Размещено на http://allbest.ru

Министерство образования и науки Российской Федерации

ФГБОУ ВО «Бурятский государственный университет им. Доржи Банзарова»

Медицинский институт

Кафедра фармации

Лекарственное растительное сырье, содержащее терпеноиды: полыни крупноголовчатой

Выполнил: студентка 3 курса,

Цыбикова Д.З

Научный руководитель:

к. фарм.н., доц. Рандалова Т. Э.

ассист. Цыбикова С.З.

Улан-Удэ

2019



Оглавление

Введение

Глава 1. Обзор литературы

1.1 Эфирные масла

1.2 Способы получения эфирных масел

1.3 Лечебные свойства эфирных масел

1.4 Химический состав растений рода полынь

1.5 Полынь крупноголовчатая

Глава 2. Материалы и методы

2.1 Объект исследования

2.2 Методы анализа

2.2.1 Макроскопический анализ

2.2.2 Микроскопический анализ

2.2.3 Товароведческий анализ

2.2.4 Фито-химический анализ (качественный анализ)

2.2.5 Количественное определение

Глава 3. Результаты исследования

3.1 Внешние признаки

3.2 Анатомо-диагностические признаки

3.3 Товароведческий анализ

3.4 Качественные реакции

3.5 Количественное определение

Выводы

Список литературы



Введение

Народная медицина возникла в рутинной жизни человеческого общества еще во времена первобытного общества. Знания о создании лекарственного средства по «народным рецептам» передавались из поколения в поколение. Причем некоторые из них, прошедшие тысячелетние испытания, оправдали себя и стали основой для научных исследований. Современная наука, не оставаясь в стороне, продолжает свои исследования и выявляет новые полезные и «не очень» свойства лекарственных растений, основываясь на многолетнем опыте, накопленным народной медициной.

Растения рода полынь семейства Астровых занимают немаловажное место в народной и официнальной медицине. Для нормального функционирования желудка человека применяют различные препараты из растений рода полынь.

Фармакологические свойства данного растения: усиливает секрецию желудочного сока, повышает аппетит, улучшает пищеварение, обладает желчегонными свойствами. Но, возможно, и это не все. В мире существует значительное количество видов полыни, до которых не добралась наука. Эти растения не изучены и поэтому интересны. Вероятность обнаружения чего-то нового (нового компонента БАВ) так и манит, призывая изучать.

Таким растением оказалась полынь крупноголовчатая (Artemisia Macrocephala), ставшая темой данной курсовой работы. A. Macrocephala не входит в реестр лекарственного растительного сырья государственной фармакопеи. О растении, практически, нет научных статей, рефератов, докладов, каких-либо диссертаций. Но наука не дремлет.

Также, на дальнем Востоке имеются значительные растительные ресурсы растения рода полынь, что подтверждает перспективность научного исследования данного сырья и разработки новых лекарственных препаратов. Это имеет большое значение в оздоровлении населения.

Цель работы: провести фармакогностический анализ полыни крупноголовчатой (A. Macrocephala).

Для достижения цели необходимо решить следующие задачи:

1) Провести микро- и макроскопический анализы A.macrocephala.

2) Установить числовые показатели A. macrocephala.

3) Провести качественные реакции на БАВ, содержащиеся в A. macrocephala.

4) Определить количественное содержание суммы флавоноидов в сырье.



Глава 1. Обзор литературы

1.1 Эфирные масла

Термин «эфирные масла» появился в средине XVIII века, не отражает свойств, но сохранился до настоящего времени во многих странах. Эфирными маслами называют летучие душистые вещества, образующиеся в растениях и обладающие способностью перегоняться с водяным паром. Эфирными они названы потому, что имеют свойство летучести, а маслами потому, что имеют схожую консистенцию с жирными маслами, так же жирные на ощупь.

Эфирные масла широко используются в парфюмерии для производства различных косметических препаратов - духов, в мыловаренной и косметической - для приготовления мыла, лосьонов, кремов, тоников и других косметических средств. Применяют их в пищевом, ликероводочном, табачном производстве.. Накапливаются эфирные масла во внешних и внутренних образованиях. К внешним образованиям относятся волоски, железки и железистые пятна (Туманова, 2014).

Железистые пятна -- простейшие выделительные образования. Это мелкокапельные скопления эфирных масел сразу под кутикулой эпидермиса, вызывающие отслаивания (вздутие) кутикулы. Эфирное масло вырабатывается отдельными группами выделительных клеток - "пятнами", разбросанными в эпидермальной ткани. Такая локализация эфирных масел наблюдается в лепестках розы, ландыша, в листьях некоторых растений, в эпидермисе кроющих чешуи тополевых почек и т.д.

Железистые волоски состоят из одноклеточной или чаще многоклеточной ножки и "головки" шаровидной или овальной формы, которая образована одной или несколькими выделительными клетками. Железки могут быть различного строения. Все они имеют очень короткую ножку и многоклеточные головки с разным количеством и расположением составляющих их железистых (выделительных) клеток. Так, например, у яснотковых (губоцветных) головка чаще образована 8 клетками, расположенными розеткой. К внутренним образованиям, находящимся в паренхимных тканях, относятся:

Секреторные клетки могут встречаться одиночно (клетки-идиобласты) или же образуют в паренхиме слои. Клеточные стенки склонны к опробковению. Одиночные клетки, например, имеются в корневище аира, в паренхиме которого в месте соприкосновения нескольких (3 - 4) клеток располагается одна секреторная клетка.

Вместилища представляют собой круглые или овальные полости, встречающиеся в мезофилле листа, кожуре плодов цитрусовых, в коре и древесине некоторых растений. Вместилища образуются двояким путем - схизогенным и схизолизигенным (StudFiles: [сайт]. URL: https://studfiles.net/preview/4104028/page:2/).

Значение эфирных масел для растения весьма разнообразно, хоть и неясно до конца. Например, вместилища с эфирным маслом, находящиеся в подземных органах, защищают их от ран, действуют как ранозаживляющий компонент. Защищают растения от поедания животными и препятствуют заражению патогенными грибами и бактериями. Для цветков - обуславливают их запах, так же служат для привлечения насекомых. В настоящее время большинство специалистов считают, что эфирные масла являются активными участниками обменных процессов, протекающих в растительном организме.

В пользу этого суждения, в частности, свидетельствует высокая реакционная способность терпеноидных соединений, являющихся основными компонентами эфирных масел (BioFile.ru: [сайт]. URL: http://biofile.ru/bio/6361.html).

Терпены - углеводороды, имеющие общую формулу (С₅Н₈)n, .а кислородосодежащие их производные называются терпеноидами.

Терпены и терпеноиды относятся к различным классам природных соединений, однако в основе структуры всех этих соединений лежит изопрен.

В зависимости от числа изопреновых звеньев все терпены и терпеноиды можно разделить на следующие группы:

· С₅Н₈ - полутерпены;

· С₁₀Н₁₆ - монотерпены, составляющие легколетучие фракции эфирных масел;

· С₁₅Н₂₄ - сесквитерпены, составляющие тяжелолетучие (часто не перегоняются с водяным паром) фракции эфирных масел;

· С₂₀Н₃₂ - дитерпены, входящие в состав ряда смол;

· С₃₀Н₄₈ - тритерпены, являющиеся агликонами сапонинов;

· С₄₀Н₆₄ - тетратерпены, образующие разные пигменты, в том числе каротиноиды;

· (С₁₀Н₁₆)n - политерпены, К ним относятся каучук и гуттаперча (refdb.ru: [сайт]. URL: https://refdb.ru/look/2583053-pall.html).

1.2 Способы получения эфирных масел

Эфирные масла получают

1) перегонкой с водяным паром;

2) экстракцией некоторыми экстрагентами;

3) анфлераж;

4) поглощение жирами;

5) прессование;

6) мацерация;

7) поглощение активированным углем.

Использование того или иного способа зависит от морфоанатомических особенностей сырья, количества и состава эфирного масла. Количество эфирного масла в сырье колеблется в весьма широких пределах.

Перегонка с водяным паром - старинный и до сих пор наиболее распространенный способ получения эфирных масел. Его используют во всех случаях, когда сырье содержит много эфирного масла и температура перегонки (около 100 °С) не отражается на качестве последнего.

Рисунок 1. Установка для перегонки с водяным паром. 1 -- парообразователь; 2 -- круглодонная колба с длинным горлом; 3 -- холодильник; 4 -- приемник; 5 -- тройник; 6 -- винтовой зажим (Xumuk.ru: [сайт]. URL: http://www.xumuk.ru/toxicchem/38.html).

Температура кипения отдельных компонентов эфирных масел колеблется от 150 до 350 °С. Так, например, пинен кипит при 160 °С, лимонен - при 177 °С, гераниол - при 229 °С, тимол - при 233 °С и т.п. Однако все эти вещества в присутствии водяного пара перегоняются при температуре ниже 100 °С.

Теоретические основания процесса перегонки с водяным паром вытекают из закона Дальтона о парциальных давлениях, согласно которому смесь жидкостей (взаимно нерастворимых и химически друг на друга не действующих) закипает тогда, когда сумма упругостей их паров достигает атмосферного давления.

По закону Дальтона общее давление смеси равно сумме парциальных давлений компонентов. В результате давление паров смеси достигает атмосферного давления еще до кипения воды. Так, например, смесь скипидара и воды в условиях атмосферного давления будет перегоняться при 95,5 °С (вместо 160 °С для пинена - основного компонента скипидара).

Перегонку с водяным паром осуществляют в перегонных кубах или в непрерывно действующих перегонных аппаратах.

Перегонные кубы представляют собой периодически действующие установки, состоящие из перегонного куба (собственно), конденсатора и приемника; куб имеет двойную рубашку, в которой циркулирует пар, предохраняющий куб от охлаждения. На днище куба располагается перфорированный змеевик, через который поступает пар для перегонки масла. Куб закрывается крышкой, которая посредством пароотводной трубки - хобота - соединяется с конденсатором.

Приемником служат так называемые флорентийские склянки со сливными трубками. Они устроены так, что если масло легче воды, то оно собирается слоем сверху, при этом вода вытекает через сливную трубку, которая укрепляется в тубусе у днища склянки. Если эфирное масло тяжелее воды, то оно опускается на дно, а воду удаляют через трубку, укрепленную в верхней части склянки. Сырье загружают в куб на ложное дно. Через вентиль и змеевик в куб впускают пар, который, проходя через растительную массу, увлекает с собой эфирное масло. В тех случаях, когда погонные воды содержат в растворенном или эмульгированном состоянии много ценного эфирного масла (например, при получении розового масла), последнее выделяется из него путем вторичной дистилляции отгонных вод. При этом с первыми же порциями воды отгоняется большая часть удержанного масла (Туманова, 2014).

Для переработки больших количеств сырья применяют непрерывно действующие перегонные аппараты. Перегонка с водяным паром может проводиться не только при атмосферном давлении, но и под давлением с перегретым паром. В этом случае соотношение воды и эфирного масла выгодно меняется в пользу увеличения перегоняемого масла. Это объясняется тем, что уменьшение упругости паров воды идет непропорционально изменению упругости паров эфирного масла (Fptl.ru: [сайт]. URL: http://www.fptl.ru/tehnika-labrabot/peregonka-s-parom.html).

Экстракция. Эфирные масла растворяются во многих легко летучих органических растворителях. Это свойство используется в тех случаях, когда компоненты эфирных масел термолабильны и подвергаются деструкции при перегонке с водяным паром.

Экстракция заключается в том, что сырье в специальных экстракторах подвергают извлечению петролейным эфиром (чаще всего), этиловым эфиром, ацетоном или иным экстрагентом. Затем экстрагент отгоняют, конденсируют и вновь направляют в процесс. Экстракторы работают по принципу аппарата Сокслета (в тех случаях, когда повторный нагрев экстракта в приемнике не отражается на качестве масла) или в установках, работающих по принципу противотока. Такой аппарат состоит из колонки, внутри которой сырье по шнеку поднимается снизу вверх, а навстречу ему сверху вниз поступает экстрагент.

После отгонки растворителя остаток представляет собой или чистое эфирное масло или, чаще, смесь эфирного масла с другими извлеченными веществами - смолами, восками и т.п. Такие экстракты, называемые "пахучими восками", используются в натуральном виде или подвергаются переработке для выделения из них эфирного масла (экстракция спиртом и отгонка последнего под вакуумом).

В последнее время экстракция эфирных масел стала производиться также сжиженными газами (углекислота, бутан и др.).

К экстракционным способам получения эфирных масел относится и мацерация цветочного сырья жирами. Для этого сырье в тканевых мешочках погружают в емкость с жировым корпусом на 24 - 48 ч. Далее эфирное масло извлекают из жира спиртом. Мацерация - метод получения эфирных масел путем их размачивания в жирах;

Анфлераж основан на том, что выделяющееся эфирное масло из собранного сырья (преимущественно из цветков) поглощается сорбентами (твердые жиры, активированный уголь и др.). Этот процесс проводится в специальных рамах, герметично собираемых по 30 - 40 штук (одна на другую) в батарею.

При работе с твердыми жирами на обе стороны стекла (рамы) наносят жировой сорбент (смесь свиного и говяжьего жира и др.) слоем 3 - 5 мм. Цветки раскладывают поверх сорбента толщиной до 3 см и оставляют на 48 - 72 ч. По истечении этого срока сырье удаляют и на рамы помещают свежее сырье. Такую операцию повторяют многократно (до 30 раз), пока сорбенты не будут насыщены эфирным маслом. Отработанное сырье как содержащее еще некоторое количество эфирного масла (преимущественно тяжелые фракции) дополнительно перерабатывают экстракцией. Затем жир, насыщенный эфирным маслом, снимают со стекла. Из полученной таким образом помады эфирное масло извлекают спиртом, спиртовое извлечение вымораживают и фильтрацией удаляют из него выпавшие примеси. Спирт отгоняют под вакуумом и получают чистое эфирное масло.

При использовании в качестве сорбента активированного угля сырье (цветы) помещают в камеру на сетки, после чего камеру герметически закрывают и через нее продувают сильный ток влажного воздуха, уносящий с собой пары эфирного масла, выделяемого цветками.

Масло из воздуха поглощается активированным углем, лучше всего марки БАУ (березовый активированный уголь), находящимся в адсорбере, который установлен над камерой. Через сутки цветки из камеры выгружают и экстрагируют петролейным эфиром для извлечения оставшихся в них тяжелых фракций эфирного масла.

Активированный уголь после его насыщения эфирным маслом выгружают из адсорбера и передают на элюирование этиловым эфиром. После отгонки последнего получают эфирное масло (aromazona.ru: [сайт]. URL: http://www.aromazona.ru/glossary/1/anflerazh.html).

Прессование проводят на гидравлических прессах из кожуры, оставшейся после отжатия из плодов сока. Для этого кожуру предварительно пропускают через зубчатые вальцы. Оставшееся (до 30 %) в кожуре эфирное масло извлекают далее перегонкой с водяным паром. Соскребывание (натирание) проводят с кожуры целых плодов вручную с помощью специальных ложек с зазубренными краями или металлических дисков с большим количеством тупых игл. Этот способ широко использует местное население Западной Африки.

Поглощение жирами - старинный метод, основанный на свойстве жиров поглощать испаряющиеся из цветков эфирные масла. Применяется для душистых цветков, тонкий запах которых при перегонке может изменяться;

Поглощение активированным углем - новый метод поглощения без жиров, поскольку масло из угля извлекают с помощью спирта (Туманова, 2014).

1.3 Лечебные свойства эфирных масел

Диапазон воздействия на организм человека эфирных масел очень широк из-за их сложного химического состава. В состав масел входят терпены, кетоны, спирты, альдегиды, эфиры, фенолы и др. (от 50 до 300 соединений). Все эфирные масла обладают бактерицидным, антисептическим и противовоспалительным действием, большинство из них положительно влияют на нервную систему - успокаивают, снимают стресс, депрессию.

Ароматические масла легко впитываются через кожу и органы дыхания в кровь, влияя на систему кровообращения в целом. Последние исследования подтверждают, что умелое использование специфических свойств эфирных масел помогает человеку в различных ситуациях.

Масла, обладающие разогревающим эффектом, не только усиливают циркуляцию крови, но и влияют на работу внутренних органов. Благодаря анестезирующему свойству они заметно снимают боль и уменьшают воспалительные процессы (Кибардин, 2013).

Эфирные масла - это всегда смеси веществ. Выделено свыше 1000 компонентов эфирных масел. Это различные типы углеводородов, в том числе спирты, кетоны, кислоты, сложные эфиры, лактоны, ароматические компоненты.

Эфирное масло распространенное биологически активное вещество, т. е. содержится во многих лекарственных растениях. Так, природа не обделила этим маслом и растения рода полынь. Именно наличие эфирного масла придает полыни антипаразитное, противовоспалительное, антивирусное свойства. Благодаря им, растение нашло свое применение в медицине.

Многочисленные представители рода полынь широко распространены на территории Сибири и Дальнего Востока (Амельченко, 1978, с. 12). Многие из них издавна используются в народной медицине при различных заболеваниях желудочно-кишечного тракта, как противоопухолевые, противовоспалительные, ранозаживляющие, а также как противосудорожные.

Предварительные исследования полыней, произрастающих на территории Сибири и Дальнего Востока, показали, что они содержат комплекс биологически активных соединений, обладающих широким спектром фармакологического действия. Установлено, что исследуемые виды содержат кумарины от следовых количеств до 10%, эфирное масло от следовых количеств до 2%.

Отдельные виды полыни содержат хамазулен в эфирных маслах от следовых количеств до 50% (Баторова, 1986). Полыни распространены в южных районах Сибири и Дальнего Востока, но также обильны и многообразны в северных арктических широтах. Наибольшая численность видов характерна равнинным и горным областям Средней Европы, Кавказа, Средней Азии (Гроссгейм, 1936). Выявлено, что центры многообразия их связаны главным образом с Азией. В подроде Artemisia виды секций Artemisia и Abrotanum имеют главные центры видового многообразия в Восточной Азии: Алтай, Монголия, Прибайкалье, Забайкалье, Китай, Манчжурия. Виды секции Absinthium связаны преимущественно с Европой и Азией. Часть видов подрода Dracunculus также связаны с Восточно-Азиатским центром, однако виды секции Campestris и Japonicae происходят из Беренгийского и Китайско-Японского центров. В формировании подрода Seriphidium наибольшую роль сыграли степи Казахстана и горы Центральной Азии, где расположен Центрально-Азиатский центр таксономического многообразия полыней. Полыни, произрастающие в Сибири, имеют, главным образом, Азиатский и Евразийский ареалы, а дальневосточные виды - Восточно-Сибирский и Китайско-Японский ареалы (Ханина, 2018).

Полыни широко распространены в различных экологических условиях: на лугах, в лесах, степях, пустынях, горах, тундре. Многие полыни свойственны засоленным степям. Подрод Artemisia представлен всеми экологическими группами, подрод Dracunculus большей частью ксерофитами, ксеропетрофитами, ксеропсаммофитами и ксеромезофитами, подрод Seriphidium в основном ксе-рофитами, ксерогалофитами и ксеропетрофитами (Ханина, 2018).

В традиционной и народной медицине используются все части растений рода полынь (трава, корни, листья, соцветия) в виде лекарственного растительного сырья (сухое и свежее), сока из свежесобранного сырья и в виде суммарных извлечений, полученных с помощью воды (отвары, настои), этилового спирта (настойки, экстракты), масел (экстракты), вин.

Галеновые препараты полыней применяются внутрь, а также наружно, распаренная трава в виде припарок, порошкованное сырье и зола после сжигания сырья - в качестве присыпок, масленые экстракты для растираний, изготовления мазей, сухая трава для прижиганий ("моксы"), ванн при широком спектре заболеваний. Полыни обладают разносторонней биологической активностью по отношению к человеческому организму, популярны в народной и традиционной медицине и применяются для лечения широкого спектра заболеваний, а также в целях профилактики как тонизирующее и общеукрепляющее. Данные факты побуждали исследователей искать причины проявления такой широты биологической активности. В результате химических исследований было установлено, что полыни накапливают разнообразные биологически активные вещества. Остановимся на некоторых результатах исследования полыней флоры Сибири и Дальнего Востока (Ханина, 2018).

1.4 Химический состав растений рода полынь

На территории СНГ (в пределах бывшего СССР) произрастает около 175 видов полыни. Сведения по химическому составу полыней в основном представлены для европейских, кавказских и среднеазиатских видов. Однако следует отметить, что степень их химической изученности все же невелика и составляет не более 25% всего видового состава. Виды полыни относятся к перспективному для медицины растительному сырью, так как содержат в значительных количествах разнообразные высокоактивные биологические соединения: эфирные масла, соединения фенольного характера - флавоноиды, фенолкарбоновые кислоты, кумарины, сесквитерпеновые лактоны, витамины, полисахариды и др. (Пигулевский, 1949).

1.5 Полынь крупноголовчатая

Как говорилось выше, неизученных видов полыни много. Таковой является полынь Крупноголовчатая - Artemisia Macrocephala. Растение собирают из дикой природы для использования в качестве лекарства. Растение является ингредиентом различных традиционных рецептов в Монголии. Эфирное масло в A. macrocephala содержит туйон. Туйон является антагонистом рецептора ГАМК, который позволяет нейронам легче срабатывать. В больших дозах это может вызвать мышечные спазмы и судороги, а также может быть токсичным для клеток мозга, почек и печени.

Было много негативной прессы в отношении туйона, особенно в середине 19-го века, когда, как сообщалось, туйон был более опасным, чем алкоголь, - поскольку было показано, что он преувеличен; и сообщает в 1970-х годах, что он может оказывать аналогичное воздействие на мозг с ТГК (содержится в каннабисе), поскольку он признан неверным.

Туйоне, вероятно, наиболее известен благодаря его употреблению в алкогольном напитке «Абсент». Это также найдено в эфирных маслах многих других заводов, которые используются в растительных лекарственных средствах и продуктах питания, включая Arborvitae (виды Thuja), некоторые можжевельники (виды Juniperus), полыни (особенно A. absinthium) и шалфей (Salvia officinalis). В разных странах существуют некоторые законодательные ограничения на количество туйона, которое можно добавлять в продукты питания и напитки, и оно варьируется в зависимости от страны.

Побочные эффекты от употребления туйона могут включать бессонницу и беспокойство, но, если не использовать чистое эфирное масло, количество туйона, обнаруженного в растениях, находится в пределах безопасности. Однако беременным женщинам может быть рекомендовано ограничить использование растений, содержащих туйон.

Хотя мы не видели конкретных сообщений для этого вида, многие представители этого рода содержат потенциально аллергенные сесквитерпеновые лактоны, которые могут вызывать кожные реакции (temperate.theferns.info:[сайт].URL:http://temperate.theferns.info/viewtropical.php?id=Artemisia+macrocephala).

Ботаническое описание. Однолетнее растение покрыто прилегающими опутанными волосками. Стебли 6-30 см высотой., от основания ветвистые или простые. Нижние и средние стеблевые листья длинночерешковые без ушек (иногда с ушками), 1.5-4 см дл., овальные дважды перисторассеченные, с 2 парами первичных долей. Конечные дольки линейно-продолговатые к концу расширенные, тупые или закругленные. Верхние стеблевые листья черешковые с простыми ушками.

Прицветные листья линейные, цельные. Корзинки диаметром 4-10 мм, на длинных ножках, поникающие в рыхлых кистях. Листочки обертки с наружной стороны волосистые, слабо железистые.

Наружные из них линейные, травянистые, густоволосистые, в числе 5-7, некоторые из них превышают остальную часть корзинки в 2 раза и постепенно переходят в следующий ряд листочков, которые яйцевидные с зеленой средней частью, иногда на верхушке башлычковидные.

Внутренние продолговато-обратнояйцевидные, буро-пленчатые, расположены в несколько рядов и в направлении к диску цветков мельчающие и светлеющие. Цветоложе густоволосистое со светло-бурыми волосками. Краевые цветки пестияные в числе 25-27 шт. Венчики их густо железистые. Внутренние - обоеполые. Венчики с перетяжкой в средней части и более густо железистой нижней частью. Семянки около 1.2 мм дл. обратно-яйцевидно-продолговатые (bioaltai-sayan.ru: [сайт]. URL: http://bioaltai-sayan.ru/regnum/species_all.php?right=boxspecp/artemisia.php&left=go.php&species=artemisia_macrocephala).

Место обитания. Цветущий стебель имеет горький, горячий и грубый вкус. Цветет с середины июля до середины августа во второй декаде. В основном на скалах в сухих руслах крупных и малых рек. Степи, холмы, пустоши, сухие места, засоленные или гравийные почвы; на высотах от 1500 до 5500 метров. Горно-лесостепной пояс, степная зона, пустынно-степная зона, пустынная зона. Центральная и Восточная Азия, Казахстан, Кыргызстан, Таджикистан, Афганистан, Пакистан, север Индии, Сибирь, Дальний Восток, Томский район, Монголия, север и запад Китая (temperate.theferns.info:[сайт].URL:http://temperate.theferns.info/viewtropical.php?id=Artemisia+macrocephala).

Детали выращивания. Виды этого рода, как правило, легко растут, преуспевая в хорошо дренированной околонейтральной или слегка щелочной суглинистой почве, предпочитая солнечное положение. Они имеют тенденцию быть более долгоживущими, более выносливыми и более ароматными, когда выращиваются в бедной сухой почве. Штатные растения устойчивы к засухе (Читтендон, 1956).

Химический состав: Растение содержит 0,4 - 0,5% эфирного масла, состоящего примерно из 9% альфа-пинена; 12,1% цинеол; 16,3% камфоры; 6,5% азулена; и 28,3%, возможно, третичного спирта (возможно, борнеол) (temperate.theferns.info: [сайт]. URL: http://temperate.theferns.info/viewtropical.php?id=Artemisia+macrocephala).

В составе эфирного масла A. macro. обнаружены соединения: альфа-пинен, лимонен, терпинолен, камфора, борнилацетат, копаен, кариофиллен, гамма-муролен, кадинен, кариофилленоксид, ледол, кадинол, интермедиол, хамазулен, аянол (Хинина, 2018).

Фармакологическое действие: Artemisia macrocephala используется как противовоспалительное, ранозаживляющее, болеутоляющее, при инфекционных заболеваниях (микробные, бактериальные, вирусные инфекции). Так же A. macro. используется при лечении воспалений горла; заболевания легких; и лихорадка (Хинина, 2018).



Глава 2. Материалы и методы

2.1 Объект исследования

Материалом для исследования служила надземная часть полыни крупноголовчатой (A. macrocephala), собранная в Хэнтейском аймаке Моноголии, в 2018 году в начале фазы цветения.

2.2 Методы анализа

2.2.1 Макроскопический анализ

Подготовка объекта к анализу: при необходимости сухую траву размачивают, погружая ее на несколько минут в горячую воду или помещая во влажную камеру. Если трава измельченная, то для размачивания выбирают куски стебля, листья, цветки, плоды. Свежую траву исследуют без предварительной обработки.

Подготовленную к анализу траву раскладывают на стеклянной пластинке, тщательно расправляя стебель, листья, цветки, плоды. Рассматривают невооруженным глазом, с помощью лупы (10Ч) или стереомикроскопа (8Ч, 16Ч, 24Ч и др.).

При анализе листьев обращают внимание на следующие анатомо-диагностические признаки:

1. Строение (простое, сложное -- непарноперистосложное, парноперистосложное, дваждыпарноперистосложное, дваждынепарно-перистосложное, пальчатосложное, тройчатосложное и др.) и размеры листовой пластинки.

2. Форму листовой пластинки (округлая, эллиптическая, широкоэллиптическая, узкоэллиптическая, продолговатая, яйцевидная, широкояйцевидная, узкояйцевидная, обратнояйцевидная, округлообратно-яйцевидная, широкообратнояйцевидная, ланцетная, сердцевидная, стреловидная, копьевидная, серповидная, игольчатая и др.).

3. Глубину рассечения листовой пластинки (пальчатолопастные, перистолопастные, тройчатолопастные, пальчатораздельные, перисто-раздельные, тройчатораздельные, пальчаторассеченные, перисто-рассеченные, тройчаторассеченные).

4. Характер основания (округлое, широкоокруглое, узкоокруглое, клиновидное, узкоклиновидное, ширококлиновидное, усеченное, выемчатое, сердцевидное и др.) и верхушки (острая, округлая, туповатая, выемчатая, оттянутая и др.) листовой пластинки.

5. Характер края листа (цельный, пильчатый, двоякопильчатый, зубчатый, городчатый, выемчатый).

6. Наличие черешка, его размеры.

7. Характер поверхности черешка (гладкая, ребристая, бороздчатая и др.).

8. Наличие влагалища, прилистников (свободные, сросшиеся), характеристика, размеры.

9. Опушение листа и черешка (обилие и расположение волосков).

10. Жилкование листа (у однодольных -- параллельное, дуговидное; у двудольных -- перистое, пальчатое; у папоротников и примитивных семенных растений (гингко) -- дихотомическое).

11. Наличие эфирномасличных железок и других образований на поверхности листа или наличие вместилищ в мезофилле.

Размеры определяют с помощью измерительной линейки или миллиметровой бумаги. Измеряют длину и ширину пластинки листа, длину и диаметр черешка.

Цвет определяют с обеих сторон листа на сухом материале при дневном свете.

Запах определяют при растирании.

Вкус определяют, пробуя сухое сырье или водное извлечение листьев (только у неядовитых объектов).

При анализе цветков обращают внимание на следующие анатомо-диагностические признаки:

1. Строение околоцветника: простой (чашечковидный, венчиковидный) или двойной.

2. Строение чашечки и венчика (правильные -- актиноморфные или неправильные -- зигоморфные).

3. Число и форму чашелистиков (или зубчиков чашечки).

4. Число и форму лепестков (или зубчиков венчика).

5. Число и строение тычинок.

6. Число пестиков.

7. Особенности строения завязи и цветоложа.

В строении стебля отмечают:

1. Характер ветвления (простой или ветвистый);

2. Форму поперечного сечения (цилиндрическая, ребристая, четырехгранная и т.д.);

3. Характер поверхности (гладкая, ребристая, бороздчатая и др.);

4. Опушение (обилие и расположение волосков);

5. Листорасположение (очередное, супротивное, мутовчатое);

6. Размеры (длину стебля и диаметр у основания) определяют с помощью измерительной линейки или миллиметровой бумаги. (Государственная, 2018)

2.2.2 Микроскопический анализ

Для анализа берут цельные листья или кусочки пластинки листа с краем и жилкой, кусочки листа от основания и верхушки, кусочки черешка (если лист имеет черешок); чашечку, венчик, тычинки, пестик и цветоножку, при необходимости другие элементы цветка и соцветий, если таковые имеются; кусочки стеблей, если есть, и при необходимости плоды. Используют способы просветления, описанные для листьев, цветков и плодов.

Для исследования стеблей их обрезки кипятят в натрия гидроксида растворе 5 % в течение 3 -- 5 мин в зависимости от толщины и грубости объектов. Эпидермис снимают скальпелем или препаровальными иглами; из остальных тканей готовят микропрепарат, раздавливая объект скальпелем на предметном стекле в хлоралгидрата растворе или глицерина растворе 33 %. При необходимости готовят поперечные срезы, для чего используют методику приготовления поперечных срезов черешка листа, учитывая, что при помещении кусочков стеблей между двумя половинками пробки необходимо сделать бритвой соответствующие углубления для предотвращения сдавливания тканей исследуемого объекта.

В диагностических целях в стебле необходимо рассматривать:

1. Характер кутикулы (ровная, морщинистая, в том числе продольно-морщинистая, поперечно-морщинистая, лучисто-морщинистая; штриховатая, гребневидная и др.), степень выраженности изменения ровности кутикулы.

2. Форму клеток эпидермиса (изодиаметрическая -- округлая, квадратная, многоугольная; полигональная -- прямоугольная, овальная, ромбовидная, веретеновидная, комбинированная и др.).

3. Извилистость стенок клеток эпидермиса (прямые, извилистые, волнистые, зигзагообразные, зубчатые и др.), степень извилистости.

4. Утолщенность стенок клеток эпидермиса (наличие четковидной утолщенности).

5. Наличие устьиц и их форма (круглая, овальная), размеры.

6. Тип устьичного аппарата (ОФС «Листья»).

7. Погруженность устьиц в эпидермис (выступающие над эпидермисом, погруженные в эпидермис).

8. Наличие, характеристика и размеры волосков (простые и головчатые, одно- и многоклеточные, одно-, дву- и многорядные, пучковые, разветвленные и неразветвленные), особенности их мест присоединения (наличие розетки), утолщенность стенок (толстые, тонкие стенки), характер кутикулы (ровная, бородавчатая, штриховатая).

9. Наличие и структура железок, их размеры.

10. Наличие секреторных каналов, млечников, вместилищ.

11. Наличие кристаллов, их структура (одиночные кристаллы различной формы, друзы, рафиды, стиллоиды, цистолиты, кристаллический песок и др.), локализация (в паренхиме под эпидермисом, в паренхиме в виде кристаллоносной обкладки вокруг проводящих пучков и групп волокон, редко в клетках эпидермиса), размеры.

12. Наличие включений: слизи, инулина, каротиноидов и др. (в паренхиме под эпидермисом, редко в клетках эпидермиса).

13. Наличие аэренхимы.

Для исследования листьев берут кусочки пластинки листа с краем и жилкой, кусочки листа от основания и верхушки, кусочки черешка (если лист имеет черешок). Просветляют одним из двух способов:

1. Несколько кусочков сырья помещают в колбу или пробирку, прибавляют натрия гидроксида раствор 5 %, разведенный водой (1:1), и кипятят в течение 2 -- 5 мин в зависимости от толщины и плотности объекта, не допуская сильного размягчения. Более жесткие листья (толокнянка, брусника, эвкалипт) кипятят до 5 мин, более хрупкие листья (крапива, чистотел) кипятят до 2 мин. Затем содержимое переливают в стеклянный стакан, жидкость сливают через 2 -- 4 слоя марли, которой закрывают стакан, и сырье тщательно промывают водой, каждый раз сливая воду через ту же марлю. Содержимое стакана переносят в небольшом количестве воды в чашку Петри. Частички сырья, оставшиеся на марле, смывают в ту же чашку Петри. Из воды кусочки вынимают скальпелем или лопаточкой и помещают на предметное стекло в каплю раствора хлоралгидрата или глицерина раствора 33 %.

2. Кусочки сырья кипятят в растворе хлоралгидрата, разведенного водой (1:1), в течение 5 -- 10 мин (до просветления). Просветленный кусочек сырья помещают на предметное стекло в каплю раствора хлоралгидрата или глицерина раствора 33 %.

Кусочки сырья, просветленные тем или иным способом и помещенные на предметное стекло, разделяют скальпелем или препаровальными иглами на две части, одну из них осторожно переворачивают. Кожистые и толстые листья раздавливают скальпелем или обратным концом препаровальной иглы. Кусочек черешка помещают на предметное стекло. Тонкие черешки раздавливают скальпелем или обратным концом препаровальной иглы для высвобождения эпидермиса.

С толстых черешков снимают эпидермис с помощью препаровальных игл или бритвы, убирая грубые внутренние части черешка, мешающие получению хорошего микропрепарата эпидермиса.

Объект накрывают покровным стеклом, при необходимости слегка сверху придавливают чистым обратным концом препаровальной иглы и слегка подогревают до удаления пузырьков воздуха, после охлаждения рассматривают лист с обеих сторон и эпидермис черешка под микроскопом сначала при малом, затем при большом увеличении. При разных увеличениях, пользуясь макро- и микровинтом, исследуют верхний и нижний эпидермис, а также глубинные структуры листа, расположенные под эпидермисом (паренхима, включения, сосуды и т.д.).

При анализе толстых и кожистых листьев (эвкалипт, толокнянка, брусника) готовят поперечные срезы. При необходимости также готовят поперечные срезы черешков. Для чего используют два способа размачивания.

1. Листья (черешки) кипятят в растворе хлоралгидрата в течение 10 мин.

2. При отсутствии хлоралгидрата выбранные листья (черешки) и их кусочки помещают в воду на 1 -- 2 ч, после размачивания переносят в смесь глицерин - вода - этанол (1 : 1 : 1), где выдерживают 1 -- 2 сут до полного пропитывания тканей жидкостью. В этой жидкости материал можно хранить продолжительное время, для чего при приготовлении смеси к ней добавляют кристаллик фенола.

Из размоченных объектов делают срезы, зажимая кусочки листа (черешка) в бутылочную пробку (коровую) или сердцевину бузины. При использовании бутылочной пробки ее предварительно кипятят в воде 15 мин. Кусочек бузины или бутылочной пробки разрезают пополам и между двумя половинками зажимают кусочек листа. Для изготовления поперечных срезов поверхность кусочка следует подготовить так, чтобы она была строго перпендикулярна к оси черешка или жилке листа. Для поперченного среза из листа вырезают небольшой участок, так чтобы попала средняя или боковая жилка, срез ведут перпендикулярно к жилке. Готовые срезы помещают в чашку Петри с водой, откуда срезы вынимают, просматривают под микроскопом, отбирая удачные.

При использовании первого способа размачивания срезы для их изучения помещают на предметное стекло в раствор хлоралгидрата. При втором способе размачивания срезы требуют дополнительного просветления. Для чего их помещают в натрия гидроксида раствор 5 % на предметное стекло, накрывают покровным стеклом и осторожно нагревают над пламенем горелки до полного просветления.

После охлаждения микропрепарата с левой стороны покровного стекла помещают небольшой кусочек фильтровальной бумаги, а с правой начинают понемногу вводить пипеткой глицерина раствор 33 % до получения препарата с бесцветной включающей жидкостью. Полученный микропрепарат изучают под микроскопом.

Для исследования цветков берут кусочки чашечки, венчика, цветоножки, а также тычинки, пестик и другие элементы цветка и соцветий, если таковые имеются. Если сырье имеет небольшие размеры, то берут цельные чашечку и венчик. Для исследования пыльцы раздавливают пыльники тычинок обратным концом препаровальной иглы. Следует учесть, что тонкие лепестки кипятят в натрия гидроксида растворе 5 % не более 1 мин. Анализ цветоножки проводят аналогично анализу черешка листа. При необходимости делают поперечные срезы цветоножки (Государственная, 2018).

2.2.3 Товароведческий анализ

Товароведческий анализ - это раздел фармакогностического анализа, используемый для определения подлинности и доброкачественности лекарственного сырья.

Определение содержания примесей. Обычно к допустимым примесям лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов относят:

§ части сырья, изменившие окраску, присущую данному виду лекарственного растительного сырья/препарата (побуревшие, почерневшие, выцветшие и т. д.);

§ другие части растения, не соответствующие установленному описанию сырья;

§ органическую примесь (части других неядовитых растений);

§ минеральную примесь (земля, песок, камешки).

К недопустимым примесям относят стекло, помет грызунов и птиц, части ядовитых растений, части растений, утратившие свою окраску (с указанием в фармакопейной статье или нормативной документации их недопустимой окраски).

Часть аналитической пробы цельного и измельченного лекарственного растительного сырья/препарата, оставшуюся после определения подлинности и измельченности, взвешивают с погрешностью ± 0,01 г, затем помещают на чистую гладкую поверхность и лопаточкой или пинцетом выделяют примеси, указанные в фармакопейной статье или нормативной документации на лекарственное растительное сырье или лекарственный растительный препарат.

Для порошка, как правило, определяют только минеральную примесь, так как определение других допустимых примесей затруднено.

Каждый вид примеси взвешивают отдельно с погрешностью ±0,1 г при массе аналитической навески более 100 г и погрешностью ±0,05 г при массе аналитической навески 100 г и менее.

Содержание каждого вида примеси в процентах (X) вычисляют по формуле:

(1)

где

m₁ -- масса примеси, г;

m₂ -- навеска лекарственного растительного сырья/препарата, г.

Для допустимых примесей устанавливаются следующие нормы: органическая примесь должна составлять не более 1 %; минеральная примесь - не более 1 %; части сырья, утратившие окраску, присущую данному виду сырья, -- не более 3 %; другие части растения, не соответствующие установленному описанию сырья, -- не более 2 %, если иное не указано в фармакопейной статье или нормативной документации.

Для определения содержания минеральной примеси, имеющей размеры менее 2 мм, анализируемую пробу цельного и измельченного лекарственного растительного сырья/препарата просеивают сквозь сито с размером отверстий 2 мм.

Частицы, прошедшие сквозь сито, помещают в стеклянный стакан вместимостью 1000 мл и далее используют метод определения содержания минеральной примеси в порошке.

Массу минеральной примеси, полученную в отсеве, присоединяют к массе минеральной примеси, отобранной механическим способом с помощью пинцета, и рассчитывают её суммарное содержание по формуле (1).

Для определения содержания минеральной примеси в порошке лекарственного растительного сырья/препарата часть аналитической пробы взвешивают с погрешностью ± 0,01 г, затем помещают в стеклянный стакан вместимостью 1000 мл, прибавляют 200 мл воды.

Чтобы устранить комочки из слипшихся частиц, содержимое размешивают до полного смачивания сырья /препарата, равномерно распределяя в объёме раствора. Выдерживают 3 -- 5 мин. После оседания минеральной примеси воду со взвешенными частицами быстро (не давая разбухнуть частицам сырья) сливают с осадка. Осадок в стакане несколько раз промывают водой до полного удаления взвешенных частиц сырья.

По окончании промывания в стакане должен остаться осадок минеральной примеси с минимальным количеством воды. Стакан с осадком помещают в сушильный шкаф и сушат при температуре около 100 -- 105 ^оС до приобретения осадком сыпучести.

Высушенный осадок (минеральную примесь) охлаждают и взвешивают с погрешностью ± 0,01 г. Содержание минеральной примеси рассчитывают по формуле (1). (Государственная, 2018)

Определение влажности. Требования настоящей общей фармакопейной статьи распространяются на лекарственное растительное сырье (свежее и высушенное) и лекарственные растительные препараты. Под влажностью понимают потерю в массе при высушивании за счет удаления гигроскопической влаги и летучих веществ, которую определяют в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах при высушивании до постоянной массы или другим методом, описанным в фармакопейной статье или нормативной документации.

Аналитическую пробу высушенного лекарственного растительного сырья, предназначенную для определения влажности, предварительно измельчают любым подходящим способом до размера частиц не более 10 мм, в зависимости от морфологической группы лекарственного растительного сырья.

Аналитическую пробу лекарственного растительного препарата или измельченного высушенного лекарственного растительного сырья перемешивают и берут две навески по 3 -- 5 г, взвешенные с погрешностью ± 0,01 г.

Каждую навеску высушенного лекарственного растительного сырья/препарата помещают в предварительно высушенный до постоянной массы и взвешенный бюкс с крышкой и ставят в сушильный шкаф, нагретый до 100 - 105 °С. При этой же температуре осуществляют высушивание взятых навесок.

Высушивание лекарственного растительного сырья/препарата проводят в открытых бюксах вместе со снятыми крышками. При взвешивании бюксы должны быть закрыты.

Первое взвешивание охлажденных в эксикаторе анализируемых образцов, представленных листьями, травами, цветками и порошком из лекарственного растительного сырья и препаратов, проводят через 2 ч; анализируемых образцов, представленных корнями, корневищами, корой, плодами, семенами и другими морфологическими группами лекарственного растительного сырья и препаратов, - через 3 ч.

При определении влажности в свежем лекарственном растительном сырье аналитическую пробу анализируемого растительного объекта, предназначенную для определения влажности, предварительно измельчают до размера частиц не более 10 мм, используя для этого соответствующее оборудование и приспособления (ножницы, мельницы различных типов, ступку и др.), что определяется морфологической группой лекарственного растительного сырья.

Измельченную аналитическую пробу свежего лекарственного растительного сырья тщательно перемешивают и берут две навески по 3 -- 5 г, взвешенные с погрешностью ± 0,01 г. Каждую навеску свежего лекарственного растительного сырья помещают в предварительно высушенный и взвешенный бюкс с крышкой и ставят в сушильный шкаф, нагретый до 130 -- 135 °С. При этой же температуре осуществляют высушивание взятых навесок.

Высушивание свежего лекарственного растительного сырья проводят в открытых бюксах вместе со снятыми крышками. При взвешивании бюксы должны быть закрыты.

Для свежего лекарственного растительного сырья, представленного листьями, травами, цветками и плодами, первое взвешивание охлажденных в эксикаторе анализируемых образцов проводят через 1 ч, анализируемых образцов, представленных другими более плотными по морфологической структуре видами сырья, - через 2 ч.

Высушивание лекарственного растительного сырья/лекарственного растительного препарата проводят до постоянной массы. Постоянная масса считается достигнутой, если разница между двумя последовательными взвешиваниями после 30 мин дополнительного высушивания и 30 мин охлаждения в эксикаторе не превышает ±0,01 г.

В этом случае имеется в виду влажность воздушно-сухого лекарственного растительного сырья/препарата.

При определении абсолютной влажности, значение которой используется в формулах расчета количества действующих веществ в высушенном лекарственном растительном сырье/препарате, определение проводят в навесках 1 - 2 г (точная навеска), взятых из аналитической пробы, предназначенной для количественного определения действующих веществ и золы, вышеописанным методом, но при разнице между взвешиваниями, не превышающей ±0,0005 г.

Влажность (W) лекарственного растительного сырья/препарата в процентах вычисляют по формуле 2:



(2)

где

m-масса до высушивания, г;

m₁ - масса после высушивания, г.

За окончательный результат определения принимают среднее арифметическое трех параллельных определений, вычисленных до десятых долей процента.

Допустимое расхождение между результатами двух параллельных определений не должно превышать 0,5 %.

Для высушенного лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов устанавливают верхний предел содержания влаги: не более…%.

Для свежего лекарственного растительного сырья, как правило, нормируется нижний и верхний предел содержания влаги: не менее…% и не более…%.

Для определения влажности лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов возможно использование влагомеров термографических инфракрасных, при этом в фармакопейной статье или нормативной документации должны быть указаны навеска, измельченность лекарственного растительного сырья/препарата, а также режим сушки и норма влажности. Методика должна быть валидирована. (Государственная, 2018)

Определение золы общей. Требования данной общей фармакопейной статьи распространяются на метод определения золы общей в лекарственных средствах, лекарственном растительном сырье (свежем и высушенном) и лекарственных растительных препаратах.

Требования данной общей фармакопейной статьи распространяются на метод определения золы общей в лекарственных средствах, лекарственном растительном сырье (свежем и высушенном) и лекарственных растительных препаратах.

Определение общей золы проводят с измельченным испытуемым образцом. При необходимости лекарственное средство растирают в ступке перед взятием навески.

Высушенное и свежее лекарственное растительное сырье измельчают с помощью соответствующего оборудования и приспособлений (ножницы, мельницы различных типов, ступки и др.). Высушенное лекарственное растительное сырье измельчают до размера частиц не более 2 мм.

Платиновый, фарфоровый или кварцевый тигель нагревают до красного каления (550 - 650 °С) в течение 30 мин, затем охлаждают в эксикаторе и точно взвешивают. Прокаливание тигля проводят до постоянной массы.

Около 1 г (точная навеска) лекарственного средства или 3 - 5 г (точная навеска) высушенного лекарственного растительного сырья, или 5 -- 25 г (точная навеска) свежего лекарственного растительного сырья, или 2 -- 3 г (точная навеска) лекарственного растительного препарата помещают в подготовленный тигель, равномерно распределяя анализируемую навеску по дну тигля.

Испытуемый образец в тигле осторожно нагревают при 100 - 105 °С в течение 1 ч и далее проводят сжигание с последующим прокаливанием остатка образца при температуре 550 - 650 °С.

Испытуемый образец свежего лекарственного растительного сырья осторожно нагревают в тигле, не допуская разбрызгивания пробы. Тигель охлаждают в эксикаторе и взвешивают.

Прокаливание повторяют до постоянной массы, избегая сплавления золы и спекания её со стенками тигля.

В ходе сжигания не должно появляться пламя. Если после длительного прокаливания зола все ещё содержит черные частицы, её обрабатывают горячей водой, фильтруют через беззольный бумажный фильтр, осадок и фильтр сжигают, объединяют фильтрат с золой, осторожно упаривают досуха и сжигают, после чего тигель с золой охлаждают в эксикаторе и взвешивают.