Основные гематологические, биохимические и иммунологические показатели крови собак, зараженных возбудителем Opisthorchis felineus

Размещено на http://www.allbest.ru/

НОРМАТИВНЫЕ ССЫЛКИ

В настоящей дипломной работе использованы ссылки на следующие нормативные документы:

ГОСТ12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия.

ГОСТ1770-74Е Посуда мерная лабораторная стеклянная.

ГОСТ 17227-71 рН-метры, таблетки для приготовления рабочих буферных растворов.

ГОСТ17299-78 Спирт этиловый технический. Технические условия.

ГОСТ 20292-74 Пипетки вместимостью до 10 см3 с ценой деления 0,01 и 0,1 см3

ГОСТ29230-91- (ИСО 835-4-81) Посуда лабораторная стеклянная

ГОСТ30204-95 Приборы холодильные бытовые. Эксплуатационные характеристики и методы испытаний

ГОСТ 4180-85 СПКП. Меры массы. Номенклатура показателей

ГОСТ 4233-77 Хлористый натрий.

ГОСТ4517-87 Реактивы. Методы приготовления вспомогательных реактивов и растворов, применяемых при анализе.

ГОСТ 919.2-77 Реактивы и особо чистые вещества. Методы приготовления буферных растворов.

ГОСТ 555-81 Вата медицинская гигроскопическая. Технические условия.

ГОСТ 6709-72 - Вода дистиллированная. Технические условия.



ОПРЕДЕЛЕНИЯ

В настоящей дипломной работе применяются следующие термины с соответствующими определениями:

Амилаза - фермент, гликозил-гидролаза, расщепляющий крахмал до олигосахаридов, относится к ферментам пищеварения.

Антиген - любая молекула, которая специфично связывается с антителом.

Антитела - белки сыворотки и других биологических жидкостей, которые синтезируются в ответ на введение антигена и обладают способностью специфически взаимодействовать с антигеном, вызвавшим их образование.

Аланинаминотрансфераза (АЛТ) - это фермент, который принимает непосредственное участие в биохимических процессах, проходящих в организме человека. В частности, он участвует в образовании пировиноградных кислот и глутамата путем переноса аминокислоты из одной биологической молекулы в другую.

Аспартатаминотрансфераза (АСТ) - фермент белкового обмена в организме.

Базофилы - это крупные гранулярные лейкоциты, в небольшом количестве находящиеся в крови и тканях, и отвечающие за уничтожение чужеродных агентов в организме.

Билирубин - желчный пигмент, один из главных компонентов желчи в организме человека и животных. Образуется в норме как результат расщепления белков, содержащих гем.

Биохимический анализ крови - лабораторный метод исследования, использующийся в медицине, по результатам которого можно судить о функциональном состоянии органов и систем организма животного и человека.

Гамма-глутамилтранспептидаза (ГГТП) - фермент клеток печени, желчевыводящих путей, он является катализатором ряда биохимических реакций.

Гематокрит - объем красных кровяных клеток в крови. Измеряет способность крови переносить кислород.

Гемоглобин - сложный железосодержащий белок животных, обладающих кровообращением, способный обратимо связываться с кислородом, обеспечивая его перенос в ткани.

Гемометр Сали - упрощенный колориметр, применяемый для определения уровня гемоглобина в крови.

Дигенетические сосальщики, или рематоды - класс паразитических плоских червей.

Инвазия - проникновение паразитов в организм хозяина, то есть заражение.

Камера Горяева - приспособление, предназначенное для подсчета количества клеток в заданном объёме жидкости.

Клинический анализ крови (развернутый анализ крови) - анализ, позволяющий оценить содержание гемоглобина в системе красной крови, количество эритроцитов, цветовой показатель, количество лейкоцитов, тромбоцитов.

Компрессионный метод - метод выявления личинок трематод, заключающийся в микроскопии кусочков мышечной ткани, сжатых между стеклами в капле глицерина.

Конъюгат - искусственно синтезированная (химически или путем рекомбинации in vitrо) гибридная молекула, в которой объединены две молекулы с разными свойствами.

Кровь - жидкая подвижная соединительная ткань внутренней среды организма, которая состоит из жидкой среды - плазмы и взвешенных в ней клеток - форменных элементов

Лейкоциты, или белые кровяные тельца - форменные элементы крови, основной функцией которых является защита организма от чужеродных агентов, то есть токсинов, вирусов, бактерий, отмирающих клеток собственного организма и др.

Лейкоцитарная формула (лейкограмма) - процентное соотношение различных видов лейкоцитов, определяемое при подсчёте их в окрашенном мазке крови под микроскопом.

Лимфоциты - это клетки, отвечающие в организме за иммунный ответ и иммунную память.

Метацеркарий - инвазионная стадия развития зрелой личинки трематод, возникающая после церкария и обитающая в организме дополнительного (промежуточного) хозяина (рыб, крабов).

Моноциты - крупные лейкоциты, отвечающие за специфическую защиту организма: очистку крови от физических агентов и инородных клеток.

Нейтрофилы - разновидность лейкоцитов, главной функцией которых является защита организма от проникших в него микробов и их токсинов - фагоцитоз. Нейтрофилы первыми пребывают на место повреждения тканей,

Общий белок в сыворотке крови - это концентрация альбуминов и глобулинов жидкой составляющей крови в сумме, выраженная количественно.

Прибор Панченкова - прибор, предназначенный для определения скорости оседания эритроцитов при отстаивании стабилизированной крови.

Сыворотка крови - плазма крови, лишённая фибриногена.

Тромбоциты - кровяные клетки, основной функцией которых является обеспечение процесса свертывания крови.

Холестерин - липофильный природный спирт, содержащийся в клеточных мембранах практически всех живых организмов.

Эозинофилы - разновидность лейкоцитов, роль которых заключается в связывании чужеродного белка, движущегося в плазме.

Эритроциты - форменные элементы крови, содержащие гемоглобин, транспортирующие кислород и углекислый газ.



ОБОЗНАЧЕНИЯ И СОКРАЩЕНИЯ

В настоящей дипломной работе применяются следующие обозначения:

%, °С, 109/л, га, г/л, км, мл, мм, мм2, мм3, мм/час, мин, мкг, мкл, МЕ/л, мкм, ммоль/л, мкмоль/л, нм, пг, ч - единицы измерений.

В настоящей дипломной работе применяются следующие сокращения:

A.caninum D.caninum E.granulosis Нв IgА IgЕ IgG IgМ О. felineus О. viverrini PBS рН PSA T.canis T.leonine АГ АЛТ АСТ AЧТВ БСА ГГТП ЗФР ИФА КФК ЛДГ М Млн ОФД ПЖ РК PKMФ СОЭ ХС ЦИК ЦП ЩФ ЭДТА ЭИ ЭС-АГ	- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -	Ancylostoma caninum; Dipylidium caninum; Echinococcus granulosus; Hemoglobin; иммуноглобулины класса А; иммуноглобулины класса Е; иммуноглобулины класса G; иммуноглобулины класса М; Opisthorchis felineus; Opisthorchis viverrini; Phosphate buffered saline (натрий-фосфатный буфер) ; кислотность раствора; Ammonium persulfate (персульфат аммония) ; Toxocara canis ; Toxascaris leonine; антиген; аланинаминотрансфераза; аспартатаминотрансфераза; активное частичное тромбопластиновое время; бычий сывороточный альбумин; гамма-глутамилтрансфераза; забуференный физиологический раствор; иммуноферментный анализ; креатинфосфокиназа; лактатдегидрогеназа; молярность раствора; миллион; ортофенилендиамин; поджелудочная железа; Республика Казахстан; растворимые комплексы мономерного фибрина; степень оседания эритроцитов; холестерин; циркулирующие иммунные комплексы; цветной показатель; щелочная фосфотаза; этилендиаминтетраацетат; экстенс-инвазивность; экскреторно-секреторный антиген.



ВВЕДЕНИЕ

Более века прошло с тех пор, когда в 1891 году профессор Томского университета Виноградов К.Н. открыл описторхоз у человека, однако, актуальность этой проблемы нисколько не снизилась. Несмотря на многочисленные исследования и значительные успехи в лечении и профилактике этого гельминтоза, и в настоящее время описторхоз является не только медицинской, но и социально-экономической проблемой [1].

Описторхоз - паразитарное заболевание, возбудителем которого является биогельминт из класса трематод семейства Opisthorchiidae, включающего Opisthorchis felineus, Opisthorchis viverrini и Clonorchis sinensis [2].

Opisthorchis felineus встречается преимущественно в Западной Сибири, Казахстане, на Украине в бассейне Днепра, Южного Буга и Северного Донца. В Западной Европе описторхоз описан в Голландии, Франции и Италии. Описторхоз, вызываемый трематодой Opisthorchis viverrini, распространён в Таиланде и ряде других стран [3].

Описторхоз - природно-очаговый зооантропоноз, поражающий преимущественно гепатобилиарную систему и поджелудочную железу (ПЖ), отличающийся длительным течением, протекающий с частыми обострениями, способствующий возникновению первичного рака печени и ПЖ [2].

Развитие паразита происходит с участием двух промежуточных хозяев: моллюсков и карповых рыб. Конечными хозяевами являются человек и плотоядные животные [4].

Собаки - конечные хозяева, представляющие плотоядных животных, заражаются описторхозом в результате поедания инвазированной рыбы.

Клиническое течение описторхоза отличается большим разнообразием [5]. В патогенезе описторхоза выделяют две фазы: раннюю, или острую, и позднюю, или хроническую [6]. Острая и хроническая стадии описторхоза существенно отличаются клинически, что обусловлено различными патогенетическими механизмами. Ранняя фаза, или острый описторхоз, длится от нескольких дней до 4-8 и более недель и связана с проникновением эксцистированных метацеркариев паразита в гепатобилиарную систему и поджелудочную железу. В острую фазу выявлены закономерные нарушения со стороны различных органов и систем, которые соответствуют признакам общей аллергической реакции организма на внедрение антигена паразита. Поздняя фаза, или хронический описторхоз, продолжается многие годы [5, 7].

При заражении организма происходит сбой основных физиологических процессов в местах локализации паразитов, обусловленные влиянием инфекционных агентов на поврежденные органы, а также продуктов метаболизма описторхисов, которые преодолевают эпителиальный барьер и поступают в кровеносное русло, оказывая токсическое воздействие на организм животного [7].

Для более глубокого анализа происходящих в организме патологических процессов и постановки диагноза проводят общий анализ крови и определение в сыворотке крови активности синтезируемых ферментов и концентрации метаболитов, обмен которых регулируется печенью, позволяющее судить о состоянии данного органа, нарушениях отдельных его функций и систем [8].

Другим немаловажным аспектом при диагностике описторхоза являются изменения в иммунной системе хозяина. Формирование иммунного ответа - защитная реакция организма и в тоже время - это главный механизм патогенеза гельминтозов. Иммунный ответ во многом соответствует обычной реакции макроорганизма на внедрение чужеродного агента и характеризуется выработкой специфических антител к возбудителю заболевания [5].

Целью настоящей работы является изучение основных гематологических, биохимических и иммунологических показателей крови собак, зараженных возбудителем Opisthorchis felineus, на всем протяжении инвазионного процесса.

Для реализации поставленной цели необходимо выполнить следующие задачи:

Сформировать экспериментальную группу собак;

Провести поиск инвазированных особей среди рыб семейства карповых путем детекции в мышечных тканях метацеркариев O. felineus;

Осуществить заражение собак метацеркариями O. felineus путем вольного вскармливания;

Провести отбор крови у собак для изучения гематологических и биохимических показателей;

Выделить от собак половозрелые формы О. felineus;

Использовать О. felineus для получения экскреторно-секреторного антигена;

Изучить изменения иммунологических показателей на протяжении всего периода описторхозной инвазии.



1. ОСНОВНАЯ ЧАСТЬ

1.1 Обзор литературы

1.1.1 Анализ гематологических параметров крови, их изменения в ходе инвазионного процесса

Описторхоз является одним из распространенных паразитарных заболеваний на территории Северного Казахстана, вызываемого дигенетическими сосальщиками Opisthorchis felineus. Основной путь заражения человека - это употребление в пищу зараженной рыбы, которая является промежуточным хозяином в цикле развития данного паразита.

Рассматривая распространение возбудителя O. felineus, то самый крупный очаг в мире - Обь-Иртышский, охватывающий 15 краев и областей России и Казахстана. Пораженность местного населения в отдельных районах достигает 85-95 %, кошек - 100 %, собак - 27-50 %, свиней - 40 % [9]. В Казахстане исследованием описторхоза занимаются в разных областях Республики, где были зафиксированы очаги данного заболевания. Высокие показатели заболеваемости были зарегистрированы в Павлодарской области, средние в Западно-Казахстанской и Костанайской областях, низкие в Северо-Казахстанской, Акмолинской (в г. Астана заболеваемость характеризуется как средняя), Карагандинской и Восточно-Казахстанской областях [10]. На территории именно этих областей и располагаются реки и озера, относящиеся к Обь-Иртышскому бассейну.

Рассматривая уровень инфицирования рыбы метацеркариями описторхоза в разрезе областей, то показатели отличаются по уровню инвазии различных видов рыб семейства карповые.

Так, имеются данные по изучению описторхоза в Западно-Казахстанской области в период с 2009 по 2011 годы. Авторами исследовано 26 водоемов в 7 районах, за 3 года было выловлено и исследовано 2512 экземпляров рыб семейства карповых. Доказана зараженность рыбы описторхозом в водохранилище Багырлай, реке Шолак-Анкаты, Есен-Анкаты, Кушум, оз. Теплое, старице реки Урал у п. Круглоозерное, старице реки Урала у пос. Красноармейск. Из всех исследованных видов карповых рыб метацеркарий описторхиса обнаружены у язя 57,2 %, карася 1%, красноперки 33 %, плотвы 2,8 % и линя 1,9 % [9, 10].

На территории Карагандинской области существуют взаимосвязанные природные очаги описторхоза: Шидертинский (гидроузлы Шидертинского канала), Нуринский (среднее течение реки Нуры) и Жезказганский (реки Сары-су и Кенгир). Авторы, изучающие обстановку по описторхозу в Карагандинской области, исследовали на наличие метацеркарий описторхид 1829 экземпляров рыбы из 34 различных водоёмов Карагандинской области, где ведётся промысловый и любительский лов рыбы, в том числе 1159 экземпляров рыбы семейства карповых и 136 экземпляров хищных рыб. Метацеркарии были выявлены в 69 экземплярах рыбы из следующих водоёмов: озеро Курепала, Курганколь, Жаманколь, Кумколь, Самарское водохранилище [11].

Костанайская область также является источником описторхозной инфекции. Гершун В.И. и Ковалева Т.И. провели исследования на наличие метацеркарий описторхоза рыбы в двух озерах - Акколь и Карасор и в реке Улы-Жиланчик Джангельдинского района Костанайской области, где был установлен природный очаг описторхозной инвазии. Для исследования было отобрано 108 экземпляров рыбы, в том числе 25 экземпляров язей, 10 -лещей, 18 - линей, 25 - сазанов и 30 экземпляров карасей. Метацеркарии описторхоза обнаружены в 22 экземплярах рыбы (20,4%). Наиболее высокая зараженность установлена у язя (68%) и леща (40%) и относительно незначительная у линя (14,3%). Метацеркарии не обнаружены у сазана и карася. Зараженность рыбы метацеркариями описторхоза установлена во всех обследованных водоемах [12].



1.1.2 Изучение описторхозной инфекции в Акмолинской области

Акмолинская область РК также входит в число неблагополучных по данному заболеванию областей. Основными реками Акмолинской области являются Ишим и его крупные притоки: Колутон, Аршалы, Жабай, Терисаккан, Нура, Куланотпес, Оленты, Селеты и ее притоки (Акмырза, Кедей), кроме рек на территории области насчитывается около 4000 озер. Из общего числа озер 94% приходится на долю пресных, среди них преобладают (более 90%) озер с площадью зеркала до 1 км. Хозяйственное значение имеет небольшая часть: 327 озера служат источником обводнения пастбищ, 9 - источником орошения, 157 используются для промыслового лова рыбы. Наиболее крупными и значительными в производственно-хозяйственном отношении являются: озеро Майбалык - 2106 га, озеро Узунколь - 1000 га и озеро Жарлыколь - 1500 га. В настоящее время по данным областной ветеринарной лаборатории неблагополучными по описторхозу считаются водоемы Коргалжынского района и в частности Биртабан-Шалкарской системы озер, а также озеро Садырбай, кроме низовья рек Нуры и Ишима [13].

Имеются данные по изучению описторхозной инфекции на территории Акмолинской области, в период с 1994 - 2008 годов [14]. Были показаны результаты, что зараженность рыбы неодинакова в различных водоемах и подвержена годовым колебаниям и это обусловлено изменением численности моллюсков - битиний, сезоном их активности и другими факторами. Исследованию были подвержены озера Коктал, Есей, Султанкельды, Узунколь, Шолак, Биртабан, Шалкар, Жарлыколь, Кумдыколь. Авторы указывают, что в исследуемых озерах наибольшая зараженность метацеркариями Opisthorchis felineus прослежены в рыбах язь, карась, красноперка. Наибольшую опасность по описторхозу, учитывая данные экстенс-инвазивности (ЭИ), представляют озера Шолак (ЭИ - 86,9%), Биртабан (ЭИ - 81,2%), Шалкар (ЭИ - 65,7%).

Интересные данные были получены Михалевой Е.В. при исследовании рыбы в Акмолинской области на наличие возбудителей различных инфекций. С 2001 по 2004 автором было исследовано 2669 проб рыбы (язь - 645, карась - 414, карп - 313, плотва - 298, красноперка - 569, лещ - 131, окунь - 189, сазан - 110), доставленных из озер Жарлыколь, Узунколь, Коктал, Есей, Шалкар, Жаныбек-Шалкар Акмолинской области, а также с Центрального рынка г. Астаны. Результаты, представленные автором, показывают наличие заболеваний: описторхоз в 1496 исследуемых пробах, миксоспоридиоз в 54, диплостоматоз в 84, помфорнихоз в 40 и лигулез в 71 пробах. Миксоспоридиоз был обнаружен в карасе из озер Коржинколь, Саумалколь Егендыкольского района. Описторхоз обнаружен в рыбе язь из озер Каражар Коктал, Есей, Шалкар, Жаныбек-Шалкар Коргалжинского района. Диплостомоз и помфорнихоз, филометроидоз были выявлены в рыбах, сазан, карп, карась, окунь приобретенных на Центральном рынке г. Астаны [13].

Учитывая актуальность распространения описторхозной инфекции на территории Северного Казахстана, в Казахском агротехническом университете им. С.Сейфуллина ведется научно-исследовательская работа по разработке диагностического ИФА теста, основанного на использовании рекомбинантных белков, являющихся аналогами антигенных компонентов описторхов и продуктов их жизнедеятельности.

1.1.3 Хозяино-паразитные отношения при гельминтозах

Гельминтозы собак являются одной из проблемных задач ветеринарии. Многие гельминты, паразитирующие у собак, являются опасными для человека. Рост численности собак в мегаполисах представляет особую опасность как источник загрязнения внешней среды фекалиями и инвазионными яйцами гельминтов [15].

Ведущее звено в патогенезе гельминтозного процесса - формирование и характер взаимоотношений, складывающихся из факторов воздействия гельминтов, изменяющихся стадийно (личиночная стадия - половозрелая форма - яйцепродукция) и особенностей ответных реакций организма хозяина. Гельминты могут обитать в самых разнообразных органах и тканях животного организма. Однако, несмотря на столь большое различие в локализации паразитов все они оказывают прямое и косвенное влияние на гомеостаз. В патогенезе гельминтозов важная роль отводится механическим повреждениям в период миграции и локализации паразитов, развитию аллергических реакций и нарушений деятельности пищеварительного тракта. В частности трематоды печени и пищеварительного тракта, встречающиеся более чем у 100 видов млекопитающих животных и человека, обуславливают тяжелые патологические процессы в организме. Характер их вредоносного воздействия на организм хозяина во всех случаях может быть сведен к двум моментам: токсическое влияния гельминтов на организм животного и механическое воздействия на его органы и ткани [15, 16, 17, 18].

Клинически описторхоз проявляется в острой фазе токсико-аллергическим синдромом, хронической - картиной прогрессирующего поражения гепатопанкреатической и других систем организма. Он отличается длительным течением, частыми обострениями, отягощает течение многих сопутствующих заболеваний, способствует формированию брюшнотифозного бактерионосительства и возникновению первичного рака печени и поджелудочной железы. При описторхозных суперинвазиях интенсифицируется сенсибилизация организма, усилива-ются патоморфологические изменения в лимфоидных органах и печени. В значительной мере это зависит от характера хозяино-паразитарных отношений, в структуре которых должны учитываться кратность заражения и длительность инвазии, а также качество реагирования иммунной системы хозяина [19, 20].

Паразито-хозяинные отношения - это сложное, антагонистическое биологическое явление, эволюционно сложившееся между живыми существами, и, по определению академика Павловского Е.Н., равное возрасту жизни на Земле [21]. Они осуществляются на организменном и клеточно-гуморальном уровне. Организм хозяина отвечает на внедрение паразита сенсибилизацией, эозинофилией, обильным выделением слизи, лихорадкой, а паразит действует токсинами, метаболитами, секретами специальных желез, высокой численностью (интенсивность инвазии). Чем больше интенсивность инвазии, тем выше патогенное влияние гельминта на организм хозяина. Паразито-хозяинные отношения обусловлены, прежде всего, резистентностью организма хозяина и вирулентностью гельминта [22].

Помимо местного инокуляторного и механического влияния на печень, гельминты оказывают общее токсическое действие на функциональные системы организма животного [17].

Выделяя в организме хозяина экскреторные продукты, и механически находясь в живой системе, паразиты стимулируют выработку защитных механизмов, в результате чего происходит нарушение многих процессов.

Метаболиты трематод печени, поступая в организм хозяина, влияют на количественный и качественный состав крови, степень отклонения которых находится в тесной взаимосвязи с уровнем интоксикации и сенсибилизации организма хозяина [22].

Анализ гематологических параметров крови, их изменения при описторхозе

Кровь - жидкая соединительная ткань, которая наряду с лимфой и тканевой жидкостью образует внутреннюю среду организма, омывающую все его клетки и ткани.

Функции крови очень сложны и разнообразны. Через кровь происходит удаление из клеток организма и тканей продуктов обмена. Она выполняет дыхательную, питательную, регуляторную, защитную и механическую функции в организме. Наряду с нервной системой кровь обеспечивает функциональное единство всех частей организма. Как гуморальное звено регуляторных механизмов гомеостаза кровь участвует в стабилизации всех констант организма [23, 24].

Кровь состоит из плазмы и взвешенных в ней форменных элементов. Часть объема крови, которая приходится на клеточную долю, называется гематокритом (40-45%).

Жидкая часть крови - плазма - на 90-91% состоит из воды, выполняющей роль растворителя, белков (6,5-8%) и минеральных солей (1%). Помимо них, в плазме обнаруживаются около 1% других веществ: гормонов, ферментов, азотосодержащих веществ, питательных компонентов, микроэлементов и др.

Различают три вида форменных элементов крови: эритроциты, лейкоциты и тромбоциты.

Эритроциты составляют основную массу клеток крови. Эти клетки безъядерные, имеют форму двояковогнутых дисков, что увеличивает их дыхательную поверхность, способствуя быстрой, равномерной диффузии О2 через оболочку эритроцитов.

В норме количество эритроцитов у собак составляет 3,5-4,8х1012 г/л, или 3,5-4,8 млн. в 1 мм3.

Подсчет количества эритроцитов в крови осуществляют, используя камеру Горяева (рисунок 1).

Рисунок 1 - Счетная камера Горяева

Счетная камера Горяева (рисунок 1) состоит из 225 больших квадратов, 25 из которых поделено на 16 маленьких. Единицей отсчета является маленький квадрат. Его сторона равна 1/20 мм, а площадь - 1/20x1/20 = 1/400 мм2. Объем крови, помещающийся над маленьким квадратом, равен 1/400 мм2х1/10 мм = 1/4000 мм3 (1/10 мм - высота слоя крови).

Методика подсчета эритроцитов: в сухую пробирку точно отмеривают 4 мл 3%-го раствора NaCl. Кровь избирают пипеткой от гемометра Сали до метки «0,02 мл» и осторожно выдувают в раствор. Пипетку несколько раз промывают этим же раствором. Стеклянной палочкой кровь тщательно перемешивают в течение 40-60 секунд, после чего однородную каплю при помощи этой же палочки помещают на сетку камеры Горяева, к которой предварительно притерто покровное стекло до появления цветных - «ньютоновских колец». Заполнив камеру раствором крови, ставят ее под микроскопом и приступают к подсчету. Эритроциты считают при малом увеличении (окуляр х15) и 5 больших квадратах, имеющих дополнительно по 16 маленьких квадратиков. Чтобы избежать ошибки из-за возможного неравномерного распределения эритроцитов в камере, подсчет производится в квадратах, расположенных по диагонали, используя правило Егорова. Подсчитав количество эритроцитов в каждом очередном квадрате, записывают цифры в тетрадь, а затем суммируют все числа, найденные в 5 квадратах. Формула для вычисления количества эритроцитов следующая:

Х= (1);

где Х - искомое число эритроцитов в 1 мкл крови (или в мм3);

Э - сумма эритроцитов, подсчитанных в 5 больших квадратах;

4000 - объем части камеры над одним маленьким квадратиком;

200 - разведение крови;

80 - количество маленьких квадратиков в 5 больших квадратах (5х16=80).

Эритроцит заполнен гемоглобином. В среднем, в одном эритроците находится примерно 280 млн. молекул гемоглобина. Гемоглобин представляет собой сложный глобулярный белок, полипептидные цепи которого свернуты в компактную глобулу. Состоит он из белковой части - глобина и небелковой пигментной группы - гема, соединенных между собой гистидиновым мостиком. В молекуле гемоглобина имеется 4 гема. Каждый гем построен из 4 пирроловых колец и содержит Fe2+. Гем является активной, или простетической, группой и обладает способностью присоединять или отдавать О2. Глобин представлен двумя б и в полипептидными цепями, образующими с СО2 карбаминовую связь.

Различают физиологические соединения гемоглобина (НвО2, НвСО2) и патологические (НвСО, метгемоглобин). Физиологические соединения способны обратимо присоединять О2 и СО2 и легко участвуют в газообмене. Патологические соединения препятствуют присоединению О2 (НвСО) или его отдаче (метгемоглобин, где железо переходит в трехвалентную форму).

В норме содержание гемоглобина в крови собак: 11-14% (110-140 г/л).

Относительное насыщение эритроцитов гемоглобином называется цветным показателем крови (ЦП). При подсчете за норму принимается количество эритроцитов, равное 5 млн. в 1 мкл крови, и гемоглобина - 166 г/л. Определяют среднее количество гемоглобина в 1 эритроците (166/5 млн. = 0,000033 мкг, или 33 пг-пикограмм).

Для определения количества гемоглобина применяют колориметрический метод Сали.

Гемометр Сали представляет собой штатив с тремя пробирками (рисунок 2). Боковые пробирки заполнены стандартным раствором солянокислого гематина и запаяны. Средняя пробирка градуирована и служит для исследования крови.



Рисунок 2 - Гемометр Сали: 1 - корпус, 2 - запаянные пробирки со стандартом, 3 - градуированная пробирка, 4 - капиллярная пипетка для взятия крови, 5 - глазная пипетка, 6 - стеклянная палочка

Кровь в количестве 0,02 мл насасывают в пипетку и выдувают в среднюю пробирку гемометра, где предварительно находится 0,2 мл 0,1N НСl. Пипетку несколько раз промывают, насасывая и выдувая раствор. Под воздействием НСl гемоглобин превращается в соляно- кислый гематин коричневого цвета. Затем в этот раствор постепенно добавляют дистиллированную воду, помешивая стеклянной палочкой до тех пор, пока цвет раствора не совпадет с цветом стандартных растворов. Отмечают на шкале уровень жидкости в пробирке - это будет количество гемоглобина.

Вычисление производится по формуле:

ЦП= : (2);

Где, - количество Нв и эритроцитов в анализируемой крови, а 166 и 5000000 - нормальное количество Нв в мкг/мкл и эритроцитов в 1 мкл.

Упрощенная формула для подсчета цветного показателя крови следующая:



ЦП = (3);

В норме цветной показатель крови составляет 0,8-1. Эритроциты, имеющие такой показатель, называются нормохромными. Если ЦП>1, то эритроциты называют гиперхромными, а если <0,8 - гипохромными.

В крови, предохраненной от свертывания, эритроциты начинают оседать (СОЭ). Величина СОЭ зависит от числа эритроцитов, их размеров, формы и, особенно, от белкового состава плазмы, т.к. белки, адсорбируясь на эритроцитарной мембране, уменьшают её заряд. Тогда эритроциты образуют так называемые «монетные столбики» и скорость их оседания возрастает. При некоторых патологических состояниях СОЭ существенно повышается.

При определении скорости оседания эритроцитов пользуются прибором Панченкова (рисунок 3).

Прибор Панченкова состоит из штатива, в котором могут быть зафиксированы в вертикальном положении специальные капилляры (рисунок 3). Капилляры градуированы в миллиметрах. На капилляре есть метки: «0» (нанесена на расстоянии 100 мм от заостренного конца), «К» (кровь - на уровне нуля) и метка «Р» (реактив - на уровне 50 мм).

Рисунок 3 - Прибор Панченкова для определения СОЭ: А - общий вид; Б - капилляр; В - часовое стекло; 0 - верхняя метка, находится на расстоянии 100 мм от конца капилляра; 100 - нижняя метка, от которой отсчитывается 100 мм; К - уровень набора крови, совпадает с меткой «0»; Р - уровень набора реактива, расположен на расстоянии 50 мм от конца капилляра



Капилляр предварительно промывают 5%-ным раствором цитрата натрия, набирают его до метки «Р» и выдувают на часовое стекло. Затем дважды заполняют капилляр до метки «К» кровью, выдувают на часовое стекло, где находится цитрат натрия. Тщательно перемешивают с ним. После этого смесь насасывают до метки «К» и капилляр устанавливают в штатив на 1 час. СОЭ определяют по высоте образовавшегося верхнего столбика плазмы в капилляре.

В норме эритроциты собаки оседают со скоростью 4-10 мм/час.

Лейкоциты, или белые кровяные тельца в отличие от эритроцитов имеют ядра. Лейкоциты разнообразны по форме, происхождению, функциям и своему количественному представительству в крови. Процентное соотношение различных форм лейкоцитов называется лейкоцитарной формулой (таблица 1).

Таблица 1 - Лейкоцитарная формула крови собаки

Показатели	Общее число	Гранулоциты	Агранулоциты
		Нейтрофилы	Эозинофилы	Базофилы	Лимфоциты	Моноциты
		палоч.	сегм.
В %	100	2,0-5,5	43-71	0,5-6,0%	0-1	42-74	2,0-12,0

Различают пять видов лейкоцитов: эозинофилы, базофилы, нейтрофилы, лимфоциты и моноциты. Лейкоциты неодинаковы по величине, форме ядер, свойствам цитоплазмы и функциям. Диаметр их колеблется от 6 до 25 мкм. По наличию в цитоплазме зернистости лейкоциты делят на зернистые - гранулоциты (нейтрофилы, базофилы и эозинофилы) и незернистые - агранулоциты (моноциты и лимфоциты) [27].

Продолжительность жизни лейкоцитов разная: от нескольких часов и дней до многих десятков лет.

Основная функция лейкоцитов - обеспечение организма специфической и неспецифической формами защиты от микробов, вирусов, патогенных простейших, чужеродных белков, клеток, тканей, измененных аутоантигенов. Иммунитет - способ защиты организма от живых тел и веществ, несущих на себе признаки генетической чужеродности. Одной из неспецифических форм защиты является фагоцитоз, осуществляемый в основном нейтрофилами и моноцитами.

Специфические формы защиты обеспечиваются лимфоцитами, которые создают специфический гуморальный (образование антител) и клеточный (образование иммунных лимфоцитов) иммунитет в ответ на действие антигенов. Клеточный иммунитет обращен в основном против клеточных антигенов - бактерий, патогенных грибов, чужеродных клеток и тканей (пересаженных или опухолевых).

Нейтрофилы первыми прибывают к месту повреждения тканей за счет своей способности к активному передвижению. Основная функция нейтрофилов - фагоцитарная (один нейтрофил способен фагоцитировать 20-30 бактерий). Они уничтожают микробы и их токсины, разрушающиеся клетки собственного организма или чужеродные частицы. Противомикробная функция нейтрофилов проявляется в секретировании ими в окружающую среду лизосомных катионных белков и гистонов, противовирусное действие - в продукции белка интерферона. Кроме того, они выделяют вещества, стимулирующие регенерацию тканей. Нейтрофилы делятся на сегментоядерные и палочковидные. У собак содержание сегментоядерных нейтрофилов в крови составляет 43-71%, а палочковидных - 2,0-5,5% от общего количества лейкоцитов.

Базофилы обладают слабовыраженной способностью к фагоцитозу, синтезируют противосвертывающее вещество гепарин, а также гистамин, расширяющий капилляры в очаге воспаления, что ускоряет процессы рассасывания и заживления. Чрезмерное освобождение гистамина из базофилов происходит при различных аллергических реакциях под воздействием комплекса антиген-антитело. В норме у собак в крови содержится 0-1% базофилов от общего содержания лейкоцитов.

Эозинофилы также способны к фагоцитозу, но их основная функция - участие в разрушении и обезвреживании чужеродных белков, токсинов белкового происхождения, комплексов антиген-антитело. Эозинофилы фагоцитируют гранулы базофилов, содержащих много гистамина, а также продуцируют фермент гистаминазу, разрушающую поглощенный гистамин. Нейтрализация последнего замедляет чрезвычайное проявление аллергических реакций, поэтому количество эозинофилов возрастает при аллергических состояниях, глистной инвазии, болезнях кожи, интоксикациях. Помимо этого, эозинофилы участвуют в фибринолизе, поскольку вырабатывают фермент плазминоген, который, переходя в плазмин, расщепляет нити фибрина в кровяном сгустке. У здоровой собаки в норме содержится от 0,5 до 6,0% эозинофилов.

Моноциты обладают выраженной фагоцитарной и бактерицидной активностью. Один моноцит способен фагоцитировать до ста микробов. Их влияние распространяется и на погибшие лейкоциты, поврежденные клетки воспаленной ткани, что в целом приводит к очищению очага воспаления и подготовке его для регенерации. В этом смысле моноциты являются «дворниками организма». Они из крови переходят в ткани, где дозревают, превращаясь в тканевые макрофаги, участвующие затем в формировании специфического иммунитета. Поглощая чужеродные вещества, макрофаги переводят их в особые соединения, которые вместе с лимфоцитами формируют специфический иммунный ответ - выработку антител. Содержание моноцитов в норме равно 2-12% от всех лейкоцитов.

Лимфоциты - центральное звено иммунной системы организма. Они осуществляют общий иммунный надзор. Различая «свое» и «чужое» с помощью своих рецепторов, лимфоциты обеспечивают защиту от всего чужеродного, способствуя сохранению генетического постоянства внутренней среды. Различают Т-лимфоциты (тимусзависимые) и В-лимфоциты (бурсозависимые). Т-лимфоциты возникают в костном мозге и проходят дифференцировку в вилочковой железе (Тhymus). В-лимфоциты также продуцируются костным мозгом, а дифференцировку проходят в лимфоидной ткани кишечника, червеобразного отростка, небных и глоточных миндалинах (у птиц - в фабрициевой сумке - Bursa Fabrisius). Основная функция Т-лимфоцитов - обеспечение клеточного иммунитета. Формы Т-лимфоцитов: Т-киллеры (убийцы) - обеспечивают реакцию клеточного иммунитета, отторжение трансплантанта, разрушение опухолевых клеток, клеток-мутантов и т.д. Т-хелперы (помощники) кооперируются с В-лимфоцитами при выработке антител или стимулируют Т- киллеры. Т-супрессоры (угнетатели) - блокируют чрезмерные реакции В-лимфоцитов и подавляют иммуный ответ. Основная функция В-лимфоцитов - обеспечение гуморального иммунитета путем выработки антител (иммунных гамма-глобулинов). В-лимфоциты очень специфичны: каждая их группа (клон) реагирует лишь с одним антигеном и отвечает за выработку антител только против этого антигена (специфический иммунитет). Различают несколько типов В-лимфоцитов (В1-клетки, В2-клетки и т.д.), которые выполняют разнообразные функции. В норме содержание лимфоцитов в крови у собак составляет 42-74% от общего числа белых клеток крови.

Принципы подсчета лейкоцитов и эритроцитов одинаковы. Различие заключается в том, что кровь для лейкоцитов разводится в 20 раз в 3%-ном растворе уксусной кислоты, подкрашенном метиленовой синькой, а сам подсчет ведется в 400 маленьких квадратиках (расположенных в 25 больших квадратах) камеры Горяева.

В сухую чистую пробирку отмеривают 0,4 мл 3%-ного упомянутого раствора. Кровь набирают пипеткой от гемометра Сали до метки 0,02 мл и осторожно выдувают в раствор. Затем перемешивают и однородную каплю с помощью стеклянной палочки помещают под покровное стекло на сетку камеры Горяева. Приступают к подсчету лейкоцитов и суммируют общее количество клеток в 25 больших квадратах.

Формула для вычисления количества лейкоцитов такова:

Х= (4);

где Х - искомое число лейкоцитов;

Л - сумма лейкоцитов в 25 больших квадратах;

4000 - объем части камеры над одним маленьким квадратиком;

20 - разведение крови;

400 - количество маленьких квадратиков в 25 больших квадратах [24].

В норме количество лейкоцитов составляет 5,5-12,5*109/л, или 5,5-12,5 тыс. в мм3 [24].

Тромбоциты, или кровяные пластинки, представляют собой бесцветные сферические, лишённые ядер тельца. Их диаметр 2-3 мкм, в 3 раза меньше диаметра эритроцитов. Тромбоциты образуются в красном костном мозге и селезёнке. Продолжительность жизни около 4 дней. Разрушение их происходит в селезёнке. Значительная часть их депонирована в селезёнке, печени, лёгких и в случае необходимости поступает в кровь.

Число тромбоцитов в крови около 180-400*109/л. Состояние, при котором количество красных кровяных пластинок снижается ниже 180 109/л, называется тромбоцитопенией, а при повышении их уровня более 400 109/л - тромбоцитозом.

Основная функция тромбоцитов связана с их участием в свёртывании крови. При ранении кровеносных сосудов тромбоциты разрушаются. При этом из них выходит в плазму ряд веществ, необходимых для формирования кровяного сгустка - тромба. Как правило, образование тромба сопровождается сужением кровеносных сосудов. Этому способствует выделяющееся при разрушении кровяных пластинок особое сосудосуживающее вещество [25].

Подсчет тромбоцитов также ведется с применением камеры Горяева.

Исследуемую кровь разводят в 200 раз для предотвращения свертывания и агглютинации тромбоцитов в консервирующей жидкости, например в 5-7% растворе трилона Б Для этого в сухую пробирку набирают 4 мл реактива и 0,02 мл крови. Перемешивают и оставляют на 25-30 мин для гемолиза эритроцитов. Помещают счетную камеру во влажную камеру на 5 мин для оседания тромбоцитов. Тромбоциты считают в 25 больших квадратах.

Расчет тромбоцитов проводят по формуле:

Х = = а*2000 (5);

где Х - число тромбоцитов в 1 мкл крови;

а - число тромбоцитов, сосчитанных в 25 больших квадратах,

200 - разведение крови,

25 - число сосчитанных квадратов,

250 - объем одного большого квадрата 1/250 мкл.

Число подсчитанных тромбоцитов умножают на 2000.

Помимо камеры Горяева подсчет тромбоцитов проводят в мазках крови (по Фонио).

В качестве антикоагулянтов применяют 14% раствор сульфата магния или 6% раствор этилендиаминтетраацетата натрия (ЭДТА). Реактив набирают в капилляр Панченкова до метки «75» и вносят в пробирку, затем добавляют кровь, взятую тем же капилляром, до метки «0». Содержимое пробирки перемешивают и готовят тонкие мазки. Фиксируют и окрашивают по Романовскому-Гимзе в течение 2-3 ч (при использовании раствора сульфата магния) и в течение 30-45 мин (при приме нении ЭДТА). Высохшие мазки микроскопируют с иммерсионным объективом, подсчитывая количество тромбоцитов в тонких местах препарата.

Подсчет количества тромбоцитов проводят по отношению к 1 тысяче эритроцитов. Сосчитав 1 тысячу эритроцитов, суммируют общее количество встретившихся тромбоцитов [28, 29].

Развитие патологических изменений в организме влияет на показатели крови. Исследование крови имеет большое значение при оценке клинического состояния животного, важнейшим диагностическим методом. Кроветворные органы чрезвычайно чувствительны к различными физиологическим, и особенно патологическим воздействиям на организм. Картина крови является отражением этих воздействий. Состав и свойства крови зависят от физиологического состояния организма. По показателям крови можно судить о тяжести, направлении и атипичности патологического процесса [26, 27].

Основными индикаторами данных сбоев организма служат гематологические показатели, для определения и изучения которых проводят общий анализ крови.

Традиционные методы подсчета клеток крови (микроскопия) вследствие присущей им неточности, особенно в области низких и высоких значений концентрации клеток, имеют ограничения при использовании в качестве средства мониторирования. Вариабельность приготовления и окрашивания мазка крови, ограниченное количество анализируемых клеток и систематические ошибки самой методики - все это приводит в конечном итоге высоким значениям коэффициента вариации (от 25 до более чем 50%).

В настоящее время используются современные методы тестирования, реализованные в гематологическом оборудовании второго поколения. Полная автоматизация процесса анализа позволяет устранить вариабельность, систематические погрешности метода, способствует высокой воспроизводимости и точности результатов [30].

Общий анализ крови - лабораторное исследование, которое включает в себя подсчет всех видов клеток крови (эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов), определение их параметров (размеры клеток и др.), лейкоцитарную формулу, измерение уровня гемоглобина, определение соотношения клеточной массы к плазме (гематокрит), степень оседания эритроцитов (СОЭ).

Именно по показателям результатов общего анализа крови можно судить об основных изменениях гематологических показателей при гельминтозах.

Так, С.А. Труновой при изучении гематологических показателей крови собак, зараженных гельминтами видов T. canis, T. leonine, E. granulosis, было отмечено увеличение числа лейкоцитов в 1,8-1,3 раза, палочкоядерных нейтрофилов в 2,3-2,6 раза, эозинофиолов в 2,1-3,1 раза, лимфоцитов на 16,3-18,1%. Число сегментоядерных нейтрофилов уменьшилось на 20%, концентрация гемоглобина снизилась на 22,4-29,9%, эритроцитов на 12,2%, в крови постоянно присутствовали юные нейтрофилы - 0,8-1,4% [31].

И.В. Колесников и О.В. Попов изучая морфологические показатели крови собак, спонтанно инвазированных микстиинвазиями T. canis, A. caninum, D. caninum обнаружили следующие изменения.

На 15, 30, 60 и 90 сутки наблюдений концентрация гемоглобина уменьшилась соответственно на 22,4-28,7-29,9-28,7%, эритроцитов - на 12,2-12,3-15,4-14,8%, число лейкоцитов увеличилось в 2-2,3-1,7-1,8 раза по сравнению с показателями у здоровых животных.

Характерные изменения отмечались в показателях лейкоцитарной формулы. Так, у больных собак увеличилось содержание палочкоядерных нейтрофилов (в 2,3-2,6 раза), эозинофилов (в 2,1-2,7-2,9-3,1 раза), лимфоцитов (на 16,3-17,4-18,1-17,1%), но уменьшилось число сегментоядерных нейтрофилов (на 20,0-23,6-23,8 и 22,9%). В крови больных всегда присутствовали юные нейтрофилы, их число колебалось в пределах 0,8±0,01 - 1,4±0,08% [32].

А.Н. Шинкаренко рассматривая вопрос экологии паразитов собак и мер борьбы с вызываемыми ими заболеваниями в Нижнем Поволжье, изменения гематологических показателей у больных описторхозом плотоядных регистрировал уже на 15 сутки инвазии. Значения гематологических показателей постепенно нарастали и достигли своего пика на 90 сутки инвазии. Так, количество эритроцитов у больных собак на 30 сутки инвазии было меньше показателей контрольных животных на 9,45% (P<0,05), гемоглобина - на 10,7%, на 60 сутки - соответственно на 14,4% и 31%.

Количество лейкоцитов в крови у больных плотоядных на 30 сутки инвазии было в 1,5 раза, на 60 сутки - в 1,6 раза, на 90 сутки - в 1,4 раза больше показателей контрольных животных. Характерные изменения наблюдали в лейкоцитарной формуле. Так, у больных описторхозом собак постепенно уменьшалось содержание сегментоядерных нейтрофилов (меньше показателей контрольных на 23,3-31,4%), базофилов (на 18,8-38,9%), моноцитов (на 7,9-5,4%, Р<0,05), но возрастало число палочкоядерных нейтрофилов (в 2,2-2,3 раза), эозинофилов (в 1,6-1,95 раза), лимфоцитов (на 11,9-22,3%). Во все периоды наблюдений в крови зараженных собак находили юных нейтрофилов, хотя их количество было небольшим (0,5±0,23 - 0,9±0,12%) [33].

Гельминтозы собак сопровождаются изменениями в их организме и развитием у них вторичных иммунодефицитов. Е.В. Польшкова при изучении эффективности и безвредности применения новых лекарственных средств при гельминтозах собак установила характерные изменения гематологических показателей гомеостаза в организме животных: лейкоцитоз с эозинофилией до 9,6%, фагоцитарного индекса на 6-7%, Т- и В-лимфоцитов на 4-6,4%, до 0,45-0,6 индекса иммунорегуляции [34].

Описторхоз изменяет течение ряда патологических процессов, сопровождающихся, помимо прочего, ускорением непрерывно протекающего свертывания крови. Данная патология проявляется активацией тромбоцитов и гиперкоагуляционными сдвигами разной степени выраженности в зависимости от объема инвазии.

А.В. Зиновьева при изучении состояния системы свертывания крови при хроническом описторхозе в условиях эндогенной и экзогенной тромбинемии установила, что хронический описторхоз, вызванный инвазией паразита O. felineus, через 90 суток проявился ускорением непрерывно протекающего свертывания крови. На 25,4% уменьшилось содержание тромбоцитов, абсолютное количество дискоцитов снизилось в 1,8 раз, а их доля от общего числа циркулирующих клеток - на 16,1%. Возросло относительное содержание активированных форм. Достоин тот факт, что подавляющее из большинства составляли сфероциты - 43,2%, относительное содержание которых увеличилось в 7,6 раза, а абсолютный прирост составил 58,9%. Об активации тромбоцитарного звена свидетельствовало и большее количество тромбоцитарных агрегатов.

Изучение параметров плазмокоагуляции позволило выявить признаки акивации тромбиногенеза (укорочение АЧТВ - на 17,7%, тромбинового времени - 14,4%, снижение концентрации фибриногенеза - более чем в 2 раза, прирост содержания РКМФ - на 54,2%) [35].

Н.В. Поликутин и А.Н. Шинкаренко, рассматривая патогенез при описторхозе у кошек, гематологические изменения регистрировали уже на 15 сутки после заражения и нарастали до 30-60 дня. При описторхозе отмечалось развитие гипохромной анемии, лейкоцитоза, с преимущественным увеличением количества палочкоядерных лейкоцитов - на 1,6% и эозинофилов - 5,8% [36].

С.К. Шибитов, исследуя описторхоз плотоядных в условиях Западной Сибири, установил, что y животных, зараженных O. felineus, эозинофилия, тромбоцитоз и нейтрофилия со сдвигом лейкограммы влево - являются характерными признаками изменений гематологических показателей периферической крови. Кроме этого зараженные животные, не подвергшиеся лечению, имели анемию разной степени выраженности (от слабой до выраженной) [37].

Известно, что метаболиты гельминтов, поступая в организм хозяев, влияют на количественный и качественный состав крови, степень отклонения которых находится в тесной взаимосвязи и уровнем интоксикации и сенсибилизации организма хозяина. В связи с этим изучение количественного состава гемоглобина, эритроцитов, лейкоцитов, динамику соотношения между отдельными группами лейкоцитов может раскрыть характер течения патологического процесса и явиться важным прогностическим тестом при гельминтозах [33].

Касаемо описторхоза можно прийти к выводу, что данная инвазия также характеризуется изменением гематологических показателей крови.

Эозинофилия - наиболее постоянная особенность гемограммы при описторхозе. В острую фазу содержание лейкоцитов иногда достигает 60,0х109/л при эозинофилии до 80-90% (лейкемоидная реакция).

В иммунограмме наблюдается снижение количества Т-лимфоцитов и повышение О- и В-лимфоцитов, повышение концентрации иммуноглобулинов всех классов (в острую фазу преобладает IgM) [18].

Также наблюдается снижение количества эритроцитов и концентрации гемоглобина в крови, а также ускорение непрерывно протекающего свертывания крови.

Основные биохимические показатели крови при инвазии трематодами

90% крови - вода. В ней растворены белки, жиры, углеводы, соли, ферменты, микроэлементы. Всякое нарушение благополучия организма сразу же отражается на их содержании. Отследить эти тончайшие изменения и вовремя распознать недуг позволит биохимический анализ крови [38].

Биохимический анализ занимает достойное место среди лабораторных методов диагностики. Учитывая постулат Р. Вирхова о том, что «болезнь не представляет для организма ничего нового», можно утверждать, неотъемлемым методом лабораторной диагностики различных заболеваний, изменений функционального состояния органов и систем человеческого организма. Благодаря этому методу исследования, можно определить функционирование печени и почек, обнаружить воспалительный процесс в стадию разгара, дисбаланс водно-солевого обмена или микроэлементов. С помощью биохимического анализа можно уточнить диагноз, назначить лечение, затем его скорректировать, определить стадию заболевания [39, 40].

Клиническая биохимия включает исследования по содержанию органических и неорганических веществ, образующихся в результате биохимических реакций, а также определение активности ферментов.

Биохимический анализ крови позволяет определить состояние основных обменных процессов организма (белкового, жирового, углеводного). Обычно в процессе биохимического исследования анализируется множество параметров и показателей, набор которых зависит от предварительного диагноза. Существует определенная норма всех показателей для здорового организма. Огромный плюс данного лабораторного метода диагностики - возможность выявления заболевания на ранней стадии, еще до начала появления каких-либо признаков.

В стандартный биохимический анализ крови включены следующие показатели:

Белки и белковые фракции (общий белок, альбумин, показатели азотистого обмена: мочевина, креатинин, мочевая кислота);

Глюкоза, липиды и липопротеины: (глюкоза, холестерин общий, холестерин высокой плотности (ЛПВП), холестерин низкой плотности (ЛПНП), триглицериды, коэффициент атерогенности);

Пигментный обмен (билирубин общий, билирубин прямой (связанный);

Ферменты и изоферменты (аспартатаминотрансфераза (АСТ), аланинаминотрансфераза (АЛТ), лактатдегидрогеназа (ЛДГ), щелочная фосфотаза (ЩФ), гамма-глутамилтранспептидаза (ГГТП), альфа-амилаза, креатинфосфокиназа (КФК);

Электролитный баланс (хлор, калий, натрий, кальций общий, кальций свободный (ионизированный), фосфор неогранический, магний, железо);

Маркеры воспаления (серомукоиды, С-реактивный белок, ревматоидный фактор, антистрептолизин) [41].