Размещено на http://www.allbest.ru/

МИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ И НАУКИ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение

высшего профессионального образования

"КУБАНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ"

(ФГБОУ ВПО "КубГУ")

Кафедра генетики, микробиологии и биотехнологии

ВЫПУСКНАЯ КВАЛИФИКАЦИОННАЯ РАБОТА БАКАЛАВРА

Микрофлора нефтешламов и нефтезагрязненных грунтов различного происхождения

Работу выполнила И.А. Ярыш

Факультет биологический

Направление 06.03.01 Биология

Научный руководитель, канд. биол. наук, проф. Э.В. Карасёва

Нормоконтролёр, канд. биол. наук, доц. Г.Г. Вяткина

Краснодар 2015

Реферат

Курсовая работа выполнена на _____ страницах машинописного текста. В работу включено девять таблиц, один рисунок и шесть приложений. Библиографический список содержит 32 источника.

Ключевые слова: ИДЕНТИФИКАЦИЯ, МИКРОБОЦЕНОЗ, НЕФТЕШЛАМ, ГРУНТ, БУРОВОЙ ШЛАМ, ВРЕМЯ-ПРОЛЁТНАЯ МАСС-СПЕКТРОМЕТРИЯ, ХРОМАТОГРАФИЯ.

Целью работы было изучение микробиологических сообществ в нефтезагрязнённых субстратах различных по происхождению, а также изучение морфологических и культуральных признаков выделенных штаммов и их идентификация по белковомым профилям время-пролётной масс-спектрометрии (МАЛДИ).

Объектом исследования послужили образцы грунта, нефтешлама различного срока хранения, доставленные с полигона ООО "АPБ" Абинского района, ст. Хомская, а также буровые шламы Кошильского и Тюменского месторождения Сибири.

Был применён комплексный подход: изучались морфолого-культуральные признаки и осуществлена идентификация выделенных 88 культур при помощи МАЛДИ. Проводился сравнительный анализ результатов идентификации по белковым профилям с морфолого-культуральными признаками.

В результате чего выделенные штаммы были определены до вида или рода.

Содержание

• Обозначения и сокращения
• Введение
• 1. Аналитический обзор
• 1.1 Микрофлора почвогрунтов
• 1.2 Таксономическое разнообразие микрофлоры нефтешламов различного срока хранения и происхождения
• 2. Материал и методы
• 2.1 Объект исследования
• 2.2 Питательные среды, используемые для культивирования микроорганизмов
• 2.3 Подготовка материала к исследованию
• 2.4 Количественный учет микроорганизмов
• 2.5 Идентификация выделенных культур
• 2.5.1 Морфологические и культуральные признаки
• 2.5.2 МАЛДИ как метод идентификации микроорганизмов
• 2.5.3 Микроскопирование с использованием фазово-контрастного микроскопа
• 2.5.4 Тест на определение миколовых кислот
• 2.5.5 Учёт нефтеокисляющей активности
• 3. Микрофлора нефтешламов и нефтезагрязгрязнённых грунтов различного происхождения
• 3.1 Таксономическое разнообразие микроорганизмов
• 3.2 Анализ микрофлоры исследуемых образцов и учёт нефтеокисляющей активности выделенных культур
• Заключение
• Библиографический список
• Приложения

Обозначения и сокращения

КОЕ - колониеобразующие единицы

ПА - питательный агар

R2 - низкоуглеродистая питательная среда

КМЦ - карбоксиметилцеллюлоза

МАЛДИ - время-пролётная масс-спектрометрия

HCCA - б-циано-4-гидроксикоричная кислота

Введение

Почва является одним из ключевых биосферных факторов, определяющих само существование живых организмов и всей жизнедеятельности на планете. Утрата почвой лишь нескольких функций непременно отразится на устойчивости биосферы в худшую сторону, особенно негативно это скажется на геохимических связях между звеньями природной среды [Яковлев, Прохоров, Решетина, 2001].

Бурное развитие нефтяной и нефтехимической промышленности сопровождается привнесением в природную среду вредных углеродных загрязнителей; среди них наибольшую опасность представляют сырая нефть, нефтешламы, грунты с нефтью и другими токсическими веществами.

Естественное самоочищение природных экосистем происходит обычно с недостаточно высокой скоростью, особенно при массированных загрязнениях и в регионах с пониженной температурой. В условиях почти полной репрессии

функциональной активности почвенной флоры и фауны определяющая роль в деградации нефтепродуктов в почве принадлежит микроорганизмам [Создание и применения…, 2000].

Например, такие микроорганизмы как Bacillus cereus, Staphilococcus хylosus, Pseudomonas araginosa растут с достаточно высокой скоростью в присутствии нефти и нефтепродуктов и используют нефть как единственный источник углерода и энергии. Это создает возможность перспективного использования этих микроорганизмов в процессе биоремедиации [Сопрунов, Клюякова, 2007].

Так показано, что консорциум микроорганизмов, состоящих из культур Rhodococcus sp., Pseudomonas sp, Аrthrobacter sp. при внесении в нефтезагрязнённую почву интенсивно активируют жизнедеятельность аборегенной нефтеокисляющей микрофлоры и процессы окисления нефтепродуктов в почвых различных климатических зон [Хомякова, Ботвинко, Нетрусов, 2003, Использование бактерии…, 2003].

Поэтому изучение микрофлоры нефтезагрязнённых почв, а также отдельных сообществ микроорганизмов (например, нефтеокисляющих бактерий) позволяет использовать их свойства в процессе биоремедиации.

Традиционные методы анализа микробных сообществ не позволяют выделить и учитывать все разнообразие форм микроорганизмов в шламе, грунте. поэтому требуется использование новых и нестандартных методологических подходов к изучению биоразнообразию методами МАЛДИ.

Целью настоящей работы является: изучение микробных сообществ нефтезагрязнённых субстратов.

Для достижения поставленной цели были сформулированы следующие задачи:

1. Выделение чистых культур микроорганизмов из нефтешламов и грунтов различного происхождения.

2. Изучение культуральных и морфологических признаков выделенных штаммов.

3. Идентификация выделенных культур по белковым профилям методом МАЛДИ масс-спектрометрии.

4. Использование секвенирование гена 16 рРНК для идентификации культур.

5. Определение нефтеокисляющей активности выделенных культур.

1. Аналитический обзор

1.1 Микрофлора почвогрунтов

Грунт - собирательное название горных пород, залегающих преимущественно в пределах зоны выветривания. Из-за малой дисперсности, а также отсутствия органической и биологической составляющих, грунты обладают значительно меньшими сорбционными и буферными свойствами, практически не обладают плодородием [Современный энциклопедический словарь "Химия", 1998].

Микроорганизмы широко представлены в грунтах разного генезиса. Численность микробов в подпочвенных слоях в пересчете на 1 г субстрата находится в пределах 10^{5 -} 10⁷ клеток, и это меньше, чем в почвенном слое, примерно на 1-3 порядка [Humic substances…, 1998, Оборин, 2005]. Также характерно снижение численности микробов в подпочвенных толщах с глубиной [Sinclair, Ghiorse, 1989]. Живые организмы могут находиться в грунте на поверхности твердой минеральной части, в поровом растворе, в порах, трещинах, кавернах и пустотах. Например, в скальных грунтах с пористостью в десятые и сотые доли процента биомасса организмов не может быть значительной, а рыхлые, пористые грунты, способны иметь значительную биомассу живой составляющей [Teske, 2005]. В дисперсных грунтах же подавляющее количество микроорганизмов адсорбировано на поверхности твёрдой фазы. Адсорбция микробных клеток на поверхности твердых частиц экологически целесообразна, так как большинство источников питания находится в природе в нерастворимом состоянии и прямой контакт клеток с твердым питательным субстратом облегчает использование последнего [Звягинцев, 1973, Attached and unattached microbial…, 2001].

Уже выявлено, бактерии, которые способны разрушать нефть, можно встретить не только в почвах, загрязнённых нефтью, в нефтешламах, но и они также могут быть выделены из любой полевой, лесной, луговой почвы [Бактерии - деструкторы…, 2001].

1.2 Таксономическое разнообразие микрофлоры нефтешламов различного срока хранения и происхождения

В настоящее время на предприятиях добычи, переработки и транспортировки нефти скопилось большое количество нефтешламов, образующихся в результате зачистки резервуаров нефти или продуктов ее переработки. В составе нефтешлама от 10 до 50 % составляют нефтепродукты; от 5 до 60 % - вода; от 2 до 40 % - механические примеси [Перспективные методы очистки…, 2005].

Нефтешламы - отходы хранения и переработки нефти. Состав и свойства конкретного нефтешлама определяется сортом нефти и особенностями формирования. В целом, в состав нефтешлама входят тяжелые фракции нефти и мелкодисперсный минеральный грунт. В случае длительного хранения в амбарах - накопителях говорят о выветренных нефтешламах. Следует отметить, что и токсичность, и биологическая доступность (способность быть утилизированными) нефтепродуктов определяются, в первую очередь, одним и тем же фактором - растворимостью. Таким образом, наиболее токсичные фракции нефти первыми подвергаются обезвреживанию в ходе биоремедиации, конечно, если их концентрация не подавляет нефтеокисляющие микроорганизмы [Якушева, Никоноров, Кияненко, 2002].

В составе шламов, кроме нефти и ее производных, находятся от 40 % до 70 % различных загрязняющих веществ. Так, отличительной особенностью нефтехимических шламов является наличие в их составе помимо нефтяных углеводородов бензолов, толуолов, фенолов, ксилолов, стирола, ацетофенона, ацетонитрила, метилфенилкарбинола, метилэтилкетона, опасность которых связана с токсическим, иммунотоксическим и канцерогенным потенциалом. Также нефтешламы обладают радиоактивностью, превышающей нормативные требования, что связано с наличием в них таких радиоактивных элементов, как радий и барий [Особенности распределения…, 2006].

Нефтешлам, отобранный из верхних слоёв амбаров, содержит достаточно большое количество углеводородов "дизельной фракции", находящихся в пределах 50 - 80 % масс. Концентрация парафинов в нижних слоях выше, чем в верхних [Особенности химического состава…, 2002].

С поверхности нефтешлама выделяют штаммы бактерий преимущественно родов: Pstudomonas, Васillus, Rhodococcus [Волченко, Карасёва, 2006].

В состав нефтешлама входят ксенобиотики, относящиеся к различным классам химических соединений, о суммарном метаболическом потенциале исследуемой микрофлоры судят по степени допустимости нефтешлама как единственного источника органического и минерального питания. Проявляется тенденция к снижению численности с глубиной залегания соответствующих горизонтов: общего количества микробных клеток - 10¹¹-10⁸ КОЕ/г, аэробных гетеротрофов - 10¹¹-10⁷ КОЕ/г, спорообразующих бактерий - 10⁹-10⁶ КОЕ/г, актиномицетов-10⁴-10³КОЕ/г [Никитина, Зарипова, Частухина, 2000].

При исследовании нефтяных пластов были найдены бактерии-деструкторы нефти, чаще относящиеся к аэробным термофильным углеводородокисляющим бактериям и факультативно анаэробным, способным потреблять индивидуальные углеводороды и нефть, а также продукты окисления нефти - низшие спирты и летучие кислоты. Такими бактериями являются Bacillus licheniformis, Bacillus subtilis, Bacillus megaterium [Выбор активного микроорганизма - деструктора…, 1995].

Такие рода как: Rhodococcus, Pseudomonas являются основными компонентами углеводородокисляющих бактериоценозов как почвенных, так и водных экосистем [Родококки как природный сорбент…, 1986].

Представители рода Pseudomonas плохо переносит условия конкуренции, но быстро заселяют новые ниши благодаря высокой скорости роста. Они чувствительны к низкой температуре и солнечному ультрафиолету. Pseudomonas aeruginosa, Pseudomonas fluorescens, Pseudomonas putida, Pseudomonas boreopolis способны усваивать лёгкие парафины и нафталин, а также представителей этого рода выделяют в процессе утилизации мазута [Видовая структура…, 1994].

Из микробного сообщества, существующего в экстремальных условиях нефтешлама (рН 1,15), выделены и изучены 13 штаммов бактерий, идентифицированные как Corynebacterium spр., Diezia. maris и Bacillus sp., способные к деструкции углеводородов в широком диапазоне рН. [Плешакова, 2010].

Бактерии, принадлежащие к роду Bacillus, являются активными деструкторами сырой нефти. К ним относят Bacillus subtilis и Bacillus megaterium, характеризующийся широким спектром утилизации углеводородов, в том числе моно - и полициклических соединений, которые плохо деструктируются микроорганизмами [Биодеградация углеводородов…, 1994, Выделение и характеристика, 1997].

А.А. Худорормов и соавторы [Влияние источника углерода…, 2012] выявили, что обезвреживание нефтешламов затруднено из-за практически полного отсутствия в них углеводородокисляющих микроорганизмов или крайней скудостью ее, объясняющегося токсичным действием высокой концентрации нефтепродуктов, присутствием тяжелых фракций углеводородов, отсутствием структурированности, нарушением аэрации и водного баланса, а также содержанием дополнительных поллютантов. Так, содержание в нефтешламах тяжёлых металлов могут замедлять или полностью подавлять рост микроорганизмов. Ими было выявлено, что наибольшую нефтеокисляющую активность в присутствии металлов сохраняют штаммы, относящиеся к роду Rhodococcus, Gordonia, Arthobacter, а наименьшую активность проявляет штамм Micrococcus.

Так были опровергнуты данные о выделении преимущественно спорообразующих форм из нефтешламов длительного срока хранения. Напротив были обнаружены микроорганизмы различных таксономических групп, в том числе ранее не отмечаемых, таких как: р. Chromobacterium, р. Agromyces, Сitrobacter [Беседина, 2007].

Также установлено, что для видового состава микрофлоры очищаемых нефтешламов характерна смена грамположительных спорообразующих форм неспорообразующими - актиномицетами [Неведрова, 2002].

Буровые шламы представляют собой продукт, состоящий из твердых и жидких компонентов. Образующийся на забое выбуренный шлам взаимодействует с буровым раствором. В результате этого частицы горных пород адсорбируют на поверхности различные компоненты бурового раствора и в таком виде остаются длительное время на буровой площадке, в частности, в шламовых амбарах [Ягафарова, Барахнина, 2006].

В микробных сообществах буровых шламов доминируют углеводородокисляющие микроорганизмы. Выявлены микроорганизмы, способные к разложению различных ксенобиотиков. Например, Bacillus firmus, Solibacillus silvestris, Bacillus circulans характеризовались отчетливы ростом на среде с бензолом [Беляков, Плешакова, 2013].

Э.В. Карасёва и соавторы [Нефтеокисляющий штамм…, 2012] обнаружили, что снижается фитотоксичность загрязненной нефтью почвы при обработке культурой Rhodococcus erythropolis B2. Способность родококков выделять фитостимуляторы при деструкции углеводородов даёт возможность использовать данной штамм как фитостимулирующую культуру при рекультивации нефтезагрязненных почв, а также в фиторемедиационном этапе очистки различных нефтесодержащих отходов.

микрофлора нефтешлам нефтезагрязненный грунт

2. Материал и методы

Работа проведена на кафедре генетики, микробиологии и биотехнологии Кубанского государственного университета г. Краснодара, 2014 году.

2.1 Объект исследования

Объектом исследования послужили образцы грунта, нефтешлама различного срока хранения, доставленные с полигона ООО "АPБ" Абинского района, ст. Хомская, а также буровые шламы Кошильского и Тюменского месторождения Сибири.

	Свежий шлам	Шлам длительного срока хранения	Шлам в процессе биоремедиации	Нефтезагрязнённый грунт	Незагрязнённый грунт
Срок загрязнения (год)	Меньше 1	80лет	1	1

2.2 Питательные среды, используемые для культивирования микроорганизмов

Для выделения микроорганизмов из образцов использовалась стандартная среда: питательный агар производства ЗАО "Научно-исследовательский центр фармакотерапии". А также использовались следующие среды:

Низкоуглеродистая среда R2, состав (г/л): дрожжевой экстракт - 0,5;

пептон ферментативный - 1; декстроза - 0,5; крахмал растворимый - 0,5; пируват натрия - 0,3; K₂HPO_{4 -} 0,3; MgSO₄ Ч7Н₂О - 0,05; агар-агар - 18; казеиновые кислоты - 0,5; H₂O (водопр.) - 1000.

2.3 Подготовка материала к исследованию

Предпосевная подготовка материала заключалась в том, что навеску образца грунта, нефтешлама весом 5 г помещались во флакон с 50 мл стерильного физиологического раствора. Затем флаконы взбалтывали на качалке при 130 об/мин. 15 мин.

2.4 Количественный учет микроорганизмов

Для количественного учёта микроорганизмов в грунте, нефтешламе использовался метод предельных разведений методом Коха с последующим высевом на соответствующие питательные среды: питательный агар (ПА), малоуглеродистую среду R2. Для посева на ПА, среду R2 делались разведения - 10^-2, 10^-3, 10^-4, 10^-5. Инкубировали микроорганизмы в термостате при температуре 30 Ўж в течение 4 дней.

Учёт результатов производили на 7-е. сутки. На плотных средах концентрацию клеток определяли исходя из числа выросших колоний [Практикум по микробиологии, 1976].

2.5 Идентификация выделенных культур

2.5.1 Морфологические и культуральные признаки

Морфологические и культуральные признаки выделенных культур определяли, выращивая культуры на ПА и на, низкоуглеродистой среде R2. К морфологическим признакам относят: определение формы клеток, у палочковидных отмечают форму концов клеток, размера, подвижности клеток, способности к спорообразованию, расположение спор в клетках, наличие капсул и клеточных включений. Данные были получены путем микроскопирования с использованием фазово-контрастного микроскопа Ergoval (Carl Zeiss) и окраски по Граму, а также с применением KOH - теста. К культуральным признакам относят: оптические свойства, характер поверхности, профиль, край, размеры, консистенция колоний.

2.5.2 МАЛДИ как метод идентификации микроорганизмов

Для анализа масс-спектральных белковых профилей культуры выращивали на среде R2: (27 Ўж, 48 ч), культуры предварительно сеяли штрихом на чашках Петри. Клетки (~ одну колонию) с чашки Петри втиранием переносили с помощью тонкого стерильного шпателя на стальную пластинку-мишень, сверху наносили 0,7 мкл раствора матрицы (б-циано-4-гидроксикоричная кислота [HCCA] в 50 % -ном водном растворе ацетонитрила, содержавшем 2,5 % трифторуксусной кислоты) и высушивали на воздухе при комнатной температуре. Спектры регистрировали в линейном режиме с задержанной экстракцией ионов на приборе "Autoflex Speed" ("Bruker Daltonics”). Время задержки - 350 нс, ускоряющее напряжение - 20 кВ. Запись спектров проводили в режиме положительных ионов; диапазон регистрируемых масс составлял 2-20 кДа. Результирующие спектры каждого препарата штаммов получали суммированием спектров, зарегистрированных в 10-15 точках анализируемых препаратов при 500 ударах лазера.

Обработку масс-спектров производили с помощью программных пакетов "Flex analysis 3.3" и " "Bruker Daltonics”.

Для сравнения степени идентичности видов методом МАЛДИ применились такие показатели как:

Диапозон	Описание	Категория совпадения	Цвет	Символы
2.300 - 3.000	Идентификация до вида	А	Зелёный	(+++)
2.000 - 2.299	Безопасная идентификация до рода, вероятная до вида	В	Зелёный	(++)
1.700 - 1.999	Вероятная идентификация до рода	В	Желтый	(+)
0.000-1.699	Ненадежная идентификация	С	Красный	(-)

2.5.3 Микроскопирование с использованием фазово-контрастного микроскопа

Для изучения формы и размера клеток использовался препарат "раздавленная капля" 24 - часовых культур, выращенных на чашках Петри с дальнейшим изучением культур под фазово-конрастным микроскопом Ergoval (Carl Zeiss) с использованием иммерсионного объктива 90Х.

При этом наблюдаемые в микроскопе препараты в тех частях, где имеются "амплитудные" смещения световых волн, являются контрастными, а в тех частях, где имеются "фазовые" смещения - малоконтрастными. Посредством фазово-контрастного приспособления микроскопа имеющиеся фазовые неконтрастные колебания искусственно превращаются в колебания с иной амплитудой, вследствие чего фазовые элементы препарата делаются столь же контрастными, как и амплитудные, от чего изображение всего исследуемого объекта становится контрастным и отчетливым.

2.5.4 Тест на определение миколовых кислот

1. 10 мг сухой биомассы поместить в гидролизную пробирку и добавить 1 мл метанола, 1 мл толуола, 0,04 мл конц. Н₂SO₄, перемещать.

2. Метанолиз 12-16 ч, 75Ўж.

3. После охлаждения добавить 0,2 мл гексана, интенсивно встряхивать.

4. Гексановый экстракт нанести на Silufol (Merck) и разогнать в системе гексан-диэтиловый эфир (85: 15).

5. После высушивания хроматограма проявляется 5% -ным раствором фосфорномолибденовой кислоты в спирте при нагревании. Миколовые кислоты видны как синие пятна на жёлтом фоне. Визуализируются (Merck) под УФ-лучами.

Пластины Silufol перед использованием очищаются в системе хлороформ-метанол (9:1) и активируются 1ч при 100-120Ўж. Метиловые эфиры миколовых кислот (МЭМК) частично разрушатся уже через 12 ч после метанолиза. Системва для камеры: гексан 42,5, эфир 7,5 мл.

2.5.5 Учёт нефтеокисляющей активности

Учёт нефтеокисляющей активности проводился в течении 7-ми суток по схеме:

"-" - роста нет, неэмульгированная нефтяная плёнка на поверхности;

"+" - слабый рост, частичная эмульгация;

"++" - рост, частичная эмульгация, слабое помутнение среды;

"+++" - рост, полная эмульгация, помутнение среды;

"++++" - полная деструкция нефтяной пленки.

3. Микрофлора нефтешламов и нефтезагрязгрязнённых грунтов различного происхождения

В работе были использованы образцы грунта, нефтешлама различного срока хранения, взятые с полигона ООО "АPБ" Абинского района, ст. Хомская, а также буровые отходы Западной Сибири. При этом были выделены 94 чистых культур микроорганизмов для последующего изучения их культуральных и морфологических признаков.

Таблица 1 - Высеваемость микроорганизмов (КОЕ/г) из грунта и нефтешламов на 7-е сутки

Питательная среда	Свежий шлам	Шлам длительного срока хранения	Шлам в процессе биоремедиа-ции	Нефтезагрязнённый грунт	Незагрязнённый грунт
ПА	1,5 Ч107	9Ч 106	5Ч106	5Ч106	5Ч106
R2	2Ч108	5Ч108	7,5Ч107	9Ч106	8,2Ч108

Таблица 2 - Высеваемость из микроорганизмов (КОЕ/г) из буровых шламов

Питательная среда	Тюменское месторождение	Кошильское месторождение
ПА	2 Ч106	3Ч 106
R2	2,5Ч107	4,5Ч108

Рисунок 1 - Общее количество выделенных штаммов

Согласно полученным данным наибольшая численность микроорганизмов порядка 10⁸ наблюдалась в образце с незагрязнённым грунтом, а наименьшая порядка 10⁶ - в образце с буровыми отходами Западной Сибири. Высеваемость микроорганизмов, а также наивысшее таксономическое разнообразие форм бактерий наблюдалось на низкоуглеродистой среде R2.

3.1 Таксономическое разнообразие микроорганизмов

Выделенные штаммы были идентифицированы на основании морфолого-культуральных признаков и по белковому профилю с использование время-пролётной масс-спектрометрии (МАЛДИ). Полученные данные представлены в таблице 3, 4, 5, 6, 7.

Таблица 3 - Морфологические и культуральные признаки штаммов, выделенных из незагрязнённого грунта

Штамм	Культуральные признаки (описание колоний)	Морфологические признаки	Окраска по Граму
3.7	Розовые, округлые, гладкие, маслянистые	Кокки, расположены группами и одиночно (по 2-4), спор нет	Г-
3.6 (2); 3.22	Светло - бежевые, округлые, маслянистые, гладкие	Прямые палочки, 3-3,5 мкм, склонны объединяться в цепочки, субтерминальное расположение спор, споры цилиндрической формы, Ш 0,7-0,8 мкм	Г+
3.33	Бежевые, округлые, маслянистые	Прямые палочки, 1,5-2 мкм, терминальное расположение спор, споры округлой формы, Ш 0,8 - 0,9 мкм	Г+
3.5	Бежевые, округлые, врастающие в агар, рельефные	Прямые палочки, 3-4 мкм, субтерминальное расположение спор, споры цилиндрической формы, Ш 0,7 - 0,9	Г+
3.13	Белые, округлые, гладкие, маслянистые, однородные	Палочки, 2-4 мкм, терминальное расположение спор, споры округлой формы, Ш 0,4 - 0,5	Г+
3.8 (2)	Бело-бежевые, округлые, гладкие неоднородные	Палочки, 2-4 мкм, склонны объединяться в цепочки, споры цилиндрической формы, Ш 1.5 мкм	Г+
3.2	Бело-бежевые, округлые. бургистые	Палочки, 3 - 3,5 мкм, склонны объединяться в цепочки, споры цилиндрической формы, Ш 0,7 - 0,8 мкм	Г+
3.33а	Светло-бежевые, округлые маслянистые, гладкие	Правильные палочки, субтерминальное расположение спор, эндоспоры, Ш 0,6-0,7 мкм	Г+
3.6	Светло-бежевые, округлые, гладкие, однородные	Прямые палочки, 3-4 мкм, склонны объединяться в цепочки, субтерминальное и терминальное расположение спор, споры цилиндрической формы, Ш 2 мкм	Г+
3.8 (1)	Бело-бежевые, округлые, гладкие, неоднородные	Палочки, 3-5 мкм, субтерминальное расположение спор. споры цилиндрической формы, Ш 2 мкм	Г+
3.9	Белые, округлые, гладкие, однородные	Короткие палочки, 1-1,5 мкм, встречаются удлинённые кокки, спор нет, делятся перетяжкой, Ш 1-1,2 мкм	Г-
3.10	Светло-бежевые, округлые, гладкие однородные	Одиночные палочки, 1-2 мкм, спор нет, Ш 0,2-0,4 мкм	Г-
3.11 (2)	Белые, волнистые, мелкозернистые, ризоидные	Прямые палочки, 1-1,5 мкм, терминальное и субтерминальное расположение спор, споры цилиндрической формы, Ш 0,7-0,8 мкм	Г+
3.1 (2) б	Светло - бежевые, округлые, с фестончитым краем	Палочки, 1-1,5 мкм, субтерминальное расположение спор, споры округлой формы, Ш 0,7-0,8 мкм	Г+
3.12	Белые, округлые, гладкие, плёнчатые	Правильные палочки, 1,5-2 мкм, без спор,Ш 0,2-0,3 мкм	Г-
3.2 (1) a	Светло-бежевые, округлые, складчатые	Правильные палочки, 1-1,5 мкм, спор нет, Ш 0.2-0,3	Г-

Согласно таблице 3 из незагрязнённого грунта было выделено 17 штаммов микроорганизмов из них: 4 Г ^- палочки: 3.9, 3.10, 3.12, 3.2 (1) а, 1 Г ^- кокк: 3.7, а также 12 культур Г⁺ палочек со спорами: 3.6 (2); 3.22, 3.33, 3.5, 3.13, 3.8 (2), 3.2, 3.3 (2), 3.6, 3.8 (1),3.11 (2), 3.1 (2) б.

Таблица 4 - Морфологические и культуральные признаки штаммов, выделенных из шлама длительного срока хранения

Штамм	Культуральные признаки (описание колоний)	Морфологические признаки	Окраска по Граму
2.9; 2.8	Белые, округлые, гладкие, однородные.	Кокки, но и встречаются палочки, спор нет	Г-
2.11	Белая, округлая, гладкая, маслянистая	Палочки, 1-1,5 мкм, спор нет, Ш 0.2-0,3 мкм	Г-
2.2 (2)	Желтые, складчатые, концентрические, маслянистые	Палочки, спор нет, 1-1,5 мкм, Ш 0,2 - 0,4 мкм	Г-
2.3	Бежевые, округлые, гладкие, однородные	Прямые палочки, 3-4 мкм, субтерминальное расположение спор, споры цилиндрической формы, Ш 0,3-0,4 мкм	Г+
2.4	светло - жёлтые, округлые, гладкие, маслянистые	Палочки, 1 - 2 мкм, деление бинарное, Ш 0,8 мкм	Г+
2.5	Розовые, округлые, гладкие, маслянистые	Кокки, но и встречаются палочки, спор нет	Г-
2.6	Белые, округлые, гладкие, маслянистые,. полупрозрачные	Правильные палочки, 2-4 мкм, спор нет, Ш 0,5-0,7 мкм	Г-
2.7	Белые, округлые, гладкие, маслянистые, плёнчатые, однородные	Прямые палочки, 1-1,5мкм, спор нет, Ш 0,4-0,5 мкм	Г-
2.1	Оранжевые, округлые, полупрозрачные, плёнчатые	Палочки, 1-1,5 мкм, спор нет, Ш 0,3-0,4 мкм	Г-
2.10	Белые, округлые, неоднородные, тестообразные	Правильные палочки, 3-4 мкм, субтерминальное расположение спор, споры цилиндрической формы, Ш 0,8-0,9мкм	Г+
2.13	Бежевые, гладкие, однородные, концентрические	Правильные палочки, 1-2 мкм, субтерминальное и терминальное расположение спор, споры цилиндрической формы, Ш 0,8-0,9 мкм	Г+

Согласно таблице 4 из шлама длительного срока хранения выделено 12 изолятов из них: 5 Г ^- палочек без спор: 2.11, 2.2 (2), 2.6, 2.1, 2.7; 3 Г ^- кокки: 2.9; 2.8, 2.5; 4 Г⁺ палочки со спорами: 2.3, 2.4, 2.10, 2.13.

Таблица 5 - Морфологические и культуральные признаки штаммов, выделенных из свежего шлама

Штамм	Культуральные признаки (описание колоний)	Морфологические признаки	Окраска по Граму
1.4	Светло-бежевые, складчатые, гладкие, маслянистые, однородные	Прямые палочки, 1-1,5 мкм, спор нет, Ш 0,4 - 0,5 мкм	Г-
1.11	Светло - розовые, округлые, гладкие, однородные	Палочки, 1,5-2 мкм, спор нет, Ш 0,3 - 0,4 мкм	Г-
1.9	Светло-бежевые, гладкие, маслянистые, однородные	Прямые палочки, 1-3 мкм концы закруглены, спор нет, Ш 0,7 мкм	Г-
1.10	Светло-бежевые, гладкие, маслянистые, однородные	Палочки, 1,5-2 мкм, спор нет, Ш 0,7 - 0,8 мкм	Г-
1.14	Светло-бежевые, округлые, гладкие, неоднородные, маслянистые	Прямые палочки, до 5 мкм, концы закруглены, спор нет, Ш 0,7 мкм	Г-
1.5 (2) б (2)	Светло - бежевые, гладкие, маслянистые	Прямые палочки, 2-2,5 мкм, спор нет, Ш 0,8-0,9 мкм	Г-
1.17	Светло-бежевые, складчатые, маслянистые, плёнчатые	Правильные палочки,2-2,5 мкм, спор нет, Ш 0,4 - 0,5мкм	Г-
1.26	Бежевые, гладкие, маслянистые	Прямые палочки, 2-2,5мкм, терминальное и субтерминальное расположение спор, споры цилиндрической формы, Ш 0,7-0,8 мкм	Г+
1.10 (2); 1.24	Светло - бежевые, складчатые., маслянистые, плёнчатые	Правильные палочки, 1-1,5 мкм, спор нет, Ш 0,4-0,5 мкм	Г-
1.6	Светло-бежевые, складчатые, маслянистые, плёнчатые	Прямые палочки, 2-3мкм, спор нет, Ш 0,4-0,5 мкм	Г-
1.7; 1.1	Светло-бежевые, складчатые, маслянистые, плёнчатые	Прямые палочки, 1-1,5мкм, спор нет, Ш 0,6-0,7 мкм	Г-
1.21	Светло - бежевые, складчатые, плёнчатые	Прямые палочки, 2-3мкм, спор нет, Ш 0,4-0,5 мкм	Г-
1.8 (2)	Светло - бежевые, складчатые,. плёнчатые	Прямые палочки, 1-2 мкм, концы закруглены, спор нет, Ш 0,7мкм	Г-
1.19	Светло - бежевые, складчатые, плёнчатые	Прямые палочки, 2-3мкм, спор нет, Ш 0,4-0,5 мкм	Г-
1.22 (1); 1.22 (2)	Белые, концентрические, мелкозернистые	Прямые палочки, 1,5 - 2 мкм, субтерминальное расположение спор, споры цилиндрической формы, Ш 0,7 - 0,9 мкм	Г+
1.3	Белые, округлые, гладкие, однородные, плёнчатые	Кокки, но и встречаются палочки, спор нет	Г-
1.2	Светло-бежевые, округлые, гладкие, однородные	Неправильной формы, разнообразны по размерам, встречаются в цепочках	Г-
1.20	Жёлтые, складчатые, концентрические, мелкозернистые	Палочки, до 5 мкм, субтерминальное расположение спор, споры вытянутой цилиндрической формы, Ш 0,7 мкм	Г+
1.18	Светло-бежевые, округлые, маслянистые	Прямые палочки, 2-мкм, спор нет, Ш 0,6 мкм	Г-
1.15	Бежевые, округлые, гладкие, маслянистые	Одиночные кокки, объединяются в скопления	Г-
1.13	Розовые, округлые, гладкие, маслянистые	Кокки, объединяются в скопления (небольшие агломераты), клетки не расходятся после деления	Г-

Согласно таблице 5 из свежего шлама выделено 25 штаммов микроорганизмов из них: 17 Г ^- палочек без спор: 1.4, 1.11, 1.9, 1.10, 1.14,1.5 (2) б (2), 1.17, 1.10 (2); 1.24, 1.6, 1.7; 1.1, 1.21, 1.8 (2), 1.19, 1.18, 1.15; 3 Г ^- кокков: 1.13, 1.15, 1.3; 5 Г⁺ палочек со спорами: 1.22 (1); 1.22 (2); 1.16, 1.26, 1.20; неправильной формы Г ^- палочки: 1.2.

Таблица 6 - Морфологические и культуральные признаки штаммов, выделенных из нефтезагрязнённого грунта

Штамм	Культуральные признаки (описание колоний)	Морфологические признаки	Окраска по Граму
4.11	Белые, маслянистые, мелкозернистые	Кокки, но и встречаются палочки, спор нет	Г-
4.7	Белые, гладкие, маслянистые, мелкозернистые	Палочки, 1,5 - 2 мкм, спор нет, Ш 0,7 мкм	Г-
4.5 (1) а; 4.5 (2)	Светло - зелёные, маслянистые, округлые	Правильные палочки, 2-2,5 мкм, клетки часто образуют зигзагообразные цепочки, субтерминальное расположение спор, споры вытянутой цилиндрической формы, Ш 0,7-0,8 мкм	Г+
4.9	Белые, складчатые, маслянистые	Палочки, 2-2,5 мкм, субтерминальное расположение спор, споры цилиндрической формы, Ш 0,7-0,8 мкм	Г+
4.13	Полупрозрачные, округлые, гладкие.	Палочки, 1-1,5 мкм, спор нет, Ш 0,5мкм	Г-
4.6 (2)	Белые, концентрические, маслянистые	Прямые палочки, 3-4 мкм, субтерминальное расположение спор, споры цилиндрической формы, Ш 0,7 - 0,9 мкм	Г+
4.1	Белые, концентрические, маслянистые, мелкозернистые	Прямые палочки, до 7 мкм, субтерминальное расположение спор, споры округлой формы, Ш 1,5 мкм	Г+
4.3	Бежевые, округлые, полупрозрачные, маслянистые, однородные	Прямые одиночные палочки, 1-1,5мкм, спор нет, Ш 0,6-0,7 мкм	Г-
4.4	Светло-бежевые, округлые, маслянистые	Прямые палочки, 2мкм, спор нет, Ш 0,6 мкм	Г-

Согласно таблице 6 из нефтезагрязнённого грунта выделено 10 изолятов из них: 4 Г ^- палочки без спор: 4.13, 4.3, 4.4, 4.7; 1 Г ^- кокк: 4.11; 5 Г⁺ палочки со спорами 4.5 (1) а, 4.5 (2), 4.6 (2), 4.1, 4.9.

Таблица 7 - Морфологические и культуральные признаки штаммов, выделенных из шлама в процессе биоремедиации

Штамм	Культуральные признаки (описание колоний)	Морфологические признаки	Окраска по Граму
5.17	Светло-желтые, складчатые, волнистые, плёнчатые	Палочки, 1 мкм, субтерминальное расположение спор, споры вытянуто цилиндрические, Ш 0,4 мкм	Г+
5.9 (1)	Светло-бежевые, складчатые, волнистые, маслянистые	Кокки, находятся группами по 2-6, разнообразны по форме и длине	Г-
5.19	Светло - жёлтые, гладкие, складчатые	Правильные палочки, субтерминальное расположение спор, споры цилиндрической формы, Ш 0,8-0,9 мкм, длина 2,5-3 мкм	Г+
5.21 (1)	Белые, складчатые, маслянистые, волнистые	Правильные палочки, заострённые концы, субтерминальное расположение спор, споры цилиндрической формы, Ш 0,7 мкм, длина 1,5-2,3 мкм	Г+
5.18 (1)	Светло - бежевые, округлые, гладкие, маслянистые	Прямые палочки, субтерминальное расположение спор, споры цилиндрической формы, Ш0,.3-0,4 мкм, длина 2-3 мкм	Г+
5.18 (2)	Светло - бежевые, округлые, гладкие, маслянистые	Палочки, встречаются палисадные структуры, V-образные структуры, разнообразные по форме и длине	Г-
5.18 (3)	Светло - бежевые, округлые, гладкие, маслянистые	Прямые палочки, 2 мкм, субтерминальное расположение спор, споры цилиндрической формы, Ш0,5 мкм	Г+
5.21 (2)	Бежевые, маслянистые, волнистые	Палочки, 2 мкм, субтерминальное расположение спор, споры округлой формы, Ш 0,6 мкм	Г+
5.12	Жёлтые, волнистые	Палочки, 3-4 до 5 мкм, иногда в виде нитей, концы заострены,Ш0,7-0,9 мкм	Г-
5.4 (2)	Желтые, концентрические, маслянистые	Одиночные палочки, 1,5 мкм, субтерминальное и терминальное расположение спор, споры округлой формы, Ш 0,5 мкм	Г+
5.4 (1);	Желтые, концентрические, маслянистые	Кокки, но некоторые палочки находятся группами по 2-6, разнообразны по форме и длине	Г-
5.16	Светло-жёлтые, складчатые, маслянистые	Прямые палочки, длина 2-3 мкм, без спор, Ш 0,.3-0,4 мкм	Г-
5.10; 5.14	Бежевые, складчатые, маслянистые	Палочки, 3-4 мкм, склонны объединяться в цепочки, субтерминальное и терминальное расположение спор, споры цилиндрической формы, Ш 2 мкм	Г+
5.1	Светло-жёлтые, концентрические, плёнчатые	Прямые палочки, 2-3 мкм, без спор, Ш0,.3-0,4 мкм	Г-
5.7; 5.8	Белые, округлые, гладкие, маслянистые, выделяют водорастворимый пигмент	Прямые палочки, 2-4 мкм, спор нет, Ш0,3-0,4 мкм	Г-
5.15	Белые, гладкие, маслянистые, однородные	Палочки, 1-2 мкм, склонны объединению, деление перетяжкой, слегка неправильной формы, Ш 0,5 - 0,7 мкм	Г-
5.3	Светло-оранжевые, гладкие, маслянистые	Палочки, 3 мкм, спор нет, Ш 0,5 мкм	Г-
5.13	Жёлтые, гладкие, маслянистые	Палочки, 3-4 мкм спор нет, Ш 0,3 мкм	Г-
5.5	Белые, гладкие, маслянистые, однородные	Прямые палочки, 2-3 мкм спор нет, Ш 0,5 мкм	Г-

Согласно таблице 7 из шлама в процессе биоремедиации выделено 21 изолятов из них: 7 Г ^- палочек без спор: 5.12, 5.16, 5.1, 5.7, 5.8; 5.3, 5.5, 5.13; 3 Г ^- кокка: 5.4, 5.4 (1); 5.9 (1); 2 Г ^- палочки неправильной формы:

5.15, 5.18 (2); 7 Г⁺ палочек со спорами: 5.17,5.19, 5.21 (1), 5.18 (1), 5.21 (2), 5.10, 5.14.

Таблица 8 - Морфологические и культуральные признаки штаммов, выделенных из буровых отходов Западной Сибири

Штамм	Культуральные признаки (описание колоний)	Морфологические признаки	Окраска по Граму
2.22 1а (1); 2.22 1 а (2)	Красные, гладкие, округлые	Палочки, неправильной формы, V-формы, разнообразные по форме и длине	Г-
5.5у 5.1	Бежевые, округлые, гладкие	Палочки, 2-3 мкм, спор нет, Ш 0,4 мкм	Г-
№ 5 5А	Бежевые, гладкие, маслянистые	Палочки, 2-3 мкм, спор нет, Ш 0,4 мкм	Г-
2A	Бежевые, гладкие, маслянистые	Присутствуют палочки и кокки, разнообразные по размерам	Г-
№7 2.1 2a	Бежевые, гладкие, маслянистые	Присутствуют палочки и кокки, разнообразные по размерам	Г-
№3 2.1	Бежевые, гладкие, маслянистые	Присутствуют палочки и кокки, разнообразные по размерам	Г-
P 9	Желтоватые, складчатая, маслянистая	Толстые палочки 2-3 мкм, эндоспоры	Г+
№ 6 4.4 Б	Бежевые, гладкие, масялнистые	Тонкие правильные палочки 1-2 мкм, без спор, 0,6 мкм	Г-

Согласно таблице 8 из буровых отходов Западной Сибири выделено 9 изолятов из них: 3 Г ^- палочки: № 6, 5.5у 5.1; 5 Г ^- неправильной формы палочки и кокки: 2.22 1а (1),2.22 1 а (2), № 7, № 3, № 1, 1Г⁺ палочка с эндоспорами: Р 9.

Далее для более детального изучения выделенных штаммов использовался метод время-пролётной масс-спектрометрии (МАЛДИ). Полученные результаты представлены в Приложении А, Б, В, Г, Д, Е.

Идентификация выделенных культур по белковым профилям показала, что разные штаммы являлись представителями одного вида. Мы предполагаем, что данная картина обусловлена случайным выбором культуры независимо от их реальной численности в исследуемых образцах.

Для проверки результатов идентификации, полученные с помощью МАЛДИ, проводилось сравнение идентифицированных штаммов с их морфолого-культуральными признаками.

Таблица 9 - Список изолятов идентифицированных до вида или рода

№ изолята	Вид (род)	Признак идентификации	Источник выделения
1.11 (С) (-)	Pseudomonas	Морфолого-культу ральные признаки	Свежий шлам
1.13 (А) (++)	Kocuria rosea	МАЛДИ, морфолого-культуральные признаки	Свежий шлам
1.14 (С) (-)	Pseudomonas	Морфолого-культуральные признаки	Свежий шлам
1.16 (С) (-)	Arthobacter kerguelensis	Не соответствует идентификации по морфолого-культуральным признакам	Свежий шлам
1.9 (В) (+)	Рseudomonas	МАЛДИ, морфолого-культуральные признаки	Свежий шлам
1.10 (С) (-)	Рseudomonas	МАЛДИ, морфолого-культуральные признаки	Свежий шлам
1.4 (В) (+)	Рseudomonas	МАЛДИ, морфолого-культуральные признаки	Свежий шлам
1.6 (B) (+)	Рseudomonas	МАЛДИ, морфолого-культуральные признаки	Свежий шлам
1.8 (2) (А) (++)	Рseudomonas stutzeri	МАЛДИ, морфолого-культуральные признаки	Свежий шлам
1.2 (B) (++)	Arthrobacter crystallopoietes	МАЛДИ, морфолого-культуральные признаки	Свежий шлам
1.3 (В) (+)	Асinetobacter	МАЛДИ, морфолого-культуральные признаки	Свежего шлам
1.20 (С) (-)	Рseudomonas хаnthomarina	Не соответствует идентификации по морфолого-культуральным признакам	Свежий шлам
1.21 (С) (-)	Bacillus	МАЛДИ, морфолого-культуральные признаки	Свежий шлам
1.22 (1); 1.22 (2) (В) (+)	Bacillus	МАЛДИ, морфолого-культуральные признаки	Свежегий шлам
1.18 (В) (+)	Рseudomonas	МАЛДИ, морфолого-культуральные признаки	Свежий шлам
1.17 (А) (++)	Рseudomonas stutzeri	МАЛДИ, морфолого-культуральные признаки	Свежий шлам
1.19 (В) (+)	Рseudomonas	МАЛДИ, морфолого-культуральные признаки	Свежий шлам
1.26 (В) (+)	Рseudomonas	Не соответствует идентификации по морфолого-культуральным признакам	Свежий шлам
1.10 (2); 1.24 (С) (-)	Pseudomonas	МАЛДИ, морфолого-культуральные признаки	Свежий шлам
1.5 (2) б2 (С) (-)	Рseudomonas	МАЛДИ, морфолого-культуральные признаки	Свежий шлам
1.1; 1.7 (А) (++)	Рseudomonas stutzeri	МАЛДИ, морфолого-культуральные признаки	Свежий шлам
1.15 (С) (-)	Stenotrophomonas maltophilia (PХ) 23086229 MLD	Не соответствует идентификации по морфолого-культуральным признакам	Свежий шлам
2.10 (В) (+)	Bacillus	МАЛДИ, морфолого-культуральные признаки	Шлам длительного срока хранения
2.11 (А) (++)	Рseudomonas mandelii	МАЛДИ, морфолого-культуральные признаки	Шлам длительного срока хранения
2.13 (В) (+)	Вacillus	МАЛДИ, морфологокультуральные признаки	Шлам длительного срока хранения
2.3 (С) (-)	Clostridium innocuum	Не соответствует идентификации по морфолого-культуральным признакам	Шлам длительного срока хранения
2.4 (С) (-)	Staphylococcus vitulinus	Не соответствует идентификации по морфолого-культуральным признакам	Шлам длительного срока хранения
2.5 (С) (-)	Tsukamurella	Морфолого-культуральные признаки	Шлам длительного срока хранения
2.8; 2.9 (В) (+)	Аcinetobacter lwoffii	МАЛДИ, морфолого-культуральные признаки	Шлам длительного срока хранения
2.2 (2) (А) (++)	Рseudomonas stutzeri	МАЛДИ, морфолого-культуральные признаки	Шлам длительного срока хранения
2.6 (С) (-)	Clostridium bifermintas	Не соответствует идентификации по морфолого-культуральным признакам	Шлам длительного срока хранения
2.7 (С) (-)	Еnretococcus faecium	Не соответствует идентификации по морфолого-культуральным признакам	Шлам длительного срока хранения
2.1 (С) (-)	Аromatoleum buckelii	Не соответствует идентификации по морфолого-культуральным признакам	Шлам длительного срока хранения
3.1 (2) б (С) (-)	Novosphingobium resinovorum DSM 10700 HAM	Не соответствует идентификации по морфолого-культуральным признакам	Незагрязнённый грунт
3.8 (2) (С) (-)	Chryseobacterium scophthalmum	Не соответствует идентификации по морфолого-культуральным признакам	Незагрязнённый грунт
3.22 (В) (+)	Bacillus	МАЛДИ, морфолого-культуральные признаки	Незагрязнённый грунт
3.33 (В) (+)	Bacillus	МАЛДИ, морфолого-культуральные признаки	Незагрязнённый грунт
3.6 (С) (-)	Staрhylococcus hominis ssp novobiosepticus	Не соответствует идентификации по морфолого-культуральным признакам	Незагрязнённый грунт
3.8 (1) (С) (-)	Bacillus	МАЛДИ, морфолого-культуральные признаки	Незагрязнённый грунт
3.9 (В) (+)	Асinetobacter	МАЛДИ, морфолого-культуральные признаки	Незагрязнённый грунт
3.10 (А) (++)	Рseudomonas stutzeri	МАЛДИ, морфолого-культуральные признаки	Незагрязнённый грунт
3.11 (2) (А) (++)	Bacillus licheniformis	МАЛДИ, морфолого-культуральные признаки	Незагрязнённый грунт
3.12 (А) (++)	Rhizobium radiobacter	МАЛДИ, морфолого-культуральные признаки	Незагрязнённый грунт
3.6 (2) (В) (+)	Bacillus	МАЛДИ, морфолого-культуральные признаки	Незагрязнённый грунт
3.2 (1) а (В) (+)	Bacillus	МАЛДИ, морфолого-культуральные признаки	Незагрязнённый грунт
3.33а (С) (-)	Lodderomyces elongisporus	Не соответствует идентификации по морфолого-культуральным признакам	Незагрязнённый грунт
3.5 (С) (-)	Тrauera chlorobenzoica	Не соответствует идентификации по морфолого-культуральным признакам	Незагрязнённый грунт
3.13 (А) (++)	Аcinetobacter johnsonii	Не соответствует идентификации по морфолого-культуральным признакам	Незагрязнённый грунт
3.7 (В) (+)	Kocuria rosea	МАЛДИ, морфолого-культуральные признаки	Незагрязнённый грунт
4.1 (С) (-)	Bacillus	МАЛДИ, морфолого-культуральные признаки	Нефтезагрязнёный грунт
4.5 (2); 4.5 (1) а (В) (++)	Enterobacter (cloacae)	Не соответствует идентификации по морфолого-культуральным признакам	Нефтезагрязнёный грунт
4.6 (2) (С) (-)	Bacillus thuringiensis DSM 2046T DSM	МАЛДИ, морфолого-культуральные признаки	Нефтезагрязнёный грунт
4.7 (А) (++)	Асinetobacter lwoffii	Не соответствует идентификации по морфолого-культуральным признакам	Нефтезагрязнёный грунт
4.11 (А) (++)	Аcinetobacter johnsonii	МАЛДИ, морфолого-культуральные признаки	Нефтезагрязнёный грунт
4.9 (В) (+)	Enterobacter	Не соответствует идентификации по морфолого-культуральным признакам	Нефтезагрязнёный грунт
4.13 (С) (-)	Lactobacillus amylovorus	Не соответствует идентификации по морфолого-культуральным признакам	Нефтезагрязнёный грунт
4.3 (А) (++)	Pseudomonas chlororaphis	МАЛДИ, морфолого-культуральные признаки	Нефтезагрязнёный грунт
4.4 (С) (-)	Рseudomonas	МАЛДИ, морфолого-культуральные признаки	Нефтезагрязнёный грунт
5.9 (1) (С) (-)	Сlostridium cochlearium 1050 NCTC 2909 BOG	Не соответствует идентификации по морфолого-культуральным признакам	Шлам в процессе биоремедиации
5.10; 5.14 (А) (++)	Рseudomonas stutzeri	МАЛДИ, морфолого-культуральные признаки	Шлам в процессе биоремедиации
5.17 (С) (-)	Clostridium sphenoides	Не соответствует идентификации по морфолого-культуральным признакам	Шлам в процессе биоремедиации
5.19 (С) (-)	Bacillus	МАЛДИ, морфолого-культуральные признаки	Шлам в процессе биоремедиации
5.12 (С) (-)	Bacillus	МАЛДИ, морфолого-культуральные признаки	Шлам в процессе биоремедиации
5.18 (1) (С) (-)	Bacillus	МАЛДИ, морфолого-культуральные признаки	Шлам в процессе биоремедиации
5.18 (2) (С) (-)	Bacillus safensis	Не соответствует идентификации по морфолого-культуральным признакам	Шлам в процессе биоремедиации
5.18 (3) (С) (-)	Bacillus	МАЛДИ, морфолого-культуральные признаки	Шлам в процессе биоремедиации
5.4 (2) (С) (-)	Trichosporon mucoides	Не соответствует идентификации по морфолого-культуральным признакам	Шлам в процессе биоремедиации
5.4 (1) (С) (-)	Trichosporon mucoides	Не соответствует идентификации по морфолого-культуральным признакам	Шлам в процессе биоремедиации
5.16 (В) (+)	Рseudomonas	МАЛДИ, морфолого-культуральные признаки	Шлам в процессе биоремедиации
5.21 (1) (С) (-)	+Bacillus	МАЛДИ, морфолого-культуральные признаки	Шлам в процессе биоремедиации
5.21 (2) (С) (-)	Bacillus	МАЛДИ, морфолого-культуральные признаки	Шлам в процессе биоремедиации
5.1 (А) (++)	Рseudomonas stutzeri	МАЛДИ, морфолого-культуральные признаки	Шлам в процессе биоремедиации
5.7; 5.8 (С) (-)	Рseudomonas	МАЛДИ, морфолого-культуральные признаки	Шлам в процессе биоремедиации
5.15 (А) (++)	Rhizobium radiobacter	МАЛДИ, морфолого-культуральные признаки	Шлам в процессе биоремедиации
5.3 (А) (++)	Eхiguobacterium aurantiacum	МАЛДИ, морфолого-культуральные признаки	Шлам в процессе биоремедиации
5.5 (С) (-)	Lactobacillus parahlantarum	Не соответствует идентификации по морфолого-культуральным признакам	Шлам в процессе биоремедиации
5.13 (С) (-)	Stenotrophomonas maltophilla	Не соответствует идентификации по морфолого-культуральным признакам	Шлам в процессе биоремедиации
2А №1 (А) (++)	Rhodococcus erythropolis	МАЛДИ, морфолого-культуральные признаки

Подобные документы

• Хромато-масс-спектрометрия и ее использование в идентификации загрязнителей природных сред

  Понятие и характеристика метода масс-спектрометрии. Масс-спектрометры с двойной фокусировкой в масс-спектрометрии с индуктивно-связанной плазмой. Использование хромато–масс–спектрометрии в идентификации загрязнителей природных сред, оборудование.
  
  курсовая работа [71,9 K], добавлен 07.01.2010
  

• Технология рекультивации нефтезагрязнённых земель на основе аборигенных штаммов

  Методика и технология восстановления нефтезагрязнённых земель. Виды и способы получения биопрепаратов, их показатели. Эффективность технологии рекультивации загрязненных земель нефтью на основе аборигенных штаммов, разработанная ЗАО НПС "Элита-комплекс".
  
  дипломная работа [57,8 K], добавлен 18.07.2010
  

• Биоремедиация нефтезагрязненных почв

  Компоненты нефти и их негативное влияние на окружающую природную среду. Виды микроорганизмов-деструкторов нефти и нефтепродуктов. Понятие и подходы биоремедиации, способы рекультивации нефтезагрязнённых почв и грунтов с применением методов биоремедиации.
  
  реферат [72,0 K], добавлен 18.05.2015
  

• Определение бактерий группы кишечной палочки в почвах Тульской области

  Бактерии группы кишечной палочки (БГКП). Соотношение исследуемых штаммов с родами БГКП. Обнаружение БГКП в объектах внешней среды. Загрязнение выделениями человека или животного. Идентификация выделенных штаммов микроорганизмов в почвах Тульской области.
  
  статья [15,6 K], добавлен 13.07.2015
  

• Способы рекультивации нефтезагрязненных почв и грунтов с упором на подходы биоремедиации

  Характеристика методов и способов обезвреживания нефтезагрязненных субстратов. Анализ методов оценки нефтяного загрязнения почв и подходов к их восстановлению. Биоремедиация и трансформация нефти в почве микробиологическим препаратом и дождевыми червями.
  
  дипломная работа [115,1 K], добавлен 01.04.2011
  

• Разработка мероприятий по переработке нефтешламов и очистки сточных вод предприятия

  Анализ основных методов переработки нефтешламов и очистки сточных вод предприятия. Обоснование и выбор аппаратов для механической, физической переработки нефтешламов. Технологическая схема переработки нефтешламов и очистки сточных вод предприятия.
  
  дипломная работа [1,6 M], добавлен 05.09.2010
  

• Почвенные и водные бактерии-деструкторы полигидроксиалканоатов

  Экологически чистые материалы - решение проблемы утилизации полимерных отходов. Идентификация бактерий-деструкторов полигидроксиалканоатов, выделенных из пресной воды тропических искусственных водоемов и бактериальной микрофлоры почвы дендрария.
  
  курсовая работа [2,2 M], добавлен 11.12.2014
  

• Переработка и утилизация нефтешламов

  Сущность технологии электроогневой утилизации нефтешламов, устройство экспериментальной установки. Последовательность этапов новой технологии переработки нефтешпамов, состоящей в сжигании тяжелых фракций нефтешламов в сильном электрическом поле.
  
  реферат [354,5 K], добавлен 12.12.2011
  

• Боремедиации акваторий и почв, загрязненных нефтью, с помощью бактерий-биодеструкторов

  Влияние нефти и нефтепродуктов на окружающую природную среду. Компоненты нефти и их действие. Нефтяное загрязнение почв. Способы рекультивации нефтезагрязненных почв и грунтов с применением методов биоремедиации. Характеристика улучшенных методов.
  
  курсовая работа [56,5 K], добавлен 21.05.2016
  

• Коловратки как компонент мейобентоса каменистых грунтов озера Байкал

  Значение сообществ организмов мейобентоса в функционировании экосистем водоёмов разных типов. Особенности жизнедеятельности представителей пресноводной мейофауны озера Байкал. Классификация и экологическая роль бентосных коловраток как ее компонента.
  
  статья [280,1 K], добавлен 18.07.2013
  

• главная
• рубрики
• по алфавиту
• вернуться в начало страницы
• вернуться к началу текста
• вернуться к подобным работам