Изучение взаимодействия синтаксина 6 с мембранными белками секреторных гранул нейтрофилов человека
Нейтрофилы и продукты их секреции принадлежат к числу центральных участков воспаления. Нейтрофилы человека экспресируют широкий набор белков синтаксина и установлена внутриклеточная локализация для двух представителей этого семейства: синтаксина 4 и 6.
| Рубрика | Медицина |
| Вид | дипломная работа |
| Язык | русский |
| Дата добавления | 01.01.2009 |
| Размер файла | 175,9 K |
Отправить свою хорошую работу в базу знаний просто. Используйте форму, расположенную ниже
Студенты, аспиранты, молодые ученые, использующие базу знаний в своей учебе и работе, будут вам очень благодарны.
42
Рис.4.1. Иммунодетекция синтаксина 6 в VAMP-1 иммуноприципитатах из нейтрофила человека. Равные количества иммуноприципитатов были подвергнуты разделению в 12%-ом ПААГ и иммуноблотингу с использованием антител против синтаксина 6.
К - экстракт из мозга крысы (3 мкг белка).
П - клетки не подвергнутые активации (покой).
А - активированные ФМА клетки.
42
Рис.4.2. Иммунодетекция синтаксина 6 в SNAP-25 иммуноприципитатах из нейтрофила человека. Равные количества иммуноприципитатов были подвергнуты разделению в 12%-ом ПААГ и иммуноблотингу с использованием антител против синтаксина 6.
К - экстракт из мозга крысы (3 мкг белка).
П - клетки не подвергнутые активации (покой).
А - активированные ФМА клетки.
Совокупность полученных экспериментальных данных позволяет заключить, что экзоцитоз специфических/желатиназных гранул, по-видимому, сопровождается образованием SNARE комплексов, в состав которых входят синтаксин 6 /SNAP-25/ VAMP-1 или синтаксин 6 /SNAP-23/ VAMP-1.
42
Рис.4.3. Иммунодетекция синтаксина 6 в SNAP-23 иммуноприципитатах из нейтрофила человека. Равные количества иммуноприципитатов были подвергнуты разделению в 12%-ом ПААГ и иммуноблотингу с использованием антител против синтаксина 6.
К - экстракт из мозга крысы (3 мкг белка).
П - клетки не подвергнутые активации (покой).
А - активированные ФМА клетки.
Выводы
При помощи иммунопреципитации изучены взаимодействия белка плазматической мембраны. Синтаксина 6, с отдельными представителями белков группы SNARE in vitro. Синтаксин 6 взаимодействует с белками мембран гранул VAMP-1 и двумя белками семейства SNAP-25 (SNAP-23 и SNAP-25).
На основании литературных данных и результатов собственных исследований предложена схема, объясняющая экзоцитоз специфических гранул нейтрофилов человека через образование тримерных SNARE комплексов - VAMP-1 /синтаксин 6/ SNAP-25 и VAMP-1 /синтаксин 6/ SNAP-23.
Список использованной литературы
1. Белова Л.А. Биохимия процессов воспаления и поражения сосудов. Роль нейтрофилов // Биохимия. - 1997. - Т.62. - С. 659-668.
2. Глебов Р.Н. Эндоцитоз и экзоцитоз // Биохимия мембран. - М.: Высшая школа, 1987. - 95 с.
3. Маянский А.И., Маянский Д.Н. Очерки о нейтрофиле и макрофаге. - Новосибирск, 1983.
4. Набокина С.М., Моллинедо В. Внутриклеточная локализация VAMP-1 в нейтрофилах человека // Тезисы докладов, 1998. - С. 82.
5. Набокина С.М. Регуляция экзоцитоза в нейтрофилах человека: Автореф.: дисс…докт.биол.наук: 03.00.25. - М., 1999. - 33 с.
6. Оглоблина О.Г. Вопросы медицинской химии. - М., 1988. - С. 2-9.
7. Хорст А. Молекулярные основы патагенеза болезней. - М.: Медицина, 1982.
8. Чижевский А.А. Биофизические механизмы оседания эритроцитов. - Новосибирск, 1987. - С. 39-43.
9. Barnard R.J., Morgan A., Burgoyne R.D. Stimulation of NSF ATPase activiny by alhpa - SNAP is required for SNARE complex disassembly and exocytosis // J. Cell Bid. - 1997. - V.139. - P. 875-883.
10. Baumert M., Maycox P.R., Navone F., Decamilli P., Jahn R. Synaptobrevin: an integral membrane protein of 18,000 daltons present in small synaptic vesicles of rat brain // EMBOJ. 1989. - V.8. - P. 379-384.
11. Bennett M.K., Calakos N., Sheller R.H. Syntaxin: a synaptic protein implicated in docking of synaptic at presynaptic active zones // Science. - 1992. - V. 257. - P. 255-259.
12. Bennett M.K., Garcia-Arraras J.E., Elferink L.A., Peterson K., Fleming A.M., Hazuka C.D., Scheller R.H. The syntaxin family of vesicular transport receptors // Cell-1993. - V. 74. - P. 863-873.
13. Bock J.B., Lin R.C., Scheller R.H. A new syntaxin family member implicated in targeting of intracellular transport vesicles // J. Biol. Chem - 1996. - V.271. - P. 17961-17965.
14. Bock J.B., Scheller R.H. A fusion of new ideas // Nature. - 1997. - V.387. - P. 133-135.
15. Brennward P., Kearns B., Champion K., Keranen S., Bankaitis V., Novick P. Sec 9 is a SNAP-25-like component of a yeast SNARE complex that may be the offector of Sec 4 function in exocytosis // Cell. - 1994. - V.79. - P.245-258.
16. Brumell J.H., Volchuk A., Sengelov H., Borregaard N., Cieutat A.-M., Baiton D.F., Grinstein S., Klip A. Subcellural distribution of docking/fusion proteins in neutrophils, secretory cells with multiple exocytic compartments // J. Immund. - 1995. - V.155. - P.5750-5759.
17. Galakos N., Bennett M.K., Peterson K.E., Scheller R.H. Protein-protein interactions contributing to the specificity of intracellular vesicular trafficing // Science. - 1994. - V.263. - P.1146-1149.
18. Calhoun B.C., Goldenring J.R. Two Rab proteins, vesicle-associated membrane protein 2 (VAMP-2) and secretory carrier membrane proteins (SCAMPs), are present on immunoisolated parietal cell tubulovesicles // Biochem. J. - 1997. - V.325. - P.559-564.
19. Cheatham B., Volchuk A., Kahn C.R., Wang L., Rhodes C.J., Klip A. Insulinstimulated translocation of GLUT 4 glucose transporters requires SNARE-complex proteins // Proc. Natl. Acad. Sci. - 1996. - V.93. - P15169-15173.
20. Chin A.C., Burgess R.W., Wong B.R., Schwarz T.L., Scheller R.H. Differential expression of transcripts from syb, a Drosophila melanogaster gene encoding VAMP (synaptobrevin) that is abundant in non - neuronal cells // Gene. - 1993. - V.131. - P.175-181.
21. Conner S., Leaf D., Wessel G. Members of the Snare hypothesis are associated with cortical granule exocytosis in the sea urchin egg // Mol. Reprod. Dev. - 1997. - V.48. - P.106-118.
22. Edwardson J.M. A cell-free system Ca2+-regulated exocytosis // Methods. - 1998. - V.16. - P. 209-214.
23. Fasshauer D., Eliason W.K., Brunger A.I., Jahn R. Identification of a minimal core of the synaptic SNARE complex sufficient for reversible assembly and disassembly // Biochemistry. - 1998. - V.37. - P.10354-10362.
24. Ferro-Novick S., Jahn R., Vesicle fusion from yeast to man // Nature. - 1994. - V.370. - P.191-193.
25. Fujita H., Tuma P.L., Finnegan C.M., Locco L., Hubbard A.L. Endogenous syntaxins 2, 3 and 4 exibit but overlapping patterns of expression at the hepatocyte plasma membrane // Biochem. J. - 1998. - V.329. - P. 527-538.
26. Gaisano H.V., Sheu L., Grondin G., Ghai M., Bouquillon A., Lowe A., Beaudoin A., Trimble W.S. The vesicle-associated membrane protein family of proteins in rat pancreatic and parotid acinar cells // Gastroenterology. - 1996. - V.111. - P. 1661-1669.
27. Hess D.T., Slater T.M., Wilson M.C., Skene J.H.P. The 25 kDa synaptosomal-associated protein SNAP-25 is the major methionine-rich polyleltide in rapid exonal transport and a major substrate for palmiloylation in adult CNS // J. Neurosci. - 1992. - V.12. - P.4634-4641.
28. Ikebuchi Y., Masumoto N., Matsuoka T., Yokoi T., Tahara M., Tasaka K., Miyake A. SNAP-25 is essential for cortical granule exocytosis in mouse eggs // Am. J. Physiol. - 1998. - V.274. - P.1496-1500.
29. Isemann S., Knew-Goodall Y., Gamble J., Vadas M., Wattenberg B.W. A splice-isoform of vesicle-associated membrane protein-1 (VAMP-1) contains a mitochondrial targeting signal // Mol. Biol. Cell. - 1998. - V.9. - P.1649-1660.
30. Jacobsson G., Pichl F., Meuster B. VAMP-1 and VANP-2 gene expression in rat spinal motoneuruns: differential regulation after neuronal injury // Eur. J. Neurosci: - 1998. - V.10. - P.301-316.
31. Jagadish M.N., Fernandec C.S., Hewich D.R., Macaulay S.L., Gough K.H., Grusovin J., Verkuylen A., Cosgrove L., Alafaci A. Insulin-responsive tissues contain the core complex protein SNAP-25 (synaptosomal-associated protein 25) A and B isoforms in addition to syntaxin 4 and synaptobrevins 1 and 2 // Biochem. J. - 1996. - V.317. - P.945-954.
32. Klumperman J., Kuliawt R., Criffith J.M., Geuze H.J. Mannose G-phosphate receptors are sorted from immature secretory granules via adaptor protein AP-1, clathrin, and syntaxin 6-positive vesicles // J. Cell Biol. - 1998. - V.141. - P.359-371.
33. Kretzschman S., Volknandt W., Zimmermann H. Colocalization on the same synaptic vesicles of syntaxin and SNAP-25 with synaptic vesicle proteins: A reevaluation of functional models required? // Neurisci. Res. - 1996. - V.26. - P.141-148.
34. Masaki R., Yamamoto A. Important roles of the C-terminal portion of HPC-1/syntaxin 1A in membrane anchoring and intracellular localization // J. Biochem. (Tokyo). - 1998. - V.124. - P.311-318.
35. McMahon H.T., Usharyov Y.A. Cellubrevin is a ubiguitous vesicle fusion protein // Nature. - 1993. - V.364. - P.346-349.
36. Misonou H., Kumaruka K. Regulation of the priming of exocytosis and the dissociation of SNAP-25 and VAMP-2 in adrenal chromaffin cells // Neurosci. Lett. - 1997. - V.232. - P.182-184.
37. Mollinedo F., Lazo P.A., Identification of two isoforms of the vesicle-membrane fusion protein SNAP-23 in human neutrophils and HL-60 cells // Biochem. Biophys. Res. Commun. - 1997. - V.231. - P.808-812.
38. Mollinedo F., Naranjo J.R. Uncuopled changes in the expression of the jun family members during myeloid cell differentiation // Eur. J. Biochem. - 1991. - V.200. - P.483-486.
39. Niemann H., Blasi J. Clostridial neurotoxins: new tools for dissecting exocytosis // Trends Cell Biol. - 1994. - V.4. - P.179-185.
40. Pevcner J., Calacos N., Ting A.E. Specificity and regulation of a synaptic vesicle docking complex // Neuron. - 1994. - V.13. - P.353-361.
41. Poirier M.A., Xiao. The synaptic SNARE complex is a parallel four-stranded helical bundle // Nat. Struet. Biol. - 1998. - V.5. - P.765-769.
42. Protopopov V., Gerst J. Homologs of the synaptobrevin VAMP family of the synaptic vesicle proteins function on the late secretory pathway in S. cerevisial // Cell. - 1993. - V.74. - P.855-861.
43. Ravichandran V. Identification of a novel syntaxin - and synaptobrevin / VAMP-binding protein, SNAP-23, expressed in non-neuronal tissues // J. Biol. Chem. - 1996. - V.271.
44. Rothman J.E. Mechanisms of intracellular protein transport // Nature. - 1994. - V.372. - P.55-63.
45. Schiavo G., Stenbeck G. Binding of the synaptic vesicle v-SNARE, synaptotagmin, to the plasma membrane t-SNARE, SNAP-25, can explain docked vesicles at neurotoxin-treated synapses // Proc.Natl.Acad. Biol. Chem. - 1998. - V.273.
46. Shiff G., Morel N. Association of syntaxin with SNAP-25 and VAMP (synaptobrevin) during axonal traonsport // J. Neurosci. Res. - 1997. - V.48.
47. Sollner T., Whiteheart S.W. SNAP receptors implicated in vesicle targeting and fusion // Nature. - 1993. - V.362. - P.318-324.
48. Whiteheart S.W., Griff C., Clary D.O. SNAP family of NSF attachment proteins includes a brain-specific isoform // Nature. - 1993. - V.362. - P.353-355.
Подобные документы
Анализ нейтрофилов как клеток крови, случаи их патологического изменения. Методы изучения нейтрофилов. Экспериментальная апробация способа получения гематологических характеристик, которые могут быть использованы как признаки патологии нейтрофилов.
курсовая работа [1,3 M], добавлен 29.02.2012Этиология, патогенез и лечение панкреонекроза. Нейтрофилы: жизненный цикл, морфология, функции, метаболизм. Биолюминесцентный метод определения активности НАД(Ф)-зависимых дегидрогеназ в нейтрофилах. Активность лактатдегидрогеназы нейтрофилов крови.
курсовая работа [175,0 K], добавлен 08.06.2014Гранулярный состав и продукты секреции полиморфноядерных гранулоцитов. Определение спонтанной активности MPO нейтрофилов периферической крови человека с целью проведения всех стадий анализа в растворе для спектофотометрической оценки результатов.
курсовая работа [3,2 M], добавлен 06.07.2012Оценка восстановления функциональной активности нейтрофилов и иммунореактивности организма при системном и локальном воздействии низкоинтенсивного лазера с постоянной и переменной генерацией импульса при воспалительных заболеваниях урогенитального тракта.
автореферат [138,2 K], добавлен 05.09.2010Кожа как крупнейший специализированный орган человека. Основные клеточные компоненты иммунной системы. Сущность метода иммуногистохимии и "кожного окна". Нейтрофилы, лейкоциты, эозинофилы и тучные клетки. Кератиноциты, меланоциты. Иммунная терапия.
презентация [2,3 M], добавлен 29.05.2016Влияние окислительных условий на динамику фагоцитарной реакции нейтрофилов. Получение полиморфноядерных гранулоцитов из периферической крови. Оценка изменения динамического состояния мембраны нейтрофилов после инкубации в окислительных условиях.
дипломная работа [6,5 M], добавлен 25.04.2012Причины возникновения воспаления. Общее понятие об альтерации. Местные признаки воспаления. Изменение количества и качественного состава белков плазмы крови. Переход острого воспалительного процесса в хронический. Значение воспаления для организма.
реферат [25,8 K], добавлен 11.03.2013Иммунитет как невосприимчивость, сопротивляемость организма к инфекциям и инвазиям чужеродных организмов. Иммунный ответ. Нейтрофилы и их функция. Моноциты, макрофаги, лимфоциты. Виды нарушений фагоцитарной системы. Методы оценки гуморального иммунитета.
презентация [2,0 M], добавлен 05.04.2015Понятие воспаления как защитно-приспособительной реакции целостного организма на действие патогенного раздражителя. Проявление защитной роли воспаления у животных и человека. Причины и условия возникновения воспаления, его местные и общие проявления.
контрольная работа [22,8 K], добавлен 17.05.2011Общий анализ крови: нормы, расшифровка основных показателей: гемоглобин, лейкоциты, нейтрофилы, тромбоциты, СОЭ. Этапы свертывания крови. Физиологические формы гемоглобина, его патологические формы. Причины повышения активности креатинкиназы плазмы.
презентация [275,9 K], добавлен 04.04.2016
