывать орто-хиноны. В модельных опытах установлено, что донором в водородной системе орто-дифенол: фенолоксидаза могут быть аскорбиновая кислота, никотиномидные нуклеотиды, аминокислоты, каротиноиды, восстановленный цитохром с и некоторые другие соединения.

Модельные опыты по изучению фенолоксидаз растений, широкое распространение в растительном мире фенольных соединений и окисляющих их ферментов способствовали признанию большинством исследователей возможности переноса водорода дыхательных субстратов на кислород воздуха с помощью системы полифенол: фенолоксидаза. Однако вследствие безуспешности попыток обнаружить сопряжение окисления с помощью этой системы с фосфорилинированием остается пока неясный вопрос, связано ли нормальное дыхание с постоянным участием этой системы.

Кроме дыхательных процессов флавоноиды могу участвовать во многих окислительно-восстановительных реакциях растительной клетки.

Способность реагировать с белковыми веществами считают очень важным свойством полифенолов. По-видимому, она лежит в основе их действия на ферменты. Связь молекул полифенола и белка может происходить через гидроксилы полифенолов и карбонильные группы белков (Запрометов, 1970). Возможны и другие варианты: например, хинонные формы полифенолов энергично вступают в реакции с аминными и тиоловыми группами белков.

Флавоноиды влияют на синтез белка, а также они воздействуют на хромосомный аппарат клетки, действуют на митохондрии.

Комплексы флавоноидов с белками могут иметь сложный состав и включать различные группы флавоноидов. Обнаружение подобных комплексов в физиологически активных частях растения (в зародыше семени) указывает на их важную биологическую роль.

Механизм действия флавоноидов на рост до сих пор не ясен, хотя все больше сторонников взгляда о влияниях их на гормональную систему ИУК: оксидаза ИУК. Полагают, что вещества с о-дифенольными группировками ингибируют активность оксидазы ИУК и тем самым способствуют ростовым процессам, а вещества типа монофенолов или метадифенолов стимулируют активность этого фермента, т.е. тормозят рост. По последним данным в ингибировании ИУК-оксидазы играют ведущую роль о-дигидроксилы в кольце А молекулы. Однако большинство экспериментальных данных о связи полифенолов с системой ИУК: оксидаза ИУК получено в опытах in vitvo и поэтому оставляют сомнения в действительности этих результатов для условий in vivo.

На данный момент многочисленные косвенные и немногие прямые данные, свидетельствующие о связи флавоноидов с репродуктивными процессами у растений. К косвенным относятся прежде всего данные о наибольшем содержании флавоноидных соединений и широкой амплитуде их онтогенетических изменений в генеративных органах. Есть много указаний на присутствие флавоноидов в цветках. Наличие флавоноидов в венчиках цветков обуславливает их яркую окраску, привлекающую насекомых, что имеет особое значение для опыления. Разнообразие тональности цветков создается за счет комплекса антоцианов и копигментов: флавонов, флавонолов, халконов и ауронов. В привлечении насекомых имеет значение не только окраска, создаваемая флавоноидами, но и, по-видимому, адсорбционные свойства этих растений.

Наличие флавоноидов в пыльце, возможно, связано со способами опыления растений.

С ранними данными Ф. Мёвуса о значении флавоноидов в определении пола растений согласуются сведения о зависимости содержания этих соединений от их пола. Например, у осины в мужских соцветиях к началу цветения больше антоцианов, чем у женских.

Интересный цикл исследований провел С. И. Пашкарь (1970), показавший связь фенольных соединений (включая флавоноиды) с мужской стерильностью у кукурузы и других растений. Автор выяснил, что при формировании цитоплазматической мужской стерильности в репродуктивных органах изменяется состав фенольных соединений, в том числе флавоноловых гликозидов, усиливаются окислительные превращения полифенолов, возрастает количество их хинонных форм.

Защитная роль флавоноидов заключается, по-видимому, прежде всего в их приспособительном значении к неблагоприятным для растений условиям. Одним из таких условий может быть ультрафиолетовая радиация, необходимая растению в нормальных дозах и губительная при ее избытке. Как указано выше, свет, особенно белый и синий, увеличивает интенсивность биосинтеза полифенольных соединений, т.е. веществ, поглощающих в ультрафиолетовой и близкой видимой областях спектра. О приспособлении растений к «обезвреживанию» излишней коротковолновой радиации косвенно свидетельствуют данные в том, что тепличные растения содержат меньше полифенолов, чем растения открытых мест, а солнечные листья богаче рутинном, чем теневые. Это подтверждает и локализация полифенолов в поверхностных слоях органов, чаще всего в покровных тканях.

Большое внимание привлекают флавоноиды (в числе других фенольных соединений) в связи с проблемой фитоиммунитета. На значение полифенольных соединений в приспособлении обмена веществ растений в условиях проникновения фитопатогенных грибов и бактерий указывают данные о большом содержании этих веществ у больных растений по сравнению со здоровыми, об увеличении количества флавоноидов при поражении грибом неустойчивых форм растений.

В чем же сущность защитного влияния полифенолов при инфицировании растений? Пытаясь ответить на этот вопрос, А. Вильямс изучал действие яблочного сока, содержащего полифенольные соединения, на развитие гриба Sclerotinia fructigena и обнаружил максимальную ингибирующую силу сока при его покоричневении. Последнее привело автора к предположению, что более эффективны продукты окисления полифенолов, чем их неокисленные формы. Автор подтвердил это экспериментально, показав, что при окислении полифенолов, особенно при их окислительной конденсации, возрастала их ингибирующая активность по отношению к комплексу пектинращепляющих ферментов гриба. Этому соответствуют данные об увеличении активности полифенолоксидазы и пероксидазы при поражении растений патогенными грибами, причем важную роль играет, по-видимому, полиморфизм энзиматических систем растения-хозяина, благодаря чему обеспечивается многообразие ответных реакций на проникновение инфекции.

По мнению Л. В. Метлицкого, процесс проникновения паразита и реакция растения-хозяина основаны на взаимной индукции этих двух организмов: при вторжении паразита под воздействием растения-хозяина из клеток паразита выходит индуктор фитоалексинов, которые в свою очередь оказывают губительное действие на паразита.

Способность высших растений к расщеплению бензольных колец и включение их осколков в состав разнообразных растительных метаболитов не оставляет сомнений о том, что флавоноиды используют растения как энергетический материал. Данные о наличии активной ФАЛ-лиазы во всех частях протоплазмы и параллельно идущих с самого начала развития процессах синтеза и распада флавоноидов подтверждают это.

Выступая в качестве источников энергии, флавоноиды, по-видимому, выполняют и некоторые регуляторные функции в энергетическом обмене растения. Есть сведения о стимулирующем действии флавоноидных кофакторов неустановленного строения, а также хлорогенной кислоты, (+) - катехина и кверцетина на скорость фотофосфорилирования хлоропластов.

В настоящее время доказано присутствие в выделениях растений некоторых флавоноидных соединений.

Способность растений выделять в окружающую среду фенольные соединения послужила основанием для предположения об аллелопатической роли этих веществ. Это подтверждают результаты изучения корневых выделений яблони: в их состав входит флоридзин, который угнетает рост растений, находясь в почве и вызывая «почвоутомление». При этом выделение в почву токсических для растения полифенольных соединений можно регулировать изменением минерального питания. В составе опада листьев различных деревьев нашли флавонолы и другие фенольные соединения, а водные экстракты этих листьев обладали сильными аллелопатическими свойствами.

Существует мнение, что выделение растениями фенольных соединений как бы способствует созданию более благоприятных условий для их существования. Например, при укоренении микоризы важную роль имеют флавоноиды, обнаруженные в ее экстрактах. Л. Л. Гарштя (1972) показал, что многие виды семейства зонтичных, содержащие значительные количества фенольных соединений, легко интродуцируются, что автор связывает с высокой аллелопатической активностью этих соединений (Минаева,1978).

Флавоноиды и окраска растений. Основные классы флавоноидов, оказывающие влияние на окраску растений,- это антоцианидины, флавонолы, халконы и ауроны.

Всего известно около 22 антоцианидинов, но широко распространены только три из них - пеларгонидин, дельфинидин и цианидин; они различаются лишь по числу гидроксильных групп в кольце B. В силу ионного характера молекулы как интенсивность, так и оттенок окраски антоцианидинов изменяется при изменении pH. В кислых растворах окраска изменяется от оранжево-красной (пеларгонидин) через синевато-красную (цианидин) до розовато-лиловой.

Вариации величины pH клеточного сока растений не столь велики и не играют решающей роли в регуляции окраски лепестков у тех растений, у которых она зависит в основном от антоциановых пигментов. Гораздо большее значение имеют явление копигментации и способность пигментов образовывать хелаты с металлами.

Антоцианы - это единственные флавоноиды, влияющие на окраску листьев; они вносят свой вклад в быстро изменяющуюся окраску молодых листьев, в последующую постоянную окраску и в появление у листьев осенних тонов. Почти во всех случаях участвующим в этих процессах пигментом является цианидин-3-глюкозид. Антоцианы обеспечивают красную окраску осенних листьев, жёлтая и бурая окраска обусловливается главным образом каротиноидами и танинами соответственно.

Окраска многих съедобных плодов определяется в основном антоцианами (Гудвин,1986).

1.1.6 Фармакологическая характеристика флавоноидов

Постоянно поступая в организм человека и животных с растительной пищей фенольные вещества оказывают длительное воздействие на все отделы пищеварительного тракта, а после всасывания в кровь - на сердечно-сосудистую систему, на почки и другие органы и системы. Из числа растительных фенольных соединений фармакологически наиболее изучены флавоноиды. Большинство растительных экстрактов, настоев, декоктов, отваров и иных средств народной медицины, в значительной части взятых на вооружение современной медицины содержат флавоноиды.

При естественном оральном поступлении в животный организм растительные флавоноиды подвергаются в пищеварительном тракте разнообразным превращениям: гидролизу с расщеплением полимерных структур на небольшие фрагменты и мономеры, с высвобождением агликонов из гликозидных соединений; окислению с образованием семихинонов и хинонов и дальнейшим окислением до углекислоты и воды; воздействию кишечной микрофлоры и т.п. При этом, с одной стороны, образуются продукты, обладающие повышенной активностью (семихиноны и хиноны), с другой стороны, всасывается и оказывает резорбтивное действие лишь часть поступившего в организм препарата; наконец, под влиянием начавшегося еще в пищеварительном тракте гидролиза и распада, поступающие энтеральным путем фенольные вещества очень быстро метаболизируются в организме и исчезают из него в течение нескольких часов или, реже, одних - двух суток. При парентеральном введении флавоноиды длительнее циркулируют в крови и оказывают на организм в целом более выраженное действие (Минаева,1978) .

1.1.7 Действие флавоноидов на организм животного и человека

Ранее других биологических свойств флавоноидов было обнаружено их действие на стенки кровеносных капилляров. Благоприятное влияние флавоноидов на состояние капиллярной системы обычно проявляется в снижении повышенной проницаемости капилляров и в устранении их ломкости и хрупкости (Минаева,1978). Укрепление сосудистой стенки и снижение ломкости капилляров выражено наиболее сильно у генинов и гликозидов флавоноидов. Существенно сказывается на капилляро-укрепляющей активности отсутствие в флавоноидных генинах оксигрупп в положениях 3 и 3'. Усиление действия наблюдается при переходе от агликонов к монозидам, а снижение - в ряду биозидов и триозидов (Георгиевский,1990). Способность к нормализации капиллярной системы организма доказана для флавонов и флавонолов, катехинов, лейкоантоцианидинов и флавононов. Влияние флавоноидов на кровеносные сосуды проявляется и в их спазмолитическом действии. Кроме того, флавоноиды оказывают нормализирующее влияние на лимфоток, с чем, по-видимому, согласуются их противоотечные действия. Наряду с действиями на сосуды, флавоноиды известны и как слабые кардиотонические средства: они способные уменьшать ритм сердечных сокращений и увеличивать их амплитуду. По другим данным, кверцетин, рутин и другие флавонолы восстанавливают силу утомленного или гиподинамического сердца, нормализуют пульс.

Флавоноиды могут воздействовать и на состав крови; так, сумма флавоноидов копеечника темного несколько стимулирует эритропоэз, увеличивает количество лейкоцитов. Обнаружено влияние 3-метоксилированных флавонолов на состояние форменных элементов крови: эти вещества препятстсвуют агрегации и седиментации клеток крови. Флавоноидные соединения влияют на состав крови и посредством снижения уровня холестерина, что наблюдали под действием кверцетина, лютеонина и других Р-витаминных препаратов.

Одним из ценных свойств флавоноидов является их положительное влияние на функцию печени: они усиливают желчеотделение, улучшают ее детоксицирующую способность по отношению к таким вещества, как барбитураты (Минаева,1978). Желчегонное действие у флавоноидов возрастает в ряду флаванолы < флавоны < халконы < флаваноны. Флаванолы в основном оказывают влияние на обезвреживающую функцию печени. Силу желчегонного действия и обезвреживающей функции печени определяют, как и в рассмотренных ранее видах фармакологического действия, количество и местоположения гидроксилов в агликонах в кольце В, а также природе сахарного компонента (Георгиевский,1990).

Флавоноиды обладают противоязвенным действием. В ряду флавоноидов наибольшей активностью обладают гликозиды флавонола, халкона и наименьшей - флаваноны. Флавоноиды, поступающие в организм с пищей, оказывают местное воздействие на слизистую оболочку пищеварительного трактаают влияние на обевреживающую ние, улучшают ее детоксицирующую спопобность по отношению к таким вещества, как и общее, резорбтивное воздействие на его моторику, секреторную и всасывательную функци. Присутствие в растельной пище (в плодах, овощах) флавоноидов придает ей терпкий, вяжущий вкус. На слизистые оболочки разных отделов пищеварительного тракта конденсированные полифенолы оказывают вяжущее действие, сходное с дубильным эффектом, и способствуют образованию тонкого слоя осажденного белка. Это умеряет раздражение слизистой и благоприятствует ликвидации поверхностных эрозий, изъязвлений. Противовоспалительное действие флавоноидов также способствует заживлению ран (Барабой,1976).

Для флавоноидных соединений характерно гипоизотеническое действие, обусловленное в одних случаях стимуляцией мочеобразовательной функции, в других - диуреза и мочевыделетильной функции почек в связи с усилением процесса клубочковой фильтрации и снижением канальцевой ресорбции. Гипоизотеническая активность флавоноидов кемпферонной группы зависит от природы сахарного компонента гликозидов в положении 3 (Петров,1988).

В последние годы большое значение имеет противовоспалительное действие флавоноидов, с чем, возможно, связаны их противоязвенные, ранозаживляющие, жаропонищающие и вяжущие действия.

Комплекс описанных свойств флавоноидов, как можно полагать, имеет значение и в проявлении их защитного действия, что показано для флавоноидов цитрусовых, рутина, катехинов и лейкоантоцианов.

Привлекает внимание и антимикробное свойство флавоноидов. Так, выявлено отрицательное влияние кверцетина на грамм положительные бактерии, флавонов и халконов - на стафилококка, установлено противовирусная активность полифенолов груши в отношении гриппа, штамма PR8, подобной же активностью обладают флаванолы годеции и рододендрона. Антимикробное действие отмечалось у антоцианов, изофлавонов и катехинов чая.

Флавоноиды обладают противоопухолевым действием, что является на данный момент одним из важнейших свойств этой группы веществ (Минаева,1978).

1.1.8 Возможности использования флавоноидов как лечебных средств

Широкий диапазон терапевтических возможностей флавоноидов позволяет считать их источниками средств общего действия на организм человека. Многолетний опыт народной медицины, давшей немало ценных рекомендаций по терапии заболеваний, указывает на то, что большая часть растений, используемых в восточной медицине, представлена видами с общим действие на организм: среди них немало сильнодействующих алкалоидноносных растений и обычно виды, содержащие разнообразные гликозиды, в том числе флавоноидные. Средства, содержащие флавоноиды, помимо мягкого действия на организм, обладают ценным свойством быстрой эвакуации из организма, отсутствием кумуляции. Кроме того, флавоноидные препараты практические нетоксичны. Если расположить большинство используемых в нашей медицине витаминных препаратов убывающей токсичности, то флавоноиды в нем займут последнее место.

Основное применение в медицине флавоноиды находят в качестве Р-витаминных или капилляроукрепляющих средств. Как известно проницаемость кровеносных капилляров патологически повышается при многих заболеваниях инфекционного характера, при капилляротоксикозах, поражениях нервной системы, при эндоартериите, тромбозе, болезни Адиссона, лучевых поражениях и других болезнях. У здоровых людей наблюдаются сезонные колебания проницаемости капилляров, повышение ее в весенний период, что особенно резко проявляется в северных широтах. Поэтому флавоноидные препараты необходимы не только для лечения заболеваний, но и профилактики сосудистых нарушений у здоровых лиц. Сейчас известно около 150 флавоноидных веществ, обладающих Р-витаминным действием, они относятся к группам катехинов, флавонолов, флавонов, халконов, флаванонов. В клиническом применении Р-витаминных препаратов еще много спорного, и, прежде всего, нет единого мнения относительно рекомендуемых доз.

Патологические побочные явления, сопровождающие инфекционные заболевания усугубляются приемом антибиотиков, значительно повышающих ломкость капилляров. Р-витаминные препараты в этих случаях способствуют нормализации сосудистой стенки, быстрейшему выздоровлению, улучшению функционального состояния нервной системы.

Широкие перспективы имеют флавоноидные препараты при лечении заболевании печени и желудочно-кишечного тракта благодаря желчегонному, противовоспалительму и антиязвенному действию.

Незаменимый препарат полифенолов как необходимые дополнительные компоненты к основным средствам лечения заболеваний: при дикумаринотерапии, лучевой терапии, при лечении токами индуктометрии. Прием флавоноидных препаратов показал хороший эффект. При кавернозном туберкулезе в послеоперационный период, при глаукоме, геморрагических ретинопатиях, при гиперфункции щитовидной железы. Большое значение могут иметь препараты флавоноидов в педиатрии: они оказываю положительное действие при выздоровлении детей, больных капилляротоксикозами, ревматизмом, геморрагическими заболеваниями.

Большой интерес исследователей вызывают флавоноиды как перспективные противоопухолевые средства. В отличие от средств, обычно применяемых в терапии новообразований, флавоноиды, обладающие антиопухолевой активностью, нетоксичны. Установлено достоверное стабилизирующее и дегенеративное влияние некоторых флавоноидов на опухоли разнообразной этиологии, а также их способность предотвращать метастазы при некоторых видах лимфосаркомы. Если расположить испытанные флавоноиды в ряд убывающей противоопухолевой активности, то соединения представятся в следующем порядке: лейкоантоцианы, халконы, флавонолы (причём агликоны действуют на солидные опухоли, а гликозиды - на асцитные), катехины.

Некоторые флавоноидные препараты обладают противоатеросклеротическим действием. Существует мнение, что в физико-химических механизмах старения большая роль принадлежит свободным радикалам. Поэтому с целью продления жизни можно с успехом использовать ингибиторы свободнорадикальных процессов- различные антиоксиданты,в числе которых могут быть флавоноиды. Антисклеротическое действие флавоноидов, по-видимому, связано также с их желчегонным эффектом: известно, что желчегонные средства благоприятно влияют на липидный обмен, увеличивая выведение холестерина из организма. В борьбе с преждевременным старением целесообразно вести поиск комплексных препаратов, в состав которых входят флавоноиды. Так, есть сообщение о благоприятном действии магний- флавоноидного комплекса при пневмосклерозе, эмфиземе лёгких, атеросклерозе, сердечной недостаточности и других патологических явлениях, часто сопровождающих старение организма.

Таким образом, этот краткий обзор свидетельствует о том, что флавоноидосодержащие растения и препараты из них благодаря многостороннему действию на организм должны найти применение в медицине не только как средства профилактики и лечения многих заболеваний, но и как возможные помощники в борьбе за долголетие (Минаева,1978).

1.2 Эхинацея и ее биохимическая характеристика

1.2.1 Эхинацея как целебное растение

Эхинацея относится к семейству сложноцветных. Это многолетнее травянистое растение высотой 60-100 см. Корневище короткое, многоглавое, усаженное многочисленными, тонкими корнями. Стеблей несколько, реже - одиночные, красноватые, голые или рассеянно жесткоопушенные, иногда ветвистые вверху. Листья шероховатые от короткощетинистого опушения, жесткие, неравнокрупнозубчатые. Розеточные листья продолговато-яйцевидные с оттянутой верхушкой длиной 7-24 см, длинночерешковые с 5 сильно выступающими жилками на нижней стороне. Стеблевые листья постепенно уменьшаются к верхушке стебля, очередные, черешковые, яйцевидно-ланцетные, остроконечные с 3 хорошо выраженными жилками.

Соцветия - одиночные корзинки, расположенные на длинных неветвистых цветоносах. Обертка - сплюснуто-полушаровидная трехрядная. Листочки обертки ланцетные, остроконечные, черепитчато расположенные, отогнутые наружу. Общее ложе корзинки выпуклое, удлиняющееся при плодах, полое, густо усажено прицветниками. Прицветники узколанцетные, с шиловидными красновато-коричневыми остроконечиями, превышающими по длине трубчатые цветы. Краевые цветы, числом 12-20, в корзинке - язычковые; срединные - трубчатые многочисленные, с чашечкой в виде многозубчатой воронки. Язычковые цветы пестичные, бесплодные, с недоразвитым пестиком, пурпурные, грязно-малиновые, редко белые, длиной 3-8 см с 2-3-зубчатым венчиком, опушенным снаружи отгибом. Трубчатые цветы обоеполые, темно-красные, с 5-зубчатым венчиком. Тычинки, числом 5, прикреплены к трубке венчика. Пестик с нижней одногнездной завязью и 2 рыльцами. Плод - четырехгранная серовато-бурая семянка, длиной 5-6 мм, суженная к основанию с многозубчатой окраиной наверху.

Цветет с июня до осени, плодоносит в августе-сентябре.

Растет в прериях и по песчаным берегам рек на востоке США. Культура возможна на Украине, Северном Кавказе и в более северных районах.

Используются соцветия (корзинки) и корни. В качестве лекарственного растения в основном выращивают эхинацею пурпурную (E. purpurea), эхинацею узколистную (E. angustifolia) и эхинацею бледную (E. pallida). В качестве декоративного растения наиболее популярна эхинацея пурпурная.

Все органы эхинацеи узколистной содержат эфирное масло: цветы - 0,13 -0,48%, трава - 0,8 - 0,32, корни - 0,04 - 0, 22% (свежее сырье); корни - эфирное масло (0,04 - 1, 3%).

Главной составной частью эфирного масла является нециклический сесквитерпен. Кроме того, корни содержат гликозид эхинакозид, ботаин (0,1%), смолу (1,9%), в составе которой найдены пальмитиновая, линолевая, церотиновая кислоты и фитостерины.

Эхинацея наиболее известна как иммуностимулирующее и детоксицирующее средство. В медицине некоторых стран эхинацея пурпурная применяется как антисептическое средство для наружного и внутреннего употребления. Внутрь принимают при инфекционных и септических заболеваниях, наружно - при карбункулах, абсцессах и инфицированных ранах. Препараты эхинацеи, благодаря ее способности стимулировать грануляцию тканей и активность гистиогенных и гематогенных фагоцитов, эффективны при ожогах I-III степени и тяжелых пролежнях. При ожогах также проявляется болеутоляющее действие эхинацеи. В эксперименте установлено, что препараты эхинацеи нетоксичны; в больших дозах иногда повышают слюноотделение. Сок из свежих соцветий ускоряет свертываемость крови, при местном применении - заживление экспериментальных ран (www.golkom.ru).

1.2.2 Биохимический состав эхинацеи

Эфирное масло эхинацеи. В составе масла, выделенного из корней эхинацеи пурпурной, обнаружено 31 вещество. Основными компонентами этого масла являются сесквитерпены, кариофен и фарнезен. Кроме них встречаютя a-пинен, b-пинен, b-фарнезен, мирцен, лимонен, цимол, туйен, гумулен, кариофилен эпоксид.

В эфирном масле наземной части эхинацеи пурпурной обнаружены: борнеол, борнилацетат, пентадека-8-ен-2-он, гермакрен-Д, кариофилен; выделены: ванилин, n-гидроксикоричная кислота, а в масле свежих растений гермакреновый спирт. Эфирное масло эхинацеи содержит в значительных количествах ненасыщенные углеводороды. Липофильная фракция эхинацеи, содержащая эфирные масла, проявляет более выраженную иммунную активность, чем гидрофильная фракция. 

Алкимиды ненасыщенных кислот. Для представителей рода сложноцветных довольно показательно наличие ненасыщенных алкиламидов. У эхинацеи пурпурной преобладают амиды 2,4-диеновой структуры и составляет 0,0004-0,039%. Эти соединения обуславливают жгучий вкус сырья и препаратов эхинацеи., а также обладают местноанестезирующими свойствами. Алкимиды корней эхинацеи пурпурной обладают противовоспалительным действием. Запатентованы иммуностимуляторы из эхинацеи, полученные путем экстракции с помощью воды и повторной экстракции липофильными растворителями. При этом активными ингридиентами являлись: полиненасыщенные С 10-14 изобутиламиды карбоновой кислоты,, а также С-2 карбонил с10-18 алкены и алкины. Липофильные экстракты в лабораторных условиях усиливали фагоцитоз гранулоцидов человека. Запатентован способ получения экстрактов из корней эхинацеи узколистной и пурпурной, обладающих иммуностимулирующей активностью и используемых для лечения гипертрофии простаты и воспалительных заболеваний, содержащих комплекс изобутиламида с циклодекстрином. Из растений эхинацеи пурпурной была получена паста, содержащая около 50% производного изобутиламида, используемая для лечения воспаления, отёков и нарушений иммунитета.

Другие липофильные вещества. Кроме ранее охарактеризованных соединений в липофильной фракции эхинацеи обнаружены фитостеролы. Прежде всего это b-систотерин, а также систотерин-3-b-D-глюкозид и стигмастерин.

В корнях эхинацеи пурпурной и узколистной содержится олеиновая, линолевая, церотиновая, пальмитиновая, миристиновая и льняная кислоты. В наземной части эхинацеи пурпурной найдены 13-гидрокси-октдека-9Z,11Е,15Z-триеновая кислота, производные лабдана. В растениях эхинацеи пурпурной и бледной обнаружены цианиды:цианидин-3-О-b-D-гликопиранозид и цианидин-3-О-6-малонин-b-D-гликопиранозид.

Смолы. В корнях эхинацеи пурпурной обнаружены смолистые вещества темнокоричного цвета со слабым специфическим запахом и неприятным, горько-соленым вкусом. Смола размягчается при температуре 35-40°С, а разжижается - при 95°С. Ацетон извлекает 1,48% смолы, бензол -1,05%, спирт -7,5-9,5%, хлороформ -1,68 - 1,89%, эфир -0,48--0,64%. Лучшим растворителем является спирт. Кислотное число смолы равно 37-69, число омыления -210, эфирное число-173-141. В смоле не установлено наличие эфирного масла и камедей.

Макро- и микроэлементы. В свежих корнях эхинацеи пурпурной идентифицированы следующие макро- и микроэлементы: кальций (776мг100г сырья), калий (314мг), алюминий (129мг), магний (117мг), хлор (76 мг) и железо (48).

В корнях эхинацеи пурпурной обнаружены карбонаты, сульфаты, хлориды, фосфаты и силикаты, а также катионы кальция, калия, магния и железа.

В корнях эхинацеи пурпурной и узколистной обнаружены калий и кальций, а из микроэлементов: молибден, селен, серебро, кобальт, никель, цинк, барий, бериллий, ванадий и марганец.

Уровень содержания микроэлементов у эхинацеи пурпурной выше, чем у других видов (www.refworld.ru).

2.Объект и методы исследования

2.1 Объект исследования

Объектом исследования была выбрана Echinacea purpurea.

Эхинацея пурпурная (Echinacea purpurea) - многолетнее травянистое растение семейства астровых (сложноцветных). Стебель прямой, 50-150 см. Листья простые, овально- или линейно-ланцетные. Цветы мелкие, в больших отдельно размешенных корзиночках. Плод - семянка. Цветет в августе-октябре. Используют корни, заготовленные осенью или рано весной, и соцветия, которые собирают во время цветения.

Корни эхинацеи содержат гликозид, эхинокозид, бетаин, фитостерины и смолы, в состав которых входит пальмитиновая, линолеевая, циротиновая и другие кислоты. Растение содержит также эфирное масло, соединения калия, магния, железа и алюминия.

Препараты эхинацеи стимулирующе воздействуют на центральную нервную систему. Эхинацея эффективна при общем сепсисе, параметритах, разных формах воспалительных процессов, при физическом и нервном истощении, при острых и хронических инфекционных заболеваниях, способствует также заживлению ран, ожогов и язв.

2.2 Реактивы, использованные в работе

Для проведения экспериментальной работы были использованы следующие реактивы:

этиловый спирт-96%,-70%,-30%

ледяная уксусная кислота

н-бутанол

изопропанол

бензол

муравьиная кислота

йод металлический

цинковая пыль

концентрированная соляная кислота

реактив Фолина-Дениса (смесь фосфомолибденовой и фосфовольфрамовой кислот )

2.3 Экспериментальные процедуры

2.3.1 Приготовление водно-спиртовых экстрактов

В дальнейшем был получен экстракт Echinacea purpurea. 1 грамм измельченного до порошкообразного состояния сырья заливали 10 мл 96%-м раствором этанола, Полученный экстракт на водяной бане доводили до кипения, а затем настаивали в течение суток. Затем раствор отфильтровывали. То же самое проделали с 70%- и 30%-м раствором этанола.

2.3.2 Анализ водно-спиртового экстракта.

Проведение качественных реакций.

Для определения наличия флавоноидов в растительном экстракте использовали:

1. Пробу Синода (цианидиновая проба). Реакция основана на способности окисленных форм флавоноидов восстанавливаться водородом до антоцианидинов в момент выделения. В кислой среде образуются оксониевые соли, окраска которых зависит от структуры флавоноида. В каждую пробирку к экстрактам добавляли 0,03 - 0,05 г цинковой пыли и 3 капли хлористоводородной кислоты, нагревали на водяной бане до кипения- растворы приобретали розовый оттенок (наличие флавоноидов ).

2. В присутствии реактива Фолина-Дениса (смесь фосфомолибденовой и фосфовольфрамовой кислот), фенолсодержащие соединения дают синюю окраску. Окраска основана на образовании вольфрамовой и молибденовой сини и имеет максимум поглощения при 725-750 нм. Окраска устойчива и может быть использована для количественных определений.

Тонкослойная хроматография

Этот вид хроматографии имеет некоторые преимущества перед бумажной хроматографией, а именно: 1) более высокая чувствительность метода; 2) быстрота проведения анализа; 3) устойчивость хроматограмм к действию агрессивных проявителей и нагреванию; 4) в ряде случаев более легкая десорбция вещества; 5) удобство препаративного разделения.

Существует целый ряд растворителей применяемых в ТСХ. Состав их весьма разнообразен. Из липофильных растворителей используют бензол, толуол, хлороформ, сочетая их со спиртами и кислотами. При хроматографии на полиамиде широко используется система, содержащая в качестве основного компонента этилацетат.

Проявление хроматограмм производят в видимом или в УФ-свете до и после обработки различными реактивами. Из различных реактивов, применяемых для обнаружения флаваноидов, наиболее часто используют соли диазония соли металлов, особенно 25% водный раствор основного ацетата свинца и 10% раствор хлористой сурьмы в хлороформе, реактив Бенедикта, щелочи и кислоты, а также пары йода.

При проведении ТСХ пробы наносили в виде раствора с растворителем (бутанол:уксусная кислота:вода - 4:1:5, бутанол:уксусная кислота:вода - 40:12:28, изопропанол:муравьиная кислота:вода - 2:5:5, уксусная кислота:бензол - 1:1), для того, чтобы хроматографируемые соединения имели бы низкие значения Rf. Растворы проб наносили в виде пятен на хроматографические пластинки посредством микро- и самозаполняющихся пипеток известной емкости. Концентрация пробы в растворе составляла 0,01 или 1·10-2 . Объем нанесенной пробы подбирали в зависимости от чувствительности обнаружения и он составлял 10 мкл, хотя иногда наносят и большие количества. Рекомендуется наносить как можно меньшее количество пробы; четкость разделения при этом увеличивается, а форма нанесенных пятен приближается к идеально круглой. Пробу наносили на расстоянии 1,5?--?2 см. от нижнего края хроматографической пластинки. Расстояние между нанесенными пробами составляло от 1,5 до 2 см.

3.Результаты и их обсуждение

Качественный состав флавоноидов Echinacea purpurea изучали с помощью общепринятых методов и приемов фитохимического анализа.

Экстрагирование проводили следующим образом:

Учитывая растворимость агликонов и гликозидов флавоноидов в спирте, проводили экстракцию флавоноидов из сырья 10мл 30%, 70%, 96% этанола. Спиртовое извлечение исследовали на наличие флавоноидов. Проводили качественный и количественный анализ.

На первом этапе исследования проводили анализ полученных водно-спиртовых экстрактов на наличие флавоноидов используя цианидиновую реакцию (проба Синода), а также реакцию с применением реактива Фолина-Дениса.

Элюирование зон этанолом и проведение антодианидиновой реакции (Mg+соляная кислота)

Реакция (+)	Реакция (-)
Окрашивание: Оранжево-красное - флавоны Красное - флавонолы Малиново-красное - флаваноны	Изофлавоны, куместаны, халконы, ауроны, кумарины, фенолокислоты
Полосы поглощения в УФ-области
275-290 300-330	флаваноны	255-275 изофлавоны 300-330 плечо
250-270 330-350	флавоны	285-295 изофлаваны 210-230 кумарины
250-270 330-390	флавонолы	310-350 230-240 коричные кислоты 290-330

В ходе проведенных исследований было установлено отсутствие окрашивания в экстрактах эхинацеи пурпурной, что может свидетельствовать о наличии в них изофлавонов либо кумаринов.

Дальнейшее исследование наличия фенольных соединений производили путем изучения спектров поглощения анализируемых экстрактов (рис.1).

Рис.1. Спектры поглощения водно-спиртовых экстрактов Echinacea purpurea:

1 - 96% спиртовой экстракт;

2 - 30% водно-спиртовой экстракт;

3 - 70% водно-спиртовой экстракт.

Как видно из данных представленных на рис.1 спектры поглощения экстрактов существенно отличаются как по интенсивности, так и по имеющимся пикам.

Следующим этапом наших исследований было исследование наличия фенольных соединений в полученных экстрактах с применением хроматографических методов (ТСХ и масс-спектрометрии). Данные представлены на рис.2 и 3.

Рис.2. Разделение водно-спиртовых экстрактов Echinacea purpurea в тонком слое сорбента.

Из рис.2 видно, что наибольшему разделению имеющихся веществ подвергся 30% спиртовой экстракт. Было установлено наличие в нем четырех соединений, в то время как 70% и 96% экстракты не разделились.

На следующую хромотографическую пластинку мы нанесли сплошным слоем 30% экстракт и увидели более четкое разделение веществ в тонком слое сорбента (рис.3).

Рис.3. Разделение 30% водно-спиртового экстракта Echinacea purpurea в тонком слое сорбента.

На следующем этапе исследований мы провели анализ экстрактов Echinacea purpurea методом масс-спектрометрии. Полученные результаты представлены на рис.4, 5, 6.

Рис.4. Разделение веществ 30% водно-спиртового экстракта Echinacea purpurea.

Рис.5.Разделение веществ 70% водно-спиртового экстракта Echinacea purpurea.

Рис.6. Разделение веществ 96% спиртового эксракта Echinacea purpurea.

Анализ данных, представленных на рис.4, 5, 6 показал, что в данных экстрактах содержатся различные соединения. В дальнейшем мы определили спектры поглощения веществ находящихся в области пиков, полученных в результате масс-спектрометрии 70% водно-спиртового экстракта Echinacea purpurea. Проанализировав полученные результаты с использованием литературных данных о спектрах поглощения различных веществ, мы предположили то, какие вещества могут содержатся в данном экстракте. Полученные данные представлены на рис.7, 8, 9, 10 и 11.

Рис.7. Спектр поглощения соответствующий диоксифлавону.



Рис.8. Спектр поглощения соответствующий 3-гидроксифлавону.

Рис.9. Спектр поглощения соответствующий 3-о-метилкверцетину.

Рис.10. Спектр поглощения соответствующий 5,7,8-триоксифлавону.



Рис.11. Спектр поглощения соответствующий рамнетину.

Анализируя данные представленные на рис. 7, 8, 9, 10 и 11 мы пришли к выводу, что пик приходящийся на определенную длину волны соответствуют определенному веществу:

Рис.7. Спектру поглощения с длинной волны 257 нм соответствует вещество диоксифлавон.

Рис.8. Спектру поглощения с длинной волны 320 нм соответствует вещество 3-гидроксифлавон.

Рис.9. Спектру поглощения с длинной волны 366 нм соответствует вещество 3-о-метилкверцетин.

Рис.10. Спектру поглощения с длинной волны 290 нм соответствует вещество 5,7,8-триоксифлавон.

Рис.11. Спектру поглощения с длинной волны 273 нм соответствует вещество рамнетин.

Заключение

На первом этапе наших исследований были получены 30%, 70%, 96% водно-спиртовые экстракты из семян Echinacea purpurea.

В дальнейшем нами был проведен анализ полученных водно-спиртовых экстрактов на наличие флавоноидов с использованием качественных реакций (проба Синода; реакция проведенная с использованием реактива Фолина-Дениса). Результаты данных реакций свидетельствуют о присутствии в экстрактах изофлавонов либо кумаринов.

Далее мы исследовали водно-спиртовые экстракты Echinacea purpurea с использованием методов спектрофотометрии, ТСХ и масс - спектрометрии.