Разработка методики определения флавоноидов в лекарственном растительном сырье

Потребление лекарственных трав и сборов на мировом рынке характеризуется тенденцией к росту. По оценкам экспертов Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ) в ближайшие 10 лет доля потребления фитопрепаратов достигнет 60% от общих объемов потребления лекарственных средств. Это связано с тем, что более 12% населения Земли страдает аллергией, в том числе на синтетические лекарственные препараты.

На сегодняшний день около 40% фармацевтической продукции в мире изготавливается из лекарственных растений. Результаты социологических исследований свидетельствуют о том, что более половины населения США и Германии предпочитает лечение травами, а почти каждый второй житель США принимает растительные лекарства ежедневно. По данным ВОЗ, значительная часть жителей развивающихся стран в рамках системы первичной медико-санитарной помощи пользуется традиционными препаратами природного происхождения.

Рост потребления лекарственных трав и сборов наблюдается и на российском рынке, при этом эксперты отмечают, что наибольшим спросом пользуются следующие виды продукции из растительного сырья: ромашка, пустырник, боярышник, календула, толокнянка, валериана, липа и кора дуба, а также грудные, урологические, успокоительные и желчегонные сборы.

Производство лекарственных средств на основе растительного сырья на протяжении десятилетий являлось важнейшей составляющей отечественной фарминдустрии. Однако в современных рыночных условиях производители лекарственных растительных средств действуют в ситуации все более выраженной конъюнктуры, как внутри своего сегмента фармацевтического рынка, так и со стороны производителей синтетических лекарственных препаратов. В ситуации усиления конъюнктуры актуальной задачей для производителей лекарственных растительных препаратов становится, в частности, отслеживание тенденций динамики продаж и емкости различных групп синтетических препаратов. Принятие решений о выпуске и продвижении лекарственных растительных препаратов целесообразно на основе анализа этих тенденций, формирующего предпосылки спроса у потребителей [27].

Растительные препараты на порядок дешевле и безопаснее большинства синтетических препаратов, попадая в активно растущие сегменты фармацевтического рынка, они в большинстве случаев пользуются высоким спросом у населения. Важным фактором специфики потребительских предпочтений лекарственных растительных средств у россиян, выступает консерватизм. Отечественному потребителю присущ исторически сложившийся стереотип, согласно которому лучшими средствами для лечения большинства заболеваний являются разнообразные настои, отвары и примочки. Консерватизм российского потребителя оказывает двойственное влияние на маркетинговую политику компании, продвигающей продукцию лекарственных растительных средств. С одной стороны, этот фактор снижает затраты на рекламу в связи с отсутствием необходимости лишний раз рассказывать о том, что такое цветки ромашки, листья мяты или корень валерианы. С другой стороны - каждый новый препарат или сбор, в особенности, включающие экзотические или малознакомые большинству населения растения, приходится позиционировать как полноценный бренд, сопровождая его продвижение масштабной рекламно-информационной поддержкой.

Усиление конкуренции между производителями лекарственных трав и сборов на российском рынке побуждает к более тщательному поиску возможностей повышения привлекательности продукции для потребителя. Так, представители российских производителей отмечают, что, если еще несколько лет назад относительно малочисленные производители лекарственных трав конкурировали между собой в основном за счет цен и условий контрактов с дистрибьюторами, то сегодня все большую актуальность приобретает привлекательность продукции не только для оптового партнера, но и для аптеки, и для непосредственного покупателя. В плане повышения лояльности потребителей весьма актуальной стала разработка фильтр - пакетов для лекарственных трав. Новая технология мини - упаковки стала весьма востребованной в связи с тем, что практически все лекарственные травы очень плохо переносят хранение в домашних условиях. Купив стандартную упаковку той или иной лекарственной травы, потребители, как правило, используют лишь небольшую ее часть непосредственно для лечения, а остальное спустя некоторое время выбрасывают. Фильтр - пакеты фактически открыли новую рыночную нишу для лекарственных трав и сборов. Оказалось, что лекарственный сбор не обязательно долго заваривать в чайнике, термосе или ставить на паровую баню, его можно приготовить как обычный чай, даже на работе или в дороге. Эта возможность очень важна для людей, вынужденных пить лекарственные отвары курсами, через определенные промежутки времени [27].

В целом, анализируя тенденции современного фармацевтического рынка в России, эксперты выделяют следующие основные причины повышения потребительского спроса на лекарственные растительные средства:

- относительная безопасность действия. Химическая природа лекарственных растений позволяет препаратам на их основе легко включаться в биохимические процессы человека;

- незначительное количество побочных эффектов;

- возможность рационального сочетания лекарственных растений между собой и с синтетическими средствами;

- ценовая доступность;

- менталитет российского населения. Благосклонное отношение потребителей к лекарственным средствам из растительного сырья сформировалось благодаря многовековым традициям и огромному опыту народной медицины.

В экономической части дипломной работы приведен расчет сметы затрат на проведение исследования.

3.1 Определение затрат на проведение исследования

Смета затрат на проведение исследования включает следующие расходы:

1. материальные затраты;

2. расходы на оплату труда;

3. отчисления в социальные фонды;

4. амортизационные отчисления;

5. прочие накладные расходы [28].

3.1.1 Материальные затраты

Затраты на основные и вспомогательные материалы, израсходованные в процессе исследования определяются по формуле (3.1).



	(3.1)

где K_м - количество израсходованного (i) материала;

Ц - цена за единицу (i) материала;

n - количество видов материалов.

Результаты представлены в таблице 3.1.

Таблица 3.1 - Затраты на основные и вспомогательные материалы

№ №	Наименование	Единицы	Цена в руб. с НДС/ед	Израсходовано	Затраты, руб.
11	ГСО Рутин	1г	3.6	0.2013	0.72
22	ГСО Кверцетин	1г	7.25	0.2036	1.48
33	Этанол	1л	162.8	1.253	203.99
44	Алюминий хлористый	1г	0.25	15.0005	3.75
85	Пустырник трава	50г	27.78	4.5511	2.53
66	Ноготки цветы	50г	30.91	4.4327	2.74
77	Боярышник плоды	50г	35.40	4.2549	3.01
Всего	218.22

3.1.2 Затраты на израсходованную электроэнергию

Затраты на израсходованную электроэнергию определяются по формуле (3.2).

	(3.2)

где М - мощность установленного электродвигателя;

К - коэффициент использования мощности (К = 0,9);

Т_эф - эффективное время работы установки;

Ц - тариф за Й кВт/час электроэнергии.

Результаты расчета представлены в таблице 3.2.

Таблица 3.2 - Затраты на электроэнергию

№	Наименование установки	Мощность, кВт	Тэф, час	Тариф, руб.	Величина затрат, руб.
1	Сушильный шкаф ШС-80-01 СПУ	1.1	25	2.87	71.03
2	Электроплитка ЭПТ 1-1/220	1.0	3	2.87	7.75
3	Аналитические весы электронные	0.001	1	2.87	0.01
4	Спектрофотометр ПЭ-5300В	0.2	5	2.87	2.58
5	Масс-спектрометрAPI 2000 LC/MS/MS SYSTEM	2.6	12	2.87	80.59
6	Термостат ВТ-10-1 лабораторный	2.5	9	2.87	58.12
Всего	220.08

3.1.3 Заработная плата исполнителей исследования

Исследования проводились двумя студентами в течение месяца. Исполнителями являются студенты-дипломники, поэтому принимается к расчету стипендия, равная 1100 руб. в месяц у каждого (3.3) [28].

Зпл=1100·2=2200 руб	(3.3)

Заработная плата руководителю работы начисляется с учетом количества часов и оплаты за час (3.4).

Зпл. рук. = 40 ·192 = 7680 руб.	(3.4)

Следовательно, оплата труда составляет З_пл и З_{пл. рук.}, равную 9880 руб.

3.1.4 Амортизационные отчисления

Годовая сумма амортизации (А) устанавливается по проценту (Н_А) от стоимости установки (Ф) и рассчитывается по формуле (3.5).

	(3.5)

где Ф - стоимость установки (приборов), руб.;

- годовая норма амортизации (%): рассчитывается исходя из срока службы установки, ее принимают равной 20%;

-длительность проведения исследования на данной установке студентом-дипломником;

12 - число месяцев в году.

Результаты расчетов представлены в таблице 3.3.

Таблица 3.3 - Расчет затрат на амортизационные отчисления

№	Наименование	Стоимость установки, руб.	tн, месяц	Затраты на амортизацию, руб.
1	Сушильный шкаф ШС-80-01 СПУ	19000	1	316.67
2	Термостат ВТ-10-1 лабораторный	25870.40	1	431.17
3	Спектрофотометр ПЭ-5300В	41500	1	691.67
4	Масс-спектрометрAPI 2000 LC/MS/MS SYSTEM	7500000	1	125000
5	Аналитические весы электронные	18550	1	309.17
6	Электроплитка ЭПТ 1-1/220	420	1	7.00
Всего	126755.68

3.1.5 Расчет отчислений в социальные фонды

Размер отчислений в социальные фонды составляет исходя из ставки 34% от расходов на оплату труда (3.6)

Сн = 9880·0.34 = 3359.2 руб.	(3.6)

3.1.6 Определение накладных расходов

Накладные расходы включают в себя разного рода расходы, связанные с обслуживанием установки (ремонт, смазка, освещение, вентиляция, уборка помещения и т.п.) [28].

Накладные расходы принимают в размере 50 % от суммы заработной платы (3.7)

Нр = 9880 ·0.50 = 4940 руб.	(3.7)

3.1.7 Смета затрат

Смета затрат на проведение исследования представлена в таблице 3.4.

Таблица 3.4 - Смета затрат на проведение исследования

№	Элементы затрат	Сумма, руб.	% к итогу
1	Материальные затраты: Сырье Электроэнергия	438.3 218.22 220.08	0.29 0.14 0.15
2	Оплата труда	9880	6.80
3	Отчисления в социальные фонды	3359.2	2.31
4	Амортизационные отчисления	126755.68	87.20
5	Накладные расходы	4940	3.40
Всего	145373.18	100

Заключение

В состав лекарственного растительного сырья входит большое количество биологически активных компонентов, в том числе флавоноидов.

Интерес к лекарственному растительному сырью, содержащему флавоноиды велик ввиду присущего им широкого спектра биологического действия. В связи с этим современная наука занимается поиском оптимальных путей выделения, получения и использования флавоноидов.

Основным фактором повышения интереса к лечебным свойствам лекарственных растений явилось то, что фитопрепараты обладают высокой безопасностью при достаточной эффективности, простотой приготовления и не исключают возможность длительного применения. Следует отметить, что для синтетических сильнодействующих препаратов характерны различные нежелательные и опасные побочные эффекты.

В процессе работы проводились исследования методов количественного анализа лекарственного растительного сырья, а именно: травы пустырника, плодов боярышника и цветов календулы. Неотъемлемой частью в изучении количественного содержания флавоноидов в сырье является изучение способов извлечения флавоноидов из лекарственного растительного сырья и выявление наиболее оптимального, т.к. степень извлечения флавоноидов напрямую зависит от количественного содержания последних в готовой лекарственной форме.

В ходе работы были использованы такие методы анализа, как спектрофотометрия и хроматомасспектрометрия. При сравнении данных методов было выявлено, что метод спектрофотометрии является самым дешевым, экспрессным методом, но менее точным по сравнению с методом хроматомасспектрометрии. Данные методы широко используются для количественного определения содержания флавоноидов не только в условиях учебно-аналитической лаборатории, но и могут быть использованы в контрольно-аналитической лаборатории на предприятии в качестве экспрессных методов анализа.

4. Безопасность и экологичность

4.1 Идентификация опасных и вредных факторов при работе в химической лаборатории

В процессе жизнедеятельности человек подвергается воздействию различных опасностей, под которыми обычно понимают явления, процессы, объекты, способные в определенных условиях наносить ущерб здоровью человека непосредственно или косвенно, т.е. вызывать различные нежелательные последствия.

Человек подвергается воздействию опасностей и в своей трудовой деятельности. Эта деятельность осуществляется в пространстве, называемом производственной средой. В условиях производства на человека в основном действуют техногенные, т.е. связанные с техникой, опасности, которые принято называть опасными и вредными производственными факторами [29].

Опасным производственным фактором (ОПФ) называется такой производственный фактор, воздействие которого на работающего в определенных условиях приводит к травме или к другому внезапному резкому ухудшению здоровья. Травма -- это повреждение тканей организма и нарушение его функций внешним воздействием. Травма является результатом несчастного случая на производстве, под которым понимают случай воздействия опасного производственного фактора на работающего при выполнении им трудовых обязанностей или заданий руководителя работ.

Вредным производственным фактором (ВПФ) называется такой производственный фактор, воздействие которого на работающего в определенных условиях приводит к заболеванию или снижению трудоспособности. Заболевания, возникающие под действием вредных производственных факторов, называются профессиональными.

К опасным производственным факторам следует отнести, например:

- электрический ток определенной силы;

- раскаленные тела;

- возможность падения с высоты самого работающего либо различных деталей и предметов;

- оборудование, работающее под давлением выше атмосферного, и т.д.

К вредным производственным факторам относятся:

- недостаточная освещенность рабочих мест; повышенная яркость света и пульсация светового потока;

- запыленность и загазованность воздушной среды;

- воздействие шума, инфра- и ультразвука, вибрации;

- наличие электромагнитных полей, лазерного и ионизирующих излучений и др. [29].

Все опасные и вредные производственные факторы в соответствии с ГОСТ 12.0.003-74 подразделяются на физические, химические, биологические и психофизиологические [30].

4.1.1 Основные понятия и гигиенические требования к производственному освещению

Основными понятиями, характеризующими свет, являются световой поток, сила света, освещённость и яркость.

Световым потоком называют поток лучистой энергии, оцениваемый глазом по световому ощущению.

Хорошее освещение действует тонизирующие, создаёт хорошее настроение, улучшает протекание основных процессов нервной высшей деятельности.

Улучшение освещённости способствует улучшению работоспособности даже в тех случаях, когда процесс труда практически не зависит от зрительного восприятия.

90% информации человек получает через органы зрения. Свет оказывает положительное влияние на обмен веществ, сердечно-сосудистую систему, нервно-психическую сферу. Рациональное освещение способствует повышению производительности труда, его безопасности. При недостаточном освещении и плохом его качестве происходит быстрое утомление зрительных анализаторов, повышается травматичность. Слишком высокая яркость вызывает явление слепимости, нарушение функции глаза.

Часть электромагнитного спектра с от 10... 340 000 нм называется оптической областью спектра, которая подразделяется на инфракрасное излучение (770... 340 000), видимое излучение (380... 770), УФ область - 10... 380 нм. В пределах видимой области, излучение paзличнoй вызывает разные световые и цветовые ощущения: от фиолетового до красного цветов. Наиболее чувствителен человеческий глаз к 550 нм излучению. К границам спектра чувствительность уменьшается [31].

4.1.2 Влияние вибрации на условия труда в химической лаборатории

Тело человека рассматривается как сочетание масс с упругими элементами, имеющими собственные частоты, которые для плечевого пояса, бедер и головы относительно опорной поверхности (положение "стоя") составляют 4~6 Гц, головы относительно плеч (положение "сидя") - 25-30 Гц. Для большинства внутренних органов собственные частоты лежат в диапазоне 6 - 9 Гц. Общая вибрация с частотой менее 0,7 Гц, определяемая как качка, хотя и неприятна, но не приводит к вибрационной болезни. Следствием такой вибрации является морская болезнь, вызванная нарушением нормальной деятельности вестибулярного аппарата по причине резонансных явлений.

При частоте колебаний рабочих мест, близкой к собственным частотам внутренних органов, возможны механические повреждения или даже разрывы. Систематическое воздействие общих вибраций, характеризующихся высоким уровнем виброскорости, приводит к вибрационной болезни, которая характеризуется нарушениями физиологических функций организма, связанными с поражением центральной нервной системы. Эти нарушения вызывают головные боли, головокружения, нарушения сна, снижение работоспособности, ухудшение самочувствия, нарушения сердечной деятельности.

Местная вибрация малой интенсивности может благоприятно воздействовать на организм человека, восстанавливать трофические изменения, улучшать функциональное состояние центральной нервной системы, ускорять заживление ран и т. п.

При увеличении интенсивности колебаний и длительности их воздействия возникают изменения, приводящие в ряде случаев к развитию профессиональной патологии - вибрационной болезни [32].

4.1.3 Влияние шума на организм человека

Диапазон слухового восприятия человека составляет примерно 130 дБ. Шум интенсивностью свыше 130 дБ вызывает боль в ушах, а при 140 дБ - нарушения в слуховом аппарате даже при кратковременном воздействии. Шум в 160 - 165 дБ в течение нескольких минут вызывает гибель животных, 180 дБ - вызывает усталость металла, 190 дБ - вырывает заклепки из конструкций.

Как все органы чувств, ухо в процессе восприятия шума в зависимости от его характера и силы адаптируется с ним. В процессе адаптации к сильным звуковым раздражителям чувствительность органа слуха к ним понижается, а после прекращения действия раздражителя чувствительность восстанавливается. Если раздражение чрезмерно сильное и длительное, наступает утомление.

По своему утомляющему действию различные шумы не равноценны. Чем выше звук, тем выше его утомляющее действие. Так, если шум интенсивностью 80 дБ с частотной характеристикой 1000 Гц вызывает у большинства людей слабо выраженное утомление, то шум той же интенсивности, но с частотой 2000 - 4000 Гц оказывает значительное утомляющее действие.

При воздействии интенсивного шума обычно возникает снижение слуховой чувствительности, свидетельствующее об утомлении при высоких частотах независимо от спектра шума, исследования показывают, что шум интенсивностью более 90 дБ даже при отсутствии высоких частот оказывает утомляющее действие.

Длительное действие интенсивного шума приводит к стойкому понижению чувствительности к различным тонам и тихой речи, т. е. к профессиональной тугоухости и глухоте. Наряду с изменениями в слуховом аппарате шум оказывает отрицательное действие и на некоторые другие органы и системы. Продолжительно воздействуя на нервную систему, шум замедляет скорости нервных реакций, понижает внимание и работоспособность, вызывает сдвиги уровня кровяного давления, изменение ритма дыхания, пульса и т. д.

Учитывая вредное действие шума на организм человека, законодательством установлены предельные уровни интенсивности шума на предприятиях и контроль за соблюдением норм [31].

4.1.4 Вредные вещества в воздухе рабочей зоны и их воздействие на организм человека

Выполнение различных видов работ в промышленности сопровождается выделением в воздушную среду вредных веществ. Вредное вещество - это вещество, которое в случае нарушения требований безопасности может вызвать производственные травмы, профессиональные заболевания или отклонения в состоянии здоровья, обнаруживаемые как в процессе работы, так и в отдаленные сроки жизни настоящих и последующих поколений.

Наиболее благоприятен для дыхания атмосферный воздух, содержащий (% по объему) азота - 78.08, кислорода - 20.95, инертных газов - 0.93, углекислого газа - 0.03, прочих газов - 0.01.

Необходимо обращать внимание и на содержание в воздухе заряженных частиц - ионов. Так, например, известно благотворное влияние на организм человека отрицательно заряженных ионов кислорода воздуха. Вредные вещества, выделяющиеся в воздух рабочей зоны, изменяют его состав, в результате чего он существенно может отличаться от состава атмосферного воздуха.

При проведении различных технологических процессов в воздух выделяются твердые и жидкие частицы, а также пары и газы. Пары и газы образуют с воздухом смеси, а твердые и жидкие частицы - аэродисперсные системы - аэрозоли. Аэрозолями называют воздух или газ, содержащие в себе взвешенные твердые или жидкие частицы. Аэрозоли принято делить на пыль, дым, туман. Пыли или дымы - это системы, состоящие из воздуха или газа и распределенных в них частиц твердого вещества, а туманы - системы, образованные воздухом или газом и частицами жидкости. Размеры твердых частиц пылей превышают 1 мкм, а размеры твердых частиц дыма меньше этого значения. Различают крупнодисперсную (размер твердых частиц более 50 мкм), среднедисперсную (от 10 до 50 мкм) и мелкодисперсную (размер частиц менее 10 мкм) пыль. Размер жидких частиц, образующих туманы, обычно лежит в пределах от 0,3 до 5 мкм. Проникновение вредных веществ в организм человека происходит через дыхательные пути (основной путь), а также через кожу и с пищей, если человек принимает ее, находясь на рабочем месте. Действие этих веществ следует рассматривать как воздействие опасных или вредных производственных факторов, так как они оказывают негативное (токсическое) действие на организм человека. В результате воздействия этих веществ у человека возникает отравление - болезненное состояние, тяжесть которого зависит от продолжительности воздействия, концентрации и вида вредного вещества.

Существуют различные классификации вредных веществ, в основу которых положено их действие на человеческий организм. В соответствии с наиболее распространенной классификацией вредные вещества делятся на шесть групп: общетоксические, раздражающие, сенсибилизирующие, канцерогенные, мутагенные, влияющие на репродуктивную (детородную) функцию человеческого организма.

Общетоксические вещества вызывают отравление всего организма. Это оксид углерода, свинец, ртуть, мышьяк и его соединения, бензол и др. Раздражающие вещества вызывают раздражение дыхательного тракта и слизистых оболочек человеческого организма. К этим веществам относятся: хлор, аммиак, пары ацетона, оксиды азота, озон и ряд других веществ. Сенсибилизирующие вещества действуют как аллергены, т.е. приводят к возникновению аллергии у человека. Этим свойством обладают формальдегид, различные нитросоединения, никотинамид, гексахлоран и др.

Воздействие канцерогенных веществ на организм человека приводит к возникновению и развитию злокачественных опухолей (раковых заболеваний). Канцерогенными являются оксиды хрома, 3,4-бензпирен, бериллий и его соединения, асбест и др.

Мутагенные вещества при воздействии на организм вызывают изменение наследственной информации. Это радиоактивные вещества, марганец, свинец и т.д.

Среди веществ, влияющих на репродуктивную функцию человеческого организма, следует в первую очередь назвать ртуть, свинец, стирол, марганец, ряд радиоактивных веществ и др.

Пыль, попадая в организм человека, оказывает фиброгенное воздействие, заключающееся в раздражении слизистых оболочек дыхательных путей. Оседая в легких, пыль задерживается в них. При длительном вдыхании пыли возникают профессиональные заболевания легких - пневмокониозы. При вдыхании пыли, содержащей свободный диоксид кремния (SiO₂), развивается наиболее известная форма пневмокониоза - силикоз. Если диоксид кремния находится в связанном с другими соединениями состоянии, возникает профессиональное заболевание - силикоз. Среди силикозов наиболее распространены асбестоз, цементоз, талькоз.

Для воздуха рабочей зоны производственных помещений в соответствии с ГОСТ 12.1.005-88 устанавливают предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ. ПДК выражаются в миллиграммах (мг) вредного вещества, приходящегося на 1 кубический метр воздуха, т. е. мг/м³.

В соответствии с указанным выше ГОСТом установлены ПДК для более чем 1300 вредных веществ. Еще приблизительно для 500 вредных веществ установлены ориентировочно безопасные уровни воздействия (ОБУВ) [33].

4.2 Техника безопасности при работе в химической лаборатории

4.2.1 Общие требования безопасности при работе в лаборатории

1. К работе по проведению химического анализа допускаются лица не моложе 18 лет, прошедшие медицинское освидетельствование, теоретическое и практическое обучение, проверку знаний по охране труда в установленном порядке и получившие допуск к самостоятельной работе.

2. Лаборант аналитической лаборатории обеспечивается спецодеждой и средствами индивидуальной защиты (халат хлопчатобумажный, фартук прорезиненный с нагрудником, перчатки резиновые, очки защитные).

3. Помещения аналитических лабораторий необходимо оборудовать принудительной приточно-вытяжной вентиляцией и местной вентиляцией (тягой) из лабораторных шкафов и других очагов выделения паров вредных веществ.

4. В помещениях аналитических лабораторий, где проводится работа с особо вредными и ядовитыми веществами, вентиляционная система выполняется индивидуальной, не связанной с вентиляцией других помещений [32].

4.2.2 Требования охраны труда перед началом работы

1. Надеть предусмотренную соответствующими нормами спецодежду и подготовить индивидуальные средства защиты. Проверить наличие дегазирующих средств и первичных средств пожаротушения.

2. Проверить исправность вентиляционного оборудования, электрооборудования, включить вентиляцию.

3. Подготовить к работе приборы и лабораторное оборудование, убедиться в их исправности. Не допускается пользование неисправными приборами и лабораторным оборудованием.

4. Приступать к работе можно, если имеются прописи - инструкции на каждый вид синтеза или анализа.

5. Получить задания на отдельные этапы исследовательской работы, в которых указаны максимально допустимые количества растворов, допустимое количество опасных примесей, температура, давление и другие условия проведения эксперимента [32].

4.2.3 Требования охраны труда во время работы

1. Помещения аналитических лабораторий следует содержать в чистоте и порядке. Не допускается загромождать коридоры и входы (выходы) какими-либо предметами, материалами, оборудованием.

2. Все работы, связанные с выделением токсичных или пожаро- и взрывоопасных паров и газов, выполнять в вытяжных шкафах при включенной местной вентиляции.

3. Не допускается пользоваться вытяжными шкафами с разбитыми стеклами или с неисправной вентиляцией, а также загромождать вытяжные шкафы посудой, приборами и лабораторным оборудованием, не связанным с выполняемой работой.

4. С разрешения руководителя аналитической лаборатории допускается хранение в вытяжных шкафах дымящихся кислот, легкоиспаряющихся реактивов и растворителей, при этом проводить анализы в этих шкафах не допускается. Если в лаборатории имеется один вытяжной шкаф, то вышеуказанные реактивы хранят в специально отведенном помещении.

5. Для хранения проб и реактивов следует использовать только герметично закрывающуюся посуду. Не допускается хранение горючих жидкостей в тонкостенной стеклянной посуде. На каждый сосуд с химическим веществом необходимо наклеить этикетку с указанием продукта.

6. Бачки, бутыли и другие емкости для хранения агрессивных жидкостей не следует оставлять даже временно на рабочих столах, в проходах и местах общего пользования.

7. Емкости с агрессивными жидкостями следует переносить вдвоем с использованием механизированных приспособлений, на специальных носилках, в корзинах с двойным дном.

8. При переливании и порционном розливе агрессивных жидкостей следует пользоваться специальными безопасными воронками с загнутыми краями и воздухоотводящими трубками. В случае перелива жидкость необходимо нейтрализовать и место разлива хорошо промыть водой.

9. Место розлива и разведения кислот и щелочей, а также места их применения следует оборудовать местной вытяжной вентиляцией, обеспечит чистой ветошью и полотенцем, водяным гидрантом с резиновым шлангом для мытья рук и фонтанчиком для промывания глаз.

10. При работе с кислотами и щелочами следует надеть резиновые перчатки и защитные очки.

11. Пролитую кислоту следует засыпать мелким песком, пропитавшийся кислотой песок убрать деревянной лопаткой и засыпать это место содой или известью, после чего замыть водой и вытереть насухо.

12. Измельчение едких и ядовитых веществ производить в закрытых ступках под тягой в защитных очках и резиновых перчатках. Необходимо вести строгий учет всех ядовитых веществ. Выдача их без разрешения руководителя аналитической лаборатории не допускается.

13. Сливать остатки щелочи, кислоты и воду в один сосуд не допускается.

14. Лабораторную посуду следует мыть в специальном моечном помещении, отделенном от других рабочих помещений лаборатории глухой несгораемой перегородкой и имеющем самостоятельный выход. Моечное помещение необходимо оборудовать самостоятельной приточно-вытяжной вентиляцией и вытяжной вентиляцией от места мытья посуды.

15. При переносе стеклянных колб с жидкостью их необходимо держать двумя руками - одной за дно, а другой - за горловину.

16. Стеклянные трубки и палочки при размалывании, а также при надевании на них резиновых трубок обертывать тканью (полотенцем). Неровные и острые концы стеклянных трубок и палочек перед надеванием на них резиновых трубочек следует оплавить и смочить водой или глицерином.

17. В помещении, где проводятся работы с ядовитыми и агрессивными веществами, не допускается хранение и прием пищи. Не допускать употребления лабораторной посуды для личного пользования.

18. Запрещается оставлять даже на короткое время химические продукты, пробы без этикеток в местах, для них не предназначенных.

19. Запрещается оставлять без присмотра работающие установки [33].

4.2.4 Требования охраны труда по окончании работы

1. Выключить электронагревательные приборы и горелки.

2. Закрыть водяные и газовые краны и вентили.

3. Закрыть банки с реактивами, легковоспламеняющимися веществами.

4. Вынести из аналитической лаборатории арбитражные пробы в места их хранения.

5. Вымыть посуду, лабораторное оборудование и уложить на место хранения.

6. Вымыть водой и вытереть рабочий стол и пол.

7. Выключить вентиляцию.

8. Промасленные ветошь, опилки и другие подобные материалы, сложенные в закрытые металлические ящики, следует вынести за пределы аналитической лаборатории в специально отведенное для этого место.

9. Переодеться, тщательно вымыть лицо и руки теплой водой с мылом и принять душ [33].

4.3 Общие положения по технике безопасности при использовании электроустановок в лаборатории

Ответственность за организацию технической эксплуатации электроустановок, находящихся в лаборатории, а также за правильное использование электроустановок, несет заведующий лабораторией и его заместитель.

Они должны обеспечить:

- безопасность на рабочих местах при обслуживании электроустановок;

- инструкциями по технике безопасности для сотрудников и студентов;

- контроль за наличием и своевременной проверкой защитных изолирующих средств;

своевременное проведение инструктажа (не менее 1 раза в год) лиц, работающих на электроустановках [32].

4.4 Эксплуатация электроприборов

Эксплуатация электроприборов (сушильных шкафов, электрических плиток, электронагревательных печей, фотоэлектрических фотометров и т.д.) должна проводиться в соответствии с требованиями «Правилами технической эксплуатации электроустановок потребителями» (ПТЭ) и «Межотраслевыми правилами по охране труда при эксплуатации электроустановок потребителями» (МПОТ).

1. Сотрудники, пользующиеся электроприборами, должны быть проинструктированы по вопросам электробезопасности.

2. Электронагревательные приборы должны размещаться на расстоянии не менее 1.5 м от металлических раковин и труб водопровода, отопления и канализации.

3. При установке в лаборатории электронагревательных приборов должны соблюдаться меры пожарной безопасности:

- устанавливать электронагревательные приборы разрешается только на несгораемые поставки;

- запрещается применение электроплит с открытой спиралью;

- запрещается оставлять включенными в сеть электронагревательные приборы после работы.

- Измерительные приборы должны подключаться к электросети согласно заводской инструкции. Подключения производятся при выключенном напряжении.

- За всеми электроприборами должен быть организован систематический надзор, обеспечивающий правильность их показаний, исправное состояние и правильное применение в соответствии с техническими инструкциями.

- Данные обо всех измерительных и электронагревательных приборах должны быть занесены в журналы, в которых производятся отметки обо всех поверках и ремонтах [32].

-

4.5 Требования охраны труда в аварийных ситуациях

4.5.1 Общие требования безопасности в аварийных ситуациях

1. При аварийном состоянии оборудования или установки немедленно прекратить работу и отключить электропитание.

2. В случае воспламенения горючей жидкости необходимо:

- выключить электронагревательные приборы и вентиляцию;

- вынести из помещения все сосуды с огнеопасными веществами и баллоны со сжатым газом;

- применять для данного случая наиболее эффективные средства тушения;

- при возникновении пожара вызвать пожарную охрану по телефону 01, применять соответствующие средства тушения.

3. Пламя необходимо гасить следующими средствами:

- при загорании жидкостей, смешивающихся с водой -- любым огнетушителем, струей воды, песком, асбестовым или суконным одеялом;

- при загорании жидкостей, несмешивающихся с водой - углекислотными огнетушителями, песком, покрывалом (исключая воду), начиная с периферии.

4. Категорически запрещается применять воду при тушении горящих проводов, электроприборов, находящихся под давлением, напряжением, их следует обесточить и тушить углекислотным огнетушителем [34].

4.5.2 Требования безопасности в аварийных ситуациях при использовании электроустановок в лаборатории

1. При обнаружении какой-либо неисправности нужно немедленно сообщить о ней начальнику лаборатории или его заместителю.

2. В случае аварии (короткого замыкания) сотрудник должен:

- отключить общий рубильник лаборатории;

- вызвать дежурного электрика [32].

4.5.3 Первая помощь пострадавшим от электрического тока

1. Спасение пострадавшего от электрического тока в большинстве случаев зависит от быстроты освобождения его от действия тока, а также от быстроты и правильности оказания пострадавшему первой помощи.

2. В лаборатории должна иметься аптечка с набором необходимых средств и приспособлений для оказания первой помощи.

3. Освобождение пострадавшего от электрического тока в случае, если он продолжает соприкасаться с токоведущими частями, должно быть произведено отключение установки.

Если отключение установки не может быть произведено, то для отделения пострадавшего от токоведущих частей или провода следует воспользоваться сухой одеждой, канатом, палкой, доской или каким-нибудь другим сухим предметом, не проводящим электрический ток. При отделении пострадавшего от токоведущих частей рекомендуется действовать по возможности одной рукой.

4. Меры первой помощи зависят от состояния, в котором находится пострадавший после освобождения его от электрического тока.

Для определения этого состояния необходимо немедленно произвести следующие мероприятия:

- уложить пострадавшего на спину на твердую поверхность;

- проверить наличие у пострадавшего дыхания;

- проверить пульс на лучевой артерии у запястья или на сонной артерии на переднебоковой поверхности шеи;

- выяснить состояние зрачка (узкий или широкий); широкий зрачок указывает на резкое ухудшение кровоснабжения.

5. Во всех случаях поражения электрическим током вызов врача является обязательным независимо от состояния пострадавшего.

6. Если пострадавший находится в сознании, но до этого был в состоянии обморока, его следует уложить в удобное положение, до прибытия врача обеспечить покой, наблюдая за дыханием и пульсом.

7. Если пострадавший находится в бессознательном состоянии, но с сохранившимся устойчивым дыханием и пульсом, его следует уложить, расстегнуть одежду, создать приток свежего воздуха, давать нюхать нашатырный спирт, обрызгивать лицо водой и обеспечить покой.

8. При отсутствии у пострадавшего признаков жизни (дыхания и пульса) ему следует немедленно оказать первую помощь в виде искусственного дыхания и наружного (непрямого) массажа сердца. Искусственное дыхание производить непрерывно как до, так и после прибытия врача. Вопрос о дальнейшем проведении искусственного дыхания решается врачом [33].

4.5.4 Требования безопасности в аварийных ситуациях при возникновении пожара в лаборатории

1. В случае возникновения пожара, первый заметивший его должен немедленно сообщить в пожарную часть по телефону 01 с указанием точного места пожара.

2. До прибытия пожарной команды приступить к тушению пожара всеми имеющимися средствами пожаротушения и применять меры к эвакуации людей, приборов, оборудования и имущества.

3. С прибытием пожарной команды применять меры к охране выносимого имущества лаборатории.

4. При разливе бензина, эфира или других огнеопасных жидкостей следует потушить горелки, закрыть общий газовый вентиль, отключить электронагревательные приборы, удалить пролитый продукт. При возникновении пожара необходимо выключить вентиляцию, сообщить о случившемся в пожарную охрану и непосредственному руководителю, приступить к ликвидации пожара первичными средствами пожаротушения.

5. При обнаружении запаха газа необходимо закрыть общий запорный вентиль на газовой сети, проветрить помещение и принять меры по устранению обнаруженных неисправностей. Зажигать нагревательные и осветительные приборы до полного проветривания помещения и устранения неисправностей не допускается.

При несчастном случае необходимо оказать первую помощь пострадавшему, вызвать скорую медицинскую помощь или направить пострадавшего в лечебное учреждение, сообщить администрации организации [34].

4.5.5 Действия по оказанию первой помощи пострадавшим

При ожогах, отравлениях, порезах, ушибах, произошедших во время работы в химической лаборатории необходимо обращаться к врачу. Доврачебная (первая) помощь заключается в приятии обычных мер, применяемых при легких ранениях, ушибах, термических ожогах. При ранении края раны осторожно смазывают йодной настойкой и накладывают стерильную повязку. Нельзя промывать раны водой. При ушибах необходимо создать пострадавшему покой, к ушибленной части тела до прихода врача необходимо прикладывать холодные примочки или пузырь со льдом.

При венозном кровотечении следует накладывать давящую повязку. Если кровотечение не останавливается, накладывают жгут.

При термических ожогах обожженную часть тела смазывают вазелином, растительным маслом или присыпают питьевой содой. При более сильных ожогах (появление пузырей) прикладывают марлю, смоченную 5%-ным раствором марганцовокислого калия, и накладывают повязку.

При химических ожогах необходимо тщательно обмыть кожу растворителем для данного вещества.

При ожогах кислотами или едкими щелочами пораженное место промывают обильной струей воды и затем обрабатывают:

- при ожогах кислотами - слабым щелочным раствором питьевой соды (можно присыпать обожженное место чистым мелом или окисью магния);

- при ожогах щелочами - слабым раствором уксусной или лимонной кислоты.

Особенно опасно попадание химических реактивов в глаза. При химическом ожоге веществами, растворимыми в воде, самым лучшим средством является немедленное промывание струей воды.

При отравлениях химическими веществами пострадавшего необходимо вынести на свежий воздух, освободить от стесняющей одежды. При остановке дыхания немедленно приступают к искусственному дыханию. Следует помнить, что от быстроты проведения искусственного дыхания и правильности приемов зависит жизнь пострадавшего.

Каждая лаборатория должна быть снабжена аптечкой с набором медикаментов, перевязочных средств и т.п., согласно указаниям медико-санитарной части предприятия [32].

4.5 Токсические свойства веществ, используемых в работе

Токсические свойства веществ, используемых в дипломной работе, представлены в таблице 4.1.

Таблица 4.1 - Токсические свойства веществ, используемых в работе

№	Вещество	ПДК, мг/м3	Защитные приспособления
1	Спирт этиловый С2Н5ОН	1000	Герметизация посуды, работа в вытяжном шкафу
2	Хромовая смесь K2Cr2O7+H2SO4	0.01	При попадании на кожу вызывает сильнейшие раздражения, экземы и дерматиты, а также может спровоцировать развитие рака кожи

4.6 Экологичность эксперимента

Учебно-аналитическая лаборатория ТГТУ (лаборатория №261) оснащена вытяжными шкафами. Расстановка оборудования произведена с учетом безопасности работы, с соблюдением проходов, требуемых норм. Все токоведущие части оборудования безопасны в эксплуатации. Для тушения пожаров предусмотрены кислотные огнетушители.

Все химические веществ, применяемые при проведении анализов, используются в небольших количествах, поэтому испарения этих веществ не предоставляют угрозы для атмосферы. Кислоты и спирты хранятся в хорошо укупоренной таре в вытяжном шкафу.

К работе допускаются лица, прошедшие инструктаж по технике безопасности, работы проводятся в спецодежде и при защите органов дыхания.

4.7 Расчет осветительной установки для учебно-аналитической лаборатории

Рассчитать методами светового потока потребное количество светильников с лампами накаливания (ЛП) и газоразрядными лампами (ГЛ). для общего освещения помещения учебно-аналитической лаборатории, выбрать экономически целесообразную осветительную установку и расположить светильники на плане помещения. При этом учитывать, что размер помещения м, разряд и подразряд зрительных работ IV г, высота светильника от потолка - 0.4 м, высота рабочей поверхности от пола - 1.0 м, коэффициент отражения света от потолка Рп=50%,от стен Рс=30%, от рабочей поверхности Рр=10%.

Таблица 4.2 - Исходные данные к заданию

Размеры помещения	12x8x6
Тип лампы	ЛН - Г500 ГЛ - ДРЛ400
Тип светильника	ЛН - ППР ГЛ - С34ДРЛ

Определим высоту, м, подвеса светильника над рабочей поверхностью по формуле:

(4.1)

где, Н - высота помещения, м;

hр - высота рабочей поверхности от пола, м;

hc - высота свеса светильника от основного потолка, м.

1. Вычисляем освещаемую площадь помещения, м², по формуле:

(4.2)

где, А и В - длина и ширина помещения, м.

2. Определяем индекс помещения:

 (4.3)

3. С учетом значений i,Р_п,Р_с,Р_р для ППН ?=26%, для С34ДРЛ ?=61%

4. Определяем норматив освещенности для ГЛ и ЛН:

5. Определяем световой поток лампы:

6. Определяем потребное количество светильников:

(4.4)

где, К_з- коэффициент запаса;

Z - коэффициент неравномерности освещения;

К_Т и Z_Т- принятые коэффициенты запаса и неравномерности (К_Т = 1,5, Z_Т = 1,1)

для ЛН

для ГЛ

7. Выбираем вариант осветительной установки с ЛН и ГЛ по экономическим показателям:

Для ЛН:

(4.5)

Для ГЛ:

(4.6)

ДРЛ (ГЛ).

8. Производим размещение светильников. Для этого находим, что светильник типа С34ДРЛ имеет КСС типа Г (глубокая).

По таблице находим л=0.8…1.2, л_ср=1.0

(4.7)

(4.8)

Значит по длине А помещения разместится:

(4.9)

По ширине В помещения разместится:

(4.10)

Общее количество светильников:

(4.11)

(4.12)

9. Так как рабочие места располагаются у стен, то

(4.13)

Схема размещения светильников приведена на рисунке 4.1.



Рисунок 4.1 - Схема размещения светильников

флавоноид рутин лекарственное сырье

Заключение

Флавоноиды исключительно многогранны. В равной мере они интересны как объекты изучения в ботанике, фармакогнозии, фитохимии и особенно в фармации и медицине.

В дипломной работе флавоноиды главным образом изучены с точки зрения химических позиций. А именно рассмотрены особенности строения и физико-химические свойства биофлавоноидов, представлены современные методы идентификации, выделения и разделения флавоноидов. Также в работе проанализированы основные способы экстрагирования лекарственного растительного сырья и выявлены оптимальные условия проведения экстракции, рассмотрены основные методы качественного и количественного определения природных флавоноидов в лекарственном растительном сырье. Особое внимание уделялось таким методам анализа как спектрофотомерия и хроматомасспектрометрия.

Было установлено, что наиболее доступным и объективным методом контроля биологически активных соединений в растительном сырье и суммарных фитохимических препаратах является хроматомасспектрометрический метод анализа, который позволяет идентифицировать отдельные флавоноиды не зависимо от присутствия посторонних или родственных соединений. Это связано с тем, что спектрофотометрический метод позволяет оценить только суммарное содержание флавоноидов в экстрактах и не дает возможности проводить, наряду с количественным, качественный анализ.

В результате проделанной работы были подобраны оптимальные условия проведения экстракции. Было установлено, что наиболее полное извлечение определяемого вещества из анализируемого лекарственного сырья достигалось при проведении экстракии в течение 120 минут при температуре 60 °С с использовании в качестве экстрагента 70%-ый спирт этиловый. По полученным данным можно сделать вывод, что наибольшее количество рутина содержится в траве пустырника сердечного, немного меньше в цветках календулы лекарственной, наименьшее содержание рутина отвечает экстракту плодов боярышника.

Список использованных источников

1. Яковлева, Г.П. Лекарственное сырье животного и растительного происхождения. Фармакогнозия./ Г.П. Яковлева - Спб.: Спецлит, 2006. - 845с.

2. Муравьева, Д.А. Фармакогнозия / Д.А. Муравьева, И.А. Самылина, Г.П. Яковлев. - М.: Медицина, 2002

3. Биологически активные вещества растительного происхождения / Б.Н. Головкин, Р.Н. Руденская, И.А. Трофимова, А.И. Шретер. - М.: Наука, 2002

4. Химия растительного сырья №4. - 2007. - 73-77 с.

5. Беликов, В.Г. Фармацевтическая химия: учебник для высш. шк. / В.Г.Беликов - М.: МЕДпресс-информ, 2007. - 624 с.

6. "Технология сушки: Учебно-методический комплекс", Киселева Т.Ф. - /Кемеровский технологический институт пищевой промышленности. - Кемерово, 2007. - 117 с.

7. Кузнецова М.А. Лекарственное растительное сырье./М.А Кузнецова. - М.: Высш. шк., 1984. - 207с.

8. Корулькин, Д.Ю. Природные флаваноиды /Д.Ю. Корулькин, Ж.А. Абилов, Г.А. Толстиков. - Новосибирск: Наука, 2007. - 296с.

9. Каухова, И. Е. Особенности экстрагирования биологически активных веществ двухфазной системой экстрагентов при комплексной переработке лекарственного растительного сырья / И. Е. Каухова // Растительные ресурсы. - 2006. - Т. 42. - Вып. 1. - С. 82-91.

10. Георгиевский, В. П. Биологически активные вещества лекарственных растений / В. П. Георгиевский, Н.Ф. Комиссаренко, С.Е. Дмитрук. - Новосибирск: Наука, 1990. - 144с.

11. Дегтярев, Е. В. Применение тонкослойной хроматографии в анализе БАВ / Е. В. Дегтярев, Б. В. Тяглов, В. Д. Красиков, А. В. Гаевский // 100 лет хроматографии. - М.: Наука, 2003. - 124с.

12. Кирхнер, Ю. В. Тонкослойная хроматография / Ю. В. Кирхнер. - М.: Мир, 1981. - 542с.

13. Органическая химия: учебник для вузов: В 2 кн. Кн.2: Специальный курс/ Н.А. Тюкавкина, С.Э. Зурабян, В.Л. Белобородов и др.; под ред. Н.А. Тюкавкиной. - М.: Дрофа, 2008. - 592с.

14. Сычев, С.Н. Высокоэффективная жидкостная хроматография на микроколоночных хроматографах серии «Милихром»: Монография/ С.Н. Сычев, К.С. Сычев, В.А. Гаврилина. - Орел: ОрелГТУ, 2002. - 134с.

15. Васильев, В. П. Аналитическая химия. Физико-химические методы анализа: учеб. для студ. вузов, обучающихся по химико-технол. спец. - 2-е изд., перераб. и доп. - М.: Дрофа, 2002. - 384 с.

16. Лебедева, М.И. Аналитическая химия и физико-химические методы анализа: учеб. пособие/ М.И. Лебедева. - Тамбов: ТГТУ, 2005. - 216с.

17. Абдуллабекова, В.Н. Идентификация рутина в растительном сырье методом капиллярного электрофореза/ В.Н. Абдуллабекова// Вестник фармации. - 2009. - №3. - С.23-28.

18. Духин, С.С. Электрофорез/ С.С. Духин, Б.В. Дерягин. - М.: Наука,1976

19. Основы аналитической химии. В 2 кн. Кн. 2. Методы химического анализа/ Ю.А. Золотов, Е.Н. Дорохова, В.И. Фадеева и др. Под ред. Ю.А. Золотова. - М.: Высшая школа, 2002. - 494 с.

20. Карасек Ф., Клемент Р. Введение в хроматомасспектрометрию: Пер. с англ. - М.: Мир, 1993. - 237 с.

21. Государственная фармакопея СССР./ М-во здравоохранения СССР. - 11 изд. - М.: Медицина, 1987. - 334с.

22. ГОСТ 24027.0-80. Правила приемки и методы отбора проб. - Введ. 1981 - 01 - 01. - М.: Изд-во стандартов. - 5с.

23. ГОСТ 24027.2-80. Сырье лекарственное растительное. Методы определения влажности, содержания золы, экстрактивных веществ, эфирного масла. - Введ. 1981 - 01 - 01. -М.: Изд-во стандартов. - 10с.

24. Лобанова, А.А. Исследование биологически активных флавоноидов в экстрактах из растительного сырья / А.А. Лобанова, В.В. Будаева, Г.В. Сакович // Химия растительного сырья. - 2004. -№1. - С. 47-52.

25. Государственная фармакопея СССР./ М-во здравоохранения СССР. - 10 изд. - М.: Медицина, 1968. - 1080с.

26. Рейхарт, Д.В. Фармацевтический рынок: его особенности, проблемы и перспективы/ Д.В. Рейхарт, Ю.В. Шиленко, В.А. Сухинина. - М.: Славянский диалог,1995. - 297 с.

27. Иващенко, А.А. Концепция инновационного развития отечественной фармацевтической отрасли / А.А. Иващенко, Д.В. Кравченко // Ремедиум. - 2008. -№5. - С. 14-18.

28. Методическое указание к экономической части дипломного проекта [Текст]. Тверь, ТГТУ,2001.

29. Раздорожный, А.А. Охрана труда и производственная безопасность: учебное-методическое пособие / А.А. Раздорожный. - М.: Экзамен, 2005. - 512с.

30. ГОСТ 12.0.003-74 - 1974. Опасные и вредные производственные факторы. Классификация. - Введ. 1976 -01-01. - М.:Изд-во стандартов. - 4 с.

31. Макаров, Г.В. Охрана труда в химической промышленности [Текст]/ Г.В. Макаров. - М.: Химия, 1989. - 330с.

32. Безопасность жизнедеятельности: Тексты лекций /Сост.: А.И. Павлов. - М.: МИЭМП, 2003. - 20 с.

33. Костин, Н.В. Техника безопасности работы в химических лабораториях [Текст]: учеб. пособие/ Н.В. Костин. - Изд.: Мос. Университет, 1966. - 270с.

34. Говоров, В.Г. Организация газоспасательной службы на химических предприятиях [Текст]: учеб. пособие/ В.Г. Говоров. - М.: Химия, 1972. - 336с.

Размещено на Allbest.ru